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AISLAMIENTO DE DNA PLASMIDICO

en el caso
GRUPO: 3FV1
SECCION:
2 de la escherichia coli utilizada, era la
resistencia a los

INTRODUCCION
El termino DNA recombinante significa la unin o
recombinacin de dos piezas de DNA de dos diferentes
especies.
Muchas bacterias contienen tambin otras molculas
de DNA circular pequeo denominadas plsmidos que
se encuentran separadas del cromosoma de la clula.
El DNA del plsmido se replica de manera
independiente al genoma bacteriano principal y puede
ser transferido de una cepa de una especie bacteriana
a otra por contacto clula-clula.
Aunque no son necesarios para la divisin celular, los
plsmidos normalmente proporcionan a la clula
alguna ventaja metablica sobre las otras clulas que
carecen de ellos.
Se encuentran en los plsmidos segmentos de DNA
que codifican la resistencia a antibiticos y otras
sustancias toxicas como metales. Estas clulas
continan creciendo y reproducindose, mientras que
las clulas susceptibles mueren.
OBJETIVOS
o

Aislar DNA plasmidico bacteriano y comprobar


dicho aislamiento mediante electroforesis en
gel de agarosa.
Identificar las diferentes formas de DNA
plasmidico observadas en la placa de
electroforesis.

RESULTADOS

Imagen 1.- Electroforesis en capa de agarosa

Con la practica pudimos observar que la mayora del


ADN plasmidico que se logro obtener fue el ADN
plasmidico sper enrollado y se obtuvo en gran
cantidad ADN genmico por lo que esto nos indica
que la tcnica no se llevo a cabo de una manera
adecuada ya que la mayora del ADN plasmidico se
pudo haber perdido en alguna fase por lo que
obtuvimos en mayor cantidad fue ADN genmico el
cual no contena la caracterstica de importancia que

antibiticos pero de manera terica para una buena


separacin lo que hubiramos preferido obtener era el
ADN plasmidico circular ya que este tiene mucha
facilidad de separarse mediante la tcnica de
electroforesis. Se prefiere este ADN plasmidico por que
como este es muy fcil de separar del ADN genmico
y contiene la caracterstica deseada este ADN
plasmidico se podra separar de la capa de agarosa. El
cual se puede implementar en otro cultivo para que la
sepa de bacterias de escherichia coli puedan adquirir
esta caracterstica.
ANALISIS DE LA TECNICA
Mediante la solucin I de GTE resuspendimos las
bacterias.
Solucin II: SDS 1%-NaOH 0.2N
El SDS es un detergente que desase las membranas y
libera el contenido de la clula.
NaOH llev a cabo la hidrlisis de DNA genmico.
Solucin III: Acetato de potasio 5M
Precipitacin de protenas y DNA genmico.
Centrifugamos
para
precipitar
completamente
protenas y DNA genmico los cuales desechamos
posteriormente.
Solucin IV: Isopropanol
Disminuye la constante dielctrica para que precipite
DNA plasmidico, lo cual se ayudo con una agitacin
leve. Si se agita fuertemente se puede romper una de
las cadenas o incluso ambas. Se requiere un DNA
plasmidico con las dos cadenas intactas.
Se centrifugo para eliminar la fase acuosa que contena
agua y alcohol y nicamente nos quedamos con el DNA
plasmidico.
Solucin V: Regulador TB 1X
Regulador de carga que contiene colorante el cual
permite seguir la muestra y glicerol el cual se intercala
en el DNA plasmidico y le da peso para que se vaya al
fondo del pozo.
Se llevo a cabo la electroforesis para comprobar que el
aislamiento del DNA plasmidico se hizo correctamente.
Se revelo con bromuro de etidio, el cual se parece
mucho a las bases nitrogenadas del DNA por lo que se
intercala con este y produce una radiacin que se ve
con luz UV.

DISCUSION DE RESULTADOS

Se sabe que la electroforesis es un mtodo que


permite la separacin de molculas en base a su
tamao. Esta separacin se realiza en un gel, que es
una malla compleja de molculas polimricas. El gel en
este caso es de agarosa. La agarosa es conveniente
para separar fragmentos de cidos nuclecos. El
fundamento de esta separacin est basado en que las
molculas de cidos nuclecos estn cargadas
negativamente (al pH y condiciones en que se
encuentran) y al someterlas a un campo elctrico
migran hacia el polo positivo a travs del gel, a
velocidades que dependen de sus tamaos: una
molcula pequea puede seguir su camino ms
fcilmente que una molcula grande. La deteccin tras
la migracin se realiza fcilmente gracias al empleo de
un colorante intercalante, bromuro de etidio que
contiene el propio gel y es visualizado al emitir luz
visible cuando el gel se ilumina con luz ultravioleta. Un
factor a tener en cuenta para valorar la migracin de
los cidos nuclecos en el gel adems de su tamao es
la configuracin espacial que adopte la molcula. El
corrimiento fue avanzando conforme la sucesin de los
pozos, esto indica que en los ltimos pozos las
molculas tenan menor peso molecular. Tambin se
observa que en los pozos se ven lneas, estas lneas,
nos indican que se encuentra DNA bacteriano. Si se
ubica en el pozo penltimo y antepenltimo
observaremos tres lneas diferentes, la primera de esta
ms gruesa que nos indica que se encuentra mayor

DNA circular, esto es, se rompi un de las dos cadenas


y es por eso que se tiene un menor corrimiento. La
segunda lnea tiene un menor ancho de la banda y nos
indica que las dos cadenas se rompieron y que su
corrimiento es intermedio se puede decir que
pertenece al DNA lineal ya que tuvo un mayor
corrimiento que la anterior. Por ltimo la tercera
mancha y de mayor corrimiento se puede suponer que
es la de DNA comprimido aunque en nuestro caso se
ve muy ligera. La mancha que se encuentra despus
de lo descrito anteriormente es el barrido de RNA que
tiene mayor corrimiento ya que tiene menor peso
molecular.
CONCLUSIONES
o

Se logro aislar ADN plasmidico bacteriano


obteniendo ADN sper enrollado en mayor
cantidad.
Se obtuvo ADN genmico como subproducto el
cual no es el ADN esperado.

BIBLIOGRAFIA
1. - Mary K. Campbell, Shawn O.Farrell. BIOQUMICA.
Ed.CENGAGE Learning. Octava edicin. Mxico D.F
(2015), pp. 365,367
2. - Charlotte W. Pratt, Kathleen Cornely. BIOQUMICA.
Ed. Manual moderno. Primera edicin en espaol.
Mxico D.F (2015), pp. 520,521