Mono Organofos

UNMSM
Facultad de qumica e Ing. Qumica

E.A.P Ing. Agroindustrial
CURSO: TOXICOLOGA
Monografa:
Estudiante:
Romani Paravecino Stefany
Nombre del profesor
12070257
: Martha Bravo
1. INTRODUCCIN
Los plaguicidas se pueden definir como sustancias que sirven para
combatir los parsitos de los cultivos, del ganado, de los animales
domsticos y del hombre y su ambiente (Primo y Carrasco, 1986).
Los plaguicidas se conocen desde la antigedad, aunque fue a
partir de los aos 20-30 del siglo XX, y especialmente a partir de la
Segunda
Guerra
Mundial,
cuando
su
empleo
se
extendi
exponencialmente. La utilizacin de los plaguicidas ha conseguido

aumentar la produccin de alimentos y mejorar la salud humana.
Sin embargo, deben vigilarse los daos ambientales ocasionados
por su uso a gran escala, de manera que puedan hacerse las
correcciones pertinentes. Es importante conocer los riesgos y la
toxicidad de estos compuestos, especialmente para las especies
que no son su objetivo, antes de que sean aplicados masivamente,
as como para asegurar que la aplicacin se lleve a cabo de una
manera adecuada
minimizando los daos posibles. El uso
generalizado de los plaguicidas en la agricultura, as como en la

industria, caminos, carreteras, vas frreas y en uso domstico,
puede llegar a producir un empobrecimiento de la biodiversidad,
contaminar las aguas subterrneas y superficiales y amenazar la
salud humana, tanto por exposicin directa como a travs de sus
residuos en alimentos o en aguas potables
El sector agrcola es considerado como el grupo poblacional con
ms alto riesgo de exposicin a estos contaminantes txicos, como
consecuencia de la elevada importancia que ha ido adquiriendo
en los pases desarrollados el uso de insecticidas, fungicidas,
molusquicidas, bactericidas, herbicidas y fumigantes.
Universidad Nacional Mayor de San Marcos

2
Uno de los riesgos para la poblacin general es la exposicin a

largo plazo provocada por la presencia de residuos de plaguicidas
en
los alimentos como consecuencia de los tratamientos
fitosanitarios, as como por los contaminantes ambientales. Debe

tenerse en cuenta que todos los plaguicidas, como biocidas que
son, tienen una cierta toxicidad y, por tanto, sus residuos en los
productos vegetales tratados pueden suponer un riesgo para la
salud de los consumidores si superan unos determinados lmites.
Los plaguicidas organofosforados han sido ampliamente utilizados
en la agricultura desde hace ms de 50 aos, proporcionado
tratamientos econmicos y efectivos para un gran nmero de
cultivos. Sin embargo, algunos residuos de estos plaguicidas
persisten en los alimentos y constituyen un riesgo importante para
la salud humana. Los mtodos de anlisis de residuos debern
proporcionar una precisin y exactitud adecuadas siendo a la vez
rpidos y simples de manera que proporcionen resultados fiables
para el anlisis de alimentos complejos en un tiempo razonable.
Control biolgico
La expresin Control Biolgico (Biological monitoring) se define
como la vigilancia o el control de la exposicin a xenobiticos de
los
medios
biolgicos
del
individuo.
En
ingls
el
trmino
monitoring en su concepto original significa la medicin

continuada de una variable a lo largo del tiempo. Partiendo de
este significado, Biological monitoring designa la medida de la
exposicin interna mediante el anlisis de un espcimen biolgico,
y que, evidentemente no puede ser llevado de forma continua,
sino en uno o varios momentos en el tiempo (Obiols, 1998).
El
control
biolgico,
en
el
que,
como
se
ha
nombrado
anteriormente, se analizan dosis internas de plaguicida, constituye

3
un sistema distinto del control ambiental en el que se mide la

exposicin externa de la poblacin. Por tanto, aqu
es el propio
trabajador el que se utiliza como muestreador de su propio lugar

de trabajo. En muchos casos las determinaciones efectuadas en la
sangre o la orina (los medios biolgicos ms frecuentemente
utilizados) del trabajador o grupo de trabajadores son mucho ms
representativos de la exposicin a la que realmente se encuentran
sometidos que las efectuadas en el aire del lugar de trabajo
2. Metodologa analtica para la determinacin de residuos

de plaguicidas en muestras biolgicas de origen humano
y en alimentos
La elevada toxicidad de los plaguicidas presentes en el medio
ambiente obliga a disponer de mtodos analticos fiables, rpidos,
econmicos y suficientemente sensibles que permitan el control de
los compuestos txicos en diversos tipos de muestras, sobre todo
en muestras biolgicas de origen humano. La Qumica
Analtica
frente al anlisis de residuos de plaguicidas tiene ante s un reto

importante, ya que existe una fuerte demanda social exigiendo el
control de todo tipo de contaminantes en el medio ambiente. Por
otro lado, slo es posible establecer legislaciones restrictivas sobre
niveles de contaminantes cuando existan mtodos adecuados para
su anlisis.
Mtodos en humanos

