Tema 6A: Microbiologa Industrial

- Definicin.
- Origen e historia.
- Marco actual.

Definicin
Microbiologa Industrial:
Rama de la Microbiologa encargada del estudio de los microorganismos, o
sus componentes, de los cuales se obtiene un bien o servicio.
Biotecnologa:
Conjunto de tcnicas que emplean a los seres vivos o sus componentes
celulares para producir bienes, servicios o modificar los existentes a travs de
innovaciones.
Biotecnologa microbiana:
Conjunto de tcnicas que emplean MICROORGANISMOS o sus componentes
celulares para producir bienes, servicios o modificar los existentes a travs de
innovaciones. Es una disciplina transversal.
Tipos de Biotecnologa:
Red Biotechnology o biomdica, uso de la tecnologa biolgica en la salud
humana o animal.
White Biotechnology o industrial, uso que hace la industria de la tecnologa
biolgica.
Green Biotechnology o vegetal, uso de la tecnologa biolgica para la
mejora de cultivos y medioambiental.
Blue Biotechnology o marina, uso de la tecnologa biolgica en los
ecosistemas acuticos.
Tres bienes producidos con microorganismos: vinagre, pan, productos
lcteos, biofertilizantes, bioindicadores, biogas, vitamina C, antibiticos,
biocemento, control de plagas.
Conversin de etOH a Ac. Actico: diap 26
1

El oxgeno tiene que estar presente debido a la estequiometra y a que Acetobacter

aceti es aerobio. El alcohol se transforma en acetaldehdo y ste en actico.

Conversin de glucosa a cido lctico:

Plantea la reaccin: Glucosa --> c. Lctico: C6H12O6 --> 2C3H6O3. El
microorganismo productor (o catalizador) sera: buscar Lactobacillus y decir por
qu. El nombre del producto sera Danone, yogures...
Rendimiento:
Moles=g/PM

1mol glucosa: 180g

1mol de ac. Lctico: 180,16g

Rendimiento=glucosa/lctico= 1g/g (aprox.)

Es importante que sea un organismo homolctico ya que as se produce solo
cido lctico. Se pueden usar diversos gneros pero de las LAB, Lactobacillus
delbrueckii es el microorganismo ms utilizado en la produccin a gran escala de
cido lctico, ya que tiene la ventaja de producir nicamente ismeros L (+),
consumir eficientemente glucosa y ser un microorganismo termfilo con
temperatura ptima de crecimiento 41.5C, lo que reduce costes de enfriamiento y
esterilizacin, as como riesgos de contaminacin microbiolgica en el fermentador.
Este microorganismo crece bien a un pH entre 5,5 y 6,5 por lo que el cido
producido debe ser continuamente neutralizado.

Origen e historia:
Por qu se populariz el trmino de biotecnologa?
Antes solo se pensaba que biotecnologa era introducir ADN en E coli y que
sta produjera algo. Pero en cuanto comenz a aplicarse a la agricultura y la
ganadera ya se considera que se hace biotecnologa moderna.
En el ao 73 se populariz el trmino de biotecnologa ya que consiguieron
introducir ADN exgeno en un microorganismo. Cercano a los aos 80 se empez a
hacer la biotecnologa moderna y actualmente sera biotecnologa contempornea.
Etapas de la biotecnologa:
- Etapa tradicional: lo primero que se hace con microorganismos es
fermentar en vinos y cervezas. En la edad media se usaban cadveres como armas
biolgicas. Luego se entr en una etapa precientfica en la que lo primero que se
descubri en microbiologa fu la existencia de los microorganismos (Lewenhoek,
buscar el nombre). En el siglo dieciocho se vacunaba con microorganismos vivos (E.
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Jenner 1796), aunque la medicina tradicional china ya usaba la vacunacin en el

