UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

INSTITUTO DE BIOCINCIAS
COMISSO DE GRADUAO DO CURSO DE CINCIAS BIOLGICAS
TRABALHO DE CONCLUSO DE CURSO

EFEITO DO EXTRATO AQUOSO (CH) DE ERVA-MATE (Ilex

paraguariensis) SOBRE PARMETROS OXIDATIVOS EM
RATOS DIABTICOS

Roxane Freire Duarte

Orientador: Luiz Carlos Kucharski
Co-orientador: Fernanda Freitas Caregnato

Trabalho escrito com base no modelo da revista Free Radicals Research

RESUMO

A diabetes melito (DM) se caracteriza por um grupo de distrbios metablicos

identificados por hiperglicemia, resultante de defeitos na secreo de insulina, na
ao da insulina ou de ambos. A diabetes causa hiperglicemia crnica, que um fator
desencadeador de aumento na produo de radicais livres, que so responsveis por
um agravamento da doena. A Erva-mate Ilex paraguariensis uma espcie nativa
das regies subtropicais e temperadas da Amrica do Sul, principal componente da
bebida popularmente conhecida como chimarro. Vrios trabalhos tm mostrado
diferentes benefcios do consumo do ch mate devido a sua habilidade em combater
as espcies reativas de oxignio, j que possui em sua composio polifenis, que
so capazes de inibir a glicosilao no-enzimtica das protenas e a formao dos
produtos finais dessa glicao, os AGEs que tambm so produzidas em excesso na
diabetes. Foram utilizados os tecidos renais (crtex e medula), fgado e msculo de
ratos Wistar machos. O objetivo foi apurar se o chimarro era capaz de reverter o
estresse oxidativo gerado pela diabetes. Para verificar os danos protenas e lipdios
realizamos as tcnicas de Carbonil e TBARS, onde crtex renal e fgado, do grupo
dos diabticos, apresentaram resultados significativos; para avaliar as defesas
antioxidantes no-enzimticas, utilizamos TRAP, onde somente o grupo dos Dbt no
crtex mostrou resultados significativos. Podemos constatar que os rgos reagem de
diferentes formas ao tratamento com ch, ora combatendo, ora produzindo radicais
livres.
Palavras-chave: estresse oxidativo, glicao, crtex renal, polifenis, cafena

1. INTRODUO

A Erva-mate (Ilex paraguariensis) uma espcie nativa das regies

subtropicais e temperadas da Amrica do Sul, onde popularmente conhecida como
erva-mate [1]. uma espcie que apresenta importncia do ponto de vista econmico
e social, devido ao hbito vinculado a essa macro regio, que consiste no consumo
do chimarro e do terer [2]. Nos pases sul-americanos, o extrato de Ilex
paraguariensis consumido como mate, em propores que chegam a um litro por
dia, por milhes de pessoas e constitui a principal alternativa ao caf e ch [3]. O
mate usado na medicina popular para o tratamento de artrite, reumatismo e outras
doenas inflamatrias, dores de cabea, obesidade, hipertenso, doenas hepticas
e desordens intestinais. Especula-se que o mate seja diurtico, hipocolesterolmico, e
tenha propriedades lipolticas [4].
Alguns autores sugerem que a ingesto da infuso pode ser uma importante
fonte de minerais essenciais e vitaminas [5] e que essa planta provavelmente
apresente propriedades farmacuticas [6]. Um estudo sobre a composio mineral da
erva-mate comercial revelou que a infuso apresenta altas concentraes de
potssio, magnsio, mangans, intermedirias de enxofre, clcio e fsforo, baixas de
alumnio e zero de cdmio e chumbo. Alm disso, as altas concentraes de potssio
na infuso so importantes para pessoas hipertensas, podendo ser considerada uma
caracterstica farmacutica [6].
Vrios trabalhos tm mostrado diferentes benefcios do consumo do ch mate,
devido a sua habilidade em combater as espcies reativas de oxignio, e relacionam

essa propriedade com a atividade da enzima peroxidase. Isso significa, do ponto de

vista biolgico, que os polifenis agem de forma similar as 293 enzimas antioxidantes
naturais dos organismos. Esse potencial antioxidante devido aos nveis de polifenis
presentes no ch [7,8]. O mate, ingerido como suplemento diettico, capaz de
aumentar as defesas antioxidantes contra os radicais livres, particularmente no
desenvolvimento da aterosclerose [4]. Ilex paraguariensis contm as maiores
concentraes de derivados de cafeiol, em comparao com as demais espcies de
Ilex, que alm de terem concentraes muito baixas, apresentam uma grande
variao nas suas concentraes de cido dicafeoilqunico. As altas concentraes
desse composto que conferem ao mate a sua capacidade antioxidante [9].
Numerosos fitoqumicos foram identificados como responsveis pelos benefcios do
mate na sade. Entre eles, os dois mais citados so as metilxantinas e os polifenis.
As xantinas que so encontradas na I. paraguariensis so teobromina e cafena, onde
a cafena encontrada em maior concentrao [10].
A cafena (1,3,7-trimetilxantina) um derivado da xantina, quimicamente
relacionada com outras xantinas: teofilina (1,3-dimetilxantina) e teobromina (3,7dimetilxantina). Elas se diferenciam pela potncia de suas aes farmacolgicas
sobre o sistema nervoso central (SNC) [11]. A biotransformao da cafena ocorre em
maior proporo no fgado, no qual existe maior concentrao de citocromo P450
1A2, enzima responsvel pelo metabolismo desta substncia [12]. Acredita-se que a
cafena possua mecanismos de ao central e perifrica que podem desencadear
importantes alteraes metablicas e fisiolgicas [13] e que a ao estimulante da
cafena no SNC envolve a estimulao do sistema nervoso simptico, aumentando a
liberao e, conseqentemente, a ao das catecolaminas [14]. Uma segunda teoria
pressupe o efeito direto da cafena sobre o msculo esqueltico com alterao de

