REVISTA COLOMBIANA DE QUMICA, VOLUMEN 26, No.

1 DE 1997

DETERMINACIN DE VITAMINA A POR CROMATOGRAFA LQUIDA

DE ALTA EFICIENCIA (CLAE) EN BIENESTARINA CRUDA
Doris Mabel Gartner C Patricia Restrepo*
Recibido marzo -V97 - Aceptado septiembre 9/97

Keywords: vitamin A, HPLC, validation, fiour.

riamente en el Laboratorio del ICBF)

con cl mtodo de extraccin slidolquido usando columnas Lichrolut.

RESUMEN

Todas las variables son estadsticamente evaluadas con un anlisis de

varianza de una sola va y con la
prueba de Duncan.

En el presente trabajo se valida una

tcnica de Cromatografa Liquida de
Alta Eficiencia (CLAE) para la determinacin y cuantificacin de la vitamina A en Bienestarina cruda (mezcla
alimenticia infantil producida por el
Instituto Colombiano de Bienestar Familiar. ICBF).
En primer lugar se lleva a cabo la
validacin del mtodo analtico, mediante el uso de patrones de concentracin conocida de palmtato de vitamina A, para lo cual se determina la
linealidad, sensibilidad (lmites de deteccin y cuantificacin), la precisin
y la exactitud del mtodo.
En segundo lugar se determinan las
mejores condiciones de extraccin de
la vitamina, como son peso de la muestra, uso de antioxidante y porcentaje
en peso de ste, adicin de a-amilasa:
unidades de actividad en relacin al
peso de muestra, temperatura y tiempo
de actividad enzimtica.
Finalmente se comparan dos mtodos de extraccin: el mtodo de extraccin lquido-lquido (utilizado rutina-

*Departamento de Qumica. Facultad de

Ciencias. Universidad Nacional de Colombia,
Apartado Areo 14490 Santaf de Bogot,
Colombia.

El mtodo utilizado para la determinacin por CLAE de vitamina A, es

lineal entre 1,75 y 8,50 UI, sensible
(con un limite de deteccin 2,73 X 10'*
UI y como lmite de cuantificacin
I.68UI), preciso y exacto. Para la extraccin de la vitamina A de Bienestarina, las mejores condiciones encontradas son: lOg de muestra, 5,0 o 10%
de hidroquinona, 2.0 unidades de actividad (UA) de a-amilasa/g de muestra,
45 "C y 60 minutos.
La extraccin slido-liquido es ms
exacta, rpida, menos txica y con mayor poder de recuperacin que el mtodo de extraccin lquido-lquido.

ABSTRACT
In the present work is validated of
the HPLC (High performance Liquid
Chromatography) for determination of
vitamin A in special flour (Bienestarina) produced by Instituto Colombiano
de Bienestar Familiar (ICBF) as food
for Children.
In first place was used a commercial standard of vitamin A (palmitate)
of known concentration for valdation
of method: linearity, the sensiblity, the
precisin and exactness.
31

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In second place was studied the improve conditions of vitamin A extraction; ofthe sample: the best weight of
sample, the best percentage of antoxidant. units of activity of a-amilase, as
well as the temperature and best time
of enzymatic activity,
Finally, two methods of extraction
were compared: the extraction lquidliquid with ethyl ether (method used of
routine in the laboratory of ICBF) and
the method of extraction sold-lquid
used the Lichrolut columns. In both
methods were evaluated the precisin,
exactness and the percentage of recuperaton.
All the variables were statistically
evaluated with a variance analysis in
one way and with Duncan test.
It was determined that HPLC method
for the cuantifcation of vitamin A, was
linear between 1.75 UI and 8.5 UL sensitive (detection limit of 2.73 X 10"'Ul.
cuantifcation limit of 1.68 UI), precise and exact. It shouid to use lOg of
sample, 5-10% of hidroquinone in relatonship to the weight of sample, as
for the parameters of enzymatic activity: 2.0 UA (units of enzymatic activity)/g of sample, 45 C and 60 minutes.
The extraction with Lichrolut is more
exact, rapid. fewer toxic and has more
vitamin A recuperation that method of
liquid-liquid extracton.
INTRODUCCIN
En 1975 el Instituto de Bienestar
Familiar (ICBF) present una formulacin la cual dio a conocer con el nombre de Bienestarina. sta es catalogada como una de las mejores mezclas
alimenticias, definindose como un aliment de alto valor nutricional. con
una formulacin tcnicamente planeada que aporta protena con un balance
adecuado de aminocidos esenciales,
contribuyendo tambin con los requcrimientos de caloras, minerales y vi-