4
Con el objeto de realizar correctamente la evaluacin de la

exposicin humana a plaguicidas, es fundamental el conocimiento
de accin y/o el metabolismo de los analitos para poder
determinar el parmetro biolgico adecuado, aunque en algunos
casos la informacin disponible sea insuficiente o inexistente.
Tambin es importante el conocimiento de las vas de absorcin
por las cuales el txico entra en el organismo, que en el caso de la
exposicin laboral a plaguicidas son principalmente la respiratoria,
la drmica y, en ocasiones, la va oral. Por otra parte, hay que
tener en cuenta la posibilidad de bioacumulacin y en el caso de
intoxicacin, si se trata de intoxicacin aguda, crnica, retardada
(que se manifieste semanas o meses despus de interrumpida
la exposicin que pudo se nica) o reintoxicacin endgena (por
persistencia del txico en el tubo grastrointestinal o en los
depsitos grasos y posterior paso a la sangre).
Uno de los primeros factores a tener en cuenta para llevar a cabo
el control biolgico es la eleccin de la matriz a analizar, la cual es
dependiente
de
un
nmero
de
variables
tales
como
la
farmacocintica del contaminante, la disponibilidad de la matriz, la

facilidad de manipulacin de la matriz, y el lmite de deteccin del
mtodo analtico (Barr et al., 1999). Por ejemplo, medir la dosis
interna del plaguicida en sangre (o suero o plasma) presenta la
ventaja principal de poder determinar directamente el compuesto
original, en lugar de los metabolitos, y por tanto no se requieren
detalles sobre el metabolismo del analito. Adems, se trata de un
fluido regulado y la concentracin de contaminantes absorbidos
normalmente permanece constante. Sin embargo, el anlisis de
sangre presenta los inconvenientes de la obtencin de la muestra,

5
la limitacin de la cantidad de sangre disponible y los bajos niveles

de concentracin de los contaminantes presentes en la matriz.
Por otra parte, las ventajas de llevar a cabo el control biolgico en
orina son las siguientes: mayor facilidad de obtencin de muestra,
mayor disponibilidad de volumen para realizar el anlisis, y
posibilidad de utilizar instrumentos menos sensibles, puesto que
las concentraciones de los compuestos en orina son mayores que
en sangre debido a su rpido metabolismo y excrecin. Sin
embargo, hay que tener en cuenta que la orina no es un fluido
regulado como la sangre, y la concentracin del contaminante o
metabolito puede cambiar, incluso si la dosis interna permanece
constante (Barr et al., 1999).
Mtodos en alimentos
El uso continuado de POF en la agricultura incrementa la
posibilidad de que los residuos de estos compuestos estn
presentes
en
los
alimentos
comprometiendo
la
seguridad
alimentaria. Se debe hacer compatible la proteccin de la Salud

Pblica con la defensa sanitaria de los cultivos contra las plagas y
enfermedades
favoreciendo
la
produccin,
por
lo
que
las
autoridades han dictado una serie de normas legales que limitan o

establecen condiciones al uso de POF y fijan Lmites Mximos de
Residuos (LMRs) en los alimentos. Desde hace dos dcadas para
vigilar el cumplimiento de la normativa, diversas agencias
medioambientales y de calidad de los alimentos han abordado la
determinacin de residuos de plaguicidas utilizando metodologas
multirresiduo, y realizando muestreos y controles sobre los
alimentos en fase de comercializacin, con el fin de establecer el
contenido d residuos de plaguicidas y comprobar si cumplen la
legislacin vigente.
6
La introduccin de nuevas estructuras y la revolucin tecnolgica

han dado lugar a la publicacin de numerosos mtodos analticos
que
se
basan
generalmente
en
la
utilizacin
de
tcnicas
cromatogrficas.
En general en el presente informe veremos 3 tcnicas muy
especficas de extraccin, como: Extraccin con disolventes
orgnicos, Extraccin en fase slida, Extraccin con fluidos
supercrticos, las cuales para realizarse previamente se debe
realizar la extraccin de la muestra a analizar y una purificacin de
esta; para la obtencin de mejores resultados.
3. Metodologa
para
la
determinacin
de
residuos
organofosforados
Metodologa AOAC (Official Method 970.52) para la determinacin

de residuos de pesticidas organoclorados y organofosforados. La
Asociacin de Qumicos Analticos Oficiales de EUA (AOAC), publica
peridicamente las referencias consideradas como oficiales y de
calidad, para realizar estudios analticos de residuos de pesticidas.
La distribucin lquido-lquido entre ter de petrleo y acetonitrilo,
es el mtodo establecido, para la separacin de pesticidas de
grasas biolgicas, ceras y alimentos grasos (leche, mantequilla,
queso y pescado). Usando una correcta proporcin, los pesticidas
se distribuyen en la fase de acetonitrilo, mientras que los lpidos
quedan solubilizados en la fase no polar debido a su contenido de
hidrocarburos. Esta metodologa incluye pasos posteriores de
clean-up, en una columna de florisil, donde los pesticidas y la
7
materia grasa son retenidos, y se obtienen fracciones de pesticidas

separadas de las grasas, al eluir con solventes de baja polaridad
[18, 19]. Esta ltima etapa es crtica, ya que pequeas cantidades
de lpidos pueden causar deterioro en la columna cromatogrfica,
contaminacin del sistema cromatogrfico y disminucin de la
sensibilidad.
La metodologa clsica, resulta larga, tediosa y consume gran
cantidad de solventes costosos y txicos; adems, son inevitables
los tratamientos posteriores de purificacin del extracto, haciendo
que las recuperaciones para algunos pesticidas resulten bajas. Por
tanto, es necesario que se desarrollen nuevos mtodos analticos
para la determinacin de pesticidas desde este tipo
de
matrices, principalmente, considerando aquellos mtodos que

