Genoma del VIH: estructura, expresin y regulacin

Javier Colomina Rodrguez, Alicia Galdames Farias

Servicio de Microbiologa y Unidad de Investigacin en Patologa Infecciosa, Hospital de La
Ribera, Alzira, Valencia

Introduccin
Estructura y expresin del genoma de VIH
Regulacin de la expresin genmica del VIH
Bibliografa

Introduccin

El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) es un retrovirus esfrico de unos 110 nm

de dimetro. Bsicamente, la partcula vrica est formada por tres capas superpuestas:
una bicapa lipdica externa (derivada de la clula husped durante el proceso de salida
de viriones por gemacin), una matriz esfrica intermedia y una cpside troncocnica
interna, que contiene el genoma vrico y diversas protenas esenciales. La informacin
gentica del VIH est compuesta por dos hebras idnticas, no unidas entre s, de ARN
monocatenario, no segmentado, de polaridad positiva y que debe transformarse,
mediante transcripcin inversa, en ADN vrico para poder integrarse en el ncleo de la
clula husped.

La forma integrada (celular) del VIH-1, tambin conocida como provirus, tiene una
longitud de aproximadamente 9,8 Kb (1). Los extremos genmicos del provirus estn
flanqueados por unas secuencias conocidas como repeticiones terminales largas (LTR,
long terminal repeats), que participan en la integracin del genoma vrico en la clula
infectada, as como en la iniciacin y regulacin de la transcripcin. En la regin central
del ADN provrico se sitan la mayora de los genes codificantes de protenas vricas
(Figura 1). Los tres genes principales del VIH, comunes a todos los retrovirus, se
denominan gag (de grupo), pol (de polimerasa) y env (de envoltura). Bsicamente, el
primero codifica las protenas del core (matriz, cpside y nucleocpside), el segundo
expresa diversas enzimas involucradas en la sntesis e integracin del ADN provrico y
el tercero codifica las protenas vricas de envoltura externa. Sin embargo, y a diferencia
de los retrovirus simples, el VIH posee seis genes adicionales, dos reguladores (tat y
rev) y cuatro accesorios (nef, vpr, vpu y vif; no esenciales in vitro), por lo que se
cataloga como retrovirus complejo. Estos genes se solapan en parte con los genes

principales, tal como se indica en la Figura 1. El genoma de VIH presenta otros

elementos relevantes, siendo los ms destacados el sitio de unin de Tat (protena
transactivadora), denominado secuencia TAR, el sitio de unin PBS del primer iniciador
de la transcripcin inversa y el sitio de unin de la protena reguladora Rev,
denominado elemento de respuesta a REV (RRE). En la Tabla 1 se presenta la
composicin del genoma del VIH con sus distintos genes y las protenas
correspondientes codificadas por ellos, as como sus principales funciones. En la
Figura 2 se muestra la estructura de la partcula vrica madura.

Tabla 1. Relacin de los genes del VIH: protenas codificadas y funciones.

Genes

Estructurales

Nombre

Gag

Producto

Protena

(precursor)

vrica

p55

p17

Funcin

Protena miristilada de la matriz

vrica.

p24

Protena principal de la cpside

vrica.

p7

Protena de la nucleocpside.
Empaquetamiento del ARN vrico.

p6

Protena de la nucleocpside. Unin

a Vpr. Encapsidacin vrica.

Pol

p160

p10

Proteasa: procesamiento
postraduccional de las poliprotenas
Gag y Gag-Pol.

p50

Transcriptasa inversa:
transformacin del ARN vrico en
ADN provrico.

p15

RNasa H: eliminacin del molde de

ARN una vez transcurrida la
transcripcin inversa.

p31

Integrasa: insercin del ADN

provrico en el cromosoma de la
clula infectada.

Env

gp160

gp120

Glucoprotena de envoltura

(gp125 en

(superficie). Interaccin vrica con

VIH-2)

receptor CD4 y correceptores

celulares.

gp41

Glucoprotena de envoltura

(gp36 en

(transmembrana). Anclaje de gp120

VIH-2)

y fusin de membranas vrica y

celular.

Reguladores

tat

Tat (p14)

Activador de la transcripcin:
sntesis de ARNm.

rev

Rev (p19)

Exportacin (transporte) de ARN

vrico del ncleo al citoplasma.

Accesorios

nef

Nef (p27)

Regulacin negativa de la
presencia de CD4 y MHC-I en la
membrana celular. Interferencia en
la activacin de linfocitos T.
Estimulacin de la infectividad de
viriones.

vpr

Vpr (p15)

Transporte del Complejo de

Preintegracin al ncleo. Bloqueo
del ciclo celular.

vpu

Vpu (p16)

(en VIH-1)

Bloqueo del CD4 en el retculo

endoplsmico celular, evitando la
interaccin con gp120 de nueva
sntesis. Incrementa la liberacin de
viriones de la clula infectada.

vif

Vif (p23)

Infecciosidad de viriones
extracelulares.

Figura 1. Organizacin genmica del VIH-1 (con un asterisco se indican los genes de expresin temprana).
5-LTR
U3 R

3-LTR

U5

RRE

U3

PBS

gag

vif
pro

pol

vpu
vpr

tat*
rev*

env
tat*
rev*

nef*

U5

Figura 2. Estructura de la partcula de VIH.

Estructura y expresin del genoma de VIH

Protenas estructurales mayores: genes gag, pol y env

Gen gag

Este gen codifica inicialmente una protena precursora de 55 kD denominada p55.