32

taminas como tiamina, rivoflavna, nacna y vitamina A (1). El ICBF produce

dos tipos de Bienestarina: la cruda que
es el resultado de la mezcla de las materias primas sin tratamiento trmico y
la precocida. la cual es sometida a un
proceso trmico con el fin de disminuir
la carga microbiolgica y prolongar la
vida til del producto,
La vitamina A ha sido determinada
utilizando mtodos biolgicos con bioensayos que miden la actividad del
retinol en los alimentos de origen anmal y mtodos fisicoqumicos que miden los carotenoides en trminos de
vitamina A sin determinar la potencia
biolgica (3).
Estos procedimientos utilizan mtodos de extraccin seguidos por una saponificacin y por mtodos fsicos para
separar pigmentos. El mtodo de cuantificacn utlizado se basa en la absorcin de luz a 620 nm por el complejo
formado en la reaccin de Carr-price
con la vitamina (7), tcnica utilizada
en el ICBF. La reaccin es rpida y
debe leerse antes de 5 segundos para
impedir lecturas inexactas, por la prdida de color del complejo formado; el
reactivo utilizado en este mtodo (cloruro de antimonio) es altamente corrosivo. Adems los volmenes de ter
etlico empleados para la extraccin de
vitamina A, resultan txicos para quien
realiza el procedimiento.
Por la importancia de la vitamina A
en la nutricin de los nios y por la
tcnica utilizada para su determinacin,
se hace necesario desarrollar tcnicas
rpidas, reproducibles y sensibles, que
evalen la calidad nutricional de la
Bienestarina.
La cromatografa Lquida de Alta
Eficiencia (CLAE) es una tcnica rpida, reproducible y cuantitatvamente
sensible para el anlisis de carotenos
y de retinol en alimentos compuestos
por matrices sencillas como jugos de
frutas (4,5). y de algunas matrices a

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base de almidn como alimentos infantiles (9). En este mtodo se utilizan

diferentes columnas y solventes, identificando la vitamina por el tempo de
retencin y cuantificndola en forma
ms rpida y precisa que otros procedimientos utilizados para la determinacin de vitamina A.
Por las anteriores razones este trabajo tiene como objetvo principal establecer las tcnicas de extraccin y
determinacin por CLAE de la vitamina A en Bienestarina cruda, que es una
matriz muy compleja por su composicin y de la que no se conocen reportes
bibliogrficos de la extraccin ni determinacin cromatogrfica de la vitamina.

ra una curva de calibracin con puntos

desde 18 UI diluyndose sucesivamente a la mitad hasta cuando el rea del
pico corresponda al doble del ruido (se
utiliza la mayor sensibilidad del equipo). Cada uno de los puntos se pasa 10
veces, para determinar el rea en cada
concentracin, se determinan adems
la media, la desviacin estndar, el lmite superior e inferior de confianza
para cada concentracin y a partir de
estos datos la sensibilidad del mtodo
medante el lmite de deteccin y de
cuantificacin (4) y la linealidad mediante el clculo de los lmites de confianza inferior y superior del total del
grfico, el intercepto, la pendiente y el
coeficiente de correlacin, entre los lmites establecidos.

METODOLOGA

Determinacin de la precisin y
exactitud del mtodo.

Puesta a punto del mtodo analtico.