determinen en
breve tiempo la presencia y el nivel del
contaminante.
3.1 Extraccin con disolventes orgnicos
Para la extraccin de los POF presentes en alimentos, se ha
empleado un amplio nmero de disolventes orgnicos ya que no
hay consenso entre los diferentes pases para proponer un
procedimiento nico. Existen unas directrices generales con
carcter internacional sobre las caractersticas que debe de reunir
un mtodo permitiendo al analista combinar distintas etapas. Los
mtodos propuestos utilizan mezclas muy variadas de disolventes,
como se observa en la tabla 1 para los alimentos que contienen
menos de un 2 % de materia grasa y en la tabla 2 para los que
contienen ms de un 2 %. Estos mtodos se basan bien en una
primera homogeneizacin con disolventes miscibles con el agua o
en la extraccin directa con solventes inmiscibles.
8
Muchos de estos mtodos estn validados y contrastados por

agencias de prestigio. Los ms aplicados son (i) extraccin con
acetato de etilo eliminando el agua con sulfato sdico anhidro; (ii)
extraccin con acetonitrilo y (iii) homogeneizacin con acetona y
reparto con una mezcla diclorometano/ter de petrleo.
Este tipo de extraccin proporciona excelentes resultados aunque
es un proceso largo y tedioso que presenta inconvenientes como la
necesidad de emplear grandes cantidades de disolvente cuyo
costo es muy elevado. Para paliar este inconveniente se han
desarrollado nuevas tcnicas como la extraccin asistida por
microondas y la extraccin acelerada por disolventes. La primera
se basa en la absorcin de energa de microondas por el disolvente
y la muestra, producindose un incremento de la temperatura que
facilita la difusin de compuestos desde la matriz al disolvente,
mientras que la segunda consiste en rellenar una columna con
material vegetal seco bombeando el disolvente a su travs a una
temperatura y presin establecidas consiguindose as que la
cantidad de disolvente necesaria para la extraccin sea menor.
Las tcnicas tradicionales de purificacin son el reparto con
disolventes orgnicos inmiscibles; la cromatografa de adsorcin
y/o reparto en columna, y la cromatografa de gel permeacin
(CGP).
El reparto liquido-liquido retiene las impurezas en un disolvente
que se deshecha, y est basado en las diferencias entre los
coeficientes de reparto de los POF y los compuestos interferentes
entre disolventes inmiscibles. Los repartos entre acetona o
acetonitrilo y diclorometano o mezclas de diclorometano/ter
etlico, se emplean para eliminar las impurezas hidrfilas. En la
cromatografa de adsorcin y/o reparto en columna se utilizan
fases slidas como Florisil, slice, alumina, C8 y C18 donde se
9
retienen compuestos de la matriz y los POF se eluyen con un

disolvente orgnico. Esta tcnica tiene el inconveniente de no ser
eficaz para separar los lpidos de los plaguicidas.
La cromatografa de gel permeacin (CGP) es una tcnica basada
en la separacin de las sustancias interferentes por el tamao de
las molculas. La muestra pasa a travs de una columna que
contiene un hidrogel, como Sephadex, Bio-Gel, Sephacryl, etc. que
crea una red con poros de diferente dimetro, donde las molculas
quedaran retenidas en funcin de su tamao y forma as, las
molculas cuyo dimetro sea mayor que el de los poros de la fase
slida no quedan retenidas mientras que las molculas de
pequeo tamao recorrern todos los poros y eluiran ms tarde.
Tabla 1. Extraccin con disolventes para alimentos con menos de un 2 % de

materia grasa.

10
Tabla 2. Extraccin con disolventes para alimentos con ms de un 2 % de materia

grasa.
3.2 Extraccin en fase solida

La extraccin en fase slida convencional (EFS) es una tcnica
muy utilizada para la extraccin de POF, que evita los
inconvenientes asociados a la extraccin con disolventes como
elevado consumo de los mismos, separacin incompleta de
fases, e interferencias de matriz, y se obtienen ventajas como
reduccin de la cantidad de muestra y de tiempo de extraccin.
3.2.1 Extraccin en fase slida convencional (EFS).
Esta tcnica consiste en extraer los POF disueltos en una matriz
acuosa al atravesar un soporte slido donde quedan retenidos,
y eluir posteriormente con una cantidad mnima de disolvente.
11
La eleccin de la fase slida depende de la polaridad de los

plaguicidas y del tipo de matriz utilizada. Las ms empleadas
son C 18 y C8, Florisil y aminopropilo. El principal inconveniente
es que con las muestras slidas hay que realizar una extraccin
previa de los residuos de plaguicidas con algn disolvente
miscible con el agua.
3.2.2 Dispersin de matriz en fase slida (DMFS).
En la DMFS se dispersa la muestra problema con una fase slida
comercial como C18 , C8, Florisil, amino, fenil, ciano, etc, hasta
conseguir una mezcla homognea, que se introduce, en una
columna cromatogrfica de vidrio, a la que se le puede aadir
una fase slida para purificar simultneamente la muestra. Los
POF se eluyen de la dispersin con diferentes disolventes
orgnicos como acetonitrilo, acetato de etilo [57, 60, 63] y/o
diclorometano.
Esta
tcnica
permite
la
extraccin
de
plaguicidas desde pequeas cantidades de muestras slidas y