ons, particularmente sdio e potssio; inibio da fosfodiesterase, possibilitando um

aumento na concentrao de adenosina monofosfato cclica (AMPc); efeito direto
sobre a regulao metablica de enzimas semelhantes s fosforilases (PHOS); e
aumento na mobilizao de clcio atravs do retculo sarcoplasmtico e,
conseqentemente, aumento dos nveis intracelulares de clcio nos msculos,
facilitando a estimulao-contrao do msculo esqueltico, aumentando a eficincia
da contrao [15]. Ela tambm acelera o metabolismo basal e o consumo de oxignio
pelos tecidos do corpo, estimulando a termognese e a oxidao de gordura [16]
Evidncias sugerem que os polifenis podem modular a absoro e o
metabolismo da glicose. Estudos tm relatado que um consumo elevado de caf pode
ser associados com um risco menor de diabetes tipo 2. Esse efeito pode ser atribudo
ao cido clorognico, principal composto fenlico presente na erva-mate. Entretanto
os mecanismos de ao do cido clorognico no metabolismo da glicose no esto
completamente elucidados. Porm, alguns derivados sintticos do cido clorognico
inibiram a glicose-6-fosfatase in vitro e in vivo aps administrao intravenosa ou
intraperitoneal, causando uma reduo dos picos glicmicos. Outro mecanismo
proposto a inibio do transporte de glicose pelas clulas intestinais. Alguns
compostos fenlicos presentes no ch verde so capazes de interagir com SGLT1, o
principal co-transportador de glicose no intestino delgado, inibindo o transporte de
glicose provavelmente por mecanismos competitivos [17].
As condies de processamento da Ilex, como o tempo e a temperatura
utilizados nas etapas de secagem, alm de outros parmetros como a variabilidade
gentica, tipo de solo, gua e fertilizantes, podem variar entre os diversos produtores
e tm influncia direta sobre a qualidade, caractersticas organolpticas e a
quantidade de substncias bioativas do produto final [16,18]. A disponibilidade dessas

substncias bioativas nas bebidas tambm depende da solubilidade dos compostos

envolvidos e de como o mate preparado (tempo de extrao e temperatura) e
ingerido [19].
Os antioxidantes encontrados no extrato aquoso de Ilex paraguariensis tiveram
seu efeito comprovado e considerado extremamente potente in vitro. De qualquer
forma, pouco se sabe a respeito da biodisponibilidade dessas substncias [20].
Os radicais livres so definidos como qualquer espcie qumica capaz de
existncia independente que contenha um ou mais eltrons desemparelhados e por
isso podem ser extremamente reativos e capazes de atacar inmeras biomolculas
[21]. Os danos causados pelos radicais livres est relacionado com morte e
degenerao celular e com inmeras doenas, entre elas: diabetes, aterosclerose,
insuficincia renal, entre outras. O estresse oxidativo ocorre quando a velocidade de
gerao das Espcies Reativas Oxignio (ERO) so superiores capacidade de
eliminao das mesmas.
Aragno e Mathers [22,23] demonstraram que o aumento das ERO e,
conseqentemente, dos danos, induzidos pela diabetes em vrios tecidos, esto
associados gerao de reaes defensivas, para neutralizar tais danos, com o
aumento da produo de molculas antioxidantes.
A diabetes melito (DM) se caracteriza por um grupo de distrbios metablicos
identificados por hiperglicemia resultante de defeitos na secreo de insulina, na ao
da insulina ou de ambos. A hiperglicemia crnica da diabetes est associada com
danos a longo prazo, disfunes e falncia de vrios rgos, especialmente olhos,
rins, nervos, corao e vasos sangneos. Sintomas de severa hiperglicemia incluem
poliria, polidipsia, perda de peso, algumas vezes polifagia e viso borrada. Disfuno

do crescimento e suscetibilidade a certas infeces tambm podem acompanhar a

hiperglicemia crnica. Hipertenso e anormalidades no metabolismo de lipoprotenas
tambm so geralmente associados com a diabetes.
Uma das principais bases moleculares das complicaes diabticas, devido
hiperglicemia, a glicao de protenas. Nesse processo, hexoses reagem de forma
no-enzimtica com os grupos amino das protenas, resultando em produtos iniciais
da glicao, como, por exemplo, a hemoglobina glicada [20]. Numa segunda fase da
rota de glicao, uma srie complexa de rearranjos e reaes oxidativas, levam esse
produto inicial a reagir novamente com protenas e a formar os produtos finais da
glicosilao no-enzimtica, conhecidos como AGEs (advanced glycated endproducts). Os AGEs so a forma final e estvel dessa reao e so cumulativos no
organismo, ou seja, suas concentraes no retornam ao normal mesmo quando a
hiperglicemia corrigida [20,24]. Podem ser encontrados no plasma, clulas e tecidos
e se acumulam na parede arterial, no mesngio e glomrulo renais e em outras
membranas. Esse acmulo de protenas glicadas pode fornecer stios catalisadores
ativos estveis da formao de radicais livres. A aminoguanidina um inibidor da
glicosilao e atenua o desenvolvimento de uma gama de complicaes vasculares
nos diabticos. No entanto, alguns problemas de toxicidade foram encontrados nos
ensaios clnicos com esta droga. Por isso, se realizam estudos com compostos
botnicos capazes de inibir o processo e servir como prottipo de futuros
medicamentos. Sabe-se que extratos de ervas como Ilex paraguariensis, que
possuem alta concentrao de antioxidantes, tm essa capacidade [24].
Diabetes experimental: O modelo experimental de DM contribui para o
entendimento das causas, conseqncias e tratamento desta doena. Para o seu
desenvolvimento

