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ESPECTROMETRA DE ABSORCIN
ULTRAVIOLETA-VISIBLE
DOCENTE:
Dr. Wilson Torres Rios
ASIGNATURA:
Bioqumica I
CICLO:
Segundo
Integrantes:
Bryan Velepucha
ngel Lapo
Bismark Morales
INDICE DE GRAFICOS
Grficos
Detalle
Pgina
1. Absorcin de radiacin
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8. Espectro electromagntico
13
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16. Fototubo
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21
26
26
1 Contenido
1
Contenido............................................................................................................ 3
1.
INTRODUCCIN................................................................................................... 1
2. MARCO TERICO.............................................................................................. 2
2.2.
ANTECEDENTE......................................................................................................................2
2.3.
ESPECTRO ELECTROMAGNTICO.................................................................................3
2.4.
TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA...................................................................4
2.4.1. TRANSMITANCIA (T)................................................................................ 4
2.4.2. LA ABSORBANCIA (A).............................................................................. 4
2.5.
LEY DE LAMBERT-BEER.....................................................................................................5
2.5.1.
2.5.2.
2.5.3.
2.5.3.1.
2.5.3.2.
2.6.
INSTRUMENTACION..........................................................................................................10
2.7.1.
FUENTES DE RADIACIN......................................................................11
2.7.2.
TIPOS DE ESPECTROFOTMETROS.......................................................11
2.8.
APLICACIONES ESPECTROFOTOMETRCA..............................................................12
2.8.1.
ANLISIS CUALITATIVO........................................................................12
INDICE
1. INTRODUCCIN
Desde hace muchos aos se ha usado el color como ayuda para reconocer las sustancias
qumicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de radiacin se puede estudiar la
absorcin de sustancias, no solamente en la zona del espectro visible, sino tambin en
ultravioleta e infrarrojo. Se denomina espectrofotometra a la medicin de la cantidad de energa
radiante que absorbe un sistema qumico en funcin de la longitud de onda de la radiacin, y a
las mediciones a una determinada longitud de onda. La teora ondulatoria de la luz propone la
idea de que un haz de luz es un flujo de cuantos de energa llamados fotones; la luz de una cierta
longitud de onda est asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad
definida de energa.
El objetivo es comprender y conocer las caractersticas generales y conceptos relacionados con
la espectrofotometra de absorcin ultravioleta-visible. La temtica que se revisa en el presente
trabajo se basa en los siguientes:
Fundamento
Antecedente
Espectro electromagntico
Transmitancia y absorbancia
Ley de lambert-beer
Tipos de transiciones electrnicas
Instrumentacin
Aplicaciones esprectrofometrica
Al concluir este presente trabajo se conocer los conceptos relacionado con la espectrofometria
de absorcin ultravioleta- visible.
2. MARCO TERICO
2.1.
FUNDAMENTO
ANTECEDENTE
ESPECTRO ELECTROMAGNTICO
2.4.
TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA
Es un concepto ms relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz
absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en consecuencia:
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del 100% e
indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 =
0.
La cantidad de luz absorbida depender de la distancia que atraviesa la luz a travs de la
solucin del cromforo y de la concentracin de ste.
2.5.
LEY DE LAMBERT-BEER
entre las especies responsables de la absorcin est disminuida hasta el punto que cada una
afecta la distribucin de cargas de sus vecinas. Esta interaccin, a su vez, puede alterar la
habilidad de las 8 especies para absorber en una longitud de onda de radiacin. Debido a que la
extensin de la interaccin depende de la concentracin, la ocurrencia de este fenmeno provoca
desviaciones de la relacin lineal entre absorbancia y concentracin.
Un efecto similar se encuentra a veces en soluciones que contienen altas concentraciones de
otras especies, particularmente electrolitos. La proximidad de iones a la especie absorbente
altera la absortividad molar de la ltima por atracciones electrostticas, este efecto se disminuye
por dilucin. Se encuentran algunas excepciones entre ciertos iones o molculas orgnicas
grandes, que presentan interacciones significativas a concentraciones debajo de 0,01 M.
Desviaciones de la ley de Beer tambin surgen porque es dependiente del ndice de refraccin
de la solucin; entonces, si cambios de concentracin provocan alteraciones en el ndice de
refraccin de la solucin, se observan desviaciones de la ley.
Surgen cuando un analito se disocia, se asocia, o reacciona con el solvente para producir un
producto teniendo un espectro de absorcin diferente del analito. Por ejemplo CrO4 2- en
funcin del pH va a absorber diferente.
2.5.3.2.
Cuando un fotn UV-Visible de energa adecuada incide en una especie absorbente, un electrn
es promovido desde su estado fundamental a un estado electrnico excitado. En absorcin UVVisible, pueden observarse las distintas transiciones electrnicas.