Condiciones cromatogrficas del estudio.
Las condiciones cromatogrficas utilizadas (4), para la validacin del mtodo analtico son:
- Cromatgrafo lquido Merck-Hitachi.
- Fase estacionaria: silicagel (activada, 60;5 mm ) de 12.5 cm de longitud
y 0.4 cm de dimetro int.
- Fase mvil: n-Hexano-isopropanol
(98 : 2).
- Flujo de la fase mvil: 0.5 mL/mn.
- Detector: UV (326 nm).
- Volumen de inyeccin: 20mL.
- Atenuacin 4.
Estas condiciones se mantienen
constantes durante todo el estudio.
Determinacin de la sensibilidad y la
linealidad.
Con un patrn de palmitato de
retinol (que tiene el mismo comportamiento cromatogrfico de la vitamina
A) de rSOO.OOO UI (SIGMA) se prepa-

Un patrn de concentracin 4.5 UI

correspondiente al punto medio de la
porcin lineal de la curva, se pasa por
el equipo 19 veces y se determinan la
media y los lmites de confianza para
los datos obtenidos de la medida del
rea. La precisin se expresa matemticamente como la desviacin estndar
relativa o coeficiente de variacin
(RSD), evaluando la dispersin de datos obtenidos con el estndar de 4,5 UI
en relacin al valor medio. La exactitud se expresa matemticamente como
cl porcentaje del valor medio de los
datos obtenidos en relacin al valor
verdadero, adems se aplica un ensayo
(t) de student a un nivel de 9 5 % de
confianza para encontrar si existen diferencias significativas entre el porcentaje obtenido experimentalmente y
el 100%.
Puesta a punto del mtodo de extraccin de la vitamina A de la BienestaDebido a que la Bienestarina es un
alimento con una matriz compleja y no
existen reportes bibliogrficos de la
extraccin de la vitamina de dicho ali-

33

REVISTA C O L O M B I A N A DE Q U M I C A , V O L U M E N 2 6 , No, 1 DE 1997

ment, es necesario poner a punto un

mtodo de extraccin que permita obtener la vitamina, en un nivel de concentracin que est dentro del rango lineal
del mtodo analtico, para lo cual se
estudian tres diferentes pesos de muestra inicial de Bienestarina: 5g, lOg,
I5g; se estudia el uso de hidroquinona
como antioxidante al 5. 10 y 15% y la
adicin de a-amilasa (taca diastasa.
Parke Davis and Co.) con el fin de degradar los polisacridos presentes en la
muestra que absorben la vitamina e
impiden su extraccin cuantitativa; se
estudian cuatro niveles de enzima:
O.IUA, l.OUA, 2.0UA, y 5.0UA por
gramo de muestra; tres tiempos: 10,30,
y 60 minutos y cuatro temperaturas de
actividad enzimtica: 20. 37. 45 y 60
"C. Cada uno de los niveles, de cada
variable se estudia dejando constantes
los dems parmetros en los niveles
mximos estudiados, excepto la temperatura que se mantiene constante a 37
C. Cada determinacin se realiza mnimo por triplicado y se evalia estadsticamente con un anlisis de varianza
de una sola va, para encontrar s existe diferencia significativa entre las determinaciones. En caso de encontrar
diferencia significativa, se lleva a cabo
la prueba de Duncan para encontrar la
mnima diferencia significativa (dms)
entre los tratamientos estudiados.
Finalmente una vez deabsorbda la
vitamina de la matriz de polisacridos
se realiza una saponificacin con el fin
de separar posteriormente, mediante
extraccin lquido-lquido o slidolquido, la vitamina A en forma de alcohol de los lpidos saponificables presentes en la Bienestarina. La saponificacin se lleva a cabo con KOH alcohlico al 1%, a ebullicin durante una
hora.
Extraccin lquido-liquido y slidoliquido.
Para separar la vitamina A de los
lpidos saponificables, se comparan los
mtodos de extraccin con ter y en

