Control bacteriano de la esterilizacin

Grupo C: Valendents
Integrantes:
Fernndez Crisstomo, Arturo Brayan
Paredes Llatance, Jefferson ngel
Romn Camel, Cesar Miguel
Vicua Huaqui, Luis Antonio
Vidal Chavez, Daniel Emerson
Villanueva Huaccache, Valentina Silvia
Docente de prctica:
Cecilia Rodrguez
Docente de curso:
Sylvia Chein Villacampa

2016

ndice
Introduccin
1.

Formulacin del problema............................................................................. 5

2.

Objetivos.................................................................................................... 5

3.

Justificacin................................................................................................ 5

4.

Marco terico.............................................................................................. 6
4.1

Antecedentes........................................................................................ 6

4.2

Bases tericas........................................................................................ 8

4.2.1

Esterilizacin.................................................................................. 8

4.2.2

Tcnica de hisopado.........................................................................9

4.2.3

Tincin Gram................................................................................. 9

4.3
5.

Hiptesis............................................................................................ 10

Metodologa.............................................................................................. 11
5.1

Tipo de investigacin............................................................................ 11

5.2

Poblacin y muestra............................................................................. 11

5.2.1

Poblacin..................................................................................... 11

5.2.2

Muestra....................................................................................... 11

5.3

Procedimiento y tcnica........................................................................12

5.3.1

Horno de Pasteur..........................................................................12

5.3.2

Flameado..................................................................................... 12

5.3.3

Determinacin de la poblacin.........................................................12

6.

Resultados................................................................................................ 14

7.

Discusin.................................................................................................. 14

8.

Conclusiones............................................................................................. 15

Bibliografa
Anexos

Introduccin

La esterilizacin es el procedimiento mediante el cual se eliminan todo tipo

microorganismos de los objetos inanimados, obtenindose como consecuencia la
proteccin de antibacteriana de los instrumentos y materiales de salud.
A travs de este informe se comprender de la importancia de la esterilizacin en
las prcticas de salud, especialmente en instrumentos que mantiene un contacto directo
con la sangre, salivas u otros, y as evitar las enfermedades de riesgo y infeccin
cruzada entre el personal odontolgico, pacientes, personal de limpieza y personal de
laboratorio.
Adems, se debe considerar que el perfil de la atencin odontolgica ha
cambiado de manera muy rpida en los ltimos aos, producto de la aparicin de
nuevas enfermedades, incorporacin de nuevas tecnologas de tratamiento, el inters de
la poblacin

por la calidad de los servicios de salud, la importancia de la salud

ocupacional, la importancia de la proteccin del ambiente y la masificacin de la

informacin han generado la necesidad revisar y actualizar los procedimientos para el
control de las infecciones en la prctica odontolgica. La importancia de poseer estos
conocimientos en esta materia radica en la reduccin de transmisin de enfermedades
infectocontagiosas, secreciones orales y respiratorias.
Es por eso, que el presente informe tiene como finalidad hacer un control
bacteriano del proceso de esterilizacin comparando un instrumental esterilizado y otro
no esterilizado y mediante un proceso llamado hisopado veremos que microorganismos
existen en el material no esterilizado y tambin veremos si el proceso de esterilizacin
ha cumplido con su fin de eliminar cualquier tipo de microrganismo del instrumental,
mediante dos placas TSA seguido de un incubado y una lectura de resultados.
Finalmente, este informe se desarrolla en nueve captulos: el primer captulo es
una introduccin del informe, el segundo captulo contiene el planteamiento del
problema, los objetivos de la investigacin: especficos e inespecficos, y la
justificacin. El tercer captulo presenta los antecedentes de la investigacin, el
desarrollo de las bases tericas y definicin de trminos bsicos. El cuarto captulo est
constituido por el tipo de investigacin, las tcnicas y los procedimientos del estudio, el
captulo cinco son los resultados, el seis sobre la discusin, el captulo siete menciones

sobre las conclusiones de los resultados, el ocho la bibliografa del informe y finalmente
el captulo nueve anexos sobre los procedimientos de hisopado.

