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UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA

VEGA

Facultad de Ciencias Farmacuticas y


bioqumica

Prctica N 2
Accin Comparativa de Enzimas
Frente a Catalizadores no
Biolgicos.

Curso: Bioqumica II
Docente: Caldern Gmez, Javier Jack
Aula: 1 X Grupo 2
Fecha: 09- 05 2016

Alumno:

Retegui Quiroz Luis

Daz Palacios Carlos

1.- MARCO TERICO

Las enzimas son catalizadores que aceleran la velocidad de las reacciones


metablicas.
Para el proceso de digestin, las biomolculas ingeridas en la dieta deben ser
degradadas a sus componentes ms sencillos para ser absorbidas a nivel del
tubo digestivo y as llegar al lugar correspondiente a nivel celular.
La digestin de los carbohidratos comienza en la boca, donde los alimentos se
mezclan con la Amilasa salival que degrada los enlaces del almidn
liberndose Maltosa, Glucosa y dextrinas de almidn que poseen todos los
enlaces. La accin de las enzimas, por sus caractersticas fsico-qumicas,
puede afectarse por las condiciones presentes en el lugar de accin de stas.
Entre los principales factores que pueden modificar la accin enzimtica
tenemos:
. La temperatura
. El pH
. Inductores e inhibidores
Los inhibidores tienen gran utilidad en bioqumica, ya que ayudan a determinar
la especificidad de la enzima por el sustrato, la naturaleza de los grupos
funcionales en el mantenimiento de la estructura activa de la enzima. Estos
compuestos no son alterados qumicamente por la enzima.
De acuerdo al tipo de inhibicin que ejerzan stas sustancias, se han
clasificado en:
Inhibidores Reversibles.
Inhibidores Irreversibles

2.- PROCEDIMIENTO

-Hidrolisis nula o negativa: El almidn permanece intacta hasta el


final del sistema
-Hidrolisis total o completa: en la hidrolisis todos los glucocitos se
rompen
2.1 DIGESTIN:
Para obtener la amilasa tomamos 20 ml de agua destilada y hacemos enjuague
por 2 minutos y luego ponemos la muestra en un becker.

AGUA
HCl 10%
AMILASA
ALMIDON
B.M 38C
B.M Hirviente

TUBO 1
1mL

TUBO 2

TUBO 3

1mL
4mL
15mL

4mL

1mL
4mL
15mL

15mL

Resultados:
El almidn ha sido diluido en una solucin salina de cloruro de sodio al 0.3%, a
concentracin 1% lo que se hizo fue pesar 0.3 gr de cloruro de sodio cantidad
suficiente para 3 ml de agua luego homogenizamos se le ayudacon
calentamiento para homogenizar por completo el almidn en el sistema y de
esta manera tenemos este reactivo que es el sustrato problema, este almidn
se hizo en solucin salina ya que esta es una conservadora de almidn.

En este paso hemos sometido al sustrato a una hidrolisis utilizando


catalizadores biolgicos (agua) y no biolgicos (agua, y el HCl).

2.2- DETERMINACION DEL SUSTRATO:

0.5mL de
T-1

0.5mL de
T-3

0.5mL de
T-2

Lugol

Lugol

Lugol

Se le agrega lugol para evidenciar si el sutrato se mantiene intacto o ya se


hidroliz.
Si la hidrolisis es concha de vino es parcial, color caramelo es total y si es azul
es negativa
TUBO #4:

nos dio una coloracin azul negruzco esto se debe a que en esta

reaccin el yodo entra a la estructura helicoidal del almidn, es decir, que los
tomos de yodo se introduce entre las espirales provocando la absorcin o
fijacin de yodo en las molculas del almidn (amilosa).
TUBO #5:

Al calentar almidn en presencia del HCl al 10%, el almidn se

hidroliza formando glucosa. El color azul caracterstico para reaccin de


almidn con el iodo depende de la estructura helicoidal de amilosa.
TUBO #6: La enzima amilasa degrada el almidn para as formar azucares ms

simples como la glucosa, es decir, de molculas complejas pasa a molculas


simples.

