Prctica No. 9: Enterobacterias.

Objetivo
Desarrollar las tcnicas de aislamiento e identificacin de enterobacterias, comprendiendo el
significado de las pruebas bioqumicas.

Introduccin
La familia Enterobacteriaceae constituye un grupo grande y heterogneo de bacterias
gramnegativas. Reciben su nombre por la localizacin habitual como saprofitos en el tubo
digestivo, aunque se trata de grmenes ubicuos, encontrndose de forma universal en el suelo,
el agua y la vegetacin, as como formando parte de la flora intestinal normal de muchos
animales adems del hombre. Escherichia coli, el microorganismo ms prevalente de esta
familia, es una de las bacterias prototpicas sometidas a estudio. En las personas
hospitalizadas o inmunodeprimidas (incluyendo los pacientes alcohlicos y diabticos), en
especial en los pacientes que reciben tratamiento antibitico, hay colonizacin por
Enterobacteriaceae, adems de en el tubo digestivo, en la orofaringe, el aparato genitourinario
y la piel. La infeccin por estas bacterias es frecuente en estos contextos. La proporcin de
aislados resistentes a mltiples antimicrobianos, incluidos aquellos que producen
betalactamasas de espectro extendido (BLEE), ha aumentado de forma ininterrumpida, de
modo que casi todos los aislados nosocomiales, y muchos de los aislados adquiridos en la
comunidad, son ahora resistentes a varias clases importantes de antimicrobianos. Diferentes
factores han contribuido al incremento de las infecciones por enterobacterias en nuestros
hospitales: el uso cada vez mayor de tcnicas diagnsticas y teraputicas agresivas (catteres
intravenosos, endoscopias, intervenciones), el empleo de potentes inmunosupresores y las
estancias hospitalarias prolongadas, entre otros.
Escherichia coli
Escherichia coli es el microorganismo de vida libre que mejor se ha estudiado. Estas bacterias
pueden ser mviles (la mayora) o inmviles, la mayor parte de ellas fermentan la lactosa y son
capaces de producir indol a partir de triptfano.
Salmonella
Se trata de un gnero de enterobacterias no formadores de esporas, anaerobias facultativas y
mviles. Son oxidasa negativas y prcticamente todas lactosa negativas. La salmonella Tiphy,
Paratiphy, Cholerasius son algunas especies patgenas para el hombre.

Shigella
Shigella spp. es responsable de la disentera bacilar. Se trata de un cuadro muy similar al
producido por las cepas entero- hemorrgicas o enteroinvasivas de E. coli. El origen de la
infeccin se produce a travs de la contaminacin de vegetales. El diagnstico se realiza a
travs del coprocultivo. El trata- miento se basa en la rehidratacin y tratamiento antibitico,
que estara indicado en todos los casos.
Yersinia
Para el hombre los microorganismos patgenos son Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica y
Yersinia pseudotuberculosis. Se trata de zoonosis que habitualmente afectan a roedores, cerdos y aves, siendo el ser humano un husped accidental de la infeccin.
Helicobacter pylori
Es una bacteria gram negativa, microaeroflica, espiroidea, que coloniza primariamente la
mucosa gstrica antral, en uno de sus polos posee multiples flagelos grandes, lo cual produce
una inflamacin aguda y crnica denominada gastritis crnica activa, la infeccin se ha
asociado a la lcera peptica, adenocarcinoma y linfoma gstrico.
Los medios selectivos para enterobacterias son, el agar E.M.B. eosina azul de metileno, el
agar salmonella shigella y el agar verde brillante McConkey.
Para identificar tambin se utilizan:
1. El agar Kliger (lactosa-maltosa): esta se utiliza para saber si hay fermentacin, cido
sulfhdrico.
2. Citrato de Simmons: determina si la bacteria utiliza citrato como fuente de carbono.
3. Agar fenil Alanina: se utiliza para saber si la bacteria quita el grupo amino, quedando
un cido.
4. Agar LIA (Lisina Hierro): se utiliza para saber si descarboxila la lisina.
5. Agar semislido SIM (sulfuros, indol, motilidad): se utiliza para saber si hay produccin
de cido sulfhdrico, produccin de indol, si la bacteria es inmvil o no.
6. MIO (motilidad, indol, ornitina): se usa para saber si la bacteria descarboxila la ornitina ,
si se produce indol y si tiene motilidad.
7. Caldo VP (Voges Proskawer): el rojo de metilo determina a partir de glucolisis y este a
partir de cidos en un medio amortiguador. Voges determina si la bacteria tiene
fermentacin butrica.

Material y Metodologa
En un agar salmonella Shiguella, se coloc la bacteria Proteus. Despus tomamos del cultivo
con un asa una pequea muestra y despus se inocularon los tubos 1, 2, 3, 4, en forma
estriada, despus con un asa delgada, se procedi en cada tubo, pinchar en el centro para
arrastrar la bacteria, pero en cada tubo se cont con la ayuda del mechero bunsen para
esterilizar, en el 5 tubo se pinch directo, en el tubo 6 y 7 se tom muestra de la bacteria
nuevamente y se inoculo directo al agar lquido, despus se dej en incubacin. Despus de la
incubacin, en el rojo de metilo, se agreg el reactivo rojo de metilo (2 gotas) para saber el
resultado, despus en voges se agreg 2 gotas de alfanaftol y 2 gotas de hidrxido de potasio,
y se registr resultados.

Resultados

La muestra de Proteus estaba contaminada, pero se puede revisar que el agar Salmonella
Shigella (Agar amarillo) hubo fermentacin, las colonias son de color negro, pequeos.

Esta imagen nos muestra los tubos ya incubados,

listos para ser examinados.

Esta imagen es del tubo 1 (agar Kigler) antes estaba en agar naranja.
Esto demuestra que hubo produccin de cido sulfhdrico pero no
fermentacin.

El tubo 2 es de citrato Simmons, su tono es

azul, se alcaliniz el medio porque hubo degradacin de citrato menor
proporcin.

Se agreg 2 gotas de cloruro frrico, fue negativa,

su color es amarilloso.

Esta prueba sali negativa, hubo produccin de cido sulfhdrico.

En el tubo 5, hubo motilidad, tambin hubo

produccin de cido sulfhdrico, se agreg 2 gotas de
reactivo Kovak y la aparicin de anillo rojo da positivo
a indol.

En el tubo 6, se cree que hubo un error, dio negativo.

El rojo de metilo y el Voges Proskawer dieron negativos.

Prueba

Proteus spp

Agar Klieger

Produccin de HO

Citrato de Simmons

+ citrato, HS

Agar Fenil Alanina

Agar LIA

Agar SIM

+ a todo

MIO

_ a ornitina

Caldo Voges Proskawer

_ a las 2 pruebas.

Conclusin
Despus de llevar a cabo varias las tcnicas anteriormente mencionadas y haber observado las
reacciones que se llevaron a cabo y las que no, se concluy que utilizando este conjunto de
pruebas bioqumicas es la mejor manera de orientarse en la identificacin del gnero de las
enterobacterias.

Bibliografa
Enfermedades infecciosas. Principios y Prctica. Mandell GL, Dolin R, Bennett J, editores. 6.a
ed. Madrid: Elsevier Churchill Livingsto- ne; 2006.

Teora vista en clase de laboratorio con el profesor Luis Alarcn (Apuntes)