Durante la traduccin, el extremo aminoterminal de esta protena es miristilado, lo que
desencadenar una asociacin con la membrana de la clula infectada. Durante el
proceso de la maduracin vrica, esta protena temprana p55 es escindida, por una
proteasa codificada por el gen pol, en cuatro protenas ms pequeas: la p17 (de la
matriz), la p24 (de la cpside) y las protenas de la nucleocpside p7 y p6 (2).
El polipptido p17 de la matriz deriva del extremo N-terminal miristilado de la p55. La
mayora de las molculas p17 interaccionan con la cara interna de la bicapa lipdica del
virin y estabilizan la partcula. Sin embargo, un subconjunto de molculas p17 se
introduce en las capas ms profundas del virin, donde se convierten en parte del
complejo que acompaa el ADN vrico hasta el ncleo. Estas molculas facilitan el
transporte nuclear del genoma vrico, debido a que una seal carioflica de la p17 es
reconocida por la maquinaria celular de importacin nuclear. Este fenmeno permite
que el VIH infecte las clulas que no estn en divisin, una caracterstica inusual para
un retrovirus.

La protena p24 de la cpside forma el ncleo cnico de las partculas vricas. Se sabe
que la ciclofilina A, una chaperona que facilita la estructuracin de protenas,
interacciona con la p24, producindose la incorporacin de la ciclofilina A en la partcula
vrica. La posterior interaccin entre el gag y la ciclofilina A parece esencial en el
desemsamblaje de la cpside, ya que la ausencia de esta interaccin inhibe la
replicacin vrica (3).

La protena p7 de la nucleocpside es responsable del reconocimiento de la seal de

empaquetamiento del VIH. Esta seal consiste en cuatro estructuras en horquilla
localizadas cerca del extremo 5' del ARN vrico, y media la incorporacin de un ARN
heterlogo en el interior de los viriones. La p7 se une a la seal de empaquetamiento a
travs de interacciones mediadas por dos dominios de dedos de zinc. La p7 tambin
parece facilitar la transcripcin inversa (4).

El polipptido p6 media las interacciones entre la protena precursora Gag p55 y la

protena accesoria Vpr, y conduce la incorporacin de la Vpr al interior de los viriones
(5). Tambin se ha observado que los mutantes p6 defectivos del VIH no pueden
producir progenie infecciosa, con lo que se acumulan las partculas vricas en la
membrana plasmtica, lo que parece implicar a esta protena en el proceso de
encapsidacin-liberacin de viriones.
Gen pol: precursor gag-pol

La proteasa, la transcriptasa inversa, la RNasa H y la integrasa son protenas vricas

que se expresan a travs de una protena de fusin Gag-Pol denominada p160. Este
precursor Gag-Pol se genera por un cambio de lectura ribosomal, provocado por un
motivo especfico del ARN (una secuencia heptanucleotdica seguida de una pequea
estructura en horquilla en la regin distal del ARN gag). Cuando los ribosomas
encuentran este motivo, cambian, en aproximadamente un 5% de las veces, al marco
de lectura de pol sin interrupcin de la traduccin. La frecuencia de cambio de lectura
ribosomal explica por qu las secuencias gag y gag-pol se expresan en un cociente de
aproximadamente 20:1.

Durante la maduracin, una proteasa vrica escinde el polipptido Pol de Gag y

posteriormente lo digiere, separndose la proteasa (p10), la transcriptasa inversa (p50),
la RNasa H (p15) y la integrasa (p31). Todas estas escisiones no siempre ocurren de
manera eficiente; por ejemplo, aproximadamente el 50% de las transcriptasas inversas
(p50) permanecen ligadas a la RNasa H (p15) como un solo polipptido (p65).

Proteasa (p10): es una aspartilproteasa que acta como un dmero. Su actividad se

requiere para la escisin de los precursores poliproteicos gag y gag-pol durante la
maduracin vrica, tal como se ha comentado previamente. La estructura
tridimensional del dmero de la proteasa se ha caracterizado, lo cual ha permitido
desarrollar nuevos frmacos dirigidos precisamente a inhibir su funcin (6). Estos
compuestos antivricos han supuesto un gran avance en la mejora del tratamiento de
las personas infectadas.

Transcriptasa inversa (p50) y RNasa H (p15): la forma funcional predominante de la

polimerasa vrica es un heterodmero de p65 y p50. Durante el proceso de la
transcripcin inversa caracterstico de los retrovirus, la polimerasa hace una copia de
ADN a partir del dmero de ARN monocatenario presente en el virin. A continuacin,

la ribonucleasa H elimina el molde original de ARN del primer filamento de ADN, con
lo que se permite la sntesis del filamento complementario de ADN. El ADN
bicatenario vrico puede ser completamente sintetizado en un plazo de seis horas
despus de la entrada vrica, aunque puede permanecer sin integrarse durante
perodos prolongados (7). Se necesitan muchos elementos activos en el ARN vrico
para la formacin del ADN. Por ejemplo, se ha observado que el denominado
elemento TAR, una pequea estructura en horquilla situada en el extremo 5' del ARN
vrico y que contiene un sitio de unin para la protena activadora de la transcripcin
Tat, es necesario para la iniciacin de la transcripcin inversa. Por otro lado, debido
a que la polimerasa vrica no contiene actividad correctora, el proceso de replicacin
es propenso a sufrir errores, y en cada nueva copia del genoma vrico se introducen
varias mutaciones puntuales. Este hecho explica la extremada variabilidad gentica
del VIH y la existencia de una poblacin vrica heterognea (cuasiespecies) dentro
de un mismo individuo.

