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INFORME N4
ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE
LA CATALAZA
PROFESORA:

CARMEN TERRY BORGAS

CURSO:

BIOQUIMICA AMBIENTAL

CARRERA:

INGENIERIA AMBIENTAL

CICLO:

INTEGRANTES:
AZCONA GUTIERREZ, Dausca Wendy

2015

I.

INTRODUCCIN

Las enzimas son protenas con capacidad de catalizar reacciones biolgicas. Igual
que los catalizadores inorgnicos, aumentan la velocidad para alcanzar el
equilibrio de la reaccin. El mecanismo por el cual las enzimas incrementan la
velocidad de la reaccin es reduciendo la energa libre de activacin requerida
para la transformar un sustrato al producto correspondiente, sin afectar la
constante de equilibrio.

La actividad de una enzima se evala en funcin de la velocidad de la reaccin. La

cintica enzimtica estudia la velocidad de la reaccin, los factores que la
modifican y el mecanismo de la misma. Los factores fisicoqumicos que modifican
la actividad de la enzima son: concentracin del sustrato, concentracin de la
enzima, pH, temperatura, fuerza inica, inhibidores.
Leonor Michaelis y Maud Menten en 1913, propusieron un modelo clsico para el
estudio de la cintica enzimtica. Este modelo consiste en graficar la velocidad de
la actividad enzimtica y la concentracin del sustrato. Esta representacin grfica
permite determinar la constante de Michaelis-Menten ( K M ) al interpolar la mitad
de la velocidad mxima ( V max ).
En esta prctica se emplear la enzima catalasa para analizar algunos aspectos
de la cintica enzimtica. La catalasa utiliza una molcula de perxido de
hidrgeno ( H 2 O2 ) como sustrato donador de electrones y otra molcula de

H 2 O2

como oxidante o aceptor de electrones.

La catalasa est contenida en los peroxisomas de eritrocitos, mdula sea,

mucosas, rin e hgado. Su funcin es la descomposicin del H2O2 formado por
accin de las oxidasas.

II.

OBJETIVOS

Comprobar la existencia de la enzima catalasa en los tejidos animales y

vegetales.
Comprobar la accin del pH sobre la actividad de la enzima.
Comprobar la accin de la temperatura sobre la actividad de la enzima.
III.

MARCO TEORICO

Las enzimas se caracterizan por 3 propiedades fundamentales:

(a) estn presentes en pequeas cantidades,
(b) aumentan la velocidad de las reacciones qumicas sin que se consuman o
alteren por la reaccin,
(c) aumentan la velocidad de las reacciones qumicas sin alterar el equilibrio
qumico entre los reactantes y los productos.
Nomenclatura y clasificacin de las enzimas El sufijo asa identifica a la mayora de
las enzimas con excepcin de algunas, como la tripsina, amilopsina,
quimiotripsina, etc.; que por tradicin siguen manteniendo su nomenclatura. Se
han asignado, por la Comisin Internacional de Enzimas, 6 clases:
1. Oxido-reductasas: participan en reacciones de xido-reduccin. En estas
reacciones se transfiere un electrn (o un H+) de un donante a un receptor.
Caso del NADH+ que entrega electrones a complejo I en la membrana
interna de la mitocondria.
2. Transferasas: transfieren grupos de un donante a un aceptor. Los grupos
transferidos con ms frecuencia son el metilo, glucosdico y fosfato. Caso
de la glucosiltransferasa (transfiere un monosacrido) y protena quinasa
(transfiere un fosfato).
3. Hidrolasas: participan en reacciones de hidrlisis, es decir, rompimiento de
enlaces como C-O, C-N y C-C por adicin de agua. Caso de los enlaces
glucosdicos (entre monosacridos) y peptdicos (entre aminocidos).
4. Liasas: producen dobles enlaces al romper uniones C-O, C-C y C-N.
Tambin pueden romper dobles enlaces agregando grupos. Caso de la
piruvato descarboxilasa que elimina un CO2 al piruvato.
5. Isomerasas: catalizan una redistribucin de tomos de los grupos qumicos
dentro de la misma molcula. Caso de la alanina racemasa que convierte Lalanina en D-alanina. Ambos son ismeros.

6. Ligasas: catalizan la unin de 2 molculas por hidrlisis de ATP u otro

trifosfato (GTP).
Actividad enzimtica
La primera enzima aislada en forma cristalina fue la ureasa (J.B. Summer, 1926)
que cataliza la hidrlisis de la urea.
(NH2)2CO + H2O CO2 + 2NH3
La hidrlisis de la urea puede ocurrir espontneamente en presencia o ausencia
de un catalizador, originando los mismos productos y la misma energa.
La velocidad de reaccin espontnea puede ser acelerada si se aaden iones H+
como catalizador y puede ser acelerada an ms cuando se aade la ureasa en
lugar de los iones H+.