Formulacin del problema

Tras el proceso del lavado de la instrumental que consiste en lavar, desinfectar,

empaquetar y por ultimo llevar a esterilizar con ello se logra destruir las formas
vegetativas y esporas de los microorganismos, obtenindose como consecuencia la
proteccin antibacteriana de los instrumentos y materiales. Ahora

cmo saber si

nuestro material ha sido despojado de cualquier tipo de microorganismo letal para

nosotros? o

cmo saber si es que el proceso de esterilizacin se ha cumplido

correctamente, para ello procederemos a realizar un control bacteriano, utilizando un

material esterilizado y otro material no esterilizado y equiparar los resultados tras un
proceso llamado hisopado, y observar que tipos de microorganismo se forma al no
hacer un correcto proceso de esterilizacin
2

Objetivos

Verificar la eficacia del esterilizado a calor hmedo en la autoclave.

Demostrar la importancia de esterilizar nuestros instrumentos despus de su uso.
Detectar la intensidad de peligro en el cual estamos expuestos ante una
negligencia mdica.

Justificacin

Hacemos esta investigacin para poder determinar a qu microorganismo

estamos expuestos al hacer contacto con materiales odontolgicos mal esterilizados y
los efectos negativos que puede conllevar en nuestro organismo. Haciendo un claro uso
de la prevencin de la salud con la ayuda del mtodo del Hisopado.

4 Marco terico
4.1 Antecedentes

En el campo de las ciencias de la salud, la bioseguridad es un punto muy importante

pues, por medio su concepto es que se intenta reducir el ndice de trasmisin de
enfermedades cruzadas, que tiene un mayor nmero en el campo odontolgico. Para
aumentar la mejora de bioseguridad, es que existe un proceso de eliminacin de agentes
patolgicos que son los responsables de las enfermedades cruzadas y es la
esterilizacin. Hasta hace poco se crea que el proceso de esterilizacin tena una
efectividad de 100%, pero estudios actuales, indican lo contrario.

Estudios realizados por estudiantes de estomatologa Cinthia Castro Jimnez y

Sandra Chavarra Mora (2003) de la Universidad Latinoamericana de Ciencia y
Tecnologa, por medio de su tesis Conocimiento y manejo del proceso de esterilizacin
a estudiantes y odontlogos de la Clnica de Especialidades Odontolgicas ULACIT,
que realiza el estudio de 130 estudiantes de odontologa, para crear un indicador del por
qu es que se da la ineficacia en el proceso de esterilizacin. Entre ls resultados
encontrados, refieren que de acuerdo al buen manejo de las tcnicas en el proceso de
esterilizacin, este proceso tendra una eficacia del 100%.
En cuanto a la investigacin realizada por alumna de odontologa Maria Fernanda
Mentfar (2012), de la Universidad Central de Ecuador, para la sustentacin de su
tesis,ANLISIS DEL PROCESO DE ESTERILIZACIN DEL INSTRUMENTAL
EN

LA

CLNICA

DE

ODONTOPEDIATRA

DE

LA

FACULTAD

DE

ODONTOLOGA DE LA UNIVERSIDAD CENTRAL, que tiene como objetivo el

analizar el proceso de esterilizacin en autoclave mediante el uso de indicadores
qumicos y biolgicos. Al final de la investigacin se demostr que en los indicadores
biolgicos, no se desarroll el proceso de esterilizacin, se concluy esto al observar un
crecimiento del 98 % de las cepas bacterianas.
En otros estudios realizados por Elizabeth Chvez Fermn, et al (2013), de la
Universidad Iberoamericana de Republica Dominicana, a travs de su artculo
Evaluacin de la eficacia de la esterilizacin del instrumental odontolgico en la
clnica de odontologa de Unibe, se demostr que, en cuanto a la esterilizacin de las
limas endodnticas, el 60% arrojo una esterilizacin eficaz, el 20% se registr una
mediana contaminacin y el ultimo 20% presento una moderada contaminacin.

