INDICE

INTRODUCCION

Pag 2-3

MARCO TEORICO

Pag 4-22

ANEXOS

Pag 23

BIBLIOGRAFIA

Pag 24

PRESENCIA DE MICROORGANISMOS POR FORMACIN DE METABOLISMOSPgina 1

PRESENCIA DE MICROORGANISMOS POR

FORMACIONES DE METABOLITOS
I.

INDRODUCCION

Las bacterias se encuentran en casi todos los ambientes e intervienen en varios procesos
biolgicos. El crecimiento microbiano requiere la formacin de estructuras complejas como
protenas, cidos nucleicos, polisacridos y lpidos a partir de elementos preformados en el
medio de crecimiento o ser sintetizados por la propia clula, a su vez, este crecimiento
necesita de una fuente de energa para ser llevado a efecto, todo este proceso se designa
con el nombre de metabolismo, que se define como todas las transformaciones qumicas
que ocurren en una clula.
Buchanam B., Gruissem W., Jones R (2000). Biochemistry & Molecular Biology of Plants. Eds.
American Society of Plant Physiologists.

Todos los seres vivos llevan a cabo el procesamiento de los nutrientes que los mantienen
vivos. A este conjunto de procesos, se le conoce como metabolismo y consiste de un gran
nmero de reacciones qumicas destinadas a transformar las molculas nutritivas en
elementos que posteriormente sern utilizados para la sntesis de los componentes
estructurales; como pueden ser las protenas.
Barcel J., Rodrigo G., Sabater B., Snchez R. (2001). Fisiologa vegetal. Ediciones Pirmide
(grupo Anaya, S.A.)

Otra parte importante del metabolismo es la de transformar y conservar la energa que est
contenida en una reaccin qumica en algn proceso que requiera de energa, como puede
ser el trabajo o el movimiento.
Es evidente que los nutrientes son transformados cuando entran en un organismo, ya que
en ningn caso el alimento contiene todas las molculas que una clula requiere. Esto se vio
con claridad al observar el crecimiento normal de levaduras en un medio de cultivo que slo
contena glucosa como nica fuente de energa.
As pues, se pens que la sntesis de todos los componentes celulares se llevaba a cabo en
el interior de las levaduras. Hoy se conoce que las transformaciones que sufre la glucosa no
ocurren en un solo paso, sino que, por el contrario, se forman varios productos intermedios
que en muchas ocasiones no tienen una funcin especfica a no ser la de formar parte de lo
que se conoce como va metablica.
Davies P.J. (1995). Plant Hormones; Physiology, Biochemistry and molecular
Biology, 2 edicin. ed. Kluwer Academic Publishers.

PRESENCIA DE MICROORGANISMOS POR FORMACIN DE METABOLISMOSPgina 2

La transformacin de los nutrientes en 24 compuestos tiles para la subsistencia de un

organismo se lleva a cabo por medio de las reacciones qumicas que realizan unas
protenas conocidas como enzimas. El trmino metabolismo se refiere al conjunto de
reacciones qumicas que tiene lugar en la clula, y tiene tres funciones especficas a saber:
Obtener energa qumica del entorno, almacenarla, para utilizar luego en diferentes
funciones celulares.
Convertir los nutrientes exgenos en unidades precursoras de los componentes
macromoleculares de la clula bacteriana.
Formar y degradar molculas necesarias para funciones celulares especficas, como por
ejemplo, movilidad y captacin de nutrientes.
Wink M. (1999). Biochemistry of Plant Secondary Metabolism; Annual Plant
Reviews, volumen 2. ed. Sheffield academic Press.

PRESENCIA DE MICROORGANISMOS POR FORMACIN DE METABOLISMOSPgina 3

II.

MARCO TEORICO

El metabolismo es el conjunto de procesos y reacciones qumicas anablicas (requieren

energa) y catablicas (liberan energa); por los cuales un microorganismo obtiene la energa
y los nutrientes que necesita para vivir y reproducirse. Los microorganismos utilizan
numerosos tipos de estrategias metablicas distintas y las especies pueden a menudo
distinguirse en base a estas estrategias. Las caractersticas metablicas especficas de un
microorganismo constituyen el principal criterio para determinar su papel ecolgico, su
responsabilidad en los ciclos biogeoqumicos y su utilidad en los procesos industriales.
Metabolitos primarios. Se producen en el curso de las reacciones metablicas anablicas o
catablicas que tiene lugar durante las fases decrecimiento y que contribuyen a la
produccin de biomasa o energa por las clulas. Se producen principalmente en la trofofase
o fase de crecimiento.
Metabolitos secundarios. Se producen por rutas anablicas especializadas cuando no hay
crecimiento. Significado evolutivo controvertido por ser imprescindibles. Pueden ser una
estrategia para mantener en funcionamiento los sistemas metablisis cuando no hay
crecimiento; tambin sirven como indicativos de diferenciacin y se producen durante la
idiofase de los cultivos. Entre sus caractersticas comunes; tienden a producirse cuando el
crecimiento est limitado (cultivo continuo); se forman por enzimas especficos a partir del
metabolismo central; no son esenciales para el crecimiento o para el metabolismo central
y son especficos para cada especie, y a veces, de cada cepa.

PRESENCIA DE MICROORGANISMOS POR FORMACIN DE METABOLISMOSPgina 4

En el caso de los microorganismos, los metabolitos secundarios mejor conocidos son

los antibiticos. En la trofofase (fase de crecimiento de los microorganismos) no se producen
metabolitos secundarios. Es en la idiofase normalmente, cuando se producen (fase en la
que el microorganismo no crece, pero sigue metablicamente activo). Para que se produzca
el metabolito secundario, primero hay que asegurar unas condiciones ptimas durante la
trofofase. Como mecanismo de defensa, la produccin de metabolitos secundarios no se
produce inmediatamente despus de la conclusin de la trofofase. Primero, al comienzo de
la idiofase, deben hacerse resistentes a sus propios antibiticos.
No se conocen bien los factores que disparan la produccin de metabolitos secundarios. Se
sabe que el paso de trofofase a idiofase se produce cuando algn nutriente del medio es
limitante. Suele tratarse de C, N o P. Al faltar algunos de estos factores, se altera la
produccin de metabolitos primarios y se originan inductores de enzimas que darn lugar a
metabolitos secundarios.