siglo XVII.
- Etapa cientfica: en el siglo XIX se desecha la hiptesis de la generacin
espontnea (Pasteur). A partir de aqu consideramos la etapa preindustrial en la
que el mismo Pasteur patent una levadura libre de grmenes de enfermedad como
artculo de manufactura: Pasteurizacin.
- Etapa industrial: En la dcada de 1900-1910 se acua el trmino gen,
despus se produce glicerol y acetona con microorganismos durante los periodos de
guerra. En los aos 20-50 se descubren los antibiticos (Flemming) y se producen
industrialmente en EEUU. En los aos 31-40 se acua el trmino de Biologa
Molecular.
A parte de Flemming y de Pasteur tenemos a Carl Neuberg (1877-1956): el
padre de la bioqumica. Hizo que Sacharomices produjera mucho glicerol en lugar
de cerveza. Lo consigu inhibiendo la sntesis de etanol.
Chaim Weizmann (1874-1952) produjo acetona con Clostridium
acetobutylicum. Este hombre consigui que los ingleses ganaran la guerra
produciendo acetona. Convenci a los ingleses para que Palestina se convirtiera en
un estado.
En la dcada de los 70-80 nace la biotecnologa moderna microbiana. Se
convoc una conferencia internacional para evaluar los riesgos de la tecnologa del
ADN recombinante. Se fund la pimera compaia biotecnolgica y la primera
compaa bioinformtica. Y se cre el primer programa de correo electrnico.
Adems, la primera compaa biotecnolgica que pasa a la historia es Genentech.
Una de las primeras cosas que produjo fue insulina.
Buscar: Hito de biotecnologa microbiana del ao 2014 para maana.
Escribirlo en un folio y traerlo. No tiene por qu ser con microorganismos.

Marco actual:
El PIB espaol en 2011 fue 1.046.327 millones de euros, el 7,15% debido al
sector de la Biotecnologa. El PIB espaol en 2012 fue 1.029.002 millones de euros,
el 7,8% debido al sector de la biotecnologa. A pesar de la crisis econmica el
sector de la biotecnologa no se vi tan afectado. Adems el nmero de
trabajadores en el sector de la biotecnologa se mantiene. Las empresas dedicadas
a este sector lentamente van creciendo. De hecho, la tendencia en el secto de la
biotecnologa en el ao 2015 tiende a aumentar.
La biotecnologa en Espaa se usa para la agricultura y la ganadera. Gran
parte del sector est tambin dedicado a la salud humana. En el ao 2011 el sector
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de Biotecnologa en Andaluca se encontraba en buen lugar, a nivel de Madrid o

Barcelona. El salario medio de la biotecnologa son 68.000 euros.
Lugares de inters de Biotecnologa: Sociedad Espaola de Biotecnologa,
Federacin espaola de Biotecnlogos, Asociacin Espaola de Bioempresas,
Andaluca BIORegin, Plataformas de Mercados Biotecnolgicos, Biopositivzate,
BiotechSpain, Biotecnoblogs, microBIO (muy interesante), vdeos de TED, etc.

Tema 6B Biotecnologa microbiana

- Material biolgico.
- Los microorganismos como factoras celulares.
- Caractersticas deseables en biotecnologa.

Material biolgico:
Lo principal es el factor humano, estudiantes.
Clasificacin de los seres vivos:
- Acelulares: virus (VIROIDES, VIRUSOIDES, PRIONES).
- Celulares: procariotas. Bacterias y Arqueas.
- Eucariotas: hongos, algas, plantas y animales.
Definicin de microorganismo: Ser vivo con una organizacin biolgica
acelular o celular, en este limo caso unicelular, cenoctica, colonial o pluricelular,
pero sin diferenciacin en tejidos, y que necesita para su estudio una metodologa
propia y adecuada.
Virus:
- De bacterias (bacterifagos) LAMBDA, T4...
- De vegetales MOSAICO DEL TABACO, MARCHITAMIENTO DEL TOMATE...
- De animales PAPILOMA, DE LA GRIPE, DE LA POLIO, DE LA RABIA, DE LA
VIRUELA, DEL HERPES.
- Producen la muerte del hospedador:
-Negativo: fallo de procesos, bioterrorismo...
-Positivo: luchar contra plagas...
- Herramienta gentica: vectores genticos.
- Producir vacunas.
- Produccin anticuerpos monoclonales y recombinantes.
- Bsqueda de drogas.
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Arqueas:
- Metangenas: en las instalaciones de depuradoras de aguas residuales.
Methanobacterium, Methanococcus...
- Halfilas: Hay muchos alimentos que se salazonan y estas bacterias pueden
fastidiarlos. Natrobacterium.
- Hipertermfilas: Sirven para obtener enzimas para la PCR, es una
polimerasa especfica. La polimerasa del segundo organismo si es muy til si no se
quiere cometir error. Pyrococcus furiosus, Pyrococcus wosei...
Bacterias:
- Grampositivas: Produccin de aminocidos, glutanol, yogures...
- Gramnegativas: Hay algunas E coli que son patgenas, Zymomonas mobilis
para la produccin de etanol, Alguna tambin es til en minera.
- Otras: Thermus aquaticus.
Hongos:
- Levaduras: Saccharomyces cerevisiae
- Mohos: Penicillium chrysogenes, Penicillium roqueforti, Aspergillus,
Rhizopus...
- Otros: Pleorotus ostreatus, Boletus, Amanita...
Algas: Dunaliella salina (beta-caroteno), Gelidium (agar), Chlorella,
Chlamydomonas...
Protozoos: Tetrahymena thermophila para la produccin de proteinas
exgenas, Plasmodium falciparum, Giardia intestinalis, Trypanosoma brucei,
Alexandrium, Peridinium...