En el caso de la investigacin realizada por la cirujana dentista Lisbeth Zuriel

Corleto lvarez (2015) de la universidad de San Carlos de Guatemala, por medio de su
tesis EFICACIA DE LOS PROCESOS DE ESTERILIZACIN MEDIANTE
INDICADORES BIOLGICOS EN LA UNIDAD DE ESTERILIZACIN Y
CLNICA DE CIRUGA Y EXODONCIA DE LA FACULTAD DE ODONTOLOGA
DE LA UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA, que realiza un
estudio sobre los distintos tipos de los procesos de esterilizacin que existen en el
campo odontolgico, desde los procesos fsicos, a los qumicos.
La recopilacin de este trabajo tiene como objetivo evaluar la eficacia de los
procesos de esterilizacin en los instrumentos de odontologa, especficamente en el
campo de exodoncia y clnica de ciruga. Para el anlisis de los resultados del
instrumental, se hizo uso de 2 autoclaves. En el primer resultado, se obtuvo que, en el
primer registro todos los indicadores biolgicos tuvieron resultados positivos. Sin
embargo, en el segundo registro se se indica que la autoclave realiza la esterilizacin de
manera ineficaz. (Area, 2015, citado por Corleto).
De manera posterior, se arrojaron como resultados que, en una carga de autoclave al
50 %, al principio, se encontr que en una carga al 50% el primer registro encontrado
es que el proceso de esterilizacin es ineficaz, estudios posteriores indicaron que se
debio al inadecuado manejo de manual del instrumental odontolgico (Area 2015,
citado por Cortelo)

4.2 Bases tericas

4.2.1 Esterilizacin
Es un proceso mediante el cual se destruyen todos los microorganismos viables
presentes en un objeto o superficie, incluidas las esporas microbianas. La norma
europea EN-556 (1995) establece como requisito esencial, que para etiquetar un

producto sanitario como ESTERIL se debe cumplir lo siguiente: La probabilidad

terica de que exista un microorganismo viable presente en el producto deber ser igual
o menor que 1 entre 1.000.000. Esta expresin es lo que internacionalmente se conoce
como Nivel SAL ( Security Assurance Level ) de 10-6. Pero para garantizar la
esterilidad de un producto, no slo debemos utilizar un sistema validado y controlado
adecuadamente, sino que dicha garanta depende de ms factores, entre los que se
encuentra la carga microbiana inicial, adems del almacenaje posterior del producto
estril. Los mtodos que se utilizan para reducir la carga microbiana, previa a la
esterilizacin de productos, son la LIMPIEZA y la DESINFECCIN (de alto, medio o
bajo nivel). Aunque estos procesos de descontaminacin sean variables en cuanto a la
efectividad antimicrobiana, no son mutuamente excluyentes. SIEMPRE que se desee
realizar un proceso de esterilizacin debe realizarse primero una correcta limpieza del
material de manera que se reduzca considerablemente la carga microbiana inicial del
producto.
La esterilizacin es un mtodo del control del crecimiento microbiano que consiste
en la destruccin total de todas las formas de vida microbiana, incluyendo las formas de
vida resistentes como las esporas presentes en un objeto o material, de esta manera
resalta su grado de importancia dentro del control de la infeccin en la prctica
odontolgica.
Es el nivel existente ms alto de destruccin microbiana por ende el que brinda
mayor seguridad en la proteccin del paciente, profesional, personal auxiliar y dems
colaboradores del rea de la salud. Se trata de un trmino absoluto que implica la
prdida de la viabilidad de todo microorganismo presente en un objeto, es decir un
objeto est estril o no lo est, sin rangos intermedios.