METABOLISMO MICROBIANO
En el V Curso latinoamericano de Biotecnologa (1996), sealaron que el crecimiento
equilibrado de un microorganismo requiere de la integracin de un gran nmero de rutas
metablicas (alrededor de 2000 procesos bioqumicos diferentes), interconectados, que
participan en un correcto flujo de energa y carbn hacia la formacin de ms materia
celular, los cuales deben operar coordenadamente y permitirle, al menor costo energtico
una adaptacin a condiciones ambientales cambiantes (tanto qumicas como fsicas).
Indicaron que en general la regulacin y fisiologa funciona a travs de controles ejercidos
sobre las enzimas claves de vas metablicas y sobre los genes que codifican para enzimas
o protenas importantes en el comportamiento microbiano. 28 Los distintos tipos de
metabolismo microbiano se pueden clasificar segn tres criterios distintos:

A) Segn la fuente de carbono que utilizan

El carbono es el mayor constituyente de la clula bacteriana, por lo tanto no llama la
atencin que requiera ms carbono que cualquier otro nutriente. Las bacterias se pueden
dividir de acuerdo a la forma en la que el organismo obtiene o utiliza el carbono para la
construccin de la masa celular:
Auttrofo. Crecen sintetizando sus materiales a partir de sustancias inorgnicas sencillas.
El carbono se obtiene del dixido de carbono (CO2).
Hetertrofo. Su fuente de carbono es orgnica. El carbono se obtiene de compuestos
orgnicos. En este ltimo grupo se encuentran todas las bacterias de inters mdico.
Mixtrofo. Son aquellas bacterias con metabolismo energtico litotrofo (obtienen energa
de compuestos inorgnicos), pero requieren sustancias orgnicas como nutrientes para su
metabolismo biosinttico. El carbono se obtiene tanto de compuestos orgnicos como
fijando el dixido de carbono.

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B) Segn el punto de vista biosinttico

La forma en la que organismo obtiene los equivalentes reductores para la conservacin de
energa o en las reacciones biosintticas:
Litotrofo. Son aquellas que slo requieren sustancias inorgnicas sencillas Los
equivalentes reductores se obtienen de compuestos inorgnicos. (SH2 SO, NH3, NO2 - , Fe,
etc.).
Organotrofo. Requieren compuestos orgnicos. Los equivalentes reductores se obtienen
de compuestos orgnicos. (hidratos de carbono, hidrocarburos, lpidos, protenas,
alcoholes).

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C) Segn la fuente de energa

Segn la forma en la que el organismo obtiene la energa para vivir y crecer:
Quimiotrofo. La energa se obtiene de compuestos qumicos externos.
Fototrofo. La energa se obtiene de la luz.
En la prctica, estos trminos se combinan casi libremente tpicos son como sigue:
Los quimiolitoauttrofos obtienen energa de la oxidacin de compuestos inorgnicos y
el carbono de la fijacin del dixido de carbono. Ejemplos: bacterias nitrificantes, bacterias
oxidantes del azufre, bacterias oxidantes del hierro, bacterias oxidantes del hidrgeno.
Los fotolitoauttrofos obtienen energa de la luz y el carbono de la fijacin del dixido de
carbono, usando compuestos inorgnicos como equivalentes reductores. Ejemplos:
Cianobacterias (agua como equivalente reductor), Chlorobiaceae, Chromaticaceae (sulfuro
de hidrgeno), Chloroflexus (hidrgeno).
Los quimiolitohetertrofos obtienen energa de la oxidacin de compuestos
inorgnicos, pero no pueden fijar el dixido de carbono. Ejemplos: algunos Nitrobacter spp.,
Wolinella (con hidrgeno como equivalente reductor), algunas bacterias oxidantes del
hidrgeno.
Los quimioorganohetertrofos obtienen energa, carbono y equivalentes reductores
para las reacciones biosintticas de compuestos orgnicos. Ejemplos: la mayora de las
bacterias, como Escherichia coli, Bacillus spp., Actinobacteria. Las bacterias patgenas que
viven a expensas de la materia orgnica son quimioorgantrofas.
Los fotoorganotrofos obtienen energa de la luz y el carbono y los equivalentes
reductores para las reacciones biosintticas de compuestos orgnicos. Algunas especies
son terminantemente hetertrofas, pero muchas otras pueden tambin fijar el dixido de
carbono y son mixtrofas. Ejemplos: Rhodobacter, Rhodopseudomonas, Rhodospirillum,
Rhodomicrobium, Rhodocyclus, Heliobacterium, Chloroflexus (alterna con fotolitoautotrofa
con hidrgeno).

REGULACIN METABLICA
Cada reaccin metablica est regulada no slo con respecto a otras reacciones sino
tambin con respecto a la concentracin de nutrientes en el medio.
La regulacin se realiza a diferentes niveles:
- Regulacin de la actividad enzimtica a travs de: enzimas alostricas, inhibicin por
retroalimentacin, activacin alostrica, y cooperatividad.
- Regulacin de la sntesis de enzimas por: induccin enzimtica y represin por productos
finales. . Metabolismo Intermediario. Fuente: (Ganong, W. F.,1996).

