Separacin de una mezcla de dos

aminocidos por cromatografa

por intercambio inico

Por

Loreto Xilo Miguel Angel

Grupo 5QM1

Seccin 4

FUNDAMENTO

En la cromatografa de intercambio inico se usa una resina de

intercambio inico como fase estacionaria.
La cromatografa de intercambio inico siempre ha empleado pequeas
cuentas esfricas y porosas que se forman en la polimerizacin del
estireno y del divinilbenceno en emulsin. La presencia de
divinilbenceno (por lo regular _8%) origina un entrelazamiento o
polimerizacin entrecruzada que confiere estabilidad mecnica a las
cuentas. Con el objetivo de activar el polmero frente a los iones, a la
estructura se le unen qumicamente grupos funcionales cidos o bsicos.
Los grupos mas comunes son el cido sinfnico y las aminas
cuaternarias.
Los sitios activos ms comunes en las resinas de intercambio catinico
son los grupos de cido eufnico SO3 , -H+ un cido fuerte, y los
grupos del cido carboxlico COO H+, un cido dbil. Los
intercambiadores anionicos contienen grupos amino terciarios

fuertemente bsicos -N(CH3)3 OH- o grupos amino primarios

dbilmente bsicos -NH3 OH-.

OBJETIVOS

1. Emplear la tcnica de intercambio inico para la separacin de dos

aminocidos.

2. Comprobar la separacin mediante una reaccin colorida y el perfil

de elucin.
Tabla 1.- Separacin de prolina e histidina
Volume A 400
A570
Volume A 400
n de
n de
elucin
elucin
3
-0.05
63
6
-0.016
66
9
-0.034
69
12
-0.003
72
15
0.126
75
18
0.442
78
21
0.415
81
RESULTADOS
RESULTADOS
24
0.315
84
27
0.475
87
30
0.3
90
33
0.307
93
36
0.289
96
39
0.163
99
42
0.344
0.228
102
45
0.095
105
48
0.182
108
51
0.181
111
54
0.339
114
57
0.268
117
60
0.32
120

1. Separacin de aminocidos.

A570

0.485
0.369
0.346
0.425
0.521
0.267
0.139
0.097
0.191
0.077
0.025
0.03
0.008
0.01
0.013
0.029
0.013
0.031
0.019
0.02

Grafica 1.-se observa los perfiles de elucin de la mezcla que se separ. Como
podemos observar en color rojo y en los primeros 45 ml de elucin
correspondena la prolina , y en los 45 ml posteriores se observa de color azul a
la histidina donde se observa la separacin de los dos compuestos de una
mezcla y su absorbancia a diferentes longitudes de onda.
1. cul de los componentes eluy primero?

La prolina fue la primera en salir por que utilizamos un intercambiador

catinico que es ms afn a las cargas positivas, y la prolina presenta
cargas ms negativas por lo tanto las cargas negativas del
intercambiador y las de la prolina se repelen ocasionando su fluencia
ms rpida que la histidina por el cual esta se queda retenida en la
matriz del intercambiador inico ya que presenta un grupo r que le
confiere aun ms cargas positivas comparado con la prolina .
2. cul es la importancia de regular la velocidad de elucin que
pasa a altas o bajas velocidades?

Al tener una alta velocidad de la elucin la separacin de la mezcla va a

ser menos efectivas ya que la muestra tendr menos tiempos de
interaccin con el intercambiador inico y podra no separarse por
completo nuestro problema por otro lado al tener una baja velocidad de
elucin tardara mucho en salir nuestra mezcla pero la separacin si se

llevara a cabo sin embargo observaramos un perfil de elucion con picos

no definidos.

DISCUSIN DE RESULTADOS

Como podemos observar en nuestro perfil de elucin se nota como la

separacin no se logr de manera adecuada, en la primera fase de la
separacin igual que en la segunda fase se observan varios picos. Este
problema pudo haberse producido por que al momento en el que se coloc la
muestra no se hizo de manera adecuada ya que se deposit con mucha fuerza
sobre la superficie de la resina esto sucedi por que la pipeta se encontraba
por residuos al parecer de algodn prosedente de la muestra o bien pudo haber
afectado la manera en que se realizaron los lavados ya que pudimos haber
diluido la muestra.
La velocidad de elucin fue constante y se descarta que la variacin de las
concentraciones de prolina e histidina en las diferentes fracciones haya sido
producto de un mal control en la velocidad de elucin.

Llegamos a la conclusin que lo primero que sali en el perfil de elucin fue la

prolina ya que como sabemos este aminocido presenta un pH ms bsico que
la histidina y es por ello que en la separacin la molcula con carga positiva fue
atrada por la matriz del intercambiador catinico y el que fue excluido o
retenido con menor fuerza fue la molcula que presentaba una carga ms
negativa. Posteriormente con el cambio de pH inducimos la salida del
aminocido que estaba siendo retenido por la fase estacionaria.

CONCLUSIONES
Se logr realizar una separacin de dos aminocidos a travs de la utilizacin
de un intercambiador de tipo catinico por la tcnica de cromatografa por
intercambio inico.
Se logr comprobar que la separacin de los dos aminocidos que contena la
mescla mediante la elaboracin de un perfil de elucin utilizando las diferentes
fracciones de eluatos que se obtuvieron durante la prctica y posteriormente

leyendo a 400nm y a 570 nm longitudes de onda donde se sabe que los

aminocidos empleados absorben este tipo de radiacin.
Podemos concluir que la tcnica de separacin por medio de la cromatografa
en columna con un intercambiador inico dan buenos resultados debido a que
estos mtodos presentan una alta selectividad por las molculas gracias a la
afinidad por cargas contrarias a la que presente la matriz y posteriormente por
la selectividad del tamao de las redes que se forme en la matriz.

BIBLIOGRAFIA
Douglas A. Skoog, F. James Holler, Stanley R. Crouch. (2008). Principios de
analisis instrumental. Mxico, D.F.: Cengage Learning.
Gary D. Christian. (2009). Quimica analitica sexta edicion. Mxico, D.F.: Mc
Graw