Integrasa (p31): una vez sintetizado el ADN provrico, se acopla a una serie de
factores celulares y vricos, formando el complejo de preintegracin, que es
transportado al ncleo, donde tiene lugar la insercin del ADN vrico en el ADN
cromosmico de la clula infectada. Este proceso de integracin realizado por la
integrasa se lleva a cabo en tres fases (8). Primero, una actividad exonucleasa corta
dos nucletidos de cada extremo 3 del ADN vrico. A continuacin, una actividad
endonucleasa escinde el ADN celular en el sitio de integracin. Finalmente, una
actividad ligasa genera un enlace covalente en cada extremo del ADN provrico. Se
cree que es entonces cuando las enzimas celulares reparan el sitio de la integracin.
No se requiere ninguna fuente de energa exgena, como ATP, para estas
reacciones. La accesibilidad del ADN cromosmico parece ser un factor que influye
ms en la eleccin de los sitios de integracin que la existencia de determinadas
secuencias especficas en el ADN. As, los sitios de ADN cromosmico no
condensados son considerados "puntos calientes" para la integracin. Esta
integracin preferencial en las regiones de cromatina abierta, transcripcionalmente
activas, parece facilitar la expresin del provirus. Por otro lado, si el ADN provrico no
est integrado, los genes vricos no se expresan eficientemente (9).

Se sabe que parte del ADN vrico puede persistir o almacenarse en el citoplasma de la
clula sin integrarse (latencia preintegracin), integrndose en los cromosomas a
medida que pasa el tiempo y como consecuencia de diversos estmulos celulares (este
fenmeno podra explicar en parte las infecciones silentes). As, se distinguen cuatro

formas de ADN vrico: la de alto peso molecular de 9,8 kb integrada, la de un anillo

circular de 9,6 kb no integrada, la de un dplex lineal de 9.6 kb y la de otras formas
circulares defectivas de menor tamao, que pueden representar transcritos nacientes o
productos de degradacin.
Gen env

La protena precursora de envoltura, Env, de 160 kD (gp160) se expresa a partir del

ARNm maduro o tardo (al igual que gag y pol). Inicialmente es sintetizada en el retculo
endoplsmico y, posteriormente, migra al aparato de Golgi, donde es glucosilada
mediante la adicin de 25 a 30 cadenas laterales de carbohidratos que son agregados a
residuos de asparagina en el extremo N-terminal. Esta glucosilacin es imprescindible
para la infectividad vrica (10). Posteriormente, una proteasa celular escinde la gp160
en dos subunidades, la protena superficial (gp120) y la protena transmembrana
(gp41), que permanecen asociadas entre s de manera no covalente y que
oligomerizan, generalmente en trmeros, en la superficie del virin. En la partcula vrica
madura, estos trmeros dan lugar a las 72 proyecciones externas visibles en la bicapa
lipdica de la superficie vrica.

La interaccin entre el VIH-1 y su receptor celular CD4 est mediada a travs de

dominios

especficos

en

la

protena

superficial

gp120

(gp125

en

VIH-2).

Estructuralmente, la gp120 presenta nueve enlaces disulfuro intracatenarios altamente

conservados y cinco regiones hipervariables (denominadas V1-V5), cuyas secuencias
aminoacdicas pueden variar enormemente entre las cepas del VIH-1. Una de estas
regiones, la V3, no est implicada en la unin al receptor CD4, sino que acta ms bien
como un determinante del tropismo preferencial del VIH-1 hacia los linfocitos T o los
macrfagos (11). La secuencia V3 interacciona con los correceptores celulares CXCR4
y CCR5, que pertenecen a la familia de los receptores de quimiocinas y determinan
parcialmente el tropismo o sensibilidad celular de las cepas vricas (12). La regin V3
tambin es la diana principal para la neutralizacin de los anticuerpos que bloquean la
infectividad del VIH-1. El segmento gp120 tiene capacidad para interaccionar con una
lectina denominada DC-SIGN que se expresa en la superficie de las clulas dendrticas
de las mucosas. Esta interaccin facilita la posterior transmisin del VIH a los tejidos
linfoides, a la vez que favorece enormemente la propagacin vrica, ya que la
transmisin del VIH a los linfocitos CD4 tiene una eficacia muy superior a la capacidad
infectiva de las partculas vricas no unidas a estas lectinas.

Una vez que la protena vrica gp120 ha interaccionado con su receptor celular CD4, el
segmento gp41 del VIH-1 (gp36 en VIH-2), a travs de un dominio fusognico Nterminal, media la fusin de las membranas vricas y celular, lo cual permite la
internalizacin de los componentes del virin en el citoplasma de la clula recin
infectada (13). Actualmente, una nueva estrategia teraputica que previene la fusin del
VIH con la membrana celular est resultando muy prometedora.
Protenas reguladoras: genes tat y rev

Gen tat

Es un activador de la transcripcin en la replicacin del VIH-1. Este gen expresa una

protena Tat de unin al ARN que, a diferencia de los factores de transcripcin
convencionales, interacciona con el ADN. Tat se une a una estructura en horquilla,
conocida como elemento de respuesta a la transactivacin (TAR), localizada en el
extremo 5'-LTR del ARN vrico (14). La unin de Tat a la regin TAR se produce
conjuntamente con algunas protenas celulares que contribuyen a su funcin y activa al
menos 1000 veces la transcripcin del VIH.