semislidas.
3.2.3 Micro extraccin en fase slida (MEFS).
La MEFS se basa en la adsorcin de los POF sobre una fibra
recubierta con una fase estacionaria, los cuales se desorben
posteriormente en el inyector de un Cromatgrafo de gases o
de lquidos. La extraccin se puede realizar por inmersin de la
fibra en la muestra lquida, o por espacio de cabeza (un sistema
cerrado, donde la fibra se encuentra suspendida sobre la
muestra). La principal ventaja de esta tcnica es que elimina la
utilizacin de disolventes [67-70] y sus inconvenientes son
desconocer los efectos que puede tener la matriz sobre el
proceso, y que no se puede realizar una extraccin directa de
12
muestras slidas. En la tabla 4 se muestran los mtodos de

MEFS propuestos.
3.2.4 Extraccin en fase slida sobre barras magnticas (ESBM)

La extraccin sobre barras magnticas (ESBM) una tcnica de
extraccin de reciente introduccin similar a la MEFS pero que
utiliza una barra magntica recubierta de fase en lugar de una
fibra. La principal diferencia entre ambas tcnicas es que la
cantidad de fase extractiva en las barras magnticas es mayor
que en las fibras, y por lo tanto la sensibilidad es tambin
mayor. La ESBM se ha utilizado para determinar POF en
naranjas
tras
extraer
la
muestra
con
una
mezcla
hidroalcohlica. Los POF se eluyen con metanol y se determinan

por cromatografa lquida. El principal inconveniente de este
mtodo es la limitada capacidad de concentracin de los POF
ms polares.
3.3 Anlisis de pesticidas

La identificacin y la cuantificacin de pesticidas se lleva a cabo
por medio de tcnicas cromatogrficas; la cromatografa de gases
(GC) es la ms utilizada, acoplada a detectores selectivos, como el
de captura de electrones (ECD) y el selectivo de masas (MSD).
3.3.1. Cromatografa de gases. Es un mtodo dinmico de
separacin en el cual los componentes orgnicos de una mezcla se
reparten entre dos fases: una es estacionaria, con una larga rea
13
superficial y, la otra, es un gas. En esta tcnica la muestra se

vaporiza y se arrastra por la fase mvil a travs de la columna. Los
componentes de la muestra o analitos son separados con base en
sus presiones de vapor relativas y su afinidad por la fase
estacionaria.
3.3.2. Cromatografa de gases acoplada con detector de captura
de electrones. El ECD es uno de los detectores ms usados en el
anlisis medioambiental. Posee respuesta selectiva, es muy
sensible
las
molculas
que
contiene
electronegativos tales como halgenos,
grupos
funcionales
perxidos, quinonas y
grupos nitro, por el contario, no es sensible a aminas, alcoholes e

hidrocarburos. El ECD es ampliamente usado en el anlisis de
pesticidas halogenados, similares al grupo de pesticidas analizados
en este trabajo.
El mecanismo de operacin del ECD, se basa en emisiones de

partculas
de
63Ni, stas partculas cargadas negativamente
colisionan con el gas make-up (argn: metano) y producen ms

electrones, esta corriente constante es colectada por
un
electrodo positivo. Sin embargo, cuando analitos capaces de

atrapar
electrones eluyen de la columna cromatogrfica, esta corriente
decrece, proporcionalmente a la concentracin de los mismos.
3.3.3.
masas.
Cromatografa de gases acoplada a espectrometra de

El
acoplamiento
de
cromatografa
de
gases
con
espectrometra de masas (GC-MS), es una de las tcnicas de

mayor importancia para el anlisis de mezclas de complejas,
14
puesto que presenta una capacidad excelente para identificar y

cuantificar los analitos. Consiste en la separacin cromatogrfica
de los componentes de la mezcla y su paso posterior a la cmara
de ionizacin en un espectrmetro de masas a presin reducida
(vacio), en donde el compuesto es bombardeado por electrones de
70 eV de energa, provenientes de un filamento
de tungsteno
(ctodo), como resultado de la ionizacin de las molculas se

forman
iones
moleculares
con
suficiente
energa
para
fragmentarse. Las corrientes inicas reconstituidas de los iones

fragmento y del ion molecular dan lugar al espectro de masas, el
cual es como la huella digital de cada compuesto y proporciona
informacin estructural. El detector selectivo de masas puede
operar en dos formas: (1) barrido completo (full scan) y (2)
Monitoreo de ion(es) seleccionado(s) (SIM), en el primer modo, se
procesa, en funcin del tiempo, la corriente inica total y, en el
segundo, slo se mide la corriente inica parcial del fragmento o
fragmentos
de
inters,
pre-seleccionado(s),
lo
que
permite
aumentar la selectividad y, sobre todo la sensibilidad del mtodo.