34

columnas de silica gel (Lichrolut marca

Merck): en la extraccin con ter se
realizan cinco extracciones; el extracto
etreo es lavado con agua hasta pH neutro y se seca con sulfato de sodio anhidro. La mezcla se solubiliza en hexano
para ser inyectada al cromatgrafo.
En la extraccin slido-lquido se
utilizan columnas de silicagel de I cm'
de fase estacionaria y una capacidad
total de 3 mL. Una vez saponificada la
muestra se realiza una extraccin con
10 mL de hexano, el total del extracto
obtenido se pasa por la columna de
slica, previamente lavada con 2 mL de
n-hexano, la vitamina es eluida del cartucho con 2 mL de una mezcla de nhexano-acetato de etilo (1:1) y este extracto es sometido a anlisis por CLAE.
Determinacin de la precisin y exactitud del sistema.
Con el fin de validar el sistema y
comparar los mtodos de extraccin
de la vitamina A de la Bienestarina, se
prepara un placebo de Bienestarina cruda, al que se le adiciona una premezcla
de vitaminas y minerales que aportan
2000 UI de palmitato de retinol por
cada I OOg de muestra. Se realizan 10
determinaciones de la extraccin con
ter y 10 determinaciones de la extraccin slido-lquido, teniendo en cuenta los parmetros ajustados de peso de
muestra, peso de antioxidante y las diferentes variables enzimticas. Se calcula la meda poblaconal. la desviacin estndar, la precisin como la
desviacin estndar relativa o coeficiente de variacin y la exactitud como
el porcentaje promedio de recuperacin, su desviacin estndar y se aplica una prueba (t), para cada uno de los
mtodos de extraccin.
Comparacin de los mtodos de extraccin lquido-lquido y slidolquido.
Para conocer la diferencia de los
mtodos de extraccin y cmo afectan

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los niveles de recuperacin de la vitamina A en Bienestarina cruda se realizan por triplicado, en una muestra de
Bienestarina de la Planta de Paipa los
dos mtodos de extraccin estudiados;
se analiza la vitamina A por CLAE y se
realiza un anlisis de varianza de los
resultados obtenidos.
RESULTADOS Y DISCUSIN

recta con un coeficiente de correlacin

de 0.997 existiendo una alta correlacin entre la concentracin de vitamina
A y la respuesta del mtodo de deteccin, con una pendiente de 4 . 9 3 x 1 0 ' y
un intercepto de 0.54 UL
La determinacin de sensibilidad del
mtodo muestra que posee un lmite de
deteccin de 2,73x10-'^ UI y un lmite
de cuantificacin de 1.68UI.

Puesta a punto del mtodo analtico.

La validacin del mtodo se realiza
para confirmar y documentar que los
resultados del anlisis de vitamina A
por CLAE, en la condiciones cromatogrficas mencionadas en la metodologa son confiables.
Determinacin de la linealidad y la sensibilidad.
La determinacin de vitamina A por
CLAE resulta ser un mtodo lineal entre 1.75 y 8.50 UI, obtenindose una

Determinacin de la precisin v la
exacttud del mtodo.
Las tablas I y 2 muestran, respectivamente, los resultados obtenidos para
determinar la precisin y la exactitud
del mtodo analtico aplicado.
Como se muestra en la tabla I el
RSD o coeficiente de variacin es un
nmero menor al determinado por el
criterio de aceptacin confirmando la
precisin del mtodo. En la tabla 2 se
muestra que el porcentaje de recupera-

Tabla 1. Precisin del mtodo de determinacin de vitamina A por CLAE.

Parmetros para evaluar la precisin
N
Media
Desviacin estndar
RSD
Criterio de aceptacin
Intervalo de confianza p = 0.05

19
5.21
1.21x10"'
2.33
2.77 (4)
5.00x10"' / 5.42x10"'

Tabla 2. Exactitud del mtodo de determinacin de vitamina A por CLAE.

Parmetros para evaluar la exactitud
N
% de recuperacin
Desviacin estndar
RSD
t-calculado
t-tabulado

19
104.22
9.06
8.69
2.11
2.10

35

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cin medio es mayor al 100%, es decir

los valores que se obtene de vitamina
A dan 4,5 Ul o superiores, probablemente debido a pequeos cambios en
los valores del rea obtenida bajo la
curva de los picos de vitamina A, adems el t-calculado es igual al t-tabulado demostrando este resultado que el
mtodo es exacto.
Puesta a punto del mtodo de preparacin de la muestra.