Recientemente se ha aclarado el mecanismo de funcionamiento de Tat. Esta protena

acta fundamentalmente promoviendo la fase de elongacin de la transcripcin del VIH1, de modo que se puedan producir transcritos de longitud adecuada, ya que en
ausencia de la expresin de Tat, el VIH generar sobre todo transcritos cortos (>100
nucletidos). La estimulacin de la elongacin se consigue mediante el reclutamiento
de una serina quinasa que fosforila el dominio carboxiterminal de la ARN polimerasa II.
Esta quinasa, conocida como CDK9, forma parte de un complejo que se une
directamente a Tat. Para el funcionamiento de Tat se requiere tambin de un cofactor
celular, conocido como Ciclina T, que facilita el reconocimiento de la estructura en
horquilla de TAR por el complejo Ciclina T-Tat. Se han caracterizado las
concentraciones de Tat liberadas por las clulas infectadas, aunque el impacto de este
fenmeno en la patogenia del VIH es desconocido. Tambin se ha demostrado que Tat
activa la expresin de ciertos genes, como el factor beta de necrosis tumoral y el factor
beta de crecimiento, y que disminuye la expresin de otros genes, como el bcl-2 y el de
la quimiocina alfa MIP-1 (15).
Gen rev

Este gen codifica una protena de 19 kD, denominada Rev, capaz de unirse de manera
especfica al ARN vrico (16). Procede del ARNm maduro y favorece la transicin de la
expresin gnica del VIH de la fase temprana a la tarda. Rev, que es codificada por
dos exones, se acumula en los ncleos y nucleolos de las clulas infectadas. Esta
protena se une a una estructura secundaria del ARN de 240 bases, denominada
Elemento de Respuesta a Rev (RRE), que se halla en el segundo intrn del VIH. La
unin de Rev al RRE facilita la exportacin de ARN vricos no procesados (unsplicing)
del ncleo al retculo endoplasmtico rugoso, donde son traducidos a protenas por los
ribosomas celulares. Se sabe que la expresin de los ARNm que codifican los
denominados genes tardos (gag, pol, env, vpr, vpu y vif) requieren de Rev para ser
expresados, mientras que la expresin de los genes tempranos (tat, rev y nef) es
independiente de Rev (17).

La sobreexpresin de la Rev produce una mayor exportacin de intrones, de manera

que la cantidad de ARN disponible para su procesamiento se ve disminuida, lo cual
reduce a su vez la expresin de la Rev. Esta capacidad de la Rev de disminuir la tasa
de procesamiento del ARN vrico genera una va de retroalimentacin negativa por la
cual se regula el grado de expresin de la Rev (18).

Se ha detectado que la protena Rev contiene al menos tres dominios funcionales: una
regin rica en arginina de unin al ARN que media las interacciones con el RRE, un
dominio multimrico necesario para el funcionamiento de Rev y un dominio efector que
acta como una Seal Nuclear de Exportacin especfica (19). La exportacin ncleocitoplasmtica del ARN vrico mediada por Rev se realiza a travs de una va de ARN
pequeos nucleares (ARNsn) y de ARN ribosomal 5s, en lugar de la va habitual de
ARNm. Se ha detectado que la protena Rev es absolutamente imprescindible para la
replicacin del VIH-1: los provirus que carecen de su funcin son transcripcionalmente
activos, pero no expresan los genes vricos tardos y, por tanto, no producen viriones.
Protenas accesorias: genes nef, vpr, vpu y vif

Adems de los genes estructurales gag, pol y env, presentes en todos los retrovirus, y
de los genes reguladores tat y rev, el VIH-1 contiene cuatro genes adicionales: nef, vpr,
vpu y vif, que codifican las denominadas protenas accesorias. El VIH-2 no contiene el
gen vpu, pero contiene otro gen, el vpx. Las protenas accesorias no son
imprescindibles para la replicacin vrica en todos los sistemas in vitro, pero
representan factores crticos para la virulencia in vivo. El gen nef se expresa a partir del

ARNm maduro y es, por tanto, independiente de la protena Rev. En contraposicin, los
genes vpr, vpu, y vif son los productos de un ARNm no totalmente procesado y,
adems, se expresan nicamente durante la ltima fase de la infeccin (dependiente de
Rev). La mayora de las pequeas protenas accesorias del VIH tienen mltiples
funciones, tal como veremos a continuacin.

Protena Nef
Nef (acrnimo de factor negativo) es una protena miristilada de 27 kD codificada por
un solo exn, localizado en la regin 3'-LTR. Nef, un gen temprano del VIH, es la
primera protena vrica que se acumula en concentraciones perceptibles en la clula
infectada (16). Su nombre deriva de su capacidad para regular negativamente la
actividad transcripcional del VIH-1. Sin embargo, no parece que Nef tenga un efecto
directo en la expresin gnica del VIH. Se ha observado que puede tener mltiples
actividades, entre las que destacan:

Disminucin de la tasa de expresin de CD4, principal receptor celular del VIH, en

la superficie celular (20): Nef incrementa la tasa de endocitosis de CD4 y la
degradacin lisosomal. El extremo citoplsmico de CD4, concretamente una
secuencia repetitiva de leucinas contenida en la regin prxima a la membrana, es
la clave para el efecto de Nef sobre CD4. La disminucin de la expresin de CD4
parece ser una ventaja para la replicacin vrica, porque el exceso de CD4 en la
superficie celular inhibe tanto la incorporacin de la protena de envoltura Env como
la salida de viriones. Nef tambin disminuye, aunque en menor grado, la expresin
de MHC-I en la superficie celular; esto ltimo hace que disminuya la capacidad de
los linfocitos T citotxicos para eliminar las clulas infectadas por el VIH.