4. Derteminaciones
de
residuos
organofosforados
en
alimentos; utilizando el mtodo AOAC (Official Method

970.52).
4.1 Metodologa para la determinacin de residuos de plaguicidas
organofosforados en leche de consumo nacional mediante cromatografa
de gases y extraccin en fase slida
4.1.1 Resumen
Se desarroll un nuevo mtodo orientado a la deteccin y
cuantificacin de 15 plaguicidas organofosforados en muestras de
leche cruda para consumo nacional. Se utiliz un cromatgrafo de
15
gases equipado con columna capilar de polidimetilsiloxano y

detector NPD, en combinacin con la tcnica de extraccin en fase
slida (SPE) para el proceso de limpieza de la muestra y extraccin
de los plaguicidas. Se obtuvieron porcentajes de recuperacin
cercanos al 100% y lmites de deteccin inferiores a 20 g/L para
13 de los organofosforados analizados. El mtodo en general
present importantes ventajas en comparacin con metodologas
convencionales de extraccin lquido-lquido.
4.1.2 Materiales y equipo
Plaguicidas organofosforados: Fueron utilizados estndares slidos
certificados obtenidos de Supelco para los 15 plaguicidas
organosfosforados
coumafos,
analizados:
diazinon,
diclorvos,
clorpirifos,
clorpirifos
metil,
dimetotato,
disulfoton,
etion,
fenamifos, forato, isofenfos, malation, metil paration, paration y

terbufos.
Reactivos: Disolventes calidad anlisis de residuos: Acetonitrilo

(JTBaker), Acetona (JTBaker), Hexano (OmniSolv), Tolueno
(Merck), Etanol absoluto (Merck), Cloruro de sodio (Merck),
Sulfato de sodio anhidro (Merck). Agua destilada/desionizada.
Cartuchos de extraccin en fase slida para limpieza de la muestra
y
extraccin
de
los
plaguicidas:
ENVI-8
(Supelco),
LC-18
(Supelco), LC-NH2 (Supelco).

Equipo: El proceso de extraccin y concentracin se realiz
utilizando un Sistema mltiple de vaco VisiTrap (Supelco) y
16
Rotavapor
(Buchi),
controlada.
El
con
anlisis
sistema
de
vaco
cromatogrfico
se
temperatura
realiz
en
un
Cromatgrafo de gases Perkin Elmer Auto System, equipado con

detector NPD, columna PE-1 (polidimetilsiloxano) de 25 m de largo,
0,33 mm de dimetro interno y 0.25 m grosor de pelcula.
4.1.3 Procedimiento
Extraccin de plaguicidas Cada muestra de 25 mL de leche se
extrajo con 50 mL de acetonitrilo/5 g NaCl, empleando agitacin
magntica por un perodo de 10 minutos. La mezcla de extraccin
se centrifug por 15 minutos a 4000 rpm. Se procedi a limpiar el
extracto orgnico de acetonitrilo empleando cartuchos LC-18 y
secarlo sobre sulfato de sodio anhidro. Seguidamente, 5 mL del
extracto se diluyeron con agua destilada a un volumen final de 50
mL. Los plaguicidas organofosforados se atraparon pasando el
extracto acuoso a travs de un cartucho ENVI-8. Los plaguicidas
fueron eluidos con 3 mL de hexano-acetona (90:10) y 3 mL de
acetona-tolueno (75:25), acoplando la salida del cartucho ENVI- 8
un cartucho de limpieza LC-NH2. Posteriormente, el eluato se
concentr utilizando un sistema Rotavapor a 35- 40 C hasta un
volumen final de 1 mL para ser inyectado al cromatgrafo.
4.1.4 Anlisis cromatogrfico

El anlisis cromatogrfico de los extractos se realiz en las
siguientes
condiciones:
temperatura
del
detector:
300
C,
temperatura del inyector: 250 C, volumen de inyeccin: 1L, gas

de arrastre: helio, split-less (1 min), programacin del horno: 80 C
(1 min), 15 C/min, 160 C (5 min), 15 C/min, 275 C (5 min).

17
4.1.5 Resultados y conclusiones

El mtodo desarrollado en nuestro laboratorio permite de manera
eficiente
el
anlisis
organofosforados
de
ms
la
mayora
comunes
de
utilizados
los
en
plaguicidas
la
actividad
agropecuaria en nuestro pas. Es apto para el anlisis en serie de

nmeros grandes de muestras. La metodologa propuesta, en
comparacin
con
mtodos
convencionales
de
extraccin
lquidolquido, se caracteriza por requerir una menor cantidad de

muestra, un menor consumo de disolventes orgnicos, y brindar
una mejora significativa en porcentajes de recuperacin y lmites
de
deteccin.
Para
muestras
de
leche
que
contenan
concentraciones iniciales de alrededor de 100 g/L, se obtuvieron

para 13 de los 15 plaguicidas analizados, excelentes porcentajes
de recuperacin que se sitan entre el 105% para el caso de forato
y 154% para el malation. Para el caso del diclorvos, se obtuvo un
rendimiento del 32% por razones an no confirmadas al momento
de esta publicacin; sin embargo, podra estar relacionado con la
alta polaridad que presenta la molcula de este plaguicida (i.e.,
alta solubilidad en agua). Estudios preliminares realizados en
nuestro laboratorio, indican que es de esperar, que porcentajes de
recuperacin similares sean obtenidos para el anlisis de los
plaguicidas incluidos en este trabajo, en caso de estar presentes
en muestras de leche contaminadas con concentraciones an
menores que los 100 g/L. Por otro lado, para los lmites de
deteccin se obtuvieron resultados que se sitan entre 2 g/L para
el caso del diclorvos y un mximo de 17 g/L para el coumafos.
Un anlisis comparativo entre los resultados de porcentajes de
recuperacin y lmites de deteccin alcanzados, con los lmites
mximos
permitidos
alimentarius),
permite
reportados
concluir
en
que
la
el
literatura
mtodo

