Mecanismos de inestabilidad cromosmica

Sarah L. Thompson , Samuel F. Bakhoum , y Duane A. Compton

Abstracto
Introduccin
La mayora de los tumores slidos son aneuploides y muchos errores de cromosomas se
segregan a tasas muy altas en un fenmeno denominado inestabilidad cromosmica
(CIN). La aneuploida es un estado en el que el nmero de cromosomas en una clula u
organismo se desva de mltiplos del nmero haploide de cromosomas. inestabilidad
cromosmica (CIN) se define como la persistencia de un alto ndice de prdida y
ganancia de cromosomas enteros. A los efectos de esta revisin, se adhieren a la
definicin estricta de CIN como todo el cromosoma mala segregacin y no incluyen los
reajustes estructurales de los cromosomas (translocaciones, deleciones, inversiones),
aunque estos reordenamientos estructurales tambin pueden estar relacionados con mala
segregacin.
La aneuploida se asoci primero con tumores en los finales de los 19 siglo. En 1890,
David von Hansemann examin secciones de tejido de tumores epiteliales y las clulas
que estaban pasando por divisiones multipolares, as como las divisiones asimtricas
todava bipolares de cromosomas [descubri 1 ].Posteriormente, Theodor Boveri
comparacin defectos en embriones de erizos de mar que haba pasado por divisiones
multipolares y propuso que una "cierta constitucin de la cromatina anormal",
independientemente de cmo se origin, "resultara en el origen de un tumor maligno"
[ 2 ]. La consecuencia de CIN es la aneuploida, pero la lnea entre la aneuploida y CIN
era borrosa en estos primeros estudios porque no se dispona de herramientas para
discriminar entre la aneuploida (un estado que describe el cariotipo celular) y CIN
(aumento de las tasas de cromosoma mala segregacin). Esta distincin es importante
porque la aneuploida puede surgir de diferentes maneras; sin embargo, el hecho de que
la mayora de los tumores aneuploides tiene el nmero de cromosomas en el intervalo
de las clulas diploides - es decir, 40-60 cromosomas
( http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman ; vase tambin [ 3 ]) - indica que la
acumulacin de desequilibrios cromosmicos generados por la prdida secuencial y la
ganancia de los cromosomas individuales a travs de CIN puede ser la va ms comn
para la aneuploida. Debido a que la aneuploida representa un estado de tener un
nmero anormal de cromosomas y CIN es una condicin de una mayor tasa de
cromosoma mala segregacin, los criterios necesarios para establecer cada condicin
son diferentes. Aneuploida puede ser detectado por cualquier mtodo que cuantifica el
nmero de cromosomas, incluyendo el anlisis de cariotipo, fluorescencia in
situ anlisis basados en la gama de hibridacin, cariotipo espectral, o hibridacin
genmica comparativa. Sin embargo, por s mismos, estas tcnicas no son suficientes

para producir medidas cuantitativas de CIN. La deteccin de CIN requiere la

determinacin de las tasas de cromosoma mala segregacin [ 4 ], que se pueden
conseguir por las herramientas de acoplamiento para el recuento de cromosomas con
ensayos de clulas clonales que permiten el anlisis de la variacin cromosmica en la
poblacin clonal resultante. En estos ensayos, las poblaciones de clulas derivadas de
precursores cromosmicamente estables mostrarn poca variacin en el contenido de
cromosoma (independientemente de si son o no aneuploides); en contraste, las clulas
en una poblacin derivada de una clula precursora CIN mostrarn altos niveles de la
desviacin en el contenido de cromosoma.
El uso de este ensayo de colonias de una sola clula, Vogelstein y sus colegas [ 5 ]
encendieron investigacin sobre los mecanismos subyacentes CIN cuando se
manifestaron dos propiedades clave de lneas celulares de cncer de colon. En primer
lugar, que mostraron que las clulas de cncer de colon con inestabilidad de
microsatlites (MIN) mantienen un contenido cromosmico estable, pero las clulas de
carcinoma de colon aneuploides mostraron desviaciones de el nmero de cromosomas
modal que vari de 16% a 66%, lo que indica la presencia de CIN. Altas desviaciones
en el contenido de cromosoma en poblaciones clonales se reportaron posteriormente en
clulas derivadas de muchos otros tipos de tumores, incluyendo cncer de mama y de
pulmn [ 6 , 7 ], lo que indica que CIN es una propiedad general de las clulas
cancerosas aneuploides. La medicin directa del cromosoma tasas de mala segregacin
en lneas celulares de cncer CIN ha demostrado recientemente que estas clulas missegregan un cromosoma, en promedio, una vez cada uno a cinco divisiones celulares
[ 8 ]. Esto puede representar el lmite superior de cambios cromosmicos tolerables
porque masivas cromosoma mala segregacin causado por insuficiencia puesto de
control [ 9 , 10 ] o la anafase multipolar [ 11 ] es letal. En segundo lugar, Vogelstein y
sus colegas [ 5 ] demostraron que la fusin de clulas MIN y CIN result en clulas
hbridas que retenan el fenotipo CIN, lo que sugiere que los mecanismos subyacentes
que causan CIN se comportan como rasgos dominantes.
A continuacin, se discuten los avances recientes que iluminan los mecanismos
subyacentes que causan CIN en clulas tumorales humanas. Estos mecanismos reducen
la fidelidad mittico e incluyen defectos en el cromosoma cohesin, la asamblea de
control de huso (SAC), nmero de copia del centrosoma, la dinmica de los
microtbulos de unin kinetochore-, y la regulacin del ciclo celular. Asimismo,
discutir cmo el conocimiento adquirido mediante el descubrimiento de estos
mecanismos da a conocer estrategias para explotar CIN para mejorar la terapia del
cncer.
Ir:
La segregacin de cromosomas en la mitosis