Tabla 3. Prueba de Duncan para el

peso de muestra.
Peso de
muestra
(g)

peso de
muestra
(g)

P. Duncan,
p=0,05

5
5

15
10
15

Hay dms
No hay dms
Hay dms

10

do (4.46), por lo tanto hay diferencia

significativa entre los diferentes pesos
de muestra.

Peso de muestra.
La figura 1 muestra los resultados
obtenidos al analizar la vitamina A obtenida a partir de los tres niveles
diferentes de peso de Bienestarina.
La mayor recuperacin de vitamina
A se obtiene cuando se utilizan 5 o 10
g de muestra; cuando se emplean 15 g
la recuperacin es baja debido a que
esta cantdad de muestra dificulta su
manejo, presentndose prdidas durante la extraccin. Para el desarrollo de
la tcnica se decide emplear 10 g por
que la cantdad de muestra es de fcil
manejo y es adems representativa en
el anlisis de alimentos. No obstante,
en algunos casos cuando haya poca
cantidad de muestra, se pueden utilizar 5 g.

Porcentaje de antioxidante.
Se utiliza hidroquinona como antoxdante. con el fin de disminuir las
perdidas de vitamina A por oxidacin
durante el proceso de extraccin por
contacto con aire o luz o cuando se
realiza la evaporacin del solvente.
La figura 2 y la tabla 4 muestran los
resultados obtenidos al utilizar tres niveles de antioxdanle.
El anlisis de varianza muestra que
el F calculado es mayor que F tabulado
(2I4>4.46), lo que significa que existe
diferencia entre los diferentes porcentajes de antioxidante utilizados. Los
resultados obtenidos muestran que en-

La tabla 3 muestra los resultados

del anlisis estadstico, donde el F calculado (225) es mayor que el F tabula0)
a

15

O)

o
o

ro innn

3^ <u
z
< E
J
>
3

nn
0

m
lO

<u
o
O)
o ro
o^ m
^ 0)
3
*-< F
>

lO

peso de la muestra (g)

Porcentaje de
antioxidante
Figura 1. Recuperacin de vitamina A de
acuerdo al peso de Bienestarina,

36

Figura 2. Recuperacin de vitamina A con

relacin al porcentaje de anloxdante.

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tre 10 y 15% de antioxidante no existe

diferencia significativa, lo que si ocurre entre 5 y 10% y 5 y 15%. Por esta
razn se pueden utilizar tanto 10 como
15% de antioxidante.

tra que existe diferencia significativa

entre todos los tratamientos estudiados
y se establece que se deben utilizar 2.0
UA /g de Bienestarina porque se obtene la mayor recuperacin de vitamina A.

Puesta a punto de la actividad de aam lasa.

Los resultados para las diferentes

temperaturas ensayadas se muestran en
la figura 4 y la tabla 5. La mayor recuperacin de vitamina A se obtiene al
realizar el ensayo con 45 C; con temperaturas menores se presenta una
disminucin en la velocidad de reaccin y con 60 C hay probablemente
alguna leve alteracin a nivel del sitio
activo de la enzima, disminuyendo su
actividad. El tratamiento estadstico
muestra que existe diferencia entre las
temperaturas ensayadas ya que el F calculado (24) es mayor que el F tabulado
(3.98) y esta diferencia se establece
segn la prueba de Duncan, entre todos los tratamientos excepto a 20 C y
37 C donde la actividad enzimtica es
muy baja y entre 45 C y 60 C donde
se obtiene la mayor actividad hidroltica de la a-amilasa, pero se decide utilizar 45 "C puesto que garantiza una
mayor recuperacin de vitamina A, se
produce un ahorro de energa y se hace
menos vulnerable la reaccin a la contaminacin microbiana.