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A) Mecanismos de Regulacin enzimtica

En la clula operan dos mecanismos deferentes de regulacin: la regulacin de la sntesis
enzimtica y la regulacin de la actividad enzimtica. En ambos casos, actan de
mediadores componentes de bajo peso molecular, los cuales o bien son formados en la
clula como metabolitos intermediarios, o bien entran en ella procedentes del medio. En
ambos mecanismos reguladores actan protenas alostericas. Las protenas alostericas son
aquellas cuyas propiedades cambian si se les unen molculas especficas denominadas
efectores. Existen dos clases de protenas alostericas: las enzimas alostericas cuya
actividad se incrementa o se inhibe cuando se combinan con sus efectores, y las protenas
alostericas reguladoras que modulan la actividad de enzimas especficas.
a. Regulacin de la actividad enzimtica Las protenas alostericas estudiadas con mayor
detalle han sido las enzimas alostericas, cuyo ejemplo lo constituye la aspartato
transcarbamilasas (ATCasa), que cataliza la primera reaccin de la biosntesis de las
pirimidinas y cuya actividad es inhibida por un producto final, la citidina trifosfato (CTP).
concentraciones elevadas de CTP inhiben el funcionamiento de la ATCasa y, en
consecuencia, la formacin de ms CTP hasta que su concentracin disminuye a un nivel
ptimo. El ATP, un segundo efector de la ATCasa, activa la enzima, sirviendo para coordinar
la sntesis de nucletidos de purina y pirimidina. las enzimas alostericas son siempre
protenas de peso molecular relativamente elevado, compuestas por mltiples subunidades.
por regla general estas subunidades son idnticas poseyendo cada una un lugar cataltico y
otro alostrico. No obstante, la ATCasa se compone de dos clases diferentes de
subunidades, una con funcin cataltica y otra con funciones reguladoras. En las bacterias
anaerobias facultativas la fermentacin (como nica va de generacin de energa) es
bloqueada en presencia de oxgeno, asegurando que el suministro de energa se produzca
por la respiracin, que consume menos glucosa y acumula menos lactato. En este
fenmeno, conocido como efecto Pasteur, la 38 enzima fosfofructoquinasa es activada o
inhibida segn la relacin ATP/ADP, regulando as el consumo de glucosa. Este es un
ejemplo de regulacin de la actividad enzimtica por una enzima alostrica. El ejemplo
clsico de regulacin a nivel de la sntesis de enzimas lo constituye el opern lactosa. Hay 3
enzimas que participan en la utilizacin de la lactosa (-galactosidasa, galactsido
permeasa y galactsido transacetilasa) que tienen un promotor nico.

b. Regulacin de la sntesis enzimtica La inhibicin por el producto final mediada por

enzimas alostericas es en gran medida suficiente para asegurar que todas las rutas
catablicas y biosinteticas operen en equilibrio. Sin embargo, cuando no es necesario el
producto de una ruta metablica, las enzimas que catalizan las reacciones de las mismas
resultan innecesarias. Muchas bacterias son capaces de utilizar un amplio espectro de
compuestos orgnicos diferentes como fuentes de carbono y energa, pero en un momento
dado, puede que solo uno de estos compuestos est presente en el medio. Aunque la
informacin gentica necesaria para sintetizar las enzimas importantes se encuentra
siempre presente, su expresin fenotpica est determinada por el medio, y una enzima
determinada se sintetiza en respuesta a la presencia de su sustrato.

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TIPOS DE METABOLITOS:
Metabolitos primarios microbianos.
Los metabolitos primarios son molculas de bajo peso molecular que tiene lugar durante las
fases de crecimiento y que contribuyen a la produccin de biomasa o energa por las
clulas.
Se producen durante la fase logartmica de crecimiento como producto del metabolismo, y
son esenciales para la funcin del microorganismo. La produccin neta se relaciona con el
crecimiento y la cantidad de sustrato. TROFOFASE.
El crecimiento microbiano depende de la capacidad de la clula para utilizar los nutrientes
de las estructuras celulares y tambin los principales compuestos macromoleculares de las
estructuras celulares y tambin los principales compuestos de peso molecular bajo
necesarios para la actividad celular. El metabolismo intermediario incluye las reacciones que
transforman los compuestos de carbono y nitrgeno que entran a la clula en nuevo material
celular o en productos que son excretados. La sntesis de estos compuestos necesitan
energa, y la mayora de las clulas utilizadas en las fermentaciones industriales son
hetertrofas y obtienen su energa a partir de la ruptura de compuestos orgnicos. En los
procesos respiratorios o aerobios, los organismos son capaces de oxidar completamente
algunos de los substratos a CO2 y H2O, obteniendo el mximo de energa para la
conversin de los substratos remanentes en nueva masa celular. En el metabolismo
fermentativo o anaerobio, las clulas son menos eficaces a la hora de convertir los
substratos orgnicos en material celular y usualmente excretan intermediarios degradados
parcialmente.
Las rutas productoras de energa o catablicas generan ATP y los coenzimas reducidos
necesarios para las diversas reacciones biosintticas, e intermediarios qumicos utilizados
como puntos de partida para las reacciones de biosntesis.
Los ms importantes desde el punto de vista industrial son

1- Componentes esenciales y productos formados por los microorganismos: protenas,