Los microorganismos como factoras celulares:

Son tiles porque son buenas factoras celulares.
Una factora es un lugar donde entran materias primas y salen materias
elaboradas. Esto ocurre en los microorganismos. Ej: factora de biodiesel: de
aceites vegetales se puede producir biodisel y glicerol en factoras biodisel.
Factora celular: con Saccharomyces cerevisiae se puede producir glicerol aunque
produce tambin etanol en gran cantidad. Para que solo se produzca glicerol se
aade sulfito y como sustrato usa la glucosa. Si se le da una pentosa no la usa.
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Caractersticas de los microorganismos para ser buenas factoras: rpida

absocin de nutrientes, crecimiento rpido y a gran escala, alta tasa metablica
(sntesis y degradacin) comprendida como tiempo y cantidad, facilidad de
adaptacin, facilidad de manejo, son pequeos, facilidad de manipulacin de sus
caractersticas intrnsecas (por ejemplo, metemos en E. coli un plsmido que
codifica para insulina) y gran diversidad metablica.
Variedad metablica:
- Variedad de rutas metablicas para obtener el mismo producto.
- Variedad de sustratos para obtener el mismo producto.
- Variedad de organismos opara obtener el mismo producto. Por ejemplo
para producir etanol: Saccharomyces, E coli...
- Variedad de producots obtenidos del mismo sustrato. Clostridium aceto...
produce acetato, CO2, H, etanol, butanol... Aunque se tiende a buscar los
organismos que son homoproductores ya que sera un problema tener que purificar
un producto entre otros muchos.
Para nosotros los microorganismos son chasis celulares, lo que se obtiene es
lo que interesa.

Caractersticas deseables en biotecnologa:

- Una caracterstica fundamental es que produzca un bien o servicio con un
sustrato. Si el microorganismo no lo produce no interesa en Biotenologa.
- Alto rendimiento y productividad: producir muchas sustancias muy rpido.
- Alta tasa de crecimiento.
- Crecimiento a gran escala. Si el organismo no es capaz de crecer a grandes
volmenes no sirve. Aunque la Biotecnologa microbiana no es siempre a gran
escala, ej: produccin de anticuerpos, pero el etanol si.
- Crecimiento en cultivo axnico: disear el medio de cultivo de forma que
solo crezca el microorganismo que queremos ya que si, por ejemplo, se fabrica
yogur se puede contaminar. Al menos que se puedan mantener las condiciones de
asepsia si no se puede tener un cultivo axnico.
- Crecimiento en medio definido. Un medio definido es aquel en el que
conocemos las concentraciones de las sustancias y las sustancias que se encuentran
en el medio de cultivo. El producto siempre tiene que tener la misma calidad.
- Crecimiento en medio no contaminable.
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- Crecimiento en medio de bajo coste.

- Fcil produccin de inculos.
- Inculos con larga viabilidad.
- Fcil purificacin de la sustancia de inters. Si el organismo produce la
sustancia en un elemento celular que no sea fcil de extraer. Lo que se busca es
que el organismo excrete el producto, que no haya que purificar el producto de
dentro del microorganismo.
- Estabilidad gentica.
- Fcil manipulacipn gentica.
- Seguro para el hombre.
- Seguro para el medio ambiente.
Si todas estas caractersticas estuvieran dentro de un microorganismo
tendramos una superfactora celular (superbug). Pero esto es imposible, se puede
conseguir que tenga muchas de las propiedades pero no todas.

Tema 6C. Microbiologa Industrial

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- Crecimiento microbiano.
- Crecimiento y microbiologa industrial.
- Formulacin de medios de cultivo.

