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BIOQUIMICA Y FISIOLOGIA VEGETAL

PRACTICA # 6
FOTOSINTESIS
INTRODUCCION
La energa que hace posible la vida de la gran mayora de los seres vivos en la Tierra
proviene directa o indirectamente del sol, a travs del proceso fotosinttico. En general la
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fotosntesis consiste en la reduccin del CO2 atmosfrico por medio del H del agua
obtenido con la energa proveniente de las radiaciones electromagnticas del sol, as la planta
almacena la energa electromagntica como energa potencial qumica en los compuestos
orgnicos. Los compuestos ricos en energa obtenidos de esta manera se usan despus
como fuente energtica para la propia planta y por otros organismos que son incapaces de
fabricar sus propios alimentos, pero s pueden aprovechar la materia vegetal.
El organismo vegetal ha desarrollado un sistema para capturar un fotn de luz y
utilizar la energa para cambiar de rbita a un electrn determinado. Dicho estado excitado
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generalmente dura muy poco (10 a 10 s); despus el electrn regresa a su nivel basal; al
hacerlo su nivel de energa es liberado en diversas formas. La evolucin de la vida vegetal
ha logrado, a travs de mecanismos biolgicos, desviar el retorno del electrn a su nivel
primitivo y utilizar el exceso de energa para sintetizar carbohidratos. Esta capacidad de
capturar el fotn y de convertir su energa luminosa en energa qumica es propiedad
exclusiva de las plantas verdes.
La substancia que absorbe la energa radiante que incide en la planta es la Clorofila,
molcula de pigmento incluida en la unidad estructural fotosinttica llamada Cuantosoma
que corresponde a una parte del tilacoide. Adems de las clorofilas a y b, en el cloroplasto
de plantas superiores hay otro grupo de pigmentos, los carotenoides con las carotinas y
xantofilas. En las algas, junto a la clorofila a, se encuentran otras, como la c la d, y
pigmentos accesorios: fucoxantinas y ficoeritrinas.
La luz solar, necesaria como fuente de energa para el proceso fotosinttico, se
compone de longitudes de onda de entre 380 nm y 760 nm, correspondiente a la luz
monocromtica de diferentes longitudes de onda (rojo y azl), y no a las otras. Est
formada por 4 ncleos de pirrol en un anillo de porfirina con un tomo metlico central
(Mg) y dos steres: un fitol y un metlico. Puede presentar fluorescencia, es decir, la
emisin de un cuantum rojo correspondiente a la energa que sobra al retornar el electrn a

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su posicin primitiva despus de haber sido excitado por un fotn. Debido a la prdida de
energa, la longitud de onda de la luz emitida es siempre mayor que la de la luz excitante.
Existen evidencias de la existencia de sistemas de pigmentos o unidades de
funcionamiento de las molculas de pigmentos o unidades fotosintticas en relacin con el
funcionamiento de las molculas de pigmentos dentro del cloroplasto, cada una con 200
300 molculas capaces de captar energa y transferirla de una molcula a otra hasta llegar al
centro de reaccin, correspondiente a una clorofila que capta longitudes de onda largas
(P700). Es evidente la existencia de dos sistemas de pigmentos diferentes, cada uno con un
papel esencial en la fase luminosa del proceso. El primer indicio de esto lo proporciono
Robert Emerson cuando, al probar el efecto de la luz monocromtica, observ que era
mayor la intensidad de la fotosntesis al utilizar simultneamente las de 650 y 690 nm en
lugar de la suma de las dos por separado; esto se conoce como "Efecto Emerson".
El cloroplasto, rgano celular donde se localiza el proceso fotosinttico, posee
adems un sistema enzimtico que cataliza la reduccin del CO 2 atmosfrico utilizando la
energa capturada. As, en el proceso se pueden distinguir claramente dos etapas conocidas
como fase luminosa o Reaccin de Hill y fase oscura o Ciclo de Calvin-Benson, o de
Blackman. En la primera, la energa luminosa interviene en la hidrlisis fotoltica del agua
con produccin de un compuesto estable de alta energa (NADPH2) y fosforilaciones
acopladas (ATP). La fase oscura es independiente de la luz pero utiliza sus productos para
reducir el CO2 atmosfrico y producir azcares. La primera reaccin se ha localizado en la
parte membranosa del cloroplasto (tilacoide) y la segunda en la matrz que le rodea llamada
estroma.
Los azcares simples son los productos de la fotosntesis; sin embargo, en la mayora
de las plantas verdes (especialmente dicotiledneas) se presentan inmediatas
transformaciones posteriores en el estroma del cloroplasto que los convierten en almidn
evitando su exportacin al citoplasma como aldehdo fosfoglicrico (GALd-P). No
obstante, entre las monocotiledneas hay especies como cebolla, maz, caa de azcar y
liliceas en las que se puede encontrar glucosa almacenada.
La carboxilacin primaria est catalizada por una de estas dos enzimas:
Ribulosadifosfato carboxilasa (o carboxidismutasa) y la fosfoenolpiruvato carboxilasa, cuyas
concentraciones y secuencia de accin varan segn las especies. Se determina as el sistema
de fijacin de CO2: va Ciclo de Calvin o C3, con la primera, y va de Hatch-Slack, o C4,