cidos nucleicos, polisacridos (dextranos, alginatos, gelanos, xantanos) y
poliesteres (PHB y plasticos), acidos grasos (saturados e insaturados), esteroles
(ergosterol)
2- Derivados del metabolismo intermedio: azucares (fructosa, ribosa, sorbosa),
cidos organicos (gluconico, cido lctico, ctrico, acetico, propionico, succinico,
fumarico), alcoholes (xilitol, etanol, glicerol, sorbitol, butanol), aminoacidos (Lys, Thr,
Glu, Trp, Phe), vitaminas (carotenos, B2, B12), nucleotidos saborizantes (acidos
inocinico y guanilico), polisacaridos y poliesteres de reserva.
2- Microorganismos productores: bacterias, levaduras y hongos.
La superproduccin de metabolitos primarios es evitada por la mayora de los
microorganismos, puesto que son procesos que consumen gran cantidad de energa,
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lo cual hace que sean menos competitivos en los ambientes naturales. Sin embargo,
existen en la Naturaleza microorganismos que tienen alterados sus sistemas
regulatorios y stos son precisamente los que a lo largo del proceso de bsqueda
son seleccionados para su utilizacin en microbiologa industrial. Estos cultivos
posteriormente se someten a un profundo estudio mediante el cual, alterando las
condiciones del medio y/o por modificaciones genticas, incrementamos la
superproduccin del producto que nos interesa.
Mediante estas alteraciones se ha conseguido, por ejemplo, que la
bacteria Pseudomonas denitrificans produzca 50.000 veces ms vitamina B12. Las
manipulaciones ms frecuentes son la alteracin de la regulacin por
retroalimentacin y la alteracin de la permeabilidad.
Metabolitos secundarios microbianos.
Un tipo ms complejo de productos industriales es aquel en el que el producto deseado no
se produce durante la fase primaria del crecimiento sino durante la fase estacionaria. Los
metabolitos producidos durante la fase estacionaria se denominan metabolitos secundarios
y son algunos de los metabolitos ms comunes y ms importantes de inters industrial.
Las caractersticas reconocidas del metabolismo secundario son:
1. Cada metabolito secundario slo lo forman relativamente pocos organismos.
2. Los metabolitos secundarios, aparentemente no son esenciales para el crecimiento y la
reproduccin.
3. La formacin de metabolitos secundarios es extremadamente dependiente de las
condiciones de crecimiento, especialmente de la composicin del medio. Con frecuencia, se
produce la represin de la formacin del metabolito secundario.
4. Con frecuencia, los metabolitos secundarios se producen como un grupo de estructuras
estrechamente relacionadas. Por ejemplo, se ha visto que una sola cepa de una especia
delStreptomyces produce 32 antibiticos distintos pero relacionados, del tipo antraciclina .
5. Con frecuencia es posible obtener una espectacular superproduccin de metabolitos
secundarios, en tanto que los metabolitos primarios, ligados como estn al metabolismo
primario, usualmente no se pueden superproducir de una manera tan espectacular.
Los metabolitos secundarios son molculas sintetizadas por determinados microorganismos,
normalmente en una fase tarda de su ciclo de crecimiento, cuyas caractersticas son:
(i) No son necesarios para el crecimiento del microorganismo que los produce. En estado
natural, sus funciones se hallan ordenadas a la supervivencia de la especie, pero cuando los
microorganismos que los producen se desarrollan en cultivo puro los metabolitos
secundarios no desempean esa misin.
(ii) Generalmente se producen como mezclas de productos muy relacionados qumicamente
entre s. Por ejemplo, una nica cepa de una especie del gnero Streptomyces produce 32
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antraciclinas diferentes.
(iii) Cada uno de estos productos es producido por un grupo muy reducido de organismos.
(iv) La produccin puede perderse fcilmente por mutacin espontnea (degeneracin de la
raza), por lo que son muy importantes las tcnicas de conservacin de estos
microorganismos.
De todos los productos tradicionales obtenidos por fermentacin, los ms importantes para
la salud humana son los metabolitos secundarios. Donde se incluyen, adems de los
antibiticos, ciertas toxinas (micotoxinas), alcaloides (cido lisrgico), factores de
crecimiento vegetal (giberelinas) y pigmentos.
Los metabolitos secundarios mejor conocidos son los antibiticos, de los que se han
descubierto ms de 5000, cifra que aumenta a razn de una media aproximada de 300 por
ao, aunque la mayora carecen de utilidad pues son txicos para los organismos vivos.
Aproximadamente el 75% de los antibiticos conocidos son producidos por actinomicetos.
Algunas especies son excepcionales productores de antibiticos, por ejemplo Streptomyces
gryseus produce al menos 40 antibiticos diferentes.
El metabolismo secundario se da en fases Trofofase e idiofase.. La trofofase es la fase de
crecimiento logaritmico (el prefijo trofos, significa "crecimiento" ) donde normalmente no
se producen los metabolitos secundarios, mientras que la fase de produccin de metabolitos
es la idiofase. Si estamos tratando con un metabolito secundario debemos asegurar que
durante la trofofase se proporcionen las condiciones apropiadas para un excelente
crecimiento y que las condiciones se alteren adecuadamente y en el momento oportuno
para que la formacin del producto sea excelente.
Aunque es una simplificacin pensar slo en dos fases, esta simplificacin nos permite
comprender mejor la fermentacin industrial de los metabolitos secundarios. Es decir, si
nosotros queremos producir un metabolito secundario primero debemos asegurar las
condiciones apropiadas durante la trofofase para un buen crecimiento y despus, debemos
alterar esas condiciones en el momento adecuado para asegurar una excelente produccin
del metabolito secundario.
Este retraso en la formacin de metabolitos secundarios es uno de los principales
mecanismos mediante el cual los microorganismos productores de antibiticos evitan el
suicidio, puesto que al comienzo de la fase logartmica de crecimiento son sensibles a su
propio antibitico, para posteriormente, durante la idiofase, volverse resistentes al antibitico
que estn produciendo
En el metabolismo secundario, la produccin en cuestin puede no derivarse del sustrato
primario del crecimiento, sino a partir de un producto que l mismo form a partir del
sustrato primario del crecimiento.
Por tanto, el metabolito secundario se produce, generalmente, a partir de varios productos
intermedios que se acumulan, bien en el medio de cultivo o bien en las clulas, durante el
metabolismo primario.
Una caracterstica de los metabolitos secundarios es que las enzimas implicadas en la
produccin del metabolito secundario estn regulados separadamente de las enzimas del
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metabolismo primario. En algunos casos se han identificado inductores especficos de la