Crecimiento microbiano:
Crecimiento: aumento de la superficie y/o volumen de un ser vivo. E. coli es
una bacteria bacilar de 2micrometros de largo, 0,5micras de dimetro y 06-07
micrmetros cbicos de volumen. El tamao de E. coli aumenta al cambiar a un
medio rico, pero se puede medir el aumento de la superficie o el volumen? Si,
como vemos en la grfica. Pero lo que nos importa es el aumento en nmero.

Mtodos de medida del crecimiento:

- Directos:
Determinacin de la masa:
- Determinacin del peso hmedo
- Determinacin del peso seco.
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Determinacin del nmero de clulas:

- Recuento al microscopio.
- Recuento en placa o filtros.
- Recuento de partculas.
- Indirectos: determinacin de la masa
- Consumo de nutrientes.
- Produccin de metabolitos.
Crecimiento microbiano: aumento de la superficie y/o volumen de un
microorganismo. Aumento del nmero de individuos o de la masa de una poblacin.
Es el crecimiento de los microorganismos igual en cualquier circunstancia?
No. Hay factores que afectan al crecimiento. Hay que saber cmo crecer a los
microorganismos. Ej la temperatura.
Los factores ambientales afectan al crecimiento, siempre hay un ptimo de
crecimiento. Por encima del mx. y el mn. ya no hay crecimiento. Estos valores se
llaman los valores cardinales del crecimiento. Normalmente el ptimo de
crecimiento es lo que da la mxima produccin.

Factores que afectan al crecimiento:

- Temperatura: a -5C pueden crecer los
protistas y las arqueas a 120C. La mayor
parte de los microorganismos crecen a la
temperatura media del planeta. Mesfilos,
termfilos, hipertermfilos...
- pH: concentracin de protones que
existe en un medio. A pH 0 pueden crecer arqueas, hongos y Cyanidium. A pH 14
son capaces de crecer protistas, Natrobacterium y Spirulina. Normalmente los
hongos crecen a pH ms bajos y a las bacterias a pH ms bsicos. Pueden crecer a
estos pHs porque existen ecosistemas en la tierra con esas condiciones y estos
organismos se han adaptado a ellas. Extremfilos: nos los encontramos en Ro Tinto
10

y desde el tipo de vista industrial tienen inters ya que sirven para la depuracin
de aguas cidas, para biominera (extraccin de metales).
Generalmente los organismos extremfilos son muy interesantes para la
industria debido a enzimas caractersticas que contengan u otros compuestos. Por
ejemplo, la TAC polimerasa (altas temperaturas), lipasas (bajas y altas
temperaturas).
- Actividad del agua (aw): va desde 0 a 1. Los cercanos a 1 permiten el
crecimiento de los microorganismos y los extremfilos suelen estar por debajo.
Dunaliella que produce beta-caroteno y puede crecer a 0,75 y Xeromyces bisporus
a 0,55.
Actividad del agua: cociente entre la presin parcial de vapor del medio con
respecto a la presin parcial de vapor del agua. Es la cantidad de agua disponible
para un ser vivo o para la clula. A valores muy por debajo de 0,9 el crecimiento de
la mayor parte de los microorganismos se ve impedido. La actividad del agua se
relaciona con la presin osmtica. Conforme desciende la actividad del agua
aumenta la presin osmtica. Esto impide el crecimiento de los microorganismos.

Actividad del agua e iones:

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Actividad del agua en alimentos:

Es la actividad del agua un problema en los procesos industriales?

Normalmente no es un problema porque se llevan a cabo en agua. El agua es
un problema porque se usa en mucha cantidad y es cara. Los procesos industriales
no tienen niveles bajos de actividad del agua pero el agua tiene que ser de calidad.
Composicin bsica de la tierra y de E. coli:

- Nutrientes: afectan severamente al crecimiento de los microorganismos.

Macronutrientes: C, H, O y N. Intermedios: P y S y micronutrientes: Na, K, Mg, Ca y
Fe. Los seres vivos estn compuestos por los macronutrientes (CHOM) y cenizas.
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Forma qumica promedio, Roels 1981: En promedio todos somos CH1,8O0,5N0,2

y cenizas, de modo que nuestro PMpromedio sera 24,6 g/mol (biomasa promedio).