Interferencia en la activacin de linfocitos T: estudios en clulas T indican que la

expresin de Nef tiene un efecto negativo en la induccin del llamado factor nuclear
kappa beta (regulador de la transcripcin celular) y en la expresin de la
interleucina-2 (factor de crecimiento de clulas T). Por el contrario, resultados
obtenidos en ratones transgnicos que expresan Nef muestran que la accin de
esta protena precede a la seal de incremento de las clulas T. Tambin se ha
observado que la expresin de Nef tiene efectos divergentes, positivos o negativos,
sobre la activacin de las clulas T, dependiendo de su localizacin intracelular
(21). As, cuando la protena Nef se acumula en el citoplasma, se produce un
bloqueo en el receptor de la clula T; sin embargo, cuando Nef se expresa en

concentraciones elevadas en la superficie celular, se detecta una activacin

espontnea seguida de apoptosis. Todas estas observaciones sugieren que Nef
puede ejercer efectos distintos sobre la activacin del linfocito T, dependiendo del
contexto de su expresin. En concordancia con esta teora, se ha observado que
Nef se asocia a otras quinasas celulares presentes en los linfocitos T helper.

Estimulacin de la infectividad de los viriones: las partculas de VIH producidas en

presencia de Nef aumentan hasta diez veces su capacidad infecciosa en
comparacin con los viriones producidos en su ausencia. Nef es incorporada dentro
de los viriones, donde es escindida por una proteasa vrica durante la maduracin
vrica. La importancia de este acontecimiento, sin embargo, todava no est clara.
Los viriones producidos en ausencia de Nef son menos eficientes en la sntesis de
ADN provrico, aunque Nef no parece influir directamente en el proceso de la
transcripcin inversa. La regulacin negativa de CD4 y el efecto sobre la
infectividad del virin causadas por Nef son genticamente distintas, segn se ha
demostrado mediante ciertas mutaciones que afectan solamente a una de estas
dos actividades (17).

Existe suficiente evidencia gentica indicativa de que la protena Nef del virus de la
inmunodeficiencia en simios (SIV) es imprescindible para la obtencin de cargas virales
altas y el posterior desarrollo de la enfermedad en animales adultos. Sin embargo, esto
tambin se ha observado en mutantes Nef-defectivos del SIV en animales recin
nacidos. Adems, los viriones Nef-defectivos causan una enfermedad similar al SIDA
en animales infectados, aunque su comienzo se retrase (22).

Protena Vpr
Vpr (acrnimo de protena vrica reguladora) se incorpora al interior de las partculas
vricas en una tasa aproximada de 100 copias de la protena por virin. Esta
incorporacin de Vpr se realiza mediante interacciones especficas con la regin
carboxiterminal de la protena precursora Gag p55 (con una alta participacin de la
protena p6).

La protena Vpr desempea un papel relevante en la capacidad infectiva del VIH en

clulas que no estn en divisin, ya que facilita la localizacin del complejo de
preintegracin (23). Sin embargo, ms que establecer seales de localizacin del
complejo, la protena Vpr parece actuar como un factor de transporte ncleo-

citoplasmtico que une directamente el ADN vrico al poro nuclear. De esta manera, Vpr
parece actuar acelerando el proceso de replicacin vrica.

Vpr tambin puede bloquear la divisin celular (24). Se ha descrito que las clulas
infectadas presentan acumulacin de Vpr en la fase G2 del ciclo celular y que la
expresin de Vpr previene la activacin del complejo p34cdc2/ciclina b, un importante
regulador del ciclo celular para la entrada en mitosis. Por consiguiente, la expresin de
mutantes constitutivos p34cdc2 previene la acumulacin inducida de Vpr en clulas que
se encuentren en fase G2.

Tambin se ha demostrado que Vpr interacciona con la protena ADN-uracilo

glucosilasa, aunque las consecuencias biolgicas de este fenmeno no se conocen.
Otra enzima implicada en la modificacin del desoxiuracilo (dUTP), la desoxiuracilo
fosfatasa (dUTPasa), es expresada por dos lentivirus que no contienen el gen vpr: el
virus de la anemia infecciosa equina y el virus de la inmunodeficiencia felina. Se cree
que la dUTPasa reduce las concentraciones de dUTP dentro de la clula; as previene
las consecuencias deletreas de la incorporacin de este desoxinucletido al ADN
vrico (25).

Protena Vpu

El polipptido Vpu (acrnimo de Viral Protein, Unknown), de 16 kD, es una

fosfoprotena integral de membrana que se localiza fundamentalmente en la membrana
interna de la clula (26). Vpu se expresa a partir del ARNm que codifica tambin la
protena Env. Sin embargo, Vpu se traduce en unas concentraciones diez veces ms
bajas que Env, debido a que el codn de iniciacin de la traduccin de Vpu no es tan
eficiente. Las dos principales funciones de Vpu son:

Regulacin negativa de CD4: en clulas infectadas por el VIH, los complejos

formados por el receptor vrico (CD4) y la protena vrica de envoltura Env son
captados por el retculo endoplsmico celular. De esta manera, la formacin de los
complejos intracelulares CD4-Env interfiere con el proceso de ensamblaje vrico.
Vpu libera la envoltura vrica accionando la degradacin, mediada por la ubiquitina,
de las molculas CD4 acomplejadas con Env (27).