produccin de metabolitos secundarios. Por ejemplo, se ha identificado un inductor
especfico de la produccin de estreptomicina, un compuesto denominado Factor A.
EFECTO DE LOS PRECURSORES O INDUCTORES EN LOS METABOLITOS
SECUNDARIOS
Los factores que ponen en marcha la produccin de metabolitos secundarios al final de la
trofofase no se conocen; nicamente se sabe que este mecanismo se dispara normalmente
cuando algn nutriente del medio se ha agotado. En algunas ocasiones el nutriente
responsable es una fuente de Carbono, en otras, sin embargo es el Nitrgeno o el Fsforo.
La explicacin puede ser que al faltar nutrientes se alteren los metabolitos primarios y se
originen inductores de los enzimas encargados de la sntesis de los metabolitos
secundarios. Otra explicacin puede ser que al faltar la fuente de Carbono cesa la represin
por catabolito, sintetizndose a partir de este momento los enzimas necesarios para la
biosntesis de estos metabolitos secundarios.
Cualquiera que sea el mecanismo general por el que se dispara el metabolismo secundario
al final de la trofofase, es un hecho que en este punto hay unos cambios muy fuertes en la
composicin enzimtica de las clulas, apareciendo los enzimas que estn especficamente
relacionados con la formacin de metabolitos secundarios. Sin embargo, e
independientemente de este aspecto general del metabolismo secundario, se ha puesto de
manifiesto la existencia de sistemas de regulacin que juegan un papel importante en la
sntesis de determinados productos industriales.
Las manipulaciones, tanto del medio de cultivo como de las condiciones ambientales que se
llevan a cabo durante el screening secundario de una forma sistemtica, incluyen la adicin
de centenares de aditivos en los medios de cultivo que puedan actuar como posibles
precursores del producto que estamos investigando. Ocasionalmente se encuentra un
precursor que incrementa de forma notable la produccin de este metabolito secundario. El
precursor puede incluso dirigir la sntesis de un determinado producto de entre varios que se
producan anteriormente; es lo que se conoce como biosntesis dirigida.
Como ejemplos de precursores estn el cido fenilactico en el caso de la produccin de
bencil penicilina; determinados aminocidos especficos en la produccin de actinomicinas y
tirociclinas; cidos benzoicos sustituidos en la formacin de novobiocinas.
En muchas fermentaciones, sin embargo, los precursores no muestran ninguna actividad.
Esto es debido a que su sntesis por el microorganismo no es el factor limitante de la
produccin del metabolito secundario. En estos casos, la adicin de aditivos ha revelado
efectos dramticos, tanto estimuladores como inhibidores en la produccin del metabolito
secundario por parte de una molcula no precursora. Este efecto se debe normalmente a la
interaccin de estos compuestos con los mecanismos reguladores del microorganismo
productor. Precisamente, estudiando estos efectos se puso de manifiesto que los
mecanismos reguladores de los microorganismos ejercen un efecto notable en la produccin
de los metabolitos secundarios.

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DIFERENCIA ENTRE METABOLITOS PRIMARIOS Y SECUNDARIOS

Metabolitos primarios
Productos del metabolismo general

Metabolitos secundarios
Productos del metabolismo especial

Ampliamente distribu dos en plantas y

microorganismos
Indispensables para la vida

Biosintetizados a partir del metabolismo

primario
Distribucin restringida a ciertas plantas,
microorganismos
Distribucin taxonmica restringida (a veces
caracterstico de un gnero dado o de una
especie)
No indispensables para la vida
Alcaloides, terpenos, flavonoides,
esteroides, cumarinas, etc.

Aminocidos de protenas, monosacridos,

lpidos, cidos derivados del ciclo de los
cidos tricarboxlicos, glcosidos, etc

RELACIN ENTRE EL METABOLISMO PRIMARIO Y EL SECUNDARIO.

La mayora de los metabolitos secundarios son molculas orgnicas complejas que para su
formacin requieren un gran nmero de reacciones enzimticas especficas. Se sabe, por
ejemplo, que en la sntesis del antibitico tetraciclina estn implicados al menos 72 pasos
enzimticos separados y ms de 25 en la sntesis de la eritromicina, y que ninguna de estas
reacciones tiene lugar durante el metabolismo primario. Sin embargo, las vas metablicas
de estos metabolitos secundarios arrancan del metabolismo primario porque los materiales
de partida para el metabolismo secundario vienen de las vas biosintticas principales.
Muchos metabolitos secundarios estructuralmente complejos, se originan a partir de
precursores estructuralmente muy similares.

B) CRECIMIENTO MICROBIANO.
Entendemos por crecimiento microbiano el aumento del nmero de microorganismos a lo
largo del tiempo. Por tanto, no nos referimos al crecimiento de un nico microorganismo
(ciclo celular), sino al demogrfico. El crecimiento de una poblacin es el aumento del
nmero de clulas como consecuencia de un crecimiento individual y posterior divisin

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1.1. CICLO CELULAR

Las clulas aisladas cultivadas en un volumen finito de medio de cultivo apropiado van
utilizando los nutrientes que tienen disponibles, sintetizando sus propios componentes
celulares y dividindose en cuanto duplican su masa y su material gentico. El tiempo que
tarda una clula en cumplir ese proceso se denomina tiempo de generacin () y puede
variar desde unos 20 minutos en condiciones ptimas hasta varios meses en condiciones
ambientales. Cada vez que transcurre un tiempo de generacin, el nmero de clulas se
duplica, siguiendo, por tanto, un incremento exponencial.

2. CINTICA DE CRECIMIENTO DE UN CULTIVO DISCONTINUO. PARMETROS.

En este apartado vamos a revisar el estudio de la cintica del crecimiento
de microorganismos que crecen aislados que no forman ningn tipo de estructura. Esta es la
forma de crecimiento de las levaduras (hongo unicelular) y bacterias.
Es importante conocer la cintica de crecimiento de los cultivos microbianos para predecir
cmo va a evolucionar un cultivo, cmo va a ir consumindose el substrato y cmo se van a
ir acumulando los productos del cultivo. Conociendo estos factores es posible iniciar el
cultivo a mayores escalas.
2.1 TRATAMIENTO DEL CRECIMIENTO COMO PROGRESIN GEOMTRICA
Las bacterias crecen siguiendo una progresin geomtrica en la que el nmero de individuos
se duplica al cabo de un tiempo determinado denominado tiempo de generacin (). De esta
forma, podemos calcular el nmero de bacterias (N) al cabo de un nmero de generaciones
(n) usando la ecuacin siguiente:
N = N0 2g (ecuacin 1)
Siendo N0 el nmero de clulas en el momento actual. El nmero de generaciones se puede
calcular de la siguiente forma:
g = t / (ecuacin 2)
Donde t es el tiempo transcurrido.
Por consiguiente, combinando las ecuaciones 1 y 2:
N = N0 2t/ (ecuacin 3)
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Las ecuaciones exponenciales son muy difciles de manejar grficamente, por ello es mejor
transformarlas en otras ms simples. Para transformar una ecuacin exponencial en una
recta, tomamos logaritmos en los dos trminos y resulta:
lnN = lnN0 + (t/) ln2 (ecuacin 4)
logN = log N0 + (t/) log2