Crecimiento y microbiologa industrial:

El crecimiento es importante ya que mediante clulas y nutrientes se forman
productos. A nosotros nos interesa conocer la T, el Ph, aw y la luz. Pero el
verdadero inters radica en los productos. El producto pueden ser clulas
(biomasa, levaduras panaderas), metabolitos (cido ctrico, actico, glicerol,
metanol, PHB para plsticos), enzimas (TAC, lipasas, proteasas, celulasas,
alcoholdhasa), polisacridos (goma santana) y otros componentes celulares.
Metabolitos ms producidos con microorganismos: bioetanol (13.000.000 Tm/
ao), antibiticos (50.000 Tm/ao), Lisina (300.000 Tm/ao) y vitamina C (80.000
Tm/ao). Para estas cantidades se necesita mucha agua.
Escalado: Lo mximo que se puede crecer de una vez son 500.000L pero hay
que partir de una escala pequea y para ello se va subiendo poco a poco en la
escala, a esto se le denomina escalado. Primero se produce una escala en el
laboratorio, despus se hace una escala piloto y finalmente se lleva a la escala
industrial. De modo que un proceso industrial es un escalado.
El recipiente donde se llevan a cabo los procesos industriales se llama
biorreactor o fermentador. Un vaso de precipitado o un matraz son tambin
biorreactores. El tpico fermentador es una vasija diseada de forma que quepa el
volumen que queremos producir.

Una planta de
aguas residuales con
piscinas tambin son biorreactores ya que obtenemos un producto: agua limpia, y
el proceso lo llevan a cabo seres vivos. Una salina tambin es un biorreactor.
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Proceso fermentativo y sus etapas:

Fermentacin / Biorreaccin: antes de hacer la fermentacin tenemos la
etapa prefermentativa y despus de hacerla, la etapa postfermentativa.
En la etapa prefermentativa se lleva a cabo la eleccin del catalizador, la
formulacin del medio de cultivo y la esterilizacin.
En la etapa postfermentativamente se hace la separacin y purificacin de la
sustancia que queremos, un control de calidad (QC), gestin de residuos,
reutilizacin de sustratos y la limpieza. Si se fabrica cerveza las levaduras se
pueden reutilizar unas 3 o 4 veces y despus se fabrica con ellas extracto de
levaduras.
Proceso fermentativo: hay que saber operar el biorreactor. Hay que controlar
la temperatura, el pH, la cantidad de oxgeno, el agotamiento o no de los
nutrientes...

Formulacin de medios de cultivo:

Metabolitos y fuentes de carbono:

Cul es el destino de los nutrientes?

Esos compuestos primarios (CHON) se convierten
biomasa pero hay una parte que nunca se puede utilizar ya
calor. Adems hay parte de los nutrientes que se usan
mantenimiento celular. Se produce mucho calor de modo
temperaturas bajas. El calor puede ser til.

en productos como la
que se desprende como
para llevar a cabo el
que hay que mantener

Frmula qumica y PM de E. coli:

14

El peso molecular de E. coli es el mismo que el nuestro. De modo que su

frmula qumica podemos ponerla en la frmula qumica de la biomasa, del
proceso.

FQ y PM de la penicilia:

Formulacin de los medios de cultivo:

Factores a tener en cuenta:
- Estequiometra del crecimiento y formacin del producto.
- Bioqumica de la formacin del producto. Por ejemplo, para formar etanol
no se puede usar el oxgeno.
- Requerimientos nutricionales para el crecimiento y formacin del producto.
- Rendimientos de biomasa y formacin de producto. Con la frmula de R.
- Disponibilidad de iones.
- Mezclado y viscosidad. Con un medio muy viscoso el mezclado es difcil. Los
polmeros suelen aumentar la viscosidad de los medios de cultivo.
- Procesos "prefermentativos" y "postfermentativos".
- Costo y disponibilidad de los sustratos.

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Fuentes de carbono:

Las ms baratas son las sustancias complejas pero estas suelen ser las
sustancias polimricas y si el organismo no es capaz de degradarlas no sirva para
nada.
Fuentes de carbono primaria: polmeros de azcares:

Las ms usadas ya que se producen en vegetales.

La celulosa se puede obtener de la madera. El papel de oficina se puede usar
como sustrato en procesos industriales pero tiene sustancias txicas para
microorganismos.