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con la segunda; y existe otra va que mezcla a las dos anteriores y se conoce como
metabolismo de cidos de las Crasulceas (MAC o CAM).
El proceso fotosinttico es tambin afectado por las condiciones del medio ambiente
en el cual ocurre. La fase bioqumica debe desarrollarse dentro del margen determinado por
la actividad de las enzimas que participan y la fase fisicoqumica est directamente
relacionada con la anterior. Algunos factores ambientales como intensidad y calidad de la
luz, cantidad de CO2 presente y temperatura, tienen importancia fundamental en la
intensidad del proceso.
Para medir la fotosntesis se usan mtodos como: formacin de almidn de
asimilacin o de glucosa; desprendimiento de O2 o el consumo de CO2; variacin de pH del
medio; y aumento de peso seco. El lugar en el que se puede tener un mejor control sobre el
medio ambiente del vegetal para establecer diferencias experimentales es en las especies
acuticas, tales como chlorella o elodea.
Cabe hacer notar que, por lo general, resulta difcil la cuantificacin del proceso
fotosinttico por su coexistencia con el respiratorio, de funcin antagnica en cuanto a
intercambio gaseoso. Por lo tanto, los valores medidos corresponden a la fotosntesis
aparente y deben corregirse por medio de los valores de respiracin, para obtener los valores
de la fotosntesis verdadera.
OBJETIVOS
Cuantificar, ya sea en forma realtiva o con mayor precisin, la intensidad del proceso
fotosinttico.
Evaluar la intensidad de la fotosntesis en elodea mediante cambios manifestados en
pH en su medio ambiente.
Analizar los factores del medio que influyen en el proceso fotosinttico como la luz,
la concentracin de CO2 y la temperatura por incidir directamente en la fotosntesis.

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MATERIALES
I.- 3 tubos de ensayo.
1 planta de elodea (proporcionada por el alumno). Para la primera parte de la
prctica se necesitan 2 ramillas. Favor de desprenderlas al momento de la prctica.
1 lmpara con foco de 75W (proporcionada por el alumno).
1 gradilla de tubos.
1 pipeta Pasteur o popotes (stos ltimos proporcionados por el alumno).
Papel aluminio (proporcionado por el alumno).
1 caja de zapatos pintada de negro por dentro (proporcionada por el alumno).
Papel pH de 0-14 o potencimetro.
Solucin de azl de bromotimol al 0.1% (de preferencia en gotero).
1 lpiz de cera o etiquetas (proporcionados por el alumno).
II.- 2 tubos de ensayo grandes (o frascos de 50 ml).
3 vasos de precipitados de 50 mL.
1 bureta con soporte (o jeringa hipodrmica de 10 mL proporcionada por el alumno).
2 pipetas de 10 mL.
Planta de elodea en su medio acutico (proporcionada por el alumno).
Solucin de NaOH al 0.04%
Solucin de fenolftalena al 0.5% en gotero.
Lmpara de 75W.
Papel aluminio o caja negra (proporcionados por el alumno).
III.- 12 tubos de ensayo.
4 gradillas para tubos.
4 vasos de precipitados de 250 ml.
1 vaso de precipitados de 500 ml.
1 incubadora a 30C.
1 mechero con rejilla y trpode.
4 termmetros.
1 lpiz de cera o etiquetas (proporcionados por el alumno).
hielo.
Planta de elodea en su medio acutico (proporcionada por el alumno).
1 lmpara con foco de 100 W.
filtros de celofn o Kodak: azl, verde y rojo (proporcionados por el alumno).
Soluciones de KHCO3 al 0.1, 0.3 y 0.5%.
3 pipetas de 10 mL.
1 cronmetro o reloj con segundero.
METODO
I.- Llene 3 tubos de ensayo con el agua en la que se encuentra la planta de
elodea hasta un tercio del borde y agregue gotas de azul de bromotimol hasta que, despus
de agitar, el color azul permanezca. A dos de los tubos haga llegar aire expirado (soplado)