El logaritmo del nmero de clulas crece linealmente con el tiempo a razn de una
constante igual a ln2/. Si el tiempo de generacin es muy grande, el crecimiento tendr
poca pendiente (ser lento) y si es pequeo el crecimiento ser rpido. En un crecimiento
equilibrado, todos los parmetros de crecimiento (nmero de clulas, biomasa de cultivo,
acumulacin de metabolitos primarios, protenas, cidos nucleicos etc.) evolucionan en
paralelo. Por tanto, en la ecuacin anterior N puede representar cualquiera de estos
factores.
2.2. TRATAMIENTO DEL CRECIMIENTO EN FUNCIN DE LA TASA DE CRECIMIENTO
Otra forma de representar la cintica es considerando el incremento en el nmero de
clulas (dN) en un intervalo corto de tiempo (dt). En este caso, la ecuacin que describe la
cintica es la siguiente:
dN/dt = N (ecuacin 5)
Esto es: el incremento del nmero de clulas (dN) por unidad de tiempo (dt) es proporcional
al nmero de clulas presentes en el cultivo (N). A la constante de proporcionalidad () se le
denomina tasa de crecimiento.
Integrando la ecuacin anterior durante el tiempo de cultivo, se transforma en la siguiente
funcin exponencial:
N = N0 et (ecuacin 6)

La transformacin de esta ecuacin en una recta (tomando logaritmos) rinde lo siguiente:

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lnN = lnN0 + t (ecuacin 7)

El incremento del logaritmo del nmero de clulas aumenta linealmente con el tiempo siendo
la constante de proporcionalidad .
Comparando esta ecuacin (7) con la similar presentada ms arriba (4), podemos concluir
que = ln2/ y, por consiguiente, que = ln2/. Es decir, que hay una correlacin inversa
entre el valor de la tasa de crecimiento () y el tiempo de generacin ().
Estas ecuaciones nos permiten relacionar los parmetros de crecimiento y predecir cul
ser el nmero de clulas, masa celular, etc. despus de un cierto tiempo de cultivo (t) si
conocemos ; o bien, poder calcular la tasa de crecimiento a partir de medidas
experimentales del incremento en el nmero de clulas, biomasa, etc. como se observa en
el siguiente ejemplo:

3. RENDIMIENTO (Ys) DE LOS CULTIVOS.

El grfico siguiente representa la variacin de la biomasa (o nmero de clulas, etc.) de un
cultivo a lo largo del tiempo. En este cultivo, se va consumiendo un substrato cuya
concentracin decrece de forma proporcional al crecimiento de la biomasa.

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A la tasa especfica de consumo de substrato (qs) la podemos considerar la velocidad con

la que el organismo consume el substrato. Evidentemente, cuanto mayor sea la tasa de
consumo mayor ser la tasa de crecimiento ().
qs = Ys/ (ecuacin 8)
Asimismo, cuanto mayor sea el rendimiento del substrato consumido, tambin mayor ser la
tasa de crecimiento. Sin embargo, hay una cierta compensacin entre la tasa de consumo
del substrato y el rendimiento de forma que los microorganismos que tienen altas tasas de
consumo de substrato tienen rendimientos ms bajos (o cuando se dan las condiciones para
una alta tasa, el rendimiento disminuye). A esta relacin inversa se le conoce con el nombre
de efecto Pasteur.
Por ltimo, nos falta relacionar la velocidad de crecimiento () con la concentracin de
substrato (S). En condiciones de substrato abundante, la concentracin de este no afecta al
valor de ; pero cuando el substrato se hace limitante, s existe ese efecto. La expresin
matemtica que relaciona ambos parmetros se conoce con el nombre de ecuacin de
Monod y es la siguiente:
= max [S/(Ks+S)] (ecuacin 9)

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En esta ecuacin la tasa de crecimiento () depende de la mxima que puede alcanzar el

microorganismo (max), de la concentracin de substrato (S) y de un valor constante, Ks,
que representa la concentracin de substrato a la que se alcanza una tasa de crecimiento
igual a la mitad de la mxima. La ecuacin de Monod tendr mucha importancia al tratar de
cultivos continuos. Para que se cumpla esta ecuacin el rendimiento debe ser independiente
de la concentracin de substrato. En la prctica, los valores de Ks suelen ser muy bajos, lo
que indica que los microorganismos crecen con tasas () muy prximas a las mximas
(max) a concentraciones de substrato bajas y slo cuando estas son extremadamente
bajas, la velocidad de crecimiento se reduce. Esto es debido a que los sistemas de
transporte de nutrientes suelen tener valores de Km considerablemente reducidos (La Km
indica la concentracin de substrato a la que la velocidad de transporte es la mitad de la
mxima).