so

utilizadas

toxinas

qumicas

(aloxano,

estreptozotocina,

queladores de zinco), animais transgnicos, entre outros. A estreptozotocina (STZ)

empregada na induo da diabetes experimental devido a sua seletividade de ao
sobre as clulas das ilhotas pancreticas. A estreptozotocina uma nitrosuria
derivada de um fungo Streptomyces griseus que produz severa insuficincia de
insulina em ratos, simulando ento a diabetes tipo I [25]. Nosso grupo de pesquisa
vem trabalhando com este modelo de diabetes do tipo I h alguns anos, buscando
esclarecer diversos aspectos da doena [26]. Assim o objetivo deste trabalho foi
avaliar o efeito sobre alguns indicadores de estresse oxidativo do extrato aquoso de
Ilex paraguariensis em ratos controle e diabticos.

2. MATERIAL E MTODOS

2.1 Animais
Foram utilizados ratos Wistar machos de 3 meses de idade. Todos os animais
foram fornecidos pelo Biotrio do Instituto de Cincias Bsicas da Sade (ICBS)
UFRGS e mantidos durante o perodo experimental pela Unidade de Experimentao
Animal (UEA) do Hospital de Clnicas de Porto Alegre, nas condies habituais do
biotrio com ciclo claro/escuro de 12 horas, temperatura de 22 C, alimentados com
rao e gua ou ch ad libitum.
A morte dos animais foi realizada por decapitao, e foram rapidamente
retirados os rins, separados em crtex e medula, fgado e msculo e congelados
menos 70C para posterior dosagens dos parmetros de estresse oxidativo, no
Centro de Estudos de Estresse Oxidativo, no Departamento de Bioqumica da
UFRGS. As carcaas dos animais foram congeladas e posteriormente descartadas de
acordo com a rotina da UEA HCPA.

2.2 Protocolo Experimental

O

diabetes

foi

induzido

por

uma

nica

injeo

intraperitoneal

de

estreptozotocina (STZ) (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO, EUA) na dose de
70 mg/kg [27]. A STZ foi diluda em tampo citrato de sdio (0,01M, pH 4,5) e injetada
at 10 minutos aps a diluio dessa substncia. Os animais controle receberam o
mesmo volume de tampo citrato de sdio. Trs dias aps a injeo de STZ ou
tampo foi feita a primeira dosagem glicmica, com a retirada de sangue da veia
caudal e a glicemia foi obtida com o auxlio de um glicosmetro (ACCU-CHEK). Foram
considerados diabticos aqueles animais que apresentaram concentrao de glicose
plasmtica superior a 250mg/dL [28].
Aps uma semana de diabetes, foi iniciado o tratamento com o ch. Foram
utilizados 30 animais, que foram pesados e divididos em quatro grupos experimentais,
e mantidos durante 5 semanas sob tratamento: 6 animais CTR-gua (animais
controle tratados com gua), 6 animais CTR-Ch (animais controle tratados com ch
de erva-mate), 9 animais DBT-gua (animais diabticos tratados com gua) e 9
animais DBT-Ch (animais diabticos tratados com ch de erva-mate). Foram
mantidos 3 animais por caixa.
Como os ratos diabticos ingerem uma quantidade de gua cerca de trs
vezes maior do que os ratos controle, o ch foi preparado com esta correo. Para os
ratos controle utilizamos 70g de erva-mate, misturada a um litro de gua a 80C, por
15 min, posteriormente coado e deixado esfriar at atingir a temperatura ambiente
[29,30]. Aps o perodo de 5 semanas de tratamento os animais foram mortos para
posterior anlises. Os rgos: rins (separados em crtex e medula), fgado e msculo,
foram retirados, pesados e congelados -70C para posterior anlise dos parmetros
de estresse oxidativo.

2.3 Parmetros de dano oxidativo

Como ndice de peroxidao lipdica, utilizou-se a formao de espcie reativas
ao cido tiobarbitrico (TBARS) durante uma reao de aquecimento do cido, que
amplamente adotado como um mtodo para avaliao do estado oxidativo dos
lipdios, como descrito anteriormente [31]. As amostras foram homogenizadas com
0,6 mL de 10% de cido tricloroactico (TCA) e 0,5 mL de cido tiobarbitrico 0,67%
(TBA, 4,6-Dihydroxypyrimidine-2-tiol), aquecidas a 90C, por 25 min. A quantificao
dos nveis de TBARS foi realizada atravs da leitura da absorbncia das amostras em
espectrofotmetro a 532 nm. Os resultados foram expressos em nmol de
malondeialdedo (MDA)/ mg de protena.