Las figuras 3, 4 y 5 y la tabla 5,

muestran, respectivamente, los resultados obtenidos del estudio de los diferentes niveles de unidades de enzima, tiempo y temperaturas de actividad enzimtica.
La figura 3 muestra cmo la mayor
recuperacin de vitamina A se obtiene
al utilizar 2.0 UA/g de Bienestarina.
Con unidades de actividad menores, la
recuperacin de vitamina A es poca por
que la cantdad de carbohidrato presente supera la capacidad de hidrlisis de
la a-amilasa y a unidades de actividad
enzimtica mayores, los productos de
hidrlisis de los polisacridos presentes en la Bienestarina, producen inhi'bicin competitiva de la actividad
enzimtica. El anlisis estadistico
muestra un F calculado (66) mayor que
el F tabulado (3.98), lo que significa
que hay diferencia significativa entre
los tratamientos utilizados para encontrar las UA que facilitan la recuperacin de la mayor cantidad de vitamina
A. La prueba de Duncan, tabla 4, mues-

La figura 5 muestra que con 60 minutos de actividad enzimtica se recupera la mayor cantidad de vitamina A

Tabla 4. Prueba de Duncan para las Unidades de Actividad, t e m p e r a t u r a y

tiempo de actividad de a-amilasa.
Enzimtica

UA
Enzimlica

P.
Duncan

Temperatura

Temperatura

P.
Duncan

0.1

1.0

Hay dms

20

37

No hay dms

0.1

2,0

Hay dms

20

45

Hay dms

0.1

5.0

Hay dms

20

60

Hay dms

1.0

2,0

Hay dms

37

45

Hay dms

1.0

5.0

Hay dms

37

60

Hay dms

2.0

5,0

Hay dms

45

60

No hay dms

Tiempo Tiempo
(min)
(min)

P.
Duncan

10

30

Hay dms

10

60

Hay dms

30

60

Hay dms

37

REVISTA C O L O M B I A N A DE Q U M I C A , V O L U M E N 2 6 , No. 1 DE 1997

2000
1500

c i:
o re

- 5
=

500H

O)

UA enzimtica
Figura 3. Vitamina A recuperada de acuerdo a las UA de
a-amilasa adicionadas a la Bienestarina.

2000
a

.-I^

rae 1500
o t

r 1000
> i

500
20

Hld
37

45

60

Temperatura grados C

Figura 4. Recuperacin de vitamina A con diferentes temperaturas de actividad de a-amlasa.

O)

ro

5 -g I
>
5

.1
m

2000
1500

IOOOIH
500|

Tiempo (min)

Figura 5. Vitamina A recuperada a diferentes tiempos de

actvidad de a-amlasa.

38

REVISTA COLOMBIANA DE QUMICA, VOLUMEN 26, No. 1 DE 1997

de la muestra de Bienestarina, y que

de acuerdo al anlisis estadstico el F
calculado (6.047) es mayor al F tabulado (4.46) y existe diferencia significativa entre los tempos estudiados. Esta
diferencia, segn se muestra en la tabla 5, existe entre los tres tiempos estudiados; a 10 y 30 minutos la enzima
no alcanza a actuar en forma eficiente,
mientras que a 60 minutos se encuentra la mayor recuperacin de vitamina;
cs probable que a tiempos mayores la
actividad de la enzima aumente, pero a
este tiempo se obtienen mejores resultados que los determinados por extraccin directa de la vitamina a partir de
la muestra, por el mtodo lquidolquido con ter y posterior cuantficacin por Carr-price. Se recomienda ensayar tempos mayores teniendo en
cuenta que el mtodo de extraccin sea
aplicable para anlisis de rutina.
P u e s t a a p u n t o del m t o d o de e x t r a c cin.

y no saponifieable. La extraccin se
debe hacer despus de la saponficacin y en este caso se realiza con cinco
lavados sucesivos con ter; los resultados obtenidos del proceso se reportan
en la tabla 5 donde se muestra la precisin del sistema y en la tabla 6 la
exactitud del mismo,
Comparando los resultados obtenidos en el RSD o coeficiente de variacin con cl criterio de aceptacin dado
por las tablas estadsticas (4). este valor es mayor, lo que hace el mtodo de
extraccin con ter no preciso; los valores obtenidos en UI de vitamina A se
acercan entre s, pero se alejan del valor medio. Con respecto a la exactitud,
el tratamiento estadstico de los resultados muestra que al comparar el tcalculado con el t-tabulado el sistema
de extraccin con ter es no exacto y
slo se recupera un 51,96% a partr
del placebo de 2000 UI.