El grfico muestra las relaciones

energticas de la reaccin entre urea
y agua (reactantes), el logro del
estado de transicin [ES] y la
obtencin de los productos (CO2 y
NH3). Note la magnitud de la energa
de activacin.

Para que la urea pueda reaccionar con el agua debe haber

suficiente energa, para que la molcula de urea y el agua
lleguen a formar un complejo activado y entren a un estado
de transicin (estado de alta energa). La energa necesaria
para llegar a dicho estado se llama energa de activacin, la
cual constituye una barrera para que la reaccin prosiga. Por
tanto, la disminucin de la barrera de la energa de
activacin es mayor en un sistema de reaccin catalizada
por una enzima; de esta manera, la reaccin procede ms
rpidamente en presencia de ureasa que en presencia de H+
o sin catalizador. En conclusin, la funcin principal de una
enzima es disminuir la barrera de la energa de activacin.
Las enzimas aumentan la probabilidad de que las molculas
reaccionantes crucen la barrera y prosigan a la consumacin
de la reaccin. Una enzima (E) hace esto al unirse con el
sustrato (S), en una asociacin temporal (estado de
transicin ES).
El complejo activado enzima sustrato [ES] tiene menor
necesidad de energa de activacin; as, habr ms cantidad
de molculas de sustrato que pueda pasar la barrera por
unidad de tiempo. Un nmero pequeo de molculas de
enzima pueden manejar millones de molculas de sustrato por segundo.

La mayor parte de las enzimas opera dentro de un margen estrecho de pH: es el

pH ptimo. La gran mayora de las enzimas tiene su pH ptimo dentro del rango
fisiolgico de la clula (pH 6.5 a 7.2). Algunas enzimas, como la pepsina del

estmago, poseen un pH ptimo en el rango cido (pH 1.0 a 2.0). Enzimas

intestinales como la tripsina y lipasas, poseen un pH ptimo en rangos alcalinos,
cercano a 10.
Como en cualquier reaccin qumica, el aumento de temperatura de los
reaccionantes produce un aumento en la velocidad de reaccin, pero en el caso
de los sistemas catalizados por enzimas, esto es vlido hasta cierto grado de
temperatura.
Considerando que las enzimas son protenas, estn expuestas a una
desnaturalizacin (cambio en la estructura terciaria) por accin de altas
temperaturas. As, puede producirse una inactivacin a causa del rompimiento de
varios enlaces dbiles. Muchas enzimas se inactivan a 45 C y la mayora se
desnaturalizan rpidamente desde los 55 C. Como cosa curiosa, hay bacterias
termfilas que viven en aguas termales calientes, alrededor de los 80 C. Sus
sistemas enzimticos resisten la desnaturalizacin a altas temperaturas.

Especificidad del sustrato La especificidad est determinada por el sitio activo de

la enzima, es decir, un sector de la molcula que contiene los grupos funcionales
particulares que le permiten unirse especficamente con el sustrato. Por ejemplo,
la quimiotripsina posee una cadena polipeptdica conformada por 245 aminocidos
de los cuales los nmeros 57 (histidina), 102 (cido asprtico) y 195 (serina)
constituyen el sitio activo. El plegamiento (estructura terciaria) de la cadena
provoca el acercamiento de estos 3 aminocidos en una estrecha regin: este es
el sitio activo de la enzima.
Las enzimas aceleran las reacciones alterando la conformacin de sus sustratos
para que logren llegar al estado de transicin. El modelo ms simple para
entender esta interaccin enzimasustrato es el modelo de la llave y la cerradura,
en el cual el sustrato encaja perfectamente en el sitio activo de la enzima.

IV. MATERIALES Y METODOS

Papa
Hgado

Cuchillo
Pinzas
Tubos de ensayo
Gradillas mechero

Reactivos:
HCl 0.1M O

HNO3

NaOH 0.1M
HIELO
Sustrato:

H 2 O2
V.

(perxido de hidrogeno)

PROCEDIMIENTO

Preparar las disoluciones siguientes:

10ml de una solucin 0.1M de NaOH, PM=40g/mol.