O dano oxidativo a protenas foi determinado atravs da quantificao de

grupos carbonil, baseados na reao com 2,4-dinitrofenilhidrazina (DNPH), como
previamente descrito [32]. Resumidamente, as protenas foram precipitadas pela
adio de 20% de TCA, redissolvido em DNPH e absorbncia lida em
espectrofotmetro a 370nm. Os resultados foram expressos como mol de carbonil/
mg de protena.

2.4 Defesas antioxidantes no-enzimticas

Para anlise do potencial antioxidante no enzimtico das estruturas foi
estimado o potencial antioxidante total (TRAP) e reatividade antioxidante total (TAR)
[33]. A reao iniciada pela adio de luminol (5-Amino-2,3-dihidro-1 ,4phthalazinedione, 4 mm) - para acompanhamento da produo de radical na presena

do composto AAPH (2,2 '-azobis-2-methylpropionamidine- dicloridrate de 10 mm) uma fonte de radicais livres, que produz radical perxido a taxa constante - em
tampo glicina (0,1 M) pH 8,6, em temperatura ambiente, resultando em uma emisso
de luminescncia estvel. A quimioluminescncia foi lida em um contador de
cintilao lquida (Wallace 1409), sendo as leituras realizadas a cada minuto. As
amostras adicionadas diminuem a luminescncia proporcionalmente ao seu potencial
antioxidante. As emisses de luminescncia foram monitoradas por 40 minutos aps
a adio da amostra e a rea sob a curva foi utilizada para fins de clculo (UAC). No
TAR, os resultados do protocolo foram expressos como porcentagem da produo de
radicais livres em relao ao controle (sistema de contagens considerado como 100%
da produo de radicais).

2.5 Anlise estatstica

As concentraes mdias de TBARS, carbonil e dos nveis de defesas
antioxidante no-enzimticas em ratos diabticos tratados ou no com ervamate foram comparados atravs de anlise de varincia de uma via (ANOVA),
sendo as diferenas discriminadas atravs de teste de comparaes mltiplas
de Tukey (p < 0,05).

3. RESULTADOS
3.1 Composio do extrato aquoso erva mate
Foram determinados os teores de polifenis (Tabela 1), metilxantinas (Tabela
2) e saponinas de trs preparaes do extrato aquoso semelhantes s que foram
oferecidas aos animais durante todo o tratamento.
A Tabela 1 mostra as quantidades dos polifenis que, pela tcnica
cromatogrfica aplicada, puderam ser identificados. Porm, outras 3 quantidades de
compostos que no tiveram sua natureza qumica totalmente elucidada foram
encontrados e h fortes indcios de que sejam derivados do cido cafeiolqunico,
assim como o cido neoclorognico, clorognico e criptoclorognico. Portanto, esses
compostos so os constituintes principais presentes no extrato aquoso de I.
paraguariensis.
Quanto s metilxantinas apresentadas na Tabela 2, pode-se observar que a
concentrao de cafena no extrato aproximadamente 5 vezes superior a
concentrao de teobromina. Isso indica que a cafena a metilxantina encontrada
em maiores quantidades no extrato aquoso que foi oferecido aos animais durante o
perodo experimental.
Ainda foram realizados dois mtodos de anlises exploratrias com o objetivo
de quantificar saponinas nas amostras, porm nenhum dos mtodos foi capaz de
detectar a quantidade existente de saponinas no extrato. Provavelmente, o mtodo de
preparo do extrato de erva-mate utilizado no estudo no um mtodo adequado para
extrao de saponinas.

3.2 Induo do Diabetes

Dos 20 animais que receberam a injeo de estreptozotocina, 18 apresentaram
glicemia acima de 250 mg/dL, trs dias aps a induo do diabetes, e foram divididos
nos dois grupos experimentais j citados anteriormente. Os 2 animais que no
atenderam ao critrio de seleo foram descartados do experimento. Alm destes,
outros 12 animais no diabticos (controle) foram includos no experimento. No
houve perdas adicionais durante o perodo experimental.

3.3 Parmetros de Dano oxidativo

A figura 1 nos mostra que crtex renal teve um aumento significativo do dano
lipdico no grupo Dbt gua, comparados com os outros grupos, e uma reduo no
grupo Dbt ch. Os valores de TBARS foram maiores no crtex renal comparado com
os outros tecidos analisados. A medula renal e o msculo no apresentaram
alteraes significativas nos nveis de TBARS. O fgado tambm teve um aumento
significativo da lipoperoxidao no grupo Dbt gua, mas o ch no foi capaz de
reverter este efeito no grupo Dbt ch. A figura 2 apresenta os resultados dos danos
causados s protenas. Novamente o crtex renal do grupo Dbt gua teve um
aumento da carbonilao das protenas e o grupo dos diabticos tratados com ch,
apresentaram uma reduo dos nveis de carbonilao, quando comparados com o
diabtico tratado com gua. Na medula renal o grupo dos diabticos teve uma
diminuio de danos protena, sendo que no grupo Dbt ch, esta diminuio foi
significativa. No fgado, o grupo Dbt ch teve nvel de carbonilao significativamente

aumentado em relao ao grupo Ctr gua. O msculo novamente no teve alteraes

significativas nos nveis de carbonilao.