Las

molculas

de

glucosa

posteriormente llegan a la sangre.

atraviesan

la

pared

intestinal

OBSERVACIONES:
a) En el 4to tubo se ve una coloracin azul marino, lo que nos indica que se
est dando una hidrolisis negativa
b) En el 5to tubo se ve una coloracin rojo concha y vino, lo que nos indica
que se est dando una hidrolisis parcial.
c) En el 6to tubo se ve una coloracin amarillenta tipo miel de abeja, lo que
nos indica que se est dando una hidrolisis completa.

Resultados:

En este caso vamos a ver qu tipo de hidrolisis se forma ya sea una


hidrolisis parcial que como producto se forma glucosas en baja proporcin
ms presencia de maltosas y dentinas, como producto de hidrolisis negativa
el almidn se encuentra intacto, pero como producto de una hidrolisis total
glucosas se van a dar en proporcin abundante por que la degradacin ha
sido completa el producto final de sistema de hidrolisis cual ser
obviamente que la glucosas.

2.3.- DETERMINACION DE PRODUCTO

0.5mL de
T-1
+
2mL Rvo.
B.M

0.5mL de
T-2
+
2mL Rvo.
B.M

0.5mL de
T-3
+
2mL Rvo.
B.M

Reactivo de Benedict:
La prueba del yodo o el lugol permite identificar la presencia de almidn, con
este reactivo se obtiene un color azul-violeta caracterstico. Toma 0.5 ml de la
disolucin de cada uno de los tubos y aade unas gotas de lugol a cada una de
ellas. Si no existe la hidrlisis del almidn la prueba ser positiva.
La prueba de Benedict permite identificar a los azucares reductores. Toma 0.5
ml de cada uno de las disoluciones de los tubos y agrgales 2 ml del reactivo
de Benedict, enseguida coloca ambos tubos en bao Mara hirviendo hasta ver
la reaccin, si existe hidrlisis del almidn se formar un precipitado rojo ladrillo
que indica la presencia de azcares como la glucosa y la maltosa.

Observaciones:
a.- En el 7mo tubo no se ve ninguna reaccin en este caso sera no ve
formacin de precipitado por lo q se trata de una hidrolisis negativa.
b.- En el 8vo tubo se ve un pequesimo precipitado lo cual nos indica que hay
glucosas pero en poca cantidad, esto nos indica que es una hidrolisis parcial.
c.- En el 9no tubo se ve formacin de precipitado lo cual nos indica que hay
glucosas a montn por la destruccin total de las biomolculas, esto nos indica
que es una hidrolisis completa.

Reactivo de Fehling:
Se produce la reaccin, por la presencia de aldehdos que conduce igualmente
al cido gluconico pasando el Cu+2, un complejo con iones tartrato en medio
bsico (-OH) de color azul-verdoso a Cu+, que precipita en forma de Cu 2O rojo
ladrillo. El almidn es un polisacrido que no posee carbonos anomricos libres
por lo que carece de poder reductor. Sin embargo, en presencia de HCl y
calentndose a Bao Mara, el almidn se hidroliza, es decir, incorpora una
molcula de agua y se descompone en los monosacridos que la forman,
glucosa y fructosa, que s son reductores. La prueba de que se ha verificado la
hidrlisis se realiza con el Reactivo de Fehling y, si el resultado es positivo,
aparecer un precipitado rojo. Si el resultado es negativo, la hidrlisis no se ha
realizado correctamente y si en el resultado final aparece una coloracin verde
en el tubo de ensayo se debe a una hidrlisis parcial de la sacarosa.

Reactivo de Tollens:

La glucosa reacciona por la presencia del aldehdo, que se oxidan a


carboxilatos depositndose espejos de plata sobre las paredes interiores de los
espejos de plata.

