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Captulo V

Biotecnologia Microbiana

Biotecnologia microbiana

Histrico
Utilizao ancestral da actividade microbiana (vinho, cerveja, po, vinagre, lacticnios)
Meados sec. XIX: Pasteur
poca de grande desenvolvimento cientfico em que se usavam culturas puras
As enzimas eram os principais produtos microbianos comercializados na altura
Produo escala industrial de penicilina durante a 2 Guerra Mundial
Modernas tecnologias de DNA recombinante e de biologia molecular
Hoje em dia os MO so usados como modelos de seres vivos mais complexos

Biotecnologia microbiana

Porqu escolher os microrganismos ?


Simplicidade estrutural

Facilidade de cultura em fermentadores

maior razo rea/volume

Absoro rpida de nutrientes e


velocidade de metabolismo muito elevada

versatilidade

produo de grande variedade de metabolitos finais

processos mais
econmicos

Objectivos da utilizao industrial de microrganismos


produo da prpria biomassa
produo de metabolitos
produo de clulas microbianas para servirem de biocatalisadores

Os processos industriais que usam MO so genericamente designados de fermentaes


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Biotecnologia microbiana

Os microrganismos com maior importncia industrial dividem-se em 2 grandes grupos:


Fungos (incluindo leveduras como Saccharomyces cerevisiae e fungos filamentosos como
Aspergillus)
Eubactrias (incluindo Gram como a E. coli e Gram + filamentosas como os actinomicetas, ou
no filamentosas como Bacillus)

Aspergillus

Bacillus

Saccharomyces cerevisiae

Biotecnologia microbiana

Seleco do microrganismo

Matrias-primas e pr-tratamento

Melhoramento da estirpe

Preparao do meio de cultura

Aumento de escala

Controlo das condies (pH,


temperatura, arejamento, etc.)

Fermentador

Calor, gases

Recuperao e formulao do produto

Esquema geral, simplificado, de um processo de biotecnologia microbiana

Biotecnologia microbiana

Seleco de microrganismos

Informao em publicaes / bases de dados


Actividade ou produo de substncia de interesse comercial
Reproduo fcil e rpida em cultura
Geneticamente estvel

Mtodos de manuteno dos microrganismos:


-Crioconservao
-Liofilizao
-Secagem em solo
-Refrigerao

Melhoramento de estirpes

Manuteno do
Introduzir genes ou interromper genes
padro metablico
Razes econmicas
Abordagem emprica
Mutao, recombinao gentica, engenharia gentica
Estabilidade gentica

Biotecnologia microbiana

Condies de cultura e produo


gua
Nutrientes

Carbono, azoto, fsforo, enxofre, magnsio, etc.

O meio de cultura depende:

microrganismo (necessidade de determinados nutrientes e oxignio)


produto pretendido
escala do processo

Eficincia de um processo biotecnolgico microbiano:


rendimento (grau de converso SP)
produtividade (rapidez do processo de converso SP)

Biotecnologia microbiana

Definio da composio
do meio de cultura

Fase de Pr-cultura
- pr-tratamento de matrias primas
- esterilizao de fermentador, meio e ar fornecidos
- estudos de scaling-up

Condies de Fermentao
- pH, Temperatura
- velocidade de agitao, oxignio dissolvido, densidade celular, etc.)
- cultura em batch, semi-contnua (fed-batch), contnua
- controlo de metabolismo microbiano

Biotecnologia microbiana

Processos de Biotecnologia Microbiana

Biotecnologia Tradicional
Vinificao
Indstria Cervejeira
Indstria da Panificao
Indstria de Lacticnios

Obteno de produtos do metabolismo microbiano


Indstria Farmacutica
Qumica Fina
Protenas Heterlogas

Biotecnologia microbiana

Vinificao

! Leveduras de fermentao alcolica e malolctica


! Floculao (vinhos brancos)
! Produo de lactato
! Secreo de hidrolases
! Produo de steres
! Produo de glicerol
! Inibio de produo de ureia

S. cerevisiae
S. bayanus

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Biotecnologia microbiana

Indstria Cervejeira

! Leveduras de maior produo de sulfito


! Floculao
! Leveduras de actividade prolongada
! Reabsoro de diacetilo

S. cerevisiae
S. pastorianus
S. carlsbergensis

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Biotecnologia microbiana

Indstria de lacticnios

! Produo de cido lctico (L. bulgaricus, L. cremoris, S. lactis, S. thermophilus)


! Uso de fungos para queijos (do gnero penicillium)
! Probiticos (L. casei imunitass)

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Biotecnologia microbiana

Qumica Fina / Indstria Farmacutica


Produtos do metabolismo microbiano
Antibiticos
Vitaminas
Alcalides
Aminocidos
Nucletidos purnicos
Enzimas
Acidos orgnicos
Solventes
Combustveis