3.4 Perfil de defesas antioxidantes no-enzimticas

O crtex renal apresentou um aumento das defesas antioxidantes, conforme
mostrado na Figura 3, nos diabticos tratados com ch e gua. Indicando ento que
quanto menor o valor do TRAP obtido, maior so os nveis das defesas antioxidantes
no-enzimticas encontrados nas amostras.
J na medula renal, no foram observadas alteraes significativas, como
observado na Figura 4, nem no grupo dos diabticos, nem nos controles.
Nas figuras 5 e 6 podemos constatar que o fgado e o msculo,
respectivamente, no apresentaram uma alterao significativa nas defesas
antioxidantes no-enzimticas em nenhum dos grupos.

4. DISCUSSO
Ilex paraguariensis uma planta que contm inmeras vitaminas e minerais
necessrios para o sustento da vida, como as vitaminas do complexo B (B1 tiamina,
B2 riboflavina, e B3 niacina), vitaminas A, C e E; os minerais potssio, magnsio,
clcio, mangans, ferro, selnio, fsforo e zinco, dentre outros. Alm dos polifenis, a
erva-mate ainda contm saponinas e metilxantinas, dentre elas a cafena, teofilina e
teobromina [16,34]. Estudos sugerem que os polifenis apresentam caractersticas

anti-carcinognicas, anti-aterognicas, anti-trombticas, vasodilatadora e analgsica

devido ao seu alto poder antioxidante [35].
O extrato de Ilex paraguariensis tem sido apontado como um potente inibidor
de espcies reativas de oxignio, sendo considerado benfico para o fgado e o
corao [36], pois pode representar uma grande fonte adicional de polifenis naturais.
O excesso de radicais livres pode estar envolvido com o diabetes e a aterosclerose
[20] e alguns estudos acreditam que o cido clorognico seja um potente antidiabtico presente na erva-mate, mostrando que esse polifenol capaz de diminuir a
produo de glicose pelo fgado, atravs de uma inibio dose-dependente da
gliconeognese e da glicogenlise [37]. Herling et al. [38] encontrou resultados
semelhantes, quando obteve uma menor produo de glicose heptica, diminuio da
glicemia, acompanhados por um aumento do glicognio heptico e renal atravs da
inibio da enzima gicose-6-fosfatase.

Esses polifenis tambm foram avaliados

sobre parmetros relacionados ao diabetes no que diz respeito reduo do pico de

glicemia no teste de tolerncia oral a glicose, provavelmente por atenuar a absoro
intestinal de glicose [39]. Algumas pesquisas sugerem que alguns compostos
fenlicos presentes na erva-mate so capazes de interagir com SGLT1 (sodium
glucose transporter), principal cotransportador de glicose no intestino delgado,
inibindo o transporte de glicose [17].
A diabetes causa hiperglicemia crnica, a qual um fator desencadeador de
aumento na produo de radicais livres, que so responsveis pelo agravamento da
doena [40]. Lunceford e Gugliucci [8] ainda relataram que o extrato de Ilex
paraguariensis rico em polifenis capazes de inibir a glicosilao no-enzimtica
das protenas e a formao dos produtos finais dessa glicao, os AGEs (advanced
glycated end-products) que tambm so produzidas em excesso na diabetes.

Nosso estudo mostrou que os rgos dos ratos diabticos respondem de forma
bem diferente ao tratamento com erva-mate, quando relacionados ao estresse
oxidativo e defesas antioxidantes no-enzimticas. O crtex renal apresentou maior
dano em todos os grupos diabticos, tanto na carbonilao de protenas, quanto na
lipoperoxidao, mas o tratamento com chimarro nos diabticos foi capaz de reverter
esse dano, quando comparados com animais diabticos tratados com gua. Esses
dados nos indicam que provavelmente houve a ao antioxidante esperada pelo
tratamento com chimarro. Na medula, porm, a lipoperoxidao no teve alteraes
significativas. J os nveis de carbonilao foram diminudos significativamente nos
ratos diabticos, evidenciando uma diminuio ainda maior nos tratados com o ch,
mostrando aqui o potencial protetor que a medula pode estar apresentando, em
funo dos danos provocados pela doena e que foi intensificado com pela erva mate.
O rim se apresenta como um caso bem particular. Esse rgo possui duas
regies bem distintas, crtex e medula, e cada parte realiza funes especficas. A
medula, formada pelas alas de Henle e ductos coletores, participa de maneira
importante na concentrao de urina, j o crtex, formado pelos glomrulos,
responsvel pelo primeiro passo da filtrao e ainda tem um importante papel na
gliconeognese no jejum prolongado. E foi justamente por isso que realizamos as
avaliaes com estas estruturas separadamente. Entretanto a diabetes causa
diversas alteraes nos rins, alm da hiperglicemia crnica, a glicosria perda do
excesso

de

glicose

pela

urina,

nefropatia

diabtica

caracterizada

pela

glomruloesclerose e a produo de corpos cetnicos que igualmente so eliminados

pelo rim. De alguma forma provavelmente essas alteraes poderiam interferir nas
diferentes caractersticas oxidativas encontradas no crtex e medula, por isto se

