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Virologa
Se cogen muestras
a distintos tiempos
(Centrifugamos)
M2
M1
Se centrifuga y
estudiamos si en el
sobrenadante hay
fagos
[=VIRUS
EXTRACELULARES]
1000
Virus extracelulares
u.f.p./ clula
Virus totales
100
PERIODO DE LATENCIA
ETAPA DE LIBERACIN
PRODUCCIN
VRICA
10
PERIODO DE
ECLIPSE
INFECCIN
Virologa
10
20
ACUMULACIN
INTRACELULAR
30
Tiempo (min)
Experimento de Hershey y
Chase (1952)
Marcaje del DNA de los fagos con
32P
Se mezclan
las bacterias y
los fagos
El ADN
del fago
incorpora
32P
En el sobrenadante
aparece muy poca
cantidad de 32P
32P-ADN
Se
c
El fago
infecta
a la
bacteria
Lisis de la
bacteria
ent
ri
Lisis de la
bacteria
fug
a
Mediante agitacin se
separan los virus que
estn unidos a la
superficie celular
32P-DNA
en la
progenie del
fago
Las protenas de
la cpsida
incorporan 35S
35S-cpsidas
Se
c
El fago
infecta
a la
bacteria
ent
ri
Lisis de la bacteria
fug
a
Se mezclan
las bacterias
y los fagos
Lisis de la
bacteria
Cpsidas
marcadas
con 35S
Mediante
agitacin se
separan los
virus que
estn unidos a
la superficie
celular
Bacterifagos
Receptores
Pared celular: Lipopolisacridos (LPS)
Protenas
Pili
Flagelos
Cpsula
Polisacrido O-especfico
Ncleo
polisacardico
Lpido A
Smooth
(Estirpe
silvestre)
rfc
rfb T
rfa H
gal E
Virologa
rfa G
S
R
R
R
R
R
S
S
S
R
R
R
R
R
S
R
R
R
R
R
R
S
S
S
R
R
S
S
S
S
R
R
S
S
R
S
Bacterifago T4
Protenas que forman la cpsida (gene product, gp)
Cabeza
23, 24,hoc, soc,IP I, II, III
Alt, DNA
Tubo central
19
Cola
Vaina
18
Espinas o fibras
cortas
12
Cuello
20, 13, 14
wac
Fibras de la cola
34, 35, 36, 37
Placa basal
7, 8, 9, 10, 11, 6, 25,
53, 5, 27, 26, 28, 48, 54
3 y 15 (sellan el tubo y la vaina)
Imgenes CryoEM
Espinas
(gp12)
Virologa
Unin reversible
Virologa
Fotografa al microscopio
electrnico del fago T4
adsorbido a la pared celular de
E. coli . La flecha seala cmo
el tubo de una de las partculas
de T4 atraviesa la pared celular
de la bacteria
Virologa
Virus de animales
Endocitosis mediada por receptor
Membrana plasmtica
Ligando
Receptor
Citoplasma
Vescula
recubierta
de clatrina
ENDOCITOSIS
Vescula
cubierta de
clatrina
Separacin
de la
clatrina
Desprendimiento
de vesculas de
transporte
pH 7.0
Fusin
con un
endosoma
ENDOSOMA TEMPRANO
H+
pH 6.0
ENDOSOMA TARDO
Lisosoma
Fusin con un lisosoma
Virologa
FUNCIN NORMAL
VIRUS
Protena
ICAM-1
Inmunoglobulinas
MHC I
MHC II
CR2
CD4
IgM
Receptor para
la Acetilcolina
Rhinovirus (Picornaviridae)
Poliovirus (Picornaviridae)
Virus de Semliki Forest (Togaviridae)
Adenovirus (Adenoviridae)
Citomegalovirus humano (Herpesviridae)
Carbohidratos
cido N-acetilneuramnico Proporciona a la superficie Influenza virus A,B,C, (Orthomyxoviridae)
de las clulas su
Paramyxovirus, (Paramyxoviridae)
carga negativa
Bovine enterovirus (Picornavirus)
Reovirus (Reoviridae)
Lpidos
Fosfotidilserina
Fosfoinositol
Componentes de la
membrana celular
Clula susceptible
Clulas permisiva
Tropismo
Ejemplos :
Familia Picornaviridae :
Esquema de molculas de la superfamilia IgSF
ICAM-1
CAR
PVR
poliovirus (PV),
Rhinovirus
Membrana
citoplasmtica
Anticuerpo
Cpsida
Receptor
ICAM-1
Virologa
Ej. Paramyxoviridae
Retroviridae
Desnudamiento
Microtbulos
Ej. Herpesviridae
Microtbulos
Ej. Orthomyxoviridae
Ej. Adenoviridae
Desnudamiento a nivel de la
Virologa
membrana nuclear
VIRUS DESNUDOS
Adenovirus
FIBRA (IV)
CORE
PENTMERO
III
IIIa
VII
TP
HEXMERO
ADN
II
VI
VIII
IX
VIII
VI
IIIa
II(MONMERO)
IX
PROTENAS DE LA CPSIDA DE UN ADENOVIRUS
NOMBRE
II
III
IIIa
IV
LOCALIZACIN
Monmero del hexmero
Pentmero
Asociada al pentmero
Fibra
VI
VII
VIII
IX
TP
FUNCIONES
Estructural
Penetracin
Penetracin
Unin al receptor,
hemaglutinacin
Parecida a Histonas
empaquetamiento?
Estabilizacin/ensamblaje
del virin?
Parecida a Histonas
Estabilizacin/ensamblaje
del virin?
Estabilizacin/ensamblaje
Virologa
del virin?
Replicacin del genoma
CITOPLASMA
Receptor
Hueco
recubierto
Integrina
Endocitosis
Se disocian
Fibras
IIIa
VIII
Endosoma
10 min
H+
15 min
20-30 min
Se disocian
Pentmero base III
IX
Degradacin de las
protenas VI
Ncleo
Contacto de la
histona HI con un
hexmero de la
cpsida
Unin de la Importina
7 y la Importina a
HI
Importacin del
hexmero de la
cpsida
Pvr
Desnudamiento
Endocitosis
Desnudamiento
Posibilidad B
VP3
VP1
VP4
Pvr
Virologa
HA Hemaglutinina
NA Neuraminidasa
M2 Canal de iones
M1 Protena de matriz
NP Nucleoprotena
PA , PB1, PB2 RNA polimerasa
cido silico (flechas rojas)
cido silico
Galactosa
Endosoma
Virologa
Hemaglutinina
(HA)
HA1
Homotrmero, en el que
cada subunidad consta de
2 polipptidos (HA1 y HA2)
unidos por un puente
disulfuro
HA2
citoplasma
Trmero HA
Pptido fusin
de HA
Pptido fusin
de HA
Anclaje en la
membrana del
virus
Pptido fusin de HA
Anclaje en la
membrana del
virus
Formacin del poro de fusin
poro de fusin
Virologa
Lentivirus (VIH)
Etapas de adsorcin y penetracin VIH en su clula
husped
Espina = multmero de
glicosilaciones
Gp120 (SU)
1:
Interaccin
Gp120:CD4
VIH
2:
Cambio
conformacional
gp41 (TM)
3:
4:
Reclutamiento Insercin de
de CCR-5
gp41 en la
membrana
5:
Fusion de
ambas
membranas
6:
Penetracin
gp41
gp120
CD4
CCR-5
citoplasma
Virologa