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sacarosa
Mtodos no enzimticos
1.
Este es probablemente el procedimiento ms comn para la estimacin del contenido total de
azcares reductores y glucsidos. Una muestra de 0.01 0.25 m mol de azcar en 0.3 mL se mezcla
con 0.01mL de fenol 10%. Se agrega 1.0mL de H2SO4 concentrado de grado analtico a la mezcla
azcar fenol. Despus de mezclar, se incuba por 30 minutos atemperatura ambiente. Luego se
mide la absorbancia a 490nm.
Algunas sustancias tales como cationes de metales pesados, compuestos azo- y tio- podran
interferir.
2.
Fenol H2SO4
3.
Antrona - H2SO4
El medio cido hidroliza el enlace glicosdico de la sacarosa y los monosacridos resultantes reaccionan
con la antrona produciendo un color verde azulado.
Para el anlisis de sacarosa, una muestra de 100m L (0.05-0.4m mol de sacarosa) se mezcla con 100m L
de NaOH 30%, y se calienta por 10 minutos a 100C. Se deja enfriar a temperatura ambiente y se
agregan 3.0mL del reactivo de antrona (0.15% en 80% H2SO4).
Despus de 15 minutos a 40C, se mide la absorbancia a
620nm.
Antrona
6. Mtodos enzimticos
1.
Introduccin
Desde un punto de vista analtico, la capacidad de los enzimas para catalizar reacciones especficas con
un alto grado de eficacia, ha dado lugar a diferentes aplicaciones en diversos campos del anlisis como
anlisis clnicos, anlisis de productos alimentarios, anlisis de preparados farmacuticos etc.
El anlisis enzimtico o anlisis mediante el empleo de enzimas puede ser utilizado en:
1. La determinacin de los sustratos de la reaccin enzimtica, siendo posible determinar especficamente
cada una de las sustancias de una mezcla sin necesidad de separar. Para la cuantificacin de sustratos
se pueden utilizar dos mtodos generales:
a. Mtodos de cambio total, de equilibrio o de punto final. En este tipo de mtodos (los ms utilizados en
la prctica) se permite que la reaccin enzimtica se complete o llegue al equilibrio y se mide la variacin
producida en la concentracin de un producto de reaccin o de un reactivo presente inicialmente en
exceso.
b. Mtodos cinticos, en los que se utilizan medidas de la velocidad inicial de la reaccin enzimtica para
deducir la concentracin inicial de sustrato. Los procedimientos de medida son idnticos a los utilizados
para reacciones catalticas en general.
2. Determinacin de los mismos enzimas mediante el empleo de mtodos cinticos en los que se mide la
velocidad de desaparicin del sustrato o de generacin del producto, relacionada con la concentracin de
enzima en disolucin.