obteve diferentes resultados nos danos causados protenas (carbonilas ) e lipdios

(TBARS) nos ratos diabticos.
O fgado de animais diabticos apresentou um aumento no contedo de lipdios
oxidados, provavelmente devido ao excesso de protenas glicadas e s AGEs
geradas pela doena, e o tratamento com chimarro no foi capaz de reverter esse
dano. Quando avaliados os parmetros de carbonilao, observou-se um aumento no
dano a protenas em diabticos e um dano ainda maior quando tratados com
chimarro, indicando aqui uma aparente inverso do que se esperava, quanto ao
papel protetor do mate. Podemos ento hipotetizar que o fgado, sendo bastante
deteriorado durante a diabetes, produz uma quantidade muito grande de EROs e de
enzimas antioxidantes para tentar combat-los, mas nesses casos, como o dano
provavelmente excessivo, os compostos presentes no chimarro acabam tendo um
potencial pr-oxidante e piorando os efeitos dos radicais no rgo.
O msculo no apresentou diferena estatstica para danos protena, nas
carbonilas, nem lipdios, no TBARS. A maior parte da eliminao de glicose
mediado pela insulina ocorre no msculo esqueltico e o aumento da quantidade de
lipdios intramocelular tem sido associada resistncia insulina e ligadas
diminuio da atividade de fosforilao oxidativa mitocondrial. Estudos [41] mostram
reduo da atividade das enzimas oxidativas no msculo de diabetes tipo 2,
independentes do tipo de fibra muscular, com mitocndrias danificadas. Os msculos
esquelticos so muito afetados pela diabetes, j que acelera muito o processo
oxidativo, na tentativa de gerar glicose, ocasionando um aumento consideravel de
espcies reativas. Acreditamos que um dos motivos para essas diferenas
encontradas entre os diferentes tecidos, seja devido ao tempo de tratamento, a dose
de erva mate administrada e ao nmero de animais.

Quando analisamos o potencial das defesas antioxidantes, somente o crtex

renal apresentou um aumento significativo nos ratos diabticos, tratados com ch e
gua, indicando que no , portanto, o ch o responsvel pelo aumento dessas
enzimas antioxidantes. Provavelmente seja uma resposta antioxidante do organismo
aos danos causados implicitamente pela diabetes. Corroborando com nossos dados,
estudos anteriores de nosso laboratrio [26], demonstraram que a diabetes j
suficiente para aumentar o contedo de glutationa, um potente antioxidante noenzimatico e que, portanto, o chimarro no capaz de aumentar esse potencial
extrinsecamente.
No fgado no foi encontrado um aumento nas defesas antioxidantes noenzimticas, explicado, talvez, porque se observou um considervel aumento nos
danos protena e lipdios.
O msculo no apresentou nenhuma alterao no contedo de defesas
antioxidantes no-enzimticas totais. Como tambm no foi encontrada nenhuma
alterao nos parmetros analisados, possvel sugerir que a falta de diferenas
tenha ocorrido devido ao tempo de tratamento, ou s doses administradas, ou ainda
ao tamanho da unidade amostral. Como o msculo sofre um processo de protelise
em animais diabticos, este poderia ser um dos motivos de no ser observado
alteraes significativas no estresse oxidativo.
Em funo dos resultados obtidos nesse trabalho importante que seja feita a
avaliao de outros parmetros de avaliao de estresse oxidativo para que se possa
ter uma idia mais precisa do efeito do tratamento com erva mate em animais
diabticos.

5. CONCLUSO

Conclumos, com o presente estudo, que realmente os tecidos dos ratos

diabticos se comportam de diferentes maneiras, quando tratados com o ch de Ilex
paraguariensis, no que se refere aos parmetros oxidativos estudados. O ch que
parece ser benfico em alguns momentos, revertendo alguns casos de danos
oxidativos somente em alguns tecidos, e produzindo danos considerveis em outros
momentos. Diante de tais resultados acreditamos que o uso do chimarro deve ser
feito com parcimnia particularmente em diabticos. Entretanto estudos posteriores
com outros indicadores de estresse oxidativo e/ou sistemas protetores devem ser
realizados para elucidar mais alguns aspectos do perfil oxidativo dos tecidos
estudados em funo de que em um primeiro momento parecem contraditrios.

6. REFERNCIAS

[1] GNOATTO, S.C.B.; BASSANI, V.L. Influncia do mtodo de extrao no teores de

metilxantinas em erva-mate (Ilex paraguariensis a. St.-Hil., aquifoliaceae).
Qumica Nova, v. 30, n. 2, p. 304-307, 2007
[2] SCHUBERT, A et al. Variao anual de metilxantinas totais em amostras de Ilex
paraguariensis A. ST. HIL (erva-mate) em Iju e Santa Maria, estado do Rio
Grande do Sul. Qumica Nova, v.29, n.6, p.1233-1236, 2006
[3] MOSIMANN, A.L.P.; WILHELM-FILHO, D.; SILVA, E.L. Aqueous extract of Ilex
paraguariensis attenuates the progression of atherosclerosis in cholesterol-fed
rabbits. BioFactors, v.26, p.59-70, 2006
[4] MOSIMANN, A.L.P.; WILHELM-FILHO, D.; SILVA, E.L. Aqueous extract of Ilex
paraguariensis attenuates the progression of atherosclerosis in cholesterol-fed
rabbits. BioFactors, v.26, p.59-70, 2006
[5] STAGG, G.V.; MILLIN, D.J. The nutritional and therapeutic value of tea a review. J
Sci Food Agri, v.26, p.1439-1459, 1975.