4. CRECIMIENTO MICROBIANO EN MEDIO LQUIDO

Si la bacteria crece en un medio lquido, en la mayora de los casos las clulas que se
producen en cada divisin forman una suspensin de clulas libres.
En un cultivo discontinuo de bacterias en medio lquido, se pueden diferenciar cuatro fases
en la evolucin de los parmetros que miden el crecimiento microbiano (Fig. 2):
1.- Fase lag o de adaptacin durante la que los microorganismos adaptan su metabolismo a
las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y condiciones de cultivo). En
esta fase no hay incremento en el nmero de clulas, pero hay gran actividad metablica,
aumento en el tamao individual de las clulas, en el contenido proteico, ADN y peso seco
de las clulas.
2.- Fase exponencial o logartmica: en ella la velocidad de crecimiento es mxima y el
tiempo de generacin es mnimo. Durante esta fase las bacterias consumen a velocidad
mxima los nutrientes del medio. La evolucin del nmero de clulas durante esta fase se
explica con los modelos matemticos descritos anteriormente.
Si un cultivo que est creciendo en fase exponencial es inoculado al mismo medio de cultivo
bajo las mismas condiciones de crecimiento, no se observa fase de latencia y el crecimiento
exponencial sigue a la misma velocidad.
3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el nmero de bacterias (ni la masa u otros
parmetros del cultivo). Las clulas en fase estacionaria desarrollan un metabolismo
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diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce una acumulacin y liberacin

de metabolitos secundarios que pueden tener importancia industrial.

Fig. 2. Fases del crecimiento microbiano

Los microorganismos entran en fase estacionaria porque se agota algn nutriente esencial
del medio o porque los productos de desecho que han liberado durante la fase exponencial
hacen que el medio sea inhspito para el crecimiento microbiano. La fase estacionaria tiene
gran importancia porque probablemente represente con mayor fidelidad el estado
metablico real de los microorganismos en los ambientes naturales.
4.- Fase de muerte: Si la incubacin contina despus de que una poblacin microbiana
alcanza la fase estacionaria, las clulas pueden seguir vivas y continuar metabolizando,
pero va a comenzar una disminucin progresiva en el nmero de clulas viables y cuando
esto ocurre se dice que la poblacin ha entrado en fase de muerte.
5. CRECIMIENTO MICROBIANO EN MEDIO SLIDO
Las fases, parmetros y cintica de crecimiento discutidas para el caso de los cultivos
lquidos se presentan tambin en cultivos slidos. La cintica de crecimiento, en este caso,
se puede estudiar siguiendo la evolucin del nmero de clulas viables por unidad de
superficie o por unidad de masa.
Cuando una clula aislada e inmvil comienza a crecer sobre un substrato slido, el
resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Por consiguiente, se
denomina unidad formadora de colonia (UFC) a una clula bacteriana viva y aislada que si
se encuentra en condiciones de substrato y ambientales adecuadas da lugar a la produccin
de una colonia en un breve lapso de tiempo. Si el nmero inicial de bacterias por unidad de
superficie es muy alto, la confluencia de las colonias da lugar a lo que se llama
un csped cuando se realizan los cultivos en placas de laboratorio.
En el caso de microorganismos mviles (deslizantes) o en el de los hongos filamentosos
que tienen un crecimiento trfico no se producen colonias aisladas sino formaciones ms
difusas o miceliares.
6. CONCEPTO DE MUERTE DE UN MICROORGANISMO
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Desde el punto de vista microbiolgico, un microorganismo muere cuando pierde de orma

irreversible la capacidad de dividirse. Como consecuencia de esta prdida, no se
Produce aumento en el nmero de microorganismos y, por tanto, no hay crecimiento. Sin
embargo, un microorganismo puede estar muerto desde el punto de vista microbiolgico y
continuar desarrollando una actividad metablica que se traduzca, por ejemplo, en
liberacin de toxinas. Por otra parte, hay que considerar que la capacidad de multiplicacin
(crecimiento) de un microorganismo puede verse transitoriamente afectada por lesiones o
por las condiciones fsicas o qumicas del entorno. En estos casos, podramos considerar
como muertos microorganismos que pueden reanudar su crecimiento si las condiciones son
de nuevo favorables.
La curva del crecimiento
fases:

de una poblacin bacteriana se divide en 4

Latencia
Cuando una poblacin bacteriana es inoculada en un medio fresco el crecimiento no suele
comenzar d inmediato, sino despus de un tiempo llamado latencia.
La fase de latencia representa un periodo de transicin para los microorganismos cuando
son transferidos a una nueva condicin. En esta fase se producen las enzimas necesarias
para que ellos puedan crecer en un nuevo medio ambiente. En esta fase no hay incremento
de clulas, pero hay gran actividad metablica, aumento en el tamao individual de las
clulas, en el contenido proteico, ADN y peso seco de las clulas.
Exponencial o logartmica
Es el periodo de la curva del crecimiento en el cual el microorganismo crece
exponencialmente, es decir que cada vez que pasa un cierto tiempo de generacin la
poblacin se duplica. Bajo condiciones apropiadas la velocidad de crecimiento es mxima.
Las condiciones ambientales afectan la velocidad de crecimiento exponencial.
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Fase estacionaria
En cultivos en recipientes cerrados una poblacin no puede crecer indefinidamente de forma
exponencial. Las limitaciones de crecimiento ocurren ya sea por agotamiento de algn
nutriente esencial, por acumulacin de productos txicos, porque se alcance un nmero de
clulas elevado para el espacio disponible o por combinacin de las causas anteriores.
Fase de muerte
Si la incubacin continua despus de que una poblacin microbiana alcanza la fase
estacionaria, las clulas pueden continuar vivas y seguir metabolizando, pero va a
comenzar una disminucin progresiva en el nmero de clulas viables, y cuando
esto ocurre se dice que la poblacin ha entrado en fase de muerte.