18
(ej.
de
Codex
anlisis
desarrollado, puede ser utilizado como mecanismo de monitoreo y

control de la contaminacin por plaguicidas organofosforados
presentes en leche destinada al consumo humano.
4.2 Residuos de plaguicidas organofosforados en cabezuela de

brcoli (Brassica oleracea) determinados por cromatografa de
gases.
4.2.1 Resumen
Este trabajo documenta el historial de manejo de plagas del cultivo
de brcoli y determinacin de los residuos de plaguicidas
organofosforados mediante cromatografa de gases en cabezuelas
listas para su comercializacin en 23 sitios de produccin. Los
resultados indican que las plagas de mayor incidencia en el brcoli
son Brevicoryne brassicae, Trichoplusia ni, Copitarsia consueta,
Artogeia rapae, Trialeurodes sp y Bermisia tabaci, reportadas con
una frecuencia de 82.5, 80, 80, 70 y 37.7 % por los productores,
respectivamente. El control de estas plagas es qumico, mediante
el uso de productos organofosforados, piretroides y carbamatos,
realizando de 1 a 4 aplicaciones durante el ciclo de cultivo. Los
residuos de plaguicidas encontrados con mayor frecuencia en el
anlisis cualitativo son el malatin, el diazinn y el clorfenvinfos,
encontrados en 70, 65 y 43 % de las muestras, respectivamente.
En cuanto a las concentraciones se encontr: clorfenvinfos,
malatin y diazinn con 5.78, 2.67 y 1.16 mg kg1, seguidos por
fentin y etin con concentraciones medias de 0.041 y 0.024 mg
kg1. 87 % de las muestras de brcoli analizadas contienen
residuos de al menos un plaguicida organofosforado; sin embargo,
las concentraciones encontradas estn por debajo de los lmites

19
recomendados. Es importante considerar el riesgo sobre la salud

humana mediante un anlisis del efecto aditivo de los residuos
encontrados.
necesarias
Asimismo
para
que
se
recomienda
dichas
tomar
concentraciones
las
no
medidas
se
vean
incrementadas, lo cual puede garantizarse mediante un monitoreo

continuo.
4.2.2 Materiales y mtodos
El estudio se realiz en la comunidad de Mixquic, Tlhuac, D. F.,
ubicada al sureste de la Ciudad de Mxico (19 13' 28" N, 98 57'
51" W), a una altura de 2240 m sobre el nivel del mar. El historial
de manejo de las parcelas se elabor mediante visitas continuas y
la aplicacin de entrevistas a una muestra de 23 productores y al
tcnico de la Junta Local de Sanidad Vegetal. Las variables
consideradas fueron: plaguicida(s) utilizado(s), dosis de aplicacin
y frecuencia de aplicacin.
4.2.3 Muestreo para anlisis de residuos de plaguicidas
Se consideraron para el estudio 23 parcelas, de las cuales 22 se
ubicaron en Mixquic y una en el campo experimental de la
Universidad Autnoma Chapingo. Se realiz un muestreo en zig
zag para obtener muestras compuestas de pella o cabezuela de
brcoli
(cinco
seis
cabezuelas
por
parcela
de
ha
aproximadamente) al momento de la cosecha. El material vegetal

fue transportado al laboratorio en condiciones de refrigeracin,
donde las pellas fueron cortadas y homogeneizadas para constituir
una muestra representativa de cada parcela.
4.2.4 Extraccin

20
El material para anlisis fue preparado con 500 g de material

vegetal de brcoli licuado con agua destilada, relacin 1:1. De este
material fueron tomadas dos muestras de 100 g de material
vegetal en matraces Erlenmeyer; posteriormente se agregaron 100
mL de acetona y se dejaron en agitacin durante 12 horas a 250
rpm. Como control, por cada 5 muestras se consider el anlisis de
una tercera. La separacin de slidos se hizo con un embudo y
papel filtro Watman No. 2 con una capa de 15 g de celita, la cual
fue aplicada con 20 mL de agua de manera homognea. La
muestra se filtr con ayuda de vaco y se hizo un segundo lavado.
La separacin de fases se realiz mediante dos lavados con 100
mL de benceno:diclorometano en relacin 4:1, ms 400 mL de
solucin salina a 5 %. La fase orgnica se hizo pasar por un
embudo de vidrio que contena un papel filtro y sulfato de sodio
anhidro para eliminar el exceso de agua. La evaporacin del
disolvente se realiz mediante el empleo de un rotavapor, a 45 C,
hasta alcanzar un volumen de 5 mL (Luke y Doose 1983).
La purificacin de la muestra se realiz mediante vaco; para ello
se emple una columna de cristal empacada con 15 g de mezcla
homognea de celulosa microcristalina y carbn activado en
relacin 9:1. Como eluyente se utilizaron 150 mL de benceno. La
muestra recuperada fue concentrada a sequedad mediante el uso
de rotavapor y el extracto se afor a 5 mL con acetato de etilo.
Todos los solventes y reactivos utilizados fueron de pureza grado
HPLC o plaguicida.
Los anlisis se realizaron en un cromatgrafo de gases Clarus 500
PerkinElmer, equipado con detector termoinico (nitrgeno
fsforo), un inyector automtico (PerkinElmer) operado en modo
21
splitless con un volumen de muestra de 1.0 L, una columna