[6] HEINRICHS, R.; MALAVOLTA, E. Composio mineral do produto comercial da

erva-mate. Cincia Rural de Santa Maria, v.31, n.5, p.781-785, 2001
[7] SCHINELLA, G.R.; TROIANI, G.; DAVILA, V.; de BUSCHIAZZO, P.M.; TOURNIER,
H.A. Antioxidant effects of an aqueous extract of Ilex paraguariensis. Biochem
Bioph Res Co, v.269, p. 357 60, 2000.
[8] LUNCEFORD, N.; GUGLIUCCI, A. Ilex paraguariensis extracts inhibit AGE formation
more efficiently than green tea. Fitoterapia, v.76, p.41927, 2005
[9] FILIP, R. et al. Phenolic compound in Seven American Ilex species. Fitoterapia, v.
72, p. 774-778, 2001
[10] HECK, C.I.; DE MEJIA, E.G. Yerba mate tea (Ilex paraguariensis): A comprehensive
review on chemistry, health implications, and technological considerations. J
Food Sci, v.72, n.9, p.138-151, 2007
[11] GEORGE, A.J. Central nervous system stimulants. Best Pract Res Cl En, v.14, n.1,
p.79-88, 2000.
[12] KALOW, W.; TANG, B. The use of caffeine for enzymatic assays: A critical
appraisal. Clin Pharmacol Ther, v.53, n.3, p.503-514, 1993
[13] GRAHAM, T.E.; RUSH, J.W.; VAN SOEREN, M.H. Caffeine and exercise:
metabolism and performance. Can J Appl Physiol, v.19, n.2, p.111-138, 1994.
[14] YAMADA, Y.; NAKAZATO, Y.; OHGA, A. The mode of action of caffeine on
catecholamine release from perfused adrenal glands of cat. Br J Pharmacol,
v.98, n.2, p.351- 356, 1989.
[15] SPRIET, L.S. Caffeine and performance. Int J Sports Nutr, v.5, n.1(suppl), p.S8499, 1995.
[16] BASTOS, D. H. M. et al. Yerba mat: Pharmacological properties, research and
biotechnology. Medicinal and Aromatic Plant Science and Biotechnology, p.
v. 1, n.1, 37 - 46, 2007
[17] OLIVEIRA, D.M.; FREITAS, H.S.; SOUZA, M.F.F.; ARARI, D.P.; RIBEIRO, M.L.;
CARVALHO, P.O.; BASTOS, D.H.M. Yerba Mat (Ilex paraguariensis) Aqueous
Extract Decreases Intestinal SGLT1 Gene Expression but Does Not Affect Other
Biochemical Parameters in Alloxan-Diabetic Wistar Rats. J Agric Food Chem, v.
56 n. 22, p. 1052710532, 2008.
[18] RESENDE, M. D. V. et al. Programa de melhoramento da erva-mate
coordenado pela EMBRAPA: Resultados da avaliao gentica de populaes,
prognies, indivduos e clones. Colombo-PR: Embrapa Florestas (Circular
Tcnica), v. 43, p. 1 - 67, 2000.
[19] GIULIAN, Raquel. Estudo da composio elementar da erva-mate (Ilex
paraguariensis). Dissertao (mestrado). Universidade Federal do Rio Grande
do Sul. Instituto de Fsica. 2005.

[20] GUGLIUCCI, Alejandro. Antioxidant effects of Ilex Paraguariensis: Induction of

decreased oxidability of human LDL in vivo. Biochemical and Biophysical
Research Communications, n. 224, p. 338 - 344, 1996
[21] HALLIWEL, B.; GUTTERIDGE, G. C. M. Free radicals in biology and medicine. 3
ed. Oxford: Oxford University Press, 1999.
[22] ARAGANO, M. et al. DHEA administration prevents the oxidative damage induced
by acute hyperglycemia in rats. J Endocrinal, v. 155, n.2, p. 233-240, 1997.
[23] MATHERS, J. et al. Antioxidant and cytoprotective responses to redox stress.
Biochem Soc Symp, n. 71, p. 157 176, 2004
[24] LUNCEFORD, N.; GUGLIUCCI, A. Ilex paraguariensis extracts inhibit AGE
formation more efficiently than green tea. Fitoterapia, v. 76, n. 5, p. 419 - 427,
2005
[25] PICKUP, J.; WILLIANS, G. Textbook of Diabetes. 2 ed. Blackwell Science, 1998.
164p.

[26] JAHN, M.P.; JACOB, M.H.; JANNER, D.R.; GOMES L.F.; PERSCH, K.; RIBEIRO,
M.F.M.; KUCHARSKI, L.C. Efeito da DHEA sobre a ingesto de alimento e sobre
o metabolismo muscular na diabetes. XXVIII Semana Cientfica do HCPA, 2008
[27] TAKEUCHI, K. et al. Introduction of gastric lesions and hypoglicemic response by
food deprivation in streptozotocin-diabetic rats. Digestive Diseases ans
Sciences, n. 39 v. 3, 1994.
[28] PACKER, L. et al. Antioxidants in diabetes manegement. Ed. Marcel Dekker,
New York, 2000.
[29] HEINRICHS, R.; MALAVOLTA, E. Composio mineral do produto comercial da
erva-mate. Cincia Rural de Santa Maria, v.31, n.5, p.781-785, 2001.
[30] JAHN, Matheus Parmegiani. Efeito osmtico da colina e da glicina betana no
rim de ratos diabticos. Dissertao (mestrado). Universidade Federal do Rio
Grande do Sul. Programa de Ps-Graduao em Fisiologia. Porto Alegre, 2004
[31]