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Lignocelulosa
No hay muchos microorganismos tiles que puedan usar xilosas y arabinosa.
A los polmeros hay que hacerles un tratamiento (ej a las lignocelulosas) para
usarlas como sustrato para microorganismos.

Las algas, biomasa para producir otras materias primas. Algas con futuro:

Procesos con algas:

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Buscar productos de microbiologa industrial y hacer la reaccin de etanol !

actico. Y etanol ! actico + biomasa (frmula promedio de la biomasa).
Fuente de N:
Del maz se sacan muchas cosas diferentes. Los aa y la urea son los
compuestos ms tiles.

Otros componentes de los medios de cultivo: agua, sales minerales,

vitaminas, factores de crecimiento, tampones, precursores, inductores,
inhibidores, antiespumantes y aire.
Todos los procesos se hacen en el agua. Pero el agua tambin tiene
impurezas y un coste. Algunos microorganismos pueden requerir vitaminas u otros
tipos de cofactores. Pueden necesitar precursores, por ejemplo, para la penicilina
G hay que echar un precursor. En los procesos de biorreaccin se suele producir
espuma, por eso se suelen echar antiespumantes. La espuma ocupa un volumen en
el biorreactor. Si el proceso es aerobio necesita aire. Si es anaerobio se usa aire
con N. En muchos casos hay que eliminar el aire ya que en las fermentaciones se
producen otros compuestos gaseosos que no interesan.
De dnde salen el H y el O? Esencialmente del agua, pero tambin de todos
los compuestos orgnicos excepto del metano. El H y el O estn en exceso, por eso
suelen pasarse por alto.

18

Tema 6D. Microbiologa Industrial

- Asepsia y desinfeccin.
- Procesado del bioproducto.
- Biorreactores.

Asepsia y desinfeccin:
Asepsia: prevenir o evitar la contaminacin.
Desinfeccin o esterilizacin: descontaminar.
Descontaminar (esterilizar): proceso prefermentativo. Hay que
descontaminar:
-

Medio de cultivo.

Vasija del biorreactor.

Tuberas, manguitos, vlvulas, sensores, etc. Se encuentran dentro del

biorreactor ya que entran en contacto con el medio de cultivo tambin.

Aire.

Cualquier sustancia/material que se aada al biorreactor.

Tambin hay que asegurarse de que el microorganismo que introducimos en

el proceso sea puro.
Limpiar: proceso postfermentativo:
-

Vasija del biorreactor.

Tuberas, manguitos, vlvulas, sensores, etc.

Cualquier material que se aada al fermentador.

Durante todo el proceso hay que mantener las condiciones de asepsia.

Normalmente la contaminacin se produce por algn humano, la higiene de los
operarios es muy importante. Hay que mantener la asepsia para mantener un
cultivo puro.
La asepsia o desinfeccin se puede mantener con agentes qumicos aunque
estos suelen usarse ms para limpiar que para mantener la asepsia. La leja no se
debe usar para la asepsia de un biorreactor. Normalmente, para la limpieza se usa
19

mucha agua y una combinacin de cido y sal. Los agentes qumicos pueden ser:
compuestos con fenol (Triclosan), compuestos con mercurio (Mercuriocromo),
compuestos con iodo (Betadine), compuestos con Cl- (Leja), alcoholes (etanol),
detergentes (SDS), perxidos (agua oxigenada), aldehdos (glutaraldehdo), sales
(sulfato de cobre) y otros como el Ozono, xido de etileno o cido ntrico/
Hidrxido sdico.
Si queremos esterilizar el biorreactor, que suele ser lo ms difcil, usamos
agentes fsicos como (imagen).

L a s
radiaciones no se suelen usar pero pueden ser tiles para mantener la asepsia o
para los alimentos. Esencialmente lo que se utiliza para el biorreactor es la
temperatura. Con calor seco podemos esterilizar material esencialmente metlico.
Esterilizacin por autoclave: medio de cultivo, vasija del biorreactor,
tuberas, manguitos, vlvulas, sensores y cualquier sustancia o material que se
aada al biorreactor.
Si en el medio de cultivo hay una sustancia que a 60C se destruye no se
puede esterilizar. En estos casos se usan los filtros. Filtros nucleopore: se fabrican
mediante radiacin, se hacen agujeros del mismo tamao en la membrana. La
filtracin es muy cara, por ello se usa en pasos y casos especficos.
El aire se esteriliza mediante compresin adiabtica o con filtros. Pero a
medida que se pasa flujo por los filtros este se satura y hay que cambiarlo. La
esterilizacin por Ozono suele usarse tambin.
Esterilizacin por filtrado para:
-

Componentes de medio de cultivo termosensible.