capilar Elite 1 de 15 x 0.25 mm, ID x 0.25 m de espesor de la
pelcula. Se utiliz helio como gas de arrastre, con una tasa de flujo
de 17 mL y una rampa de temperatura de 80 a 280 C.
Adicionalmente, las muestras fueron ledas bajo las mismas
condiciones cromatogrficas con una columna Zebrn ZB1701 de
30 x 0.25 mm, ID x 0.25 m de espesor de la pelcula. Los
resultados fueron utilizados de manera confirmatoria, eliminando
los picos que aparecan nicamente en una de las columnas.
El anlisis de datos se realiz primeramente considerando la
presencia o ausencia de los residuos, mediante la comparacin de
los tiempos de retencin de los compuestos en relacin con las
mezclas
multirresiduos
de
estndares
de
productos
organofosforados de calidad analtica (Chem Service); se emple

como control interno al etil paratin. La cuantificacin se realiz
mediante curvas de calibracin de cada uno de los plaguicidas
detectados (Luke y Doose 1983).
4.2.5 resultados y discusin
Plagas de brcoli y control
En el cuadro 1 se presentan las principales plagas y frecuencias
reportadas por los productores para el cultivo de brcoli en
mixquic, d.f, durante el ciclo de verano 2005. destaca que las
plagas que ms comnmente atacan el brcoli son el pulgn de la
col, el gusano medidor falso, el gusano del corazn de la col y la
mariposita blanca de la col. estos resultados coinciden con los
reportados para este mismo cultivo en acatzingo, puebla, por
barrios et al. (2004), quienes reportan a b. brassicae (49.65
insectos/planta), p. xylostella (4.5 insectos/planta) y c. consueta
22
(0.48
insectos/planta)
como
las
especies
de
plagas
ms
abundantes.
el control de las plagas se realiza de forma qumica en la

totalidad de los casos (cuadro 2). El nmero de aplicaciones, de
acuerdo con los datos proporcionados por los productores,
obedece casi siempre a la presencia de la plaga: se reportan
una, dos y hasta cuatro aplicaciones en proporcin de 35, 61 y
4 % de los productores, respectivamente.

23
La gua de plaguicidas autorizados de uso agrcola (cicloplafest

2005) recomienda los productos que se sealan en el cuadro
3 para el control de plagas del brcoli. Adicionalmente se
presenta el intervalo de seguridad y el lmite mximo de
residuos
de
estos
productos
que
establece
la
gua
de
plaguicidas y los reportados por el codex alimentarius.
Comparativamente, los lmites mximos de residuos del codex

alimentarius
son
ms
bajos,
dadas
las
exigencias
internacionales en el control de los mismos. Para algunos

productos no se reportan los lmites establecidos debido a que
son plaguicidas prohibidos en algunos pases, como es el caso
del paratin metlico en estados unidos.
Presencia de residuos de plaguicidas organofosforados

24
La presencia de plaguicidas organofosforados se debe a que

son productos de uso cotidiano en el control de plagas del
brcoli,
aunque
en
algunas
ocasiones
son
usados
conjuntamente con otros grupos de plaguicidas (waliszewski et

al.1997). Para la extraccin se us acetona para prevenir la
formacin de emulsiones con pectinas de los vegetales (leoni et
al. 1992). Los porcentajes de recuperacin, conjuntamente con
el lmite de deteccin y el coeficiente de variacin de la
reproducibilidad, se presentan en el cuadro 4. Es importante
sealar que la reproducibilidad vari entre 75 (dioxatin) y 93.7
% (diazinn).
los tiempos de retencin para los diferentes plaguicidas, bajo

las condiciones descritas en materiales y mtodos, se presentan
el cuadro 4 .Destaca la consistencia en los tiempos de aparicin
de los compuestos y el orden de los mismos para ambas
columnas. el tiempo de retencin del paratin metlico es muy
similar
al
reportado
por
garrido et
al.
(2006),
quienes
mencionan como tiempos de retencin un intervalo que va de

7.61 a 7.69 min. Para diazinn, el tiempo de retencin
25
encontrado es de 6.16 minutos en la columna dos, que es

superior al tiempo de retencin de 5.32 minutos que reportan
valenzuela et al. (2006).
Los residuos de plaguicidas encontrados en las muestras
analizadas, en orden de importancia tomando en cuenta las
concentraciones medias, fueron: clorfenvinfos, malatin y
diazinn, con 1.73, 1.85 y 0.68 mg kg1, seguidos por fentin y
etin con concentraciones medias de 0.002 y 0.001 mg kg 1,
respectivamente.
Sin
embargo,
considerando
la
media
ponderada, se encontraron las siguientes concentraciones:

clorfenvinfos, malatin y diazinn con 5.78, 2.67 y 1.16 mg kg 1,
seguidos por fentin y etin con concentraciones medias de
0.041 y 0.024 mg kg1, respectivamente.
Las concentraciones medias de residuos evaluados estn por
debajo
de
las
recomendadas
por
cicloplafest
(2005).
la
concentracin media ponderada de diazinn es ligeramente