Intensificacin de la liberacin del VIH de la superficie celular: en ausencia de Vpu,

se pueden observar grandes cantidades de viriones unidos todava a la superficie
de las clulas infectadas (28).

Como ya se ha comentado, el VIH-2 no contiene el gen vpu, pero contiene otro gen, el
vpx, que codifica una protena de 113 aminocidos y que permite la infeccin de los
macrfagos y la diseminacin vrica.

Protena Vif
Vif (acrnimo de factor de infecciosidad vrica) es un polipptido de 23 kD que
aumenta la infectividad del VIH entre 100 y 1000 veces. Es esencial para la replicacin
del VIH en los linfocitos de sangre perifrica y macrfagos; sin embargo, en la mayora
de las lneas celulares, esta protena no es necesaria, lo que sugiere que estas clulas
pueden expresar una protena complementaria para la funcin de Vif. A estas lneas
celulares se las conoce como permisivas para los mutantes Vif-defectivos del VIH, y se
ha observado que los viriones generados en las clulas permisivas pueden infectar
clulas no permisivas, pero que los virus producidos posteriormente no son infecciosos.

Estudios genticos indican que es posible restaurar la infectividad de los mutantes Vif
mediante su expresin en clulas productoras, pero no en clulas diana. Estos trabajos
indican que Vif debe estar presente durante el proceso de ensamblaje del virin. Otros
estudios han demostrado cmo Vif se incorpora a los viriones del VIH, aunque este
fenmeno, sin embargo, podra no ser especfico, ya que Vif tambin puede ser
incorporado en retrovirus heterlogos, como el virus de la leucemia murina. Los
estudios de produccin de partculas vricas del VIH a partir de heterocariones
generados por la fusin de clulas permisivas y no permisivas revelan que las clulas
no permisivas contienen naturalmente un factor antivrico (protena APOBEC3G) que es
superado por Vif. Adems, una evidencia a favor de que Vif contrarresta a un factor
antivrico celular sera que las protenas Vif de diversos lentivirus son especficas de
especie. Por ejemplo, la protena Vif del VIH puede modular la infectividad del VIH-2 y
del SIV en clulas humanas, mientras que la protena Vif del SIV no funciona en clulas
humanas. Esta observacin sugiere que los factores celulares, ms que los
componentes vricos, son la diana de accin de Vif. Las cepas Vif-defectivas se pueden
incorporar a las clulas, pero no pueden sintetizar eficientemente el ADN provrico. No
est claro si los defectos en Vif afectan directamente a la transcripcin inversa, al
recubrimiento vrico o a la estabilidad del complejo nucleproteico vrico. Los viriones

mutantes en Vif ensamblan incorrectamente la nucleocpside segn se ha observado

mediante microscopia electrnica (29).

Regulacin de la expresin genmica del VIH

La regulacin de la expresin gnica del VIH tiene lugar tanto a nivel transcripcional
como postranscripcional, y se lleva a cabo mediante una combinacin de factores
celulares y vricos. Segn su expresin gentica en el tiempo, los genes del VIH se
pueden clasificar en tempranos y tardos (17). Los genes tempranos, tat, rev y nef, se
expresan en un proceso independiente de la protena Rev, mientras que los ARNm que
codifican genes tardos (gag, pol, env, vpr, vpu y vif) requieren de Rev para ser
localizados en el citoplasma y ser expresados.

La transcripcin del VIH se mide por un nico promotor en el extremo 5'-LTR. Su

expresin genera un transcrito primario de 9 kb que tiene la capacidad de codificar los
nueve genes del VIH (gag, pol, env; tat, rev; nef, vpr, vpu y vif). Este transcrito primario
es aproximadamente 600 bases ms corto que el provirus, y puede ser procesado
(splicing) y dar lugar a ms de 30 tipos distintos de ARNm, o incorporado sin
modificacin adicional al virin (actuando entonces como genoma vrico). Los extremos
genmicos LTR estn compuestos por tres subregiones denominadas U3, R y U5 (30),
que deben su nombre a su localizacin dentro del transcrito primario:

La subregin U3 (secuencia nica 3') tiene aproximadamente 450 pb y est situada

en el extremo 5' de cada LTR. Esta porcin U3 contiene muchos de los puntos
activos del ADN que actan como sitios de unin para factores de transcripcin.

La regin central de cada LTR contiene la subregin R (secuencia repetitiva) de 100

pb. La transcripcin comienza en la primera base de la subregin R y la
poliadenilacin ocurre inmediatamente despus de la ltima base de R.

La subregin U5 (secuencia nica 5') tiene una longitud de 180 pb y se sita en el

extremo 3' de cada LTR. Contiene el sitio de unin para la protena Tat (activador
de la transcripcin) y las secuencias de empaquetamiento del VIH. El extremo 3' de
la subregin U5 5-LTR est caracterizado por la localizacin de un sitio de unin
lisina-tARN, el cual acta como iniciador para la transcripcin inversa.