4.2.2

Tcnica de hisopado

Esta tcnica consta de 2 opciones para su adecuado uso:

Va Hmeda: se humedece el hisopo antes de muestrear. Aplicacin: superficies

secas
Va Seca: Se humedece el hispo despus de muestrear. Aplicacin: Superficies
hmedas.

Consta de 4 pasos:

Hisopar horizontalmente (de un lado a otro).

Continuar con el hisopado sobre toda la superficie.
Repetir el hisopado verticalmente (de arriba hacia abajo).
Continuar con el procedimiento sobre toda la superficie.

4.2.3

Tincin Gram

La tincin diferencial requiere el uso de al menos 3 reactivos qumicos que se

aplican en secuencia a un frotis fijado por calor. El primer reactivo es llamado tincin
primaria o colorante primario. Su funcin es impartir color a todas las clulas. Con el
objetivo de establecer un contraste de color, el segundo reactivo usado es un agente
decolorante, el cual puede decolorar la clula completa o solo parte de ella. El reactivo
final, el colorante de contraste, le da a las clulas decoloradas un color que contrasta con
el del colorante primario. El colorante de contraste no puede ser absorbido por clulas
que no han perdido el colorante primario. De esta manera, tipos de clulas o sus
estructuras se pueden distinguir unas de otras en funcin del colorante que es absorbido.
Una de las tcnicas ms utilizadas para la tincin diferencial es la tincin de Gram,
que sirve para el reconocimiento de 2 grandes grupos bacteriolgicos, como son las
Gram positivas y las Gram negativas.
Tincin Primaria: Se utiliza Cristal Violeta, que tie todas las clulas moradas.
Mordiente: Yodo o lugol. El yodo, aparte de matar bacterias, incrementa la afinidad
del colorante primario con la clula, formando complejos insolubles con este. El
complejo cristal violeta-yodo sirve para intensificar el color del tenido.
Agente decolorante: Se utiliza alcohol etlico al 95%. El etanol tiene doble funcin:
deshidratante de protenas y solvente de lpidos. El alcohol disuelve los lpidos de la
parte externa de la pared celular Gram-negativa, haciendo la pared ms porosa. De esta

manera, el complejo Cristal violeta-yodo es removido de la capa de mureina ms fina de

las bacterias Gramnegativas, mientras que la pared ms gruesa de las Gram-positivas
retiene el tinte en su interior.
Tincin de Contraste: Safranina. Este tinte se utiliza para teir de rojo las clulas
previamente decoloradas, o sea, las Gram-negativas.
4.3 Hiptesis
a

Tras hacer uso del proceso de esterilizacin en autoclave, se pudo encontrar que

este mtodo es eficaz en un 100%.

Al trmino del proceso de esterilizacin, se encuentra que es muy importante
dicho proceso, puesto que al realizarse de manera adecuada se reduce en gran

medida el nmero de incidencias de contagio cruzado.

Ante una negligencia mdica, el peligro es muy amplio como personal de la
salud.

Metodologa

El trabajo de laboratorio en microbiologa requiere siempre ciertos mecanismos

de control de las poblaciones microbianas. La esterilizacin es uno de los mecanismos
ms utilizados y las tcnicas de esterilizacin aplicables dependen directamente de las
caractersticas del material de trabajo o de los medios que se vayan a tratar. La
esterilizacin puede ser preparativa, en la que los materiales y medios a utilizar en el
laboratorio o durante distintos procesos microbiolgicos deben ser esterilizados antes
del mismo trabajo. Pero tambin es necesaria la esterilizacin antes de desechar el
material ya utilizado y contaminado en el laboratorio, en cuyo caso se habla de
esterilizacin final. En este documento se describen las tcnicas de esterilizacin ms
habitualmente utilizadas en un laboratorio de microbiologa general y de metodologas
de control de la esterilizacin.
5.1 Tipo de investigacin
Para este trabajo fue necesario hacer

uso del tipo de investigacin segn la

extensin del estudio, de tipo semiexperimental, ya que trabajamos con datos ya antes
conocidos y con los datos de los experimentos nuevos, que se encontraron en el
laboratorio.
5.2 Poblacin y muestra
5.2.1 Poblacin
Para la realizacin del presente trabajo de investigacin, se tom como referencia y
poblacin de estudio a los alumnos del primer ao de la facultad de odontologa de la
Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
5.2.2