Pueden tener lugar cuatro tipos de transiciones: >*, >*, n>* y n>*. As
mismo, tambin pueden producirse transiciones denominadas de transferencia de carga y de
campo ligando. Seguidamente se comentarn algunas peculiaridades de cada una de las
transiciones mencionadas.
Grafico 3: Banda de absorcion originadas por diferentes transiciones electronicas
Longitud de onda <150 nm . Este tipo de transiciones se dan sobre todo en hidrocarburos que
nicamente poseen enlaces
Las especies qumicas saturadas que contengan tomos con pares electrnicos en orbitales no
enlazantes pueden dar lugar a que se produzcan transiciones n>*. Esto sucede, por ejemplo,
en compuestos saturados conteniendo heterotomos de oxgeno, azufre y halgenos.
Estas transiciones requieren bastante energa, si bien en menor grado que las >*, por lo
que las bandas correspondientes se presentan fundamentalmente en el ultravioleta lejano. Por
otra parte, la intensidad de las absorciones asociadas con estas bandas suelen ser de pequea
magnitud.
Los mximos de absorcin correspondientes a esta transiciones n>* tienden a desplazarse
hacia longitudes de onda menores al aumentar la electronegatividad del heterotomo. De hecho,
la mayor parte de los compuestos saturados que contienen oxgeno absorben a longitudes de
onda inferiores a 200 nm, lo cual hace posible que compuestos tales como el agua, o los
alcoholes, puedan utilizarse como disolventes en el ultravioleta prximo.
2.6.3. TRANSICIONES n>* y >*.
Longitud de onda entre 200-700 nm. La mayora de las aplicaciones de espectroscopia UVVisible estn basadas en transiciones que ocurren en esta zona. Se requiere que las especies
participantes aporten un sistema de electrones (grupos cromforos: compuestos con
insaturaciones, sistemas aromticos multicclicos, etc.). Las energas de excitacin en las
transiciones >*,son medianamente altas, correspondiendo a la regin UV Lejano y
Prximo, mientras que las n n>*
Estas bandas se originan cuando se produce transferencia de electrones de una parte a otra de un
sistema. Para ello es necesario que uno de sus componentes tenga caractersticas de dador de
electrones y otro de aceptor. Como consecuencia de esta transferencia de electrones se origina
un estado excitado que es el resultado de un proceso de oxidacin-reduccin interna. As, por
ejemplo, la absorcin de un fotn por el complejo Fe(III)SCN da lugar a la transferencia de
un electrn desde el tiocianato hasta uno de los orbitales del hierro, originndose una especie
excitada consistente en Fe(II) y SCN neutro:
Lo mismo que sucede con otros tipos de excitacin electrnica, el electrn que ha
experimentado la transferencia vuelve a su estado original, si bien, ocasionalmente puede tener
lugar la disociacin del estado excitado, teniendo lugar, en este caso, una reaccin fotoqumica.
Algunas molculas orgnicas pueden originar bandas de absorcin por transferencia de carga
intramolecular:
Las bandas de absorcin originadas por estos procesos de transferencia de carga son
particularmente importantes en anlisis qumico, ya que muchos compuestos orgnicos e
inorgnicos las presentan en el ultravioleta (a veces tambin en el visible) y las absortividades
molares suelen ser muy altas (superiores a 10000), por lo cual se obtienen lmites de deteccin
muy bajos para estas especies.
2.6.5. BANDAS DE CAMPO LIGANDO.
El color que presentan muchos iones y compuestos de metales de transicin normalmente se
deben a absorciones denominadas de campo ligando (junto a stas, suelen presentarse las
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Espectrofotmetro de doble haz: es aquel que cuenta con dos compartimientos para celdas
de muestra que le permite medir simultneamente la cantidad de energa radiante absorbida
por una matriz (blanco) y la energa absorbida por la muestra compuesta por la matriz y la
especie de inters.
Espectrofotmetro de haz simple: cuenta con un nico compartimiento de celda con lo cual
se debe realizar la medida de absorcin del blanco para poder registrar un cero (o
referencia) y luego medir la absorcin de la muestra.
2.8.
APLICACIONES ESPECTROFOTOMETRCA
En principio, cualquier especie qumica que absorba radiacin electromagntica en las regiones
ultravioleta o visible es susceptible de poder ser determinada por tcnicas espectrofotomtricas.
El mayor campo de aplicacin se encuentra en el anlisis cuantitativo, siendo la
espectrofotometra una de las herramientas ms usadas.
2.8.1. ANLISIS CUALITATIVO
Los espectros de absorcin ultravioleta y visible son, en general, menos tiles con fines
cualitativos que los espectros en la regin infrarroja, debido a que en aquellos las bandas son
ms anchas y, por consiguiente, menos caractersticas.