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Biotecnologia microbiana

Antibiticos
Produtos de origem microbiana com maior valor comercial
-lactmicos e tetraciclinas
Produzidos por fungos filamentosos (Penicillium, Aspergillus) e bactrias (streptomyces, bacillus)

Vitaminas
Factores essenciais da nutrio animal
Vitamina B12 e riboflavina
Algumas so produzidas directamente por fermentao de MOs

Aminocidos
cido glutmico e lisina
Essencialmente na Industria Alimentar (usados como tal ou para produzir outras substncias)

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Biotecnologia microbiana

Moduladores de sabor
!Glutamato monossdico, purina 5-ribonucleotdeo e substncias relacionadas
!Maltol e etil-maltol
!Furanonas e ciclopentenolonas
!Vanilina e etil-vanilina
!Cloreto de sdio

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Biotecnologia microbiana

Umami o 5 Sabor

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Biotecnologia microbiana

Estruturas qumicas do cido glutmico, glutamato monosdico (MSG) e substncias relacionadas

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Biotecnologia microbiana

Acumulao de cido glutmico por Corynebacterium glutamicum

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Biotecnologia microbiana

Exemplos de sais dissdicos de purinas-ribonuclesidas

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Biotecnologia microbiana

Substncias umami mais comuns

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Biotecnologia microbiana

Antibiticos
Produtos de origem microbiana com maior valor comercial
-lactmicos e tetraciclinas
Produzidos por fungos filamentosos (Penicillium, Aspergillus) e bactrias (streptomyces, bacillus)

Vitaminas
Factores essenciais da nutrio animal
Vitamina B12 e riboflavina
Algumas so produzidas directamente por fermentao de MOs

Aminocidos
cido glutmico e lisina
Essencialmente na Industria Alimentar (usados como tal ou para produzir outras substncias)

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Biotecnologia microbiana

CH3OH

Entra nas clulas


DNA e protenas

HCHO
mutaes

tumores

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Biotecnologia microbiana
Alcaloides
Produzidos por fungos (derivados do cido lisrgico)
Nucletidos purnicos
cido guanlico (5-GMP) e cido inosnico (5-IMP)
Enzimas
Essencialmente na Indstria Alimentar, de detergentes e txtil
Solventes orgnicos
Acetona e butanol produzidos por fermentao microbiana
cidos orgnicos
cido ctrico, actico, lctico,
Combustveis
Biofuel
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Biotecnologia microbiana

Alcaloides

codena
morfina
cocana
nicotina

cafena

mescalina

acido lisrgico

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Biotecnologia microbiana

Biofuel - etanol

Recurso a enzimas para melhorar o processo microbiano:


Melhoramento fermentativo
liquefaco
Sacarificao
Reduo da viscosidade

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Biotecnologia microbiana

Como produzir biodiesel?

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Biotecnologia microbiana

Protenas heterlogas

Insulina (E. coli)


Vacinas (E. coli, S. Cerevisiae)
Etc.

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Biotecnologia microbiana
Microrganismo

Produto / rea de Aplicao


Agentes teraputicos

Penicillium chrysogenum (F)


Cephalosporium acremonium (F)

Penicilinas
Cefalosporinas

Streptomyces (B)

Estreptomicina, canamicinas, neomicinas, tetraciclinas,

Escherichia coli (B)

Insulina, hormona do crescimento humano, somatostanina


Indstria Qumica e Alimentar

Saccharomyces cerevisiae (L) e Kluiveromyces marxianus (L)

Etanol

Aspergillus niger (F)


Clostridium acetobutylicum (B)

cido ctrico
Acetona e butanol
Aminocidos e nucletidos

Corynebacterium glutamicum (B)

L-lisina e cido glutmico

Corynebacterium glutamicum (B) e Bacillus subtilis (B)

5-IMP e 5-GMP
Enzimas

Bacillus (B)
Bacillus (B); Streptomyces (B)
Saccharomyces cerevisiae (L)

Proteases e amilases
Glucose-isomerase
Invertase

Cndida lipolytica/Yarrowia lipolytica (L)

Lipase
Vitaminas

Pseudomonas denitrificans (B) e Propionibacterium (B)

Vitamina B12

Ashbya gossypii (F)

Riboflavina

Exemplos de microrganismos utilizados em biotecnologia microbiana

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Biotecnologia microbiana

Biotransformaes

Capacidade microbiana para realizar certas reaces qumicas (oxidao,


hidrogenao, esterificao, metilao, descarboxilao, etc.)

PERSPECTIVAS:

Engenharia metablica

Melhoramento orientado das caractersticas celulares atravs


modificao (ou introduo) de reaces bioqumicas especficas

da

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Biotecnologia microbiana

Biotecnologia microbiana: fundamentos e aplicaes


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