UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO

VALDIZN
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

Escuela Acadmico Profesional

De Ingeniera Agroindustrial:

PRACTICA N 5
EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE

CURSO

: Anlisis Por Instrumentacin

ALUMNOS

: Meza Rodrguez Diana N.

DOCENTE

: ING. Rubio Gabriel, Michel

CAHUAYNA -HUANUCO- JUNIO -2016

I.

INTRODUCCION.
En el radical libre DPPH, es un indicador estable para medir la capacidad de secuestro
de cualquier compuesto con actividad antioxidante. Su mecanismo de reaccin
consiste en la sustraccin de un tomo de hidrogeno preveniente de un donador (ej.
Compuesto fenlico) para generar el compuesto difenilpicrihidrazine y una especie de
radical(ej. Radical fenoxil) la reaccin desarrolla un cambio de color violesta a amarillo
a medida que disminuye la absorbancia a 517 nm. La reduccin del DPPH sigue la
siguiente reaccin:
DPPH + AH DPPH + A
DPPH + R DPPH - R

Existe un creciente inters en el uso de antioxidantes para la prevencin y el

Tratamiento de enfermedades, es por esto que juega un papel importante las dietas
ricas en antioxidantes que previenen el desarrollo de algunas enfermedades
patolgicas.
Estudios

anteriores

actuales

indican

que

el

tubrculo

TROPAEOLUM

TUBEROSUM conocido como Mashua es una fuente importante de actividad

antioxidante siendo comparado con frutas como la tuna y arndano que tiene un alto
contenido de antioxidantes como flavonoides y polifenoles determinando por esto ser
excelentes en trminos de nutricin.
Es importante y ventajoso el secado en los alimentos porque reduce el contenido de
humedad, previene el crecimiento de los microorganismos y minimizan las dems
reacciones que la deterioran, adems reduce el peso y en algunos casos el volumen
lo que incluye una reduccin importante en los costos de empaque, almacenamiento
y transporte.
Los productos secos permiten adems permanecer a temperatura ambiente por
largos periodos de tiempo. Sin embargo, durante el proceso de los alimentos se debe
tomar en cuenta la posible prdida de actividad antioxidante, debido a su baja
resistencia contra el oxgeno, catlisis ion de metal, temperaturas altas que degradan,
luz, secado, grado higromtrico; por esta razn, se debe buscar parmetros ptimos
de secado para minimizar la prdida de estos compuestos bioactivos.
En consecuencia, la Mashua puede desempear un papel preponderante en el
desarrollo sustentable del rea alimenticia, implementndose procesos tecnolgicos
que sean aprovechados en beneficio y bienestar de nuestros pueblos.

II.

OBJETIVOS.
a)
Objetivo general.

Determinar de valor antioxidante mediante el mtodo espectrofotmetro

de la mashua negra

b)

Objetivo especfico.

Dar a conocer la metodologa para evaluar la actividad antioxidante en

recursos vegetales.

III.

MARCO TEORICO.
3.1. Universidad de Guayaquil. Facultad de Ingeniera Qumica:

En esta investigacin cientfica se determin la capacidad antioxidante del

tubrculo mashua (tropaeolum tuberosum) con la reaccin del radical 2,2-difenil1-picrihidrazilo, mediante el mtodo espectrofotomtrico. Para evaluar la
actividad antioxidante de la muestra se la someti a una operacin unitaria de
secado en la estufa con temperatura de 37 grados centgrados hasta alcanzar
un peso constante, para posteriormente por determinaciones tcnicas y ensayos
espectrofotomtricos determinar su capacidad antioxidante; introducindose
adems el parmetro llamado eficiencia antioxidante.
3.2.

Diario Ahora La mashua negra vale como el oro:

Es anticancergeno y el kilo se vende a S/.150
Las alturas del distrito de Yanacancha, en la provincia de Chupaca, regin
Junn, estn produciendo cada vez ms unos tubrculos que valen oro: las
mashuas negras, una de las casi 200 variedades que ya han conquistado el
mercado internacional.
La

mashua

negra

tiene

un

alto

potencial

nutritivo

propiedades

anticancergenas, previenen males a la prstata, riones e hgado y, adems,

puede ser usada como diurtico, explica Sheyla Nthaly Carhuamaca Rosales
en el stand instalado en el Gran Mercado de Mistura.
Lo que sorprende de esta papa amarga es su precio: el kilo se vende nada
menos que a S/.150 en la feria.