Muestra

Se recogieron las partculas de microorganismos depositados en los

instrumentales odontolgicos uno esterilizado y otro sin esterilizar que fue utilizado en
la revisin bucal de un paciente.

5.3 Procedimiento y tcnica

5.3.1 Horno de Pasteur
La esterilizacin mediante este tratamiento, debe alcanzar temperaturas entre
160-180C y el tiempo de tratamiento oscila entre 3 horas y 30 minutos en funcin de
la temperatura seleccionada
El horno Pasteur se utiliza para esterilizar productos u objetos de porcelana o
vidrio como pipetas, probetas, embudos, y generalmente aquellos materiales metlicos
que no se pueden esterilizar en autoclave por problemas de corrosin y tambin fluidos
oleaginosos. En general material o medios que resisten las temperaturas ms elevadas
que se utilizan en este aparato.
5.3.2

Flameado

La esterilizacin rpida durante los procedimientos de trabajo en microbiologa

se realiza por flameado (Fig. 4), mediante la exposicin directa y breve de los materiales
a la llama de un mechero. Este procedimiento est especialmente indicado para la
esterilizacin de agujas y asas de siembra, o para la boca de los tubos y matraces, ya
estriles o con cultivos, durante los procedimientos habituales de manipulacin de
microorganismos y/o medios estriles.
5.3.3

Determinacin de la poblacin

Existen diferentes tcnicas para determinar el nmero de microorganismos en

suelos o aguas, tanto directas como indirectas, Para la determinacin de
microorganismos hetertrofos totales e hidrocarbonoclastas aerobios, se seleccion la
cuenta microbiana por dilucin en placa.
Es una tcnica indirecta de cuantificacin; sin embargo, provee una medicin de
la viabilidad microbiana, permite determinar indirectamente el potencial de
biodegradacin en un suelo contaminado, es la ms adecuada para medios con
hidrocarburos como substrato, es rpida de efectuar y no requiere de mucho material
(Lorch et al., 1995; Bossert y Kosson, 1997).

El conteo de poblaciones microbianas por dilucin en placa es un mtodo simple

y rpido para la cuenta viable de clulas microbianas en el suelo. Sin embargo, la cuenta
obtenida es generalmente 10 a 100 veces menos que aquella determinada por cuenta
directa por microscopia. Las razones para esta discrepancia incluyen la exclusin de la
cuenta no viable directamente en el suelo y la inhabilidad para proveer apropiados
nutrimentos en el medio de crecimiento, para obtener la cuenta total en placa.
El mtodo de dilucin en placa se fundamenta en que cualquier clula viable
inoculada en un medio de cultivo se multiplica y produce datos de fcil identificacin,
como la formacin de colonias en placas de agar.
Este mtodo consiste en la preparacin de una serie de diluciones de una
muestra en un diluyente apropiado, esparciendo una alcuota de una dilucin sobre la
superficie de un medio de cultivo slido e incubando la placa de agar bajo condiciones
ambientales apropiadas. La dilucin debe permitir generar colonias separadas, cada
colonia puede proceder de una sola clula o de una agrupacin (unidad viable), la cual
se contar como una bacteria. Bajo este fundamento, estas placas pueden ser usadas no
slo para el conteo de poblaciones microbianas, sino tambin para el aislamiento de
organismos. Un medio selectivo o no selectivo puede ser usado dependiendo de la
naturaleza del microorganismo que se desea contar o aislar (Ramrez et al., 1992).