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por medio de una pipeta Pasteur o popote hasta que el color de la solucin cambie de azul a
amarillo; determine el pH con papel indicador.
Introduzca en cada uno de los tubos amarillos una ramita de elodea que presente su
extremo apical intacto, envuelva un tubo con papel aluminio o mtalo a la caja de zapatos.
Deje el otro tubo con planta y aqul que no tiene planta a la luz del sol o de una lmpara con
foco de 75W.
Espere unos 45 minutos hasta que note algn cambio en el tubo con planta expuesto
a la luz. Observe el tubo que qued en oscuridad y compare los 3 tubos. Determine
nuevamente el pH en cada tubo con papel indicador o potencimetro.
II.- Tome una alcuota de 20 mL de agua del medio en el que se encuentra la elodea,
agregue una gota de fenolftalena al 0.5% y titule gota a gota con el NaOH contenido en una
bureta, agite bien el vaso despus de cada gota. Contine as hasta observar un cambio de
color y registre el nmero de ml de lcali usados para llegar a ese punto; dicha cantidad
equivale al cido carbnico que hay en 20 ml de agua; esta medicin corresponde al control.
Llene 2 tubos de ensayo con el agua del medio de la elodea e incorpore en cada uno
una ramilla de elodea de igual tamao, deje uno a la luz y el otro en oscuridad. Al cabo de
dos horas titule del mismo modo una alcuota del tubo en oscuridad y otra del tubo expuesto
a la luz. Anote el nmero de mililitros gastados en cada caso. Registre el nmero de
micromoles de CO2 de cada muestra multiplicando por 10 el nmero de mililitros de NaOH
gastados en la titulacin, ya que cada mililitro de la solucin de NaOH al 0.04% recin
preparada puede combinarse con 10 moles de CO2. Anote los valores de sus mediciones
de titulacin en una tabla, teniendo en cuenta que el nmero de moles de CO2 en el
control equivale a la cantidad inicial de este gas en el agua al comenzar el experimento; la
disminucin equivale entonces a la cantidad usada en el proceso de fotosntesis.
III.- El efecto de los factores propuestos en los objetivos en el proceso fotosinttico
puede medirse utilizando el mtodo de las micromoles de CO2 consumidas, o el mtodo del
burbujeo. Para este ltimo introduzca una ramilla de elodea con el borde recin cortado
hacia arriba en un tubo de ensayo con agua.
Cuente el nmero de burbujas por minuto que salen del tallo al iluminar las plantas
con una lmpara de 100 W ubicada a 30 cm de distancia, deje que se regularice el burbujeo 5
minutos antes de contar.
a) Efecto de la Intensidad Luminosa: Coloque tubos con elodea a 60, 30 y 15 cm de
la fuente luminosa y cuente el nmero de burbujas/min. (haga 3 repeticiones).

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b) Efecto de la calidad de la luz: Coloque la lmpara a 30 cm de los tubos con

elodea y antepngale primero el filtro azul, despus el verde y finalmente el rojo. Deje 15
minutos los tubos expuestos a cada condicin antes de medir el burbujeo. (Para mayor
exactitud en intensidad luminosa procure usar filtros Kodak).
c) Efecto de la concentracin de CO2: Coloque ramillas de elodea en tubos con
agua recin hervida y enfriada, solucin de KHCO3 al 0.3%; espere 15 minutos y mida el
burbujeo.
d) Efecto de la temperatura: Use tubos con agua a 5C, 15C, 30C y 50C, en
cuyo interior se colocan las ramillas de elodea y haga la medicin como en los casos
anteriores (a 30 cm). Para mantener las temperaturas prepare un sistema de bao Mara
depositando los tubos dentro de vasos con agua a la temperatura adecuada o hielo,
contrlela con el termmetro introducido en cada tubo de ensayo.
Haga grficas de los resultados obtenidos con cada factor respecto a la intensidad de
la fotosntesis, colocando la intensidad de fotosntesis expresada en nmero de burbujas/min,
en la ordenada y el factor estudiado en el eje de la abscisa.
LITERATURA RECOMENDADA
Devlin, R.M. y Barker, A. V. 1971. Photosynthesis. New York, Van Nostrand-Reinhold.
Kok, B. 1965. Photosynthesis: The Path of Energy. In: Bonner, J. y Varner, J. eds. Plant
Biochemistry, New York. Academic Press pp904-957.
Lehninger, A.L. 1978. Bioenergtica En: Bioqumica. 2a de. Omega, Barcelona. 117p.
Zelitch, Y. 1971. Photosynthesis, Photorespiration and Plant Productivity. Academic Press,
New York, 347p.