10ml de una solucin 0.1M de HCl PM= 36.46094 g/mol /

HNO 3

PM

=63.01 g/mol.
Cortar la papa y el hgado en cinco trozos cada uno de igual tamao (1 g
aproximadamente).
Rotular 10 tubos de ensayo con los nmeros 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 y 10.
Al tubo 1, 3, 5, 7 y 9 aadir un trozo de papa y al 2, 4, 6, 8 y 10 un trozo de
hgado.
Al tubo 1 y 2 agregar 2ml de H 2 O2
a cada uno de ellos, observar e
interpretar los resultados.
En los tubos 3 y 4 aadir 2 ml de agua para hervir la muestra. Hervir
durante unos 5 minutos, despus de este tiempo, retirar el agua sobrante y
agregar 2 ml de H 2 O2 , observar e interpretar los resultados.
A los tubos 5 y 6 agregar 2ml de la solucin de

HNO3

0.1M, esperar 5

minutos, luego retirar el cido, enjuagar con agua destilada y agregar 2 ml

de H 2 O2 observar e interpretar los resultados.
A los tubos 9 y 10 hay que introducirlos en un horno helado durante 30 minutos,
luego agregar inmediatamente 2 ml de H 2 O2 , observar e interpretar los
resultados.

VI.

CALCULOS Y RESULTADOS

TUBOS
1

Patata

Hgad
o

Patata

Hgad
o

Patata

Hgad
o

Patata

Hgad
o

OBSERVACION

EXPLICACION

Se observ una gran

+2ml
cantidad de burbujas en
H 2 O2
ambos casos pero de
mayor cantidad en el
hgado. Se observa la
+2ml
liberacin espontnea de
H 2 O2
oxgeno en forma de
pequeas burbujas.
+
2ml En el caso de la papa
hervida no se observ
H2O
reaccin al igual que en
Hervir
5 el hgado.
minutos
y
retirar
el
liquido
+2ml
H 2 O2

En el caso de la papa cruda hay una rp

reaccin. La enzima acta normalmente.

2ml Tampoco se observa una

reaccin tan fuerte como
HNO 3
en el tubo uno y dos
Esperar
5
minutos,
luego retirar
el acido
+2ml
H 2 O2

No observars reaccin ya que el c

provoca tambin la desnaturalizacin de
enzima.Los pH extremos tambinprovo
la prdida de la actividad enzimtica.

+ 2ml NaOH
Esperar
5
minutos,
luego retirar
la base
+2ml
H 2 O2

La actividad enzimtica de la papa

disminuido debido al pH

Sobre todo en el tubo que tiene hga

crudo molido, se da la mxima activid
Esto se debe a que presenta un pH optim

El calor desnaturaliza las protenas, y po

tanto, las enzimas.
Esto es debido a que al someter la enzim
altas temperaturas, sta se desnatural
es decir, pierde su actividad enzimtica
la prdida de su estructura terciaria.

La actividad enzimtica del hgado

disminuido pero en menor medida que e
papa esto se debe a que es otro tejido.

10

Patata

10

Hgad
o

Refrigerado
durante 30
minutos

Al exponer el hgado y la papa

temperaturas elevadas la mayora de
molculas componentes (lpidos, proten
Hidratos de Carbono, etc.) se
desnaturalizado. Por lo que el ag
oxigenada no tiene con que reaccionar.

VII.
CONCLUSIONES
Comprobamos la existencia de esta enzima catalasa en las clulas de los
animales y vegetales, cumple un importante papel en el organismo. La
funcin de esta es descomponer el perxido de hidrogeno ( H 2 O2 ), que
es toxico y se genera durante el metabolismo celular, en agua y oxgeno. La
eficacia de esta enzima para la degradacin del perxido de hidrgeno
depende de varios factores: La dosis de la catalasa a usar, la concentracin
inicial del perxido de hidrgeno, el tiempo de contacto en la disposicin del
proceso, entre otros. En las reacciones las burbujas que se observaron es
producto de la liberacin de O2 .

Se observ que las altas temperaturas y los cambios de pH no neutros

pueden desnaturalizar la enzima, cambiando su estructura, e inactivndola.
La enzima catalasa en el organismo, evita la acumulacin de perxido de
hidrogeno, que es toxico para las clulas.
VIII.

CUESTIONARIO

A. De acuerdo a sus resultados obtenidos Cul es la temperatura y pH

ptimo de la catalasa? Explique.
Segn los resultados la mxima actividad se dio cuando se realizaron las
pruebas con el tubo de ensayo 1 y 2.por lo t6anto se puede deducir que a
temperatura ambiente y a un pH de entre6 y 8 se da una la reaccin de mayor
velocidad.