Resultados

En la muestra antes de ser esterilizada, se obtuvieron esporas ms bacilos de

tierra que tena una forma alargada al ser visualizadas en el microscopio
En la muestra despus de la esterilizacin se encontr gran positivas (cocos) y
tambin se logr visualizar una gran cantidad de proliferacin de bacterias a
comparacin que la otra muestra.
En ambas muestras se formaron grupos de microorganismos.
7

Discusin

Esta investigacin se realiz con el fin de comprobar la eficacia del esterilizado

del instrumental odontolgico con autoclave.
La esterilizacin por calor hmedo usado en el autoclave es uno de los mtodos
ms seguros con una efectividad del 100%, sin embargo, los resultados del hisopado
que se hizo al instrumental despus de la esterilizacin, no fueron los esperados, pues se
esper una esterilizacin total con una efectividad del 100% que es lo que se debera
obtener al usar el autoclave.
Al igual que en una investigacin realizada por la Universidad Iberoamericana
Unibe en Repblica Dominicana, el hallazgo de bacterias en el instrumental incluso
despus de haberlo esterilizado puede ser explicado porque el instrumental presenta
superficies intrincadas que dificultan su limpieza, adems se cree que la presencia de
residuos biolgicos con bajo contenido de humedad pueden aumentar la resistencia al
calor de bacterias y espora.
Para que se logre eficazmente la esterilizacin del instrumental es necesario
conocer la temperatura y el tiempo ideal que logre este objetivo sin que dae el
instrumental pero para esto sera necesario realizar una nueva investigacin.

Conclusiones

Al trmino de este trabajo y tras hacer el contraste respectivo entre un material

esterilizado y otro instrumental sin esterilizar, pudimos llegar a la conclusin de

que en el instrumental esterilizado an se encontr seales de contaminacin.

Llegamos a la conclusin que la presencia de bacterias y/o algn ente patgeno

en el instrumental odontolgico se debe a la mala manipulacin de los mismos.

La utilizacin del hisopado sirvi de manera adecuada para nuestro trabajo en
microbiologa.

Bibliografa
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Anexos

a. Fig.1: Rotular la placa Petri.

b. Fig.2: Esterilizar el asa para expandir la muestra en la placa petri.

c. Fig.3: sumergir el hisopo en suero fisiolgico, con el fin obtener la adhesin de

microorganismos a ella.

d. Fig.4: Pasar el hisopo por los instrumentales esterilizados y sin ella.

e. Fig.5: Colocar la muestra, usando el hisopo, en la placa petri.

f. Fig.6: Expandir la muestra, usando el hisopo, en la placa petri.

g. Fig.7: Incubar por 24 horas y a 37C.

h. Fig.8: Muestra despus de la incubacin.

i. Fig.9: Esterilizar el asa y la lmina por mtodos fsicos.

j. Fig.10: Aplicar suero fisiolgico a las laminas.

k. Fig.11: Tomar muestra, con el asa, de las cepas de amabas placas.

l. Fig.12: Expandir en la lmina las muestra de las cepas.

m. Fig.13: Dejar secar las lminas con las muestras.

n. Fig.14: Aplicar cristal de violeta por 1 minuto y luego enjuagar con agua.

o. Fig.15: Aplicar lugol por un minuto y luego enjuagara con agua.

p. Fig.16: Aplicar acetona y

enjuagar de inmediato con
agua.

q. Fig.17: Aplicar safranina por 30 segundos y enjuagar con agua.

r. Fig.18: Secar las lminas en el

mechero.

s. Fig.19: Aplicar aceite de inmersin, con el fin de mejorar la visin al

microscopio.

t. Fig.20: Proceder a observar las muestras.

Fig.21:Muestra no esterilizada: Esporas y bacilos de tierra.

u. Fig.22: Muestra esterilizada: Bacteria gram+.

v. Fig.23: Valendents