Es el verdadero oro negro de Los Andes, confiesa Sheyla al aadir que

muchos productores ya lo estn exportando a China, al parecer para la industria
farmacutica, como ocurri con la maca.
Comenta que esta variedad es muy escasa, pues se da a ms de tres mil metros
sobre el nivel del mar. La ventaja es que no requiere fertilizantes ni pesticidas y
su cosecha puede ser el doble que el de la papa. Incluso se puede cosechar
hasta tres veces de una misma planta, aade.
Se consume sancochada y acompaando cualquier plato, en sopas,
mermeladas o harinas. Los de colores son precisos para postres.
El stand est repleto de nctares de mashua de diversos colores, que se venden
a tres nuevos soles la botella.
En muchos pueblos andinos, la mashua se siembra alrededor de las chacras
de papas u ollucos, pues se dice que espantan a las plagas, ya que actan
como repelente natural.

3.3. (Johns & Neil Towers, 1981).

La mashua como antioxidante Para el cubio o mashua se han descrito dos
subespecies,

especie

cultivada

Tropaeolum

tuberosum

subespecie

tuberosum y la silvestre Tropaeolum tuberosum subespecie silvestre, las cuales

se distinguen por el tipo de glucosinolatos que presentan pmetoxibencilGsl para
la primera, y bencilglucosinolato, 2-butilGsl y 2-propilGsl para la segunda.

3.4. (Chirinos et al, 2008).

Estudios recientes han indicado que el cubio posee un alto contenido de
compuestos fenlicos y antocianinas.
3.5. (Chirinos et al., 2006).
Se ha encontrado tambin que los extractos de cubio inducen la supresin,
dependiente de la concentracin, de la proliferacin de clulas de carcinoma de
la prstata humana DU145 y clulas de melanoma murino B16F10. Las
propiedades promotoras de la salud pueden estar asociadas con los
glucosinolatos y los compuestos fenlicos que contienen.
3.6. (Chirinos, Campos, Warnier, et al., 2008)
Algunos estudios han mostrado que los genotipos morados de la mashua tienen
un alto contenido de compuestos fenlicos, comparables con aquellos
encontrados en fuentes consideradas como antioxidantes. Adems, los
tubrculos morados presentan actividad antioxidante 10 veces mayor que los
genotipos amarillos.

Determinacin de la eficiencia antioxidante (AOE)

Con el afn de determinar la capacidad antioxidante se introduce el parmetro
llamado eficiencia antioxidante (AOE) que se define como un valor absoluto de
la primera derivada de la curva en el punto con un valor de absorbancia de Ao/e.
Geomtricamente, (AOE) representa el valor absoluto de la pendiente de la
tangente en la curva de absorcin en el punto Ao/e.
De esta manera, las muestras con una mayor disminucin exponencial en la
absorbancia de radicales libres (y relacionada ms estrecho pendiente de la
tangente en el mismo punto) tiene valores de eficiencia antioxidante (AOE) ms
altos. La curva de concentracin - respuesta en general con la disminucin
exponencial de la absorbancia y la tangente en la curva de absorbancia concentracin en el punto Ao/e se muestra en el grfico # 7.

IV.

MATERIALES Y METODOS.
4.1. Materiales.

Espectrofotmetro

Cubetas de poliestireno de 1 ml

Papel filtro

Miropipetas(20-200uL, 100 1000 u)

Pipetas, tips, vasos, etc.

4.2. Reactivos.

2,2-diphenyl-1-picrihydrayl(DPPH)

etanol

4.3. Muestra.

Mashua negra (santa rosa -cauri)

Mashua negra (ambo churacan)

4.4. Procedimiento.
a. preparacin de solucin de trabajo .parar las siguientes soluciones:

100ml de 2,2-diphenyl-1-picrihydrayl(100 uM)en metanol.

b. Se har reaccionar 100ul de muestra con 900 ul de dpph(100uM).

La adsorcin ser registrada a 517nm, a intervalos de 30 segundos durante

10min para la determinacin de la actividades antioxidantes, los resultados
sern expresados en trminos de IC50.(Brand Williams et al., 1995)

c. Coeficiente de inhibicin(IC50)

Se determina mediante un anlisis de regresin de inhibicin versus la

concentracin necesaria de los extractos, para inhibir el 50% de radical DPPH.
Calculando peso
W = (#moles)(F.W)

W = (10-5 mol)(394.3 gr/mol)

W = 0.0039439 gr.