Los extremos genmicos LTR del VIH contienen sitios de unin para diversos factores
reguladores de la transcripcin. La clave para la activacin de la transcripcin del
provirus son una familia de protenas que regulan la transcripcin celular, denominada
factor nuclear kappa beta (NF-B) (31). Este factor no existe en forma activa en los
linfocitos CD4 en reposo y se induce slo en procesos de activacin inmunitaria, por lo
que la replicacin del VIH depende absolutamente de la activacin de los linfocitos
infectados. En la subregin U3-LTR del VIH-1 existen dos sitios NF-B adyacentes.
Esta protena hace que la infeccin vrica provoque la activacin del linfocito T latente
infectado. La activacin del receptor del linfocito T (TCR) provoca que la forma inactiva
de NF-B, localizada en el citoplasma, sea traslocada al ncleo, donde induce la
expresin de una serie de genes de activacin especficos del linfocito T. Los factores
NF-B y la consiguiente activacin de la transcripcin del VIH tambin pueden ser
inducidas por diversas citocinas celulares, como el factor de necrosis tumoral (TNF) alfa
y la interleucina-1. El extremo genmico LTR del VIH tambin contiene sitios de unin
para los factores de transcripcin constitutivos SP-1, Lef y Ets, junto con los sitios de
unin para los factores de transcripcin inducibles NF-AT y AP-1. Se sabe que las
protenas Lef y NF-AT son factores especficos del linfocito T y que los sitios de unin
SP-1 son esenciales para el funcionamiento del promotor del VIH.

La activacin inicial del LTR del VIH es consecuencia de factores de transcripcin

celulares, tanto inducibles como constitutivos. La activacin del LTR por los factores
celulares de transcripcin conlleva, principalmente, la formacin de transcritos cortos.
Estos transcritos son formados, en parte, por un elemento situado a continuacin del
sitio de iniciacin de la transcripcin, conocido como inductor de transcritos cortos (32).
Sin embargo, tambin se generan algunos transcritos completos que permiten la
produccin de la protena Tat. Esta protena interacciona entonces con el elemento TAR
para aumentar el grado de transcripcin de los ARN vricos. La protena Tat desempea
as un papel clave en la activacin y el mantenimiento del alto grado de transcripcin
del ADN provrico.
La transcripcin primaria del VIH-1 contiene mltiples donantes (sitios de splicing 5') y
aceptores (sitios de splicing 3') para el procesamiento, que se pueden combinar para
producir ms de 30 ARNm alternativos. Muchos de los ARNm son policistrnicos, es
decir, contienen un marco de lectura abierto (ORF) para ms de una protena, aunque
los ARNm policistrnicos expresan generalmente un solo producto. La eleccin de una
determinada pauta de lectura viene dada por la eficacia del codn de iniciacin y la

proximidad de dicho codn al extremo 5' del ARNm. Los ARNm del VIH-1 se dividen en
tres categoras segn su tamao:

ARN no procesado (unsplicing ARN): este transcrito primario de 9 Kb puede ser

expresado para generar las protenas gag y el precursor gag-pol, o puede ser
incorporado en los viriones de modo que acte como ARN genmico.

ARN procesados incompletos: estos ARN pueden expresar las protenas Env, Vif,
Vpu, Vpr y la forma de Tat codificada por un nico exn. Estos ARNm heterogneos
tienen una longitud de 4-5 Kb y conservan el segundo intrn del VIH.

ARN completamente procesado: estos ARNm han procesado ambos intrones del
VIH y tienen el potencial de expresar Rev, Nef y la forma de Tat codificada por dos
exones. Estos ARNm heterogneos no requieren la expresin de la protena Rev.

Normalmente,

los

ARN

vricos

que

contienen

todava

intrones

deben

ser

completamente procesados (splicing) antes de que puedan salir del ncleo. Esta
regulacin es esencial, porque previene la traduccin de secuencias intrnicas
contenidas en ARNm parcialmente procesados. La protena Rev se une a ARN vricos
que contienen intrones, y dirige su exportacin desde el ncleo al citoplasma. Esta
exportacin permite que estos ARN vricos poco convencionales sorteen el "punto de
control" del procesamiento del ARN. Los ARNm vricos completamente procesados
salen del ncleo usando la va de exportacin utilizada por la mayora de ARNm
celulares. Se requieren concentraciones mnimas de Rev para la exportacin de los
ARNm del VIH que contienen intrones, lo que explica que stos codifiquen los genes
vricos tardos. En contraposicin, las protenas codificadas por los ARNm
completamente procesados (Nef, Tat, y Rev) pueden ser producidas inmediatamente,
actuando como genes vricos tempranos.
Bibliografa
1. Gallo, R., Wong-Staal, F., Montagnier, L. y cols. HIV/HTLV gene nomenclature.
Nature 1988; 333: 504.
2. Gottlinger, H.G., Sodroski, J.G., Haseltine, W.A. Role of capsid precursor processing
and myristoylation in morphogenesis and infectivity of human immunodeficiency
virus type 1. Proc Natl Acad Sci USA 1989; 86: 5781-5785.