Aire.

Cualquier sustancia termosensible que se aada al biorreactor.

20

Crecimiento microbiano y temperatura: Ecuacin de Arrhenius.

A mayor temperatura mayor decremento en la velocidad del crecimiento.

Podemos calcular la temperatura a la cul el crecimiento de los organismos sea 0 y
as esterilizar. Sirve para calcular las temperaturas que hay que ponerles a un
biorreactor para esterilizar.
Temperatura y tiempo de reduccin decimal: tiempo (t) necesario para
reducir la poblacin (N) u orden de magnitud (90%).
D= tiempo de reduccin decimal.
T= tiempo.
N0= nmero de clulas inicial.
Nt= nmero de clulas al tiempo t.
Lo que queremos conseguir es que al final del proceso los pocos organismos
que queden no causen problemas.
Tiempo de reduccin decimal y alimentos:

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Se suele usar en alimentos como la leche. B. stearothermophillus es un

problema porque forman esporas, no solo l. Las esporas son estructuras de
resistencia y la espora de este organismo es una de las que ms resiste a la
temperatura. Todo lo que haya que esterilizar con temperatura estar por debajo
del umbral de estos organismos ya que son los mayores patgenos.
Tiempo de esterilizacin y reduccin decimal:

Hay que tener en cuenta que el tiempo de esterilizacin aumenta con el

volumen del biorreactor. El aumento del tiempo estropea los nutrientes. Hay que
tener en cuenta el escalado del proceso. La esterilizacin mediante autoclave en
los procesos industriales es complicada.
La esterilizacin industrial se realiza normalmente en continuo (T=140 y t=
30-120s). Se usan intercambiadores de calor externos espirales e inyeccin de
vapor en el medio de cultivo.

Procesado del bioproducto:

Hay que tener especial cuidado con estos productos porque provienen de
seres vivos. Por ejemplo, la penicilina o la TACpolimerasa. Suelen ser productos
sensibles y su procesado requiere condiciones especiales.
Esencialmente para procesar el producto primero se hace una separacin o
disrupcin celular (cargarse a las clulas), despus una separacin primaria del
producto, una purificacin y la presentacin final. Estos son procesos
esencialmente fsico-qumicos.
Es importante reducir lo ms posible el volumen de trabajo. Por ejemplo, si
queremos centrifugar caben volmenes muy pequeos, de modo que no se usan
procesos industriales. Tambin hay que cambiar la escala ya que habr que hacer
mquinas muy grandes. Tambin hay que tener presente que hay que separar lo
que interesa del resto.

22

Mtodos de separacin (celular): hay que precisar si el medio de cultivo se

produce dentro o fuera de la clula.
-

Decantacin.

Centrifugacin. Se requiere energa.

Filtracin. Los filtros son caros.

Flotacin. Es un proceso qumico en el que hay sustancias que quedan

abajo y otras arriba.

Floculacin.

Mtodos de disrupcin celular (si se produce dentro de la clula):

-

Fsica: homogeneizacin, sonicacin o choque trmico u osmtico.

Qumica: agentes caotrpicos o quelantes, detergentes o solventes.

Biolgica: autolisis, antibiticos o enzimas lticos.

Mtodos de separacin primaria: extraccin con solventes, adsorcin,

precipitacin, destilacin (alcoholes) y evaporacin.
Mtodos de purificacin: cromatografa (HPLC, de afinidad, exclusin
molecular), ultrafiltracin, precipitacin fraccionada (utilizando sales), smosis
reversa y pervaporacin (parecida a la destilacin).
Presentacin del producto: se cristalizan o se presentan desecados.
Con todo este proceso conseguimos aumentar la pureza (imagen). Al final
est casi al 100% y conlleva una prdida de sustancia.

Biorreactores:

23

Un biorreactor es un sistema termodinmico. Tenemos un medio de cultivo

con microorganismos. Se encuentra en una sala (medio ambiente) con el que
intercambia masa y energa. Si continuamente intercambia masa con el medio
ambiente hablaremos de los biorreactores en continuo, si no es en discontinuo. La
pared del biorreactor de denomina camisa del biorreactor. Parece algo muy
complejo pero se puede simplificar.
El biorreactor y la termodinmica: lo importante es que de un biorreactor
sacamos trabajo que sirve para obtener productos.