H.H. Draper and M. Hadley, Malondialdehyde determination as index of lipid

peroxidation, Methods Enzymol 186 (1990), pp. 421431

[32] R.L. Levine, D. Garland, C.N. Oliver, A. Amici, I. Climent and A.G. Lenz et al.,
Determination of carbonyl content in oxidatively modified proteins, Methods
Enzymol 186 (1990), pp. 464478
[33] E. Lissi, M. Salim-Hanna, C. Pascual and M.D. del Castillo, Evaluation of total
antioxidant potential (TRAP) and total antioxidant reactivity from luminolenhanced chemiluminescence measurements, Free Radic Biol Med 18 (1995),
pp. 153158

[34] HECK, C. I.; DE MEJIA, E. G. Yerba mate tea (Ilex paraguariensis): A

comprehensive review on chemistry, health implications, and technological
considerations. Journal of Food Science, v. 72, n. 9, p. 138 - 151, 2007.
[35] OLIVEIRA, Marco Aurelio. Extrao de polifenis da semente de cacau
(Theobroma Cacao). 72 f. Dissertao (mestrado) - Universidade Federal de
Santa Catarina. Programa de Ps-Graduao em Engenharia Qumica.
Florianpolis, 2005
[36] SCHINELLA, G.; FANTINELLI, J. C.; MOSCA, S. M. Cardioprotective effects of Ilex
paraguariensis extract: evidence for a nitric oxide-dependent mechanism.
Clinical Nutrition., v. 24, n. 3, p. 360-366, 2005.
[37] HEMMERLE, H. et al. Chlorogenic acid and synthetic chlorogenic acid derivatives:
novel inhibitors of hepatic glucose-6-phosphatase translocase. Journal of
Medicinal Chemistry, v. 40, n. 2, p. 137 - 145, 1997
[38] HERLING, A. W. et al. Alterations of carbohydrate and lipid intermediary metabolism
during inhibition of glucose-6-phosphatase in rats. European Journal of
Pharmacology, v. 386, n. 1, p. 75 - 82, 1999.
[39] BASSOLI, B. K. et al. Chlorogenic acid reduces the plasma glucose peak in

the oral glucose tolerance test: effects on hepatic glucose release and
glycaemia. Cell Biochemistry and Function, v. 23, n. 6, p. 320 - 328,
2008.
[40] BAYNES, J. W. Role of oxidative stress in development of complications in
diabetes. Diabetes, v.40, n.4, p.405-412, 1991.
[41] RABOL, R. et al. Mitochondrial oxidative function and type 2 diabetes.
Appl Physiol Nutr Metab. V. 31, P. 675-83, 2006.

7. TABELAS
Resultado da analise quantitativa de polifenis em extrato aquoso de Ilex
paraguariensis.

Resultado da analise quantitativa de metilxantinas em extrato aquoso de Ilex

paraguariensis.

8. LEGENDAS DAS FIGURAS

Figura 1.
Avaliao dos nveis de TBARS no rim e crtex renal, fgado e msculo de
animais controle e diabticos tratados com extrato aquoso de Ilex
paraguariensis. Dados esto expressos como mdia
desvio padro da
mdia. *Diferentes do controle. Diferenas foram determinadas por ANOVA de
uma via, seguido de ps-teste de Tukey, P < 0,05. (n=5 para cada grupo).

Figura 2.
Avaliao dos nveis de carbolinas no rim e crtex renal, fgado e msculo de
animais controle e diabticos tratados com extrato aquoso de Ilex
paraguariensis. Dados esto expressos como mdia
desvio padro da
mdia. *Diferentes do controle. Diferenas foram determinadas por ANOVA de
uma via, seguido de ps-teste de Tukey, P < 0,05. (n=5 para cada grupo)

Figura 3.
Potencial no-enzimtico de crtex renal de animais controle e diabticos
tratados com extrato aquoso de Ilex paraguariensis.. (A) TRAP e (B)TAR.
Dados foram expressos como mdia desvio padro da mdia. *Diferentes do
controle. Diferenas foram determinadas por ANOVA de uma via, seguido de
ps-teste de Tukey, P < 0,05. (n=5 para cada grupo)

Figura 4.
Potencial no-enzimtico de medula renal de animais controle e diabticos
tratados com extrato aquoso de Ilex paraguariensis.. (A) TRAP e (B)TAR.
Dados foram expressos como mdia desvio padro da mdia. *Diferentes do
controle. Diferenas foram determinadas por ANOVA de uma via, seguido de
ps-teste de Tukey, P < 0,05. (n=5 para cada grupo)

Figura 5.
Potencial no-enzimtico de fgado de animais controle e diabticos tratados
com extrato aquoso de Ilex paraguariensis. (A) TRAP e (B)TAR. Dados foram
expressos como mdia
desvio padro da mdia. *Diferentes do controle.
Diferenas foram determinadas por ANOVA de uma via, seguido de ps-teste
de Tukey P < 0,05. (n=5 para cada grupo)

Figura 6.
Potencial no-enzimtico de msculo de animais controle e diabticos tratados
com extrato aquoso de Ilex paraguariensis. (A) TRAP e (B)TAR. Dados foram
expressos como mdia
desvio padro da mdia. *Diferentes do controle.
Diferenas foram determinadas por ANOVA de uma via, seguido de ps-teste
de Tukey, P < 0,05. (n=5 para cada grupo).

9. FIGURAS

FIGURA 1

FIGURA 2

FIGURA 3

A)

B)

FIGURA 4

A)

B)

FIGURA 5

A)

B)

FIGURA 6

A)

B)