La cantidad que resulta se diluye en 10 ml de metanol

Entonces pesamos 0.0039 gr. De DPPH y se disuelve en 10 ml de metanol

Se obtiene la concentracin:
C1 = 1 mM = 100 uM
C2 = 100 uM
V2 = 60 ml
Aplicamos la formula:
V1 = C2*V2 / C1
V1 = (100 uM)(60 ml) / 1000Um
V1 = 6 ml
Entonces tengo que adicionar: 6ml (1 uM) +54 mL (metanol)

V.

RESULTADOS.
Resultado

Long.
N

absorbancia

Diferencia

Onda

0.945 0.110 = 0.835

1

0.945

517nm
0.119 0.110 = 0.009

0.119

517nm

%
=

0.835
100
0.945

0.009
100
0.119

88.36

83.54

En el porcentaje es estabilizado por eso cambia de color (estabilizado

por los antioxidantes).

en %

La concentracin evaluar es de 2gr de mashua negra en 10 ml de

etanol.

VI.

DISCUSIONES.
a)

Para evaluar la actividad antioxidante de la muestra se la someti a una

operacin unitaria de secado en la estufa con temperatura de 37 grados
centgrados hasta alcanzar un peso constante, para posteriormente por
determinaciones tcnicas y ensayos espectrofotomtricos determinar su
capacidad antioxidante; introducindose adems el parmetro llamado
eficiencia antioxidante.

b)

las cuales se distinguen por el tipo de glucosinolatos que presentan

pmetoxibencilGsl para la primera, y bencilglucosinolato, 2-butilGsl y 2-propilGsl
para la segunda.

VII.

CONCLUSIONES.
a)

Se demuestra adems que la tcnica del es rpida y que puede ser utilizada
para evaluar la actividad captadora de radicales libres en extractos
vegetales.

b)

Por lo tanto, queda determinado tanto tcnica como experimentalmente que

el tubrculo mashua (tropaeolum tuberosum) posee importantes nutrientes
y antioxidantes capaz de solucionar los problemas de desnutricin de los
nios y puede alargar el promedio de vida en el ser humano.

VIII. RECOMENDACIONES.
a)

En funcin de esto es que se debe establecer una comparacin de los diferentes

alimentos que sean ricos en actividad antioxidante para establecer prioridades
en la alimentacin de nios y ancianos y se evite enfermedades degenerativas
(tales como el cncer) y podamos alargar nuestro ciclo de existencia. Con
clculos como la eficiencia antioxidante ('AOE) podemos establecer los
alimentos que tienen mayor cantidad de antioxidantes como las vitaminas,
carotenoides, polifenoles y otros; para de esta manera convertirlos en productos
elaborados que sirvan para el consumo diario.

b)

Esta prctica puede servir de informacin para que el proyecto sobre la

elaboracin de productos cuya materia prima contenga antioxidantes con los
cuales se pueda contribuir a erradicar la desnutricin.

c)

Saber manejar el espectrofotmetro para as obtener resultados fijos con

referente a los revisiones bibliogrficas.

IX.

BIBLIOGRAFIA.

Chirinos, R.; Campos, D.; Arbizu, C.; Rees, J.-F.; Roez, H.; Larondelle,Y. 2007.
Effect of genotype, maturity stage and post- harvest storage on phenolic compounds,
carotenoid content and antioxidant capacity of Andean Mashua tubers (Tropaeolum
tuberosum Ruz y Pavn). Journal of the Science of Food and Agriculture. 87, 437446.

Chirinos, R.; Campos, D.; Betalleluz, I.; Giusti, M. M.;Schwartz, S. J.; Tian, Q.;
Pedreschi, R. y Larondelle, Y. 2006. High- Performance liquid chromatography with
photodiode array detection (HPLC- DAD)/ HPLCMass Spectrometry (MS) profiling
of anthocyanins from Andean mashua tubers (Tropaeolum tuberosum Ruz y Pavn)
and their contribution to the overall antioxidant activity. Journal of Agriculture and
Food Chemistry. 54, 7089- 7097.

Chirinos, R.; Campos, D.; Costa, N.; Arbizu, C.; Pedreschi, R. y Larondelle, Y.
2008a. Phenolic profiles of andean mashua (Tropaeolum tuberosum Ruz y Pavn)
tubers: Identification by HPLCDAD and evaluation of their antioxidant activity. Food
Chemistry. 106, 1285-1298.

ANEXOS.

N1 EQUIPO

N2 MATERIALES

N3 MASHUA

N4METIL

N5
PROCEDIMIENTO

N6 SACANDO LA
ABSORVANCIA