B. Graficar la relacin temperatura y

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C. Explique el fundamento de las pruebas desarrolladas

Una enzima es una molcula de carcter proteico (protena) cuya funcin es
acelerar las reacciones bioqumicas (catalizador biolgico). La catalasa es una
enzima que se encuentra en casi todas las clulas aerobias, la funcin de esta
enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se
forma una molcula txica que es el perxido de hidrgeno, H 2 O2 (agua

Oxigenada). La catalasa acta sobre el agua oxigenada descomponindolo en

H 2 O2 y O2 , con desprendimiento de energa en forma de calor. La actividad
de las enzimas puede ser afectada por otras molculas, por la temperatura, el pH
y la concentracin de sustrato, es por ello que la reaccin de la enzima no es
ptima en todos los casos experimentados.

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D. Qu sucede cuando se pone perxido de hidrogeno en una herida?

Qu sugiere la evidencia?
La razn por la que las espumas se debe a que la sangre y las clulas contienen
una enzima. Nada ms hacernos un corte, estas enzimas salen junto con la
sangre. Cuando la enzima entra en contacto con el perxido de hidrgeno,
convierte el perxido de hidrgeno ( H 2 O2 ) en agua (H O) y el gas oxgeno (
2

O2 )
2 H 2 O2

> 2 H 2 O2

+ O2

Esta reaccin es extremadamente eficiente hasta 200.000 reacciones por

segundo. Las burbujas que se ven en la espuma de burbujas de oxgeno puro se
estn creando por esta enzima. Puedes hacer la prueba poniendo un poco de
perxido de hidrgeno en un corte de patata y har lo mismo, por la misma razn.
La enzima que hay en las clulas daadas de la patata, reacciona con el perxido
de hidrgeno.
El perxido de hidrgeno no hace espuma en la botella o en su piel (en la que no
haya un corte con sangre) porque no est esta enzima que ayuda a que se
produzca la reaccin. El perxido de hidrgeno es estable a temperatura
ambiente.

E. Explique por qu tantas especies producen la enzima catalasa

Porque la Catalasa es una enzima cuya funcin es descomponer el
H2O2(Perxido de H) en Agua y O2 molecular. El H2O2 es una sustancia txica
para la clula de tal manera que debe ser degradada qumicamente.
Gracias a los Peroxisomas que sintetizan este catalizador el H2O2 es
descompuesto evitando que la clula muera por Toxicidad de este compuesto
inorgnico
F. Explique las caractersticas estructurales y funcionales de la catalasa,
y su importancia en los seres vivos
Estructura de la catalasa
Es un tetrmero de cuatro cadenas polipeptidicas, cada una larga cadena con 500
aminocidos. Contiene cuatro grupos heno porfirinicos (hierro) que llevan a la

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enzima a reaccionar con el perxido de hidrgeno. El pH ptimo para la catalasa

es aproximadamente de 7, la temperatura varia por especie.
Funcin de la catalasa
La catalasa cumple una funcin protectora contra determinados microorganismos
patgenos, sobre todo anaerobios. Las bacterias anaerobias, mueren al estar en
contacto con oxgeno, es por esta razn que el oxgeno producido por esta enzima
tiene efecto bactericida sobre estos microorganismos. Tanto es as, que la
ausencia de dicha enzima por defectos genticos, llamada acatalasemia o
enfermedad de Takahara, causa importantes infecciones en la mucosa bucal,
pudiendo llegar a causar la prdida de dientes y graves lesiones en los maxilares y
tejidos blandos de la cavidad bucal.
Importancia
De hecho la enzima catalasa sirve para proteger nuestras clulas, contrarrestando
y equilibrando la produccin continua de perxido de hidrgeno.
Debido a sus innegables, poderosas y demostradas propiedades antioxidantes, la
catalasa es muy benfica para los procesos de los rganos y el cuerpo. Adems
de fungir como sper antioxidantes, la catalasa tambin tiene la habilidad de usar
el perxido de hidrgeno para oxidar toxinas incluyendo el metanol, etanol, cido
frmico, formaldehido, y nitrito. Este tipo de actividad dual la convierte en una
enzima celular crucial.
IX.

ANEXOS

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X.

BIBLIOGRAFIA

http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales
%20PDF/EXPERIMENTO%205%20CATALASA%2006-04.pdf
http://www.apccc.es/arch_apccc/fichas2012/lasvinas/lasvinas_actenzimatica.pdf
http://www.pedropablomoreno.com/pedropablomoreno.com/BIO2Practicas_files/14-15%20P-8%20Enzimas.pdf
http://sebbm.bq.ub.es/BioROM/contenido/proteinas3d/practica/catalasaboton.html.
30 Abril 2011
http://aplicaciones.virtual.unal.edu.co/drupal/files/pitaya%20amarilla.pdf. 30 Abril
2011
file:///C:/Users/LAB02-23/Desktop/enzimas.pdf

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http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/enzima-catalasa