El proceso de extraccin se realiza

para separar la vitamina A de los dems componentes de la matriz alimenticia, aprovechando sus caractersticas
de ser soluble en solventes orgnicos

Debido a los resultados obtenidos

en la extraccin con ter y a la contaminacin que esta metodologa produce, se decide ensayar el mtodo de extraccin de la vitamina A utilizando
columnas Lichrolut de silicagel; los re-

T a b l a 5. P r e c i s i n de la e x t r a c c i n
de la de v i t a m i n a A de B i e n e s t a r i n a
con t e r .

T a b l a 6. E x a c t i t u d de la e x t r a c c i n
de v i t a m i n a A de B i e n e s t a r i n a con
ter.

Precisin
N
Media
Desviacin
estndar

10
I 1 1 1.34 UI
178.24

RSD

16.0

Criterio de
aceptacin

1.9

Intervalo de
confianza.
p = 0.05

983.85-1238.83UI

Exactitud
N

10

Porcentaje (%)
de recuperacin
medio

51.96

Desviacin
estndar

18.20

RSD

35.03

t-calculado

4.33

t-tabulado

2.26

39

REVISTA C O L O M B I A N A DE Q U M I C A , V O L U M E N 26, No. 1 DE 1997

sultados del anlisis estadstico del estudio de este sistema se muestran en

las tablas 7 y 8.

do en el proceso, el cual es altamente

txico para quien realiza la tcnica,

El obtener un valor de RSD mayor

al criterio de aceptacin, hace de la
extraccin con columnas Lichrolut de
silicagel un sistema no preciso para la
extraccin de vitamina A de Bienestarna Cruda; este resultado se puede deber al bajo nmero de replicaciones y a
la poca experiencia en el manejo de las
columnas, no se efecta una buena activacin de la columna, por lo que sera recomendable realizar un mayor nmero de determinaciones mejorando el
sistema de activacin de la columna y
la elucin de la vitamina de sta.

CONCLUSIONES

Los resultados de la exacttud del

sistema de extraccin con columnas de
Lichrolut de silicagel muestran que es
un sisten"ia exacto, con un porcentaje de
recuperacin del 80% mucho mayor que
el obtenido en el sistema de recuperacin con ter; es importante por tanto
implantar este sistema de extraccin,
porque adems de ser exacto, aporta
beneficios de tipo econmico y ambiental al reducir la cantdad de ter utlizaTabla 7. Precisin de la extraccin
de vitamina A de Bienestarina con
slica.

-La CLAE rene los requerimientos

analticos de: linealidad, sensibilidad,
precisin y exactitud; por tal razn los
resultados producidos por CLAE para
el anlisis de vitamina A son confiables,
-Se encuentra que las mejores condcones para la extraccin de vitamina A de Bienestarina cruda son: lOg de
muestra; adicionar 15% de hdroqunona como antioxidante; 2.0 UA de aamlasa por gramo de muestra, a 45 C,
durante 60 minutos,
-El mtodo de extraccin lqudolquido con ter de la vitamina A no
cumple los requerimientos de precisin
y exactitud, adems que slo permite
la recuperacin del 50% de la vitamina
presente en la Bienestarina.
-La extraccin slido- lquido de la
vitamina A utlizando columnas LchroTabla 8. Exactitud de la extraccin
de vitamina A de Bienestarina con
slica.

Precisin
N
Media
Desviacin
estnda

10
1628.5 UI
163.5

Exactitud
N

10

Porcentaje (%)
de recuperacin
medio

80

10

Desviacin
estndar

21.64

RSD
Criterio de
aceptacin

1.9

RSD

27.0

t-calculado

1.28

Intervalo de
confianza.
p = 0.05

1223.06-2003.32
t-tabulado

4.303

40

REVISTA COLOMBIANA DE QUMICA, VOLUMEN 26, No. 1 DE 1997

lut de silicagel es un sistema exacto y

permite una recuperacin mayor del
80% de la vitamina a partir de la
Bienestarina cruda.

AGRADECIMIENTOS
Las autoras desean agradecer a la
Universidad Nacional de Colombia, al
Instituto Colombiano de Bienestar Familiar y a MERCK Colombia.

BIBLIOGRAFA
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