superior al lmite mximo de residuos (lmr) recomendado (1 mg
kg1) en el manual de plaguicidas autorizados por cicloplafest
(2005) (cuadro 5).
Los resultados del anlisis multirresiduos muestran presencia de

plaguicidas no reportados por el agricultor, lo cual puede
26
deberse a aplicaciones en parcelas cercanas o provenir de

alguna otra fuente de contaminacin, como es el uso de
mezclas de plaguicidas mencionados en general, pero no
reportados en esta investigacin.
El anlisis de los residuos de plaguicidas analizados de manera
individual
indica
establecidos
que
para
cada
estn
uno
por
de
debajo
ellos;
de
sin
los
lmites
embargo,
es
importante considerar en estudios posteriores el consumo total

proveniente de muestras que contienen residuos de varios tipos
de plaguicidas, ya que puede ser significativo.
De acuerdo con los resultados encontrados, es necesario que se
tomen en cuenta las siguientes acciones: controlar plagas
mediante un manejo integrado, considerar la eficacia, los costos
y el intervalo de seguridad en la eleccin de productos qumicos
que estn autorizados para el cultivo, adems de tener una
programacin de tal forma que no se induzca resistencia y no
sobrepasar la dosis indicada en la etiqueta. asimismo, es
importante un monitoreo continuo de residuos de plaguicidas
en los productos agrcolas para asegurar una incidencia mnima
en la salud humana.
La figura 1a muestra los cromatogramas multirresiduo con
estndares organofosforados a una concentracin de 1 g g
1
con detector npd, en las dos columnas analizadas. La figura
1b muestra un cromatograma correspondiente a una muestra

de brcoli; en ella se observa un pico bien definido coincidente
con los tiempos de retencin del malatin de la figura 1a y otros
dos picos coincidentes con los tiempos de retencin de
clorfenicol y etin respectivamente, pero de tamao pequeo,
27
lo cual probablemente se deba a las bajas concentraciones de

estos compuestos en la muestra.
En la figura 2a se muestra un cromatograma correspondiente a

una muestra de brcoli, la cual tiene dos picos bien definidos,
coincidentes con los tiempos de retencin de malatin y
diazinn de la figura 2b analizados con la columna 2 descrita en
materiales
mtodos.
el
resto
de
los
picos
de
los
cromatogramas correspondientes a la muestra de brcoli no

pudieron ser asignados a ninguno de los steres fosfricos
analizados en esta investigacin.
28
4.2.6 Conclusiones
La alta incidencia de Brevicoryne brassicae, Trichoplusia ni,

Copitarsia consueta, Artogeia rapae, Trialeurodes sp y Bermisia
tabaci, reportadas por los productores como las principales
plagas en el cultivo de brcoli en Mixquic, con una frecuencia de
82.5, 80, 80, 70 y 37.7 % respectivamente, hace necesaria una
serie de aplicaciones de productos qumicos para su control,
donde
los
plaguicidas
organofosforados
tratamientos clsicos.

29
constituyen
13 % de las muestras analizadas estn libres de residuos de

plaguicidas organofosforados.
En 87 % de las muestras de brcoli analizadas se encontraron

residuos de al menos un plaguicida organofosforado; sin
embargo, es importante sealar que las concentraciones
medias
encontradas
no
rebasan
los
lmites
mximos
permisibles.
Es necesario un monitoreo continuo de los residuos de

plaguicidas como medida de seguridad que dictamine que las
concentraciones no se incrementan.

30
5. BIBLIOGRAFIA
REVISIN DE LOS MTODOS DE DETERMINACIN DE

RESIDUOS DE PLAGUICIDAS ORGANOFOSFORADOS EN
ALIMENTOS REVISTA DE TOXICOLOGA, VOL. 20, NM. 3,
2003,
PP.
166-175
ASOCIACIN
ESPAOLA
DE
TOXICOLOGA
CICLOPLAFEST
(2005).
CATLOGO
OFICIAL
DE
PLAGUICIDAS. COMISIN INTERSECRETARIAL PARA EL

CONTROL
DEL
PROCESO
USO
DE
PLAGUICIDAS,
FERTILIZANTES Y SUSTANCIAS TXICAS. MXICO D.F. 81

84.
METODOLOGA PARA LA DETERMINACIN DE RESIDUOS

DE PLAGUICIDAS ORGANOFOSFORADOS EN LECHE DE
CONSUMO NACIONAL MEDIANTE CROMATOGRAFA DE
GASES Y EXTRACCIN EN FASE SLIDA/ERIC ROMERO
BLANCO
IMPLEMENTACION DE UN METODO HS/SPME-GC PARA EL

ANALISIS DE PESTICIDAS EN LECHE/ MONICA JOHANNA
MARTINEZ MEJIA
RESIDUOS DE PLAGUICIDAS ORGANOFOSFORADOS EN

CABEZUELA
DE
BRCOLI
(BRASSICA
OLERACEA)
DETERMINADOS POR CROMATOGRAFA DE GASES/ MA.

31
ANTONIA PREZ1, ANTONIO SEGURA2, ROSARIO GARCA2,

TERESA COLINAS2, MARIO PREZ2, ANTONIO VZQUEZ2 Y
HERMILIO NAVARRO1

32

Mono Organofos

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3.2.4 Extraccin en fase slida sobre barras magnticas (ESBM)

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3.3 Anlisis de pesticidas

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4.1.5 Resultados y conclusiones

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