3. Franke, E.K., Luban, J. Inhibition of HIV-1 replication by cyclosporine A or related

compounds correlates with the ability to disrupt the gag-cyclophilin A interaction.
Virology 1996; 222: 279-282.
4. Lapadat-Tapolsky, M., De Rocquigny, H., Van Gent, D. y cols. Interactions between
HIV-1 nucleocapsid protein and viral DNA may have important functions in the viral
life cycle. Nucleic Acids Res 1993; 21: 831-839.
5. Paxton, W., Connor, R.I., Landau, N.R. Incorporation of Vpr into human
immunodeficiency virus type 1 virions: Requirement for the p6 region of gag and
mutational analysis. J Virol 1993; 67: 7229-7237.
6. Navia, M.A., Fitzgerald, P.M., McKeever, B.M. y cols. Three-dimensional structure of
aspartyl protease from human immunodeficiency virus HIV-1. Nature 1989; 337:
615-620.
7. Zack, J.A., Arrigo, S.J., Weitsman, S.R. y cols. HIV-1 entry into quiescent primary
lymphocytes: Molecular analysis reveals a labile, latent viral structure. Cell 1990; 61:
213-222.
8. Bushman, F.D., Fujiwara, T., Craigie, R. Retroviral DNA integration directed by HIV
integration protein in vitro. Science 1990; 249: 1555-1558.
9. Wiskerchen, M., Muesing, M.A. Human immunodeficiency virus type 1 integrase:
Effects of mutations on viral ability to integrate, direct viral gene expression from
unintegrated viral DNA templates, and sustain viral propagation in primary cells. J
Virol 1995; 69: 376-386.
10. Capon, D.J., Ward, R.H. The CD4-gp120 interaction and AIDS pathogenesis. Annu
Rev Immunol 1991; 9 649-678.
11. Hwang, S.S., Boyle, T.J., Lyerly, H.K., Cullen, B.R. Identification of the envelope V3
loop as the primary determinant of cell tropism in HIV-1. Science 1991; 253: 71-74.
12. Deng, H., Liu, R., Ellmeier, W. y cols. Identification of a major co-receptor for primary
isolates of HIV-1. Nature 1996; 381: 661-666.
13. Camerini, D., Seed, B. A CD4 domain important for HIV-mediated syncytium
formation lies outside the virus binding site. Cell 1990; 60: 747-754.
14. Roy, S., Delling, U., Chen, C.H. y cols. A bulge structure in HIV-1 TAR RNA is
required for Tat binding and Tat-mediated trans-activation. Genes Dev 1990; 4:1365.
15. Wei, P., Garber, M.E., Fang, S.M., Fischer, W.H., Jones, K.A. A novel CDK9associated C-type cyclin interacts directly with HIV-1 Tat and mediates its highaffinity, loop-specific binding to TAR RNA. Cell 1998; 92: 451-462.
16. Kim, S.Y., Byrn, R., Groopman, J. y cols. Temporal aspects of DNA and RNA
synthesis during human immunodeficiency virus infection: Evidence for differential
gene expression. J Virol 1989; 63: 3708-3713.

17. Pandori, M.W., Fitch, N.J., Craig, H.M. y cols. Producer-cell modification of human
immunodeficiency virus type 1: Nef is a virion protein. J Virol 1996; 70: 4283-4290.
18. Felber, B.K., Drysdale, C.M., Pavlakis, G.N. Feedback regulation of human
immunodeficiency virus type 1 expression by the Rev protein. J Virol 1990; 64: 37343741.
19. Fischer, U., Huber, J., Boelens, W.C. y cols. The HIV-1 Rev activation domain is a
nuclear export signal that accesses an export pathway used by specific cellular
RNAs. Cell 1995; 82: 475-483.
20. Lama, J., Mangasarian, A., Trono, D. Cell-surface expression of CD4 reduces HIV-1
infectivity by blocking Env incorporation in a Nef- and Vpu-inhibitable manner. Curr
Biol 1999; 9: 622-631.
21. Baur, A.S., Sawai, E.T., Dazin, P. y cols. HIV-1 Nef leads to inhibition or activation of
T cells depending on its intracellular localization. Immunity 1994; 1: 373-384.
22. Collins, K.L., Nabel, G.J. Naturally attenuated HIV-lessons for AIDS vaccines and
treatment. N Engl J Med 1999; 340: 1756-1757.
23. Heinzinger, N.K., Bukinsky, M.I., Haggerty, S.A. y cols. The Vpr protein of human
immunodeficiency virus type 1 influences nuclear localization of viral nucleic acids in
nondividing host cells. Proc Natl Acad Sci USA 1994; 91: 7311-7315.
24. Rogel, M.E., Wu, L.I., Emerman, M. The human immunodeficiency virus type 1 vpr
gene prevents cell proliferation during chronic infection. J Virol 1995; 69: 882-888.
25. Bouhamdan, M., Benichou, S., Rey, F. y cols. Human immunodeficiency virus type 1
Vpr protein binds to the uracil DNA glycosylase DNA repair enzyme. J Virol 1996;
70: 697-704.
26. Sato, A., Igarashi, H., Adachi, A. y cols. Identification and localization of vpr gene
product of human immunodeficiency virus type 1. Virus Genes 1990; 4: 303-312.
27. Willey, R.L., Maldarelli, F., Martin, M.A. y cols. Human immunodeficiency virus type
1 Vpu protein induces rapid degradation of CD4. J Virol 1992; 66(12): 7193-7200.
28. Klimkait, T., Strebel, K., Hoggan, M.A. y cols. The human immunodeficiency virus
type 1-specific protein vpu is required for efficient virus maturation and release. J
Virol 1990; 64: 621-629.
29. Simon, J.H., Gaddis, N.C., Fouchier, R.A., Malim, M.H. Evidence for a newly
discovered cellular anti-HIV-1 phenotype. Nat Med 1998; 4: 1397-1400.
30. Starcich, B., Ratner, L., Josephs, S.F. y cols. Characterization of long terminal
repeat sequences of HTLV-III. Science 1985; 227: 538-540.
31. Nabel, G., Baltimore, D. An inducible transcription factor activates expression of
human immunodeficiency virus in T cells. Nature 1987; 326: 711-713.

32. Sheldon, M., Ratnasabapathy, R., Hernandez, N. Characterization of the inducer of

short transcripts, a human immunodeficiency virus type 1 transcriptional element that
activates the synthesis of short RNAs. Mol Cell Biol 1993; 13: 1251-1263.