Resultados:

El producto final de este sistema es la glucosa que por naturaleza es un


azcar reductor, el cual vamos a revelar en esta prctica utilizando los
reactivos de fehlling, tollens y benedict, para que se haga la determinacin
de este producto de hidrolisis con estos sistema los reactivos y resultados
anteriores tienen que estar en una misma proporcin, si se forma bastante
glucosa de la hidrolisis el color va a ser anaranjado ladrillo (con benedict) lo
que indica que cuando yo revele el producto en ese tubo de ensayo se ver
abundante precipitado si hay mucha glucosa; si no hay glucosa no se forma
precipitado , teniendo en cuenta que el almidn en s, no es un azcar
reductor por eso la reaccin con benedict, en el caso de que haya una
hidrolisis negativa, al final tambin no se va a dar la reaccin. Por eso lo
que se obtenga primero debe ser consecutivo con lo ltimo al final la
reaccin debe ser la misma.

3.- CONCLUSIONES

Con la reaccin del Lugol podemos identificar de modo general


polisacridos, pero de modo especfico entre uno de ellos se encuentra el
almidn que lo identificamos en la prctica.

En esta prctica lo que hemos tratado de hacer es que a partir de un


sustrato en este caso el almidn, de por medio de catalizadores biolgicos
como producto a la glucosa, por el cual este ha sido sometido a un sistema
de hidrolisis acompaado de reactivos que detecten glucosa en este caso
utilizamos el reactivo de benedict. En el primer tubo con muestra de agua se
vio una hidrolisis negativa ya que en esta no hubo ruptura de biomoleculas
por lo cual al final me da el mismo producto es decir el almidn; en el
segundo tubo con muestra de HCl se vio una hidrolisis parcial o incompleta
en esta se ve una pequea ruptura de biomoleculas que se dan de forma
desordenada y en esta se ve presencia de glucosas en poca cantidad al
igual de disacridos (maltosa)y si producto final seria las dextrinas; y en el
ltimo tubo que contena la muestra de amilasa se da una hidrolisis
completa en la cual se ve una destruccin total de biomoleculas formando
as glucosas y esta a su vez da un precipitado anaranjado rojizo.

En el agua, no se produce una reaccin con la experiencia de yodo, esto


debido a que el agua no es un azcar, y la coloracin que se present en
nuestro tubo, fue la del color del reactivo de lugol (amarillento).

Fue una prctica sencilla de comprender, pero muy lenta, pero al final de
cuentas salieron los colores de las reacciones.

Al realizar la prctica pudimos concluir que en la saliva se encuentra una


enzima llamada amilasa, que acta sobre el almidn, al ver las reacciones
de la saliva (en la cual se encuentra la amilasa) con el lugol para almidn y
con el Benedict, ya que en la reaccin de la saliva con el lugol se torn un

color azul-violeta lo cual indica la presencia de almidn, pudimos distinguir


en que tubo de ensayo se dio la hidrlisis del almidn y en cual no.

4.- OBJETIVO

Lograr que los catalizadores produzcan hidrolisis, el rompimiento del


sustrato problema es decir la hidrolisis del almidn formando diferentes
productos en el medio.

-Hidrolisis nula o negativa: El almidn permanece intacta hasta el final del


sistema
-Hidrolisis total o completa: en la hidrolisis todos los glucocitos se rompen

Enzima

Catalizador que acelera la reaccin qumica.

Digestin
qumica

Transforma los nutrientes en compuestos ms simples.

Digestin
mecnica

Reduce los alimentos en pedazos ms pequeos.

Degradacin

Est relacionado con la reaccin de las molculas grandes de


los polmeros, las cuales solamente contienen carbn e
hidrogeno, con el oxigeno del aire.

Saliva

Es un fluido orgnico complejo producido por las glndulas


salivales en la cavidad bucal, y directamente involucrada en la
primera fase de la digestin.

Azucares
simples

Los azcares simples realizan numerosas funciones en los


seres vivos:
Fuente rpida de energa

Azucares
complejas

Los Monosacridos y los Disacridos se consideran azcares


simples.

Polmeros

Son macromolculas

Monmeros

Son micro molculas