Tambin debemos tener en cuenta la energa libre de Gibbs:

G0= -RT Ln K

La energa libre de Gibbs nos dice si la reaccin es o no espontnea. As

podemos saber si la reaccin libera energa ya que nos interesa que se libere
energa porque as se producen sustancias. Nos interesan las energas libres
negativas ya que son las espontneas. Mientras ms energa negativa tenga la
reaccin que vamos a realizar, mayor cantidad de sustancia se produce.
Vemos la conversin de benzoato hasta cido actico. Variando la K se puede
cambiar que la reaccin vaya de un lado a otro.

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Produccin de metano: a partir de CO2 y H.

SINTROFA: Syntrophus aciditrophicus/Methanospirillum hungatei:

viven

juntos y pueden llevar a cabo la reaccin hasta el final.

Si la energa libre sale positiva tenemos que introducir energa en el sistema

para llevarlo a cabo, de modo que no interesa mucho.

En el biorreactor los sustratos se convierten en productos/biomasa. En la

imagen vemos un proceso que es aerobio. En otros temas vimos que las clulas con
nutrientes daban una serie de productos entre otras cosas.
Estequiometra:

Los sustratos se convierten en biomasa y en producto, en definitiva es una

reaccin qumica. De modo que hay que calcular los parmetros estequiomtricos.
Ley de conservacin de la masa: la masa del sustrato se convierte en la masa
de los productos. Sustrato= biomasa + producto. Lo interesante es que se forme el
producto, agua y CO2.

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Todo el C,H,O, N del sustrato se convierte en C, H, O, N de Biomasa y

Producto. La ley de la conservacin quiere decir que todo el CHON se convierte en
otro tipo de CHON.
PROBLEMA PARA ENTREGAR LA SEMANA QUE VIENE: calcula los balances de C,
H, O y N de la siguiente reaccin: CWHXOYNZ +aO2 + bHgOhNi --> cCHaObNd + dCO2 +
eH2O + fCjOkHlNn. Se resuelve con la conservacin de la masa.
Rendimiento:
Los parmetros estequiomtricos que ms se usan en la industria son los
rendimientos. Normalmente se expresan como Y. El rendimiento es la cantidad de
lo que se produce en relacin con la cantidad de algo que se consume. Si tenemos
la reaccin ajustada no tenemos gramos, tenemos moles. Para calcular los gramos
tenemos que hacer una conversin.

Rendimientos para Candida utilis:

Es una levadura muy til. El rendimiento de C. utilis cuando crece en

glucosa y cuando crece en etanol. Dependiendo de donde crezca tiene una
composicin diferente a pesar de ser el mismo microorganismo. En la tabla vemos
el rendimiento de la biomasa, cuando crece con glucosa se obtiene un rendimiento
menor que cuando crece con etanol. Si estuvieramos en una empresa usaramos el
etanol porque da ms rendimiento.
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Este microorganismo sirve como protena celular (para complementos

alimenticios), saborizante, bioetanol, acetona, xilitol (chicles), uricasa (sirve para
detectar los niveles de cido rico en sangre), tratamiento de agua residuales. Para
la produccin de protena celular con C. utilis usaramos etanol. El problema de
usarla con etanol sera que no lo consumiera todo y quedaran restos de etanol,
pero como ste se evapora tampoco es un gran inconveniente.
Productividades:

Otro parmetro importante es la productividad (Q). Es un parmetro

estequiomtrico y son los gramos de biomasa seca por el volumen del biorreactor y
el tiempo. Nos dice cmo de rpido va el proceso.
Coeficiente de respiracin:

Otro parmetro estequiomtrico es el coeficiente de respiracin (RQ). Es un

buen indicativo de los procesos aerobios en los que la glucosa se transforma en
productos, CO2 y agua. Cuanto ms CO2 se produzca mejor va el proceso. Este
parmetro se da en moles, pero matemticamente se expresa como: d/a

En procesos fermentativos no tiene sentido hablar de RQ.

An nos queda responder a las siguientes preguntas: Es posible la reaccin?
Cunto sustrato se consume y cunto producto se origina? A qu velocidad se
produce la reaccin?
Si la reaccin es produccin de biomasa, Cmo se expresa la cintica de
produccin de biomasa?

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