La identificacin de un compuesto puro requiere la comparacin emprica de los detalles del
espectro (mximos, mnimos y puntos de inflexin) de la sustancia problema con los del
compuesto puro. Adems, la intensidad de la absorcin, expresada en trminos de la
absortividad molar, , se usa con frecuencia como criterio adicional para la identificacin, sobre
todo si tiene un valor elevado a determinadas longitudes de onda.
Cuando se trata de identificar sustancias orgnicas, es conveniente operar en fase de vapor y a
presin baja, ya que en estas condiciones, el espectro observado es debido a molculas aisladas
y, generalmente es posible resolver la estructura fina vibracional y rotacional, lo que
proporciona detalles caractersticos para la identificacin. En disolucin y, sobre todo, en
presencia de disolventes polares como el agua, alcoholes, steres y cetonas, las molculas no se
encuentran aisladas, sino solvatadas, como consecuencia de lo cual se limita la rotacin.
Adems, los campos del disolvente pueden modificar de forma irregular los niveles de energa
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vibracionales y, cuando el nmero de molculas es grande, los niveles de energa son poco
definidos, obteniendose como resultado la aparicin de una banda. Una de las pocas sustancias
orgnicas con espectro de absorcin caracterstico en disolucin es el benceno. Su espectro se
usa frecuentemente en test de especificaciones de pureza, donde el contenido en benceno debe
ser cuidadosamente controlado, por ejemplo, en alcohol absoluto o en ciclohexano.
Absorbentes Cuando en una disolucin hay varias sustancias que absorben radiacin, es posible,
en muchos casos, llevar a cabo su determinacin sin necesidad de separar previamente los
distintos componentes. Se va a considerar el caso de que la muestra est constituida por los
componentes M y N.
3. METODOLOGIA
3.1.1. ESPECTRO DE ABSORCIN DE UN
DETERMINACIN DE CONCENTRACIONES
3.1.2. OBJECTIVOS
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COLORANTE
Obtener el espectro de absorcin del colorante E-124 y determinar, a partir del espectro, a) El
coeficiente de absortividad molar k del colorante y b) la concentracin de una muestra
problema.
3.1.3. MATERIALES
Pipetas
Matraces aforados
La balanza de precisin.
Una disolucin tampn de mes previamente preparada. El mes es una solucin de un
cido orgnico (cido 2-morfolino etanosulfnico) 50 mM neutralizado con NaOH hasta
pH=6,5. El tampn garantiza que el pH se mantiene en torno a 6,5.
3.1.4. PROCEDIMIENTO
1. Preparacin de 4 disoluciones patrn de colorante E-124 a partir de una disolucin
concentrada del colorante (concentracin 0,15 g/l de colorante rojo E-124) que se
proporciona ya preparada.
2. Cadaparejautilizarladisolucinconcentradaparaprepararlassiguientes4
disolucionesmsdiluidasquesernlasquesemidanenelespectrofotmetro:
Disolucin1:diluir1mldeladisolucinconcentradacon5mldetampnyenrasarconaguaen
unmatrazaforadode25ml.
Disolucin 2: idem, 2 ml de disolucin concentrada.
Disolucin 3: idem, 3 ml de disolucin concentrada.
Disolucin4:idem,5mldedisolucinconcentrada.
3. Calcular la molaridad de todas las disoluciones, incluida la concentrada. Usar los
datos que se facilitan en el anexo.
4. Medir el espectro de absorcin del colorante de 325 a 685 nm sobre la disolucin 4:
Tras realizar el blanco, se introduce una cubeta con la disolucin 4 (la ms
concentrada) y se mide la absorbancia en el intervalo de longitudes de onda fijado
tomando valores cada 20 nm. Se repite la operacin de manera ms fina en la
regin donde se haya observado una mayor absorbancia, esta vez tomando valores
cada 10 nm. Establecer, a partir de esta medida, dnde se encuentra el mximo de
absorcin del colorante. Anotar el valor de absorbancia para esa longitud de onda
de la Disolucin 4.
5. Repetir la medida, a la misma longitud de onda (mximo de absorcin del
colorante) para las disoluciones 3, 2, 1 y para una mezcla problema de
concentracin desconocida. Anotar los correspondientes valores de absorbancia
frente a concentracin para hacer una recta de calibrado.
1. Consulte el manual de operacin del espectrofotmetro y ajstelo de acuerdo a lo
establecido en l.
2. Prepare las siguientes soluciones del colorante, utilizando agua:
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4. CONCLUSIN:
Se ha llegado a la conclusin de que la espectrofotometra es un mtodo analtico indirecto
porque se basa en la medicin de la absorbancia o transmitancia de las radiaciones; es de gran
utilidad en la actualidad para la identificacin de un analito en una muestra problema.
La espectrofotometra es el mtodo ms usado, debido a que es sencillo, especfico y sensible.
5. BIBLIOGRAFIA
1. APRAEZ. Anlisis de alimentos. Edit. Limuza. Mxico. 1980.
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