MACRONUTRIENTES
La glucosa, por ejemplo, es utilizada como fuente de carbono y fuente de energa. Tambin
existen bacterias que pueden usar una variedad de otras sustancias orgnicas como fuente
parcial o exclusiva de carbono. Entre las bacterias ms verstiles se encuentra las del
gnero Pseudomonas, muchas de las cuales pueden utilizar ms de 100 compuestos
orgnicos. Despus del carbono el elemento ms abundante en la clula es el nitrgeno,
representa entre el 12 y el 15% del peso seco, y es el constituyente principal de protenas y
cidos nucleicos. La mayora de las bacterias son capaces de utilizar el amonio como fuente
de nitrgeno, mientras que otras pueden usar los nitratos.
La reduccin de nitratos, se puede lograr por 2 mecanismos diferentes:
1. Reduccin asimiladora: En la cual es reducido por la va del nitrito,
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2. Reduccin desasimiladora: Donde el nitrato sirve como aceptor final de electrones. La

primera est bastante extendida entre las bacterias mientras que la segunda slo es comn
en bacterias anaerobias y anaerobias facultativas. El fsforo es utilizado para la sntesis de
cidos nucleicos y fosfolpidos. La mayora de las bacterias lo usan en forma inorgnica
como PO4 = . Los fosfatos orgnicos estn ampliamente distribuidos en la naturaleza, pero
para ser utilizados deben ser atacados primero por fosfatasas, enzimas que clivan estos
compuestos liberando fsforo inorgnico. 40 Aunque requeridos en cantidades muy
pequeas los micronutrientes son importantes para la nutricin. Entre estos destacamos,
cobalto, cobre y manganeso.

C) Factores de crecimiento
Son sustancias que deben ser aportadas preformadas, ya que la bacteria que las requiere
no las puede sintetizar a partir de los nutrientes ms simples, por falla o ausencia de una va
metablica. Estas sustancias incluyen vitaminas del complejo B, aminocidos, purinas y
pirimidinas. Las bacterias que no requieren factores de crecimiento de denominan
prototrficas y las que los requieren, auxotrficas para ese factor.
I. Oxgeno: Las exigencias de oxgeno de una bacteria en particular reflejan en parte el tipo
de metabolismo productor de energa.
De acuerdo a su relacin con el oxgeno tenemos: - Anaerobios obligados:
Hay de 2 tipos estrictos y aerotolerantes, los primeros crecen en ausencia de O2 y este es
sumamente txico, incluso letal cuando la exposicin es breve. Los segundos tambin
crecen slo en ausencia de O2 pero toleran ms que los anteriores su presencia
Anaerobios facultativos: Son capaces de crecer en presencia o ausencia de oxgeno. Aerobios obligados: Requieren oxgeno para su desarrollo.
- Microaerfilos: Crecen mejor con tensiones de oxgeno bajas (3%-5%), las
concentraciones elevadas (21%) tienen un efecto inhibidor para estas bacterias. En los
aerobios,
anaerobios
facultativos
y
anaerobios
aerotolerantes
la
enzima
superoxidodismutasa impide la acumulacin del radical superxido; esta enzima est
ausente en los anaerobios estrictos. El perxido de hidrgeno formado por la accin de la
superoxidodismutasa es destruido con rapidez por la enzima catalasa o por peroxidasas,
como vimos ms arriba.
II. Dixido de carbono: Algunas bacterias como Neisseria y Brucella tienen varias enzimas
con baja afinidad por el CO2 y requieren una concentracin ms elevada (10%) de la que
habitualmente est presente en la atmsfera (0.03%). Estos requerimientos atmosfricos
deben ser tenidos en cuenta cuando se realice el cultivo de estas bacterias.
D) Requerimientos fsicos.
POTENCIAL DE OXIDOREDUCCION: El potencial de xido-reduccin de un medio de
cultivo es un factor crtico para determinar si se producir o no el desarrollo de un inculo
sembrado en dicho medio. Para la mayor parte de los medios de cultivo en contacto con el
aire, el potencial de xido-reduccin es de +0,2 a +0,4V a Ph 7. Los anaerobios obligados
son incapaces de crecer a menos que el potencial sea tan bajo como -0,2 V como mnimo.
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Para establecer estas condiciones en un medio de cultivo se puede eliminar el oxgeno,

recurriendo a sistemas de cultivo anaerobio o agregando al propio medio compuestos que
contengan sulfidrilo por ejemplo el tioglicolato de sodio.
TEMPERATURA
La temperatura ptima de desarrollo y un rango en el cual este puede ocurrir. Las bacterias
se dividen en tres grupos de acuerdo al rango de temperatura en el que pueden
desarrollarse:
Psicrfilas: -5 a 30 C, ptimo:15C
Mesfilas: 10 a 45C, ptimo: 30C
Termfilas: 25 a 80C, ptimo: 55C.
CONCENTRACION DE HIDROGENO (pH): Tambin aqu existe un valor de pH ptimo
dentro de un rango ms amplio en el cual el crecimiento puede ocurrir. Para la mayor parte
de las bacterias de inters mdico, el pH ptimo es de 7,2 a 7,6. Sin embargo hay
patgenos humanos como M. tuberculosus que resisten valores muy bajos de pH.
CONDICIONES OSMOTICAS: La concentracin de solutos con actividad osmtica dentro
de la clula bacteriana es superior a la concentracin exterior. Con excepcin de los
Micoplasmas y las formas lister (L), que no tienen pared celular, la mayor parte de las
bacterias tienen una tolerancia osmtica importante lo que les permite soportar grandes
cambios de la osmolaridad.

III.

ANEXOS

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23

IV.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

https://es.wikipedia.org/wiki/Metabolismo_microbiano
https://es.wikipedia.org/wiki/Metabolismo_primario
https://es.wikipedia.org/wiki/Metabolito_secundario
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Buchanam B., Gruissem W., Jones R (2000). Biochemistry & Molecular Biology of
Plants. Eds. American Society of Plant Physiologists.
Wink M. (1999). Biochemistry of Plant Secondary Metabolism; Annual Plant Reviews,
volumen 2. ed. Sheffield academic Press.

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Press.
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2 edicin. ed. Kluwer Academic Publishers.
Barcel J., Rodrigo G., Sabater B., Snchez R. (2001). Fisiologa vegetal. Ediciones
Pirmide (grupo Anaya, S.A.)
Chawla H.S. (2002). Introduction to Plant Biotechnology, 2 edicin. Ed. Science
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