CIN representa la prdida de fidelidad de la segregacin de cromosomas en la mitosis,

por lo que es pertinente para la revisin de las caractersticas ms destacadas de la
mitosis que apoyan la segregacin cromosmica fieles. La mitosis es coreografiada
cuidadosamente para asegurar que todas las cromtidas hermanas se segregan a las
clulas hijas opuestas ( Figura 1A ). Central para esta coreografa es cromtida hermana
de cohesin, que se establece en el momento de la replicacin del ADN por la
deposicin del complejo cohesinas. Segregacin apropiada de cromosomas requiere que
la cohesin se mantiene a travs de los G2 y M fases del ciclo celular y luego
interrumpe bruscamente en el inicio de la anafase. El momento exacto de la destruccin
de la cohesin cromtida hermana durante la mitosis est determinada por las
actividades coordinadas de las quinasas dependientes de ciclina y el SAC. Los
cromosomas que no estn conectados adecuadamente al husillo microtbulos emiten
una seal para mantener la actividad de la quinasa dependiente de ciclina, que inhibe la
aparicin anafase y preserva la cohesin de cromtidas hermanas. Por ejemplo, los
cromosomas mono-orientadas que carecen de unin en uno cinetocoro (monotely)
emiten la seal de "esperar anafase ', y una sola cinetocoro sin ataduras es suficiente
para prevenir la aparicin anafase [ 12 , 13 ]. Una vez que todos los cromosomas
alcanzan los archivos adjuntos orientado bi-propias de husillo microtbulos, el SAC
est satisfecho y la separacin de cromtidas hermanas se induce bruscamente y de
forma sincronizada en todos los cromosomas por la maquinaria del ciclo celular que
escinde proteolticamente el complejo cohesinas. Por ltimo, en las clulas humanas
cada cinetocoro se une a un promedio de 20 ~ microtbulos y todos estos microtbulos
debe orientar hacia el mismo polo del huso para apoyar la segregacin cromosmica
fiel. La geometra de regreso a la parte posterior de la hermana cinetocoros favores
cromosoma bi-orientacin en torno a ejes [ 14 - 16 ], pero la naturaleza estocstica de
kinetochore-microtbulos adjuntos resultados en misattachments frecuentes en los que
cinetocoros individuales se unen de forma simultnea a los microtbulos que emanan de
los dos polos del huso - conocido como merotely (para una representacin esquemtica
de los tipos de unin kinetochore-microtbulos, vase la Figura 1B ). Estos accesorios
merotelic producen de forma natural en la mitosis temprana y se corrigen antes de la
aparicin anafase para asegurar la segregacin cromosmica fiel [ 17 ]. Es de destacar
que merotely no es detectado por el SAC y, si no se corrige, puede causar cromtidas
hermanas a migrar a la misma polo del huso en la anafase que conduce a cromosoma
mala segregacin [ 18 ].

Figura 1
segregacin de los cromosomas en la mitosis
Ir:
Las causas de la inestabilidad cromosmica

Desde el momento en que Vogelstein y sus colegas [ 5 ] estableci claramente la

presencia de CIN en clulas tumorales humanas aneuploides, muchos grupos de
investigacin han perseguido su causa subyacente. Estos esfuerzos han revelado varios
mecanismos por los que las clulas tumorales pierden fidelidad mittico y protenas
implicadas en la CIN se resumen en la Tabla 1 .

tabla 1
Las protenas relacionadas con la NIC.
Los defectos de cohesin

Las protenas que participan en la cohesin de cromosomas fueron identificados a travs

de estrategias genticas utilizando ensayos que miden la eficiencia de transmisin de
minicromosomas levadura en ciernes.Curiosamente, las mutaciones somticas en los
genes cuyos productos regulan la cromtida hermana cohesin, incluyendo subunidades
del complejo cohesin, se identificaron recientemente en tumores humanos en una
estrategia de secuenciacin expansiva diseado para identificar mutaciones de los
homlogos humanos de cada gen conocido para inducir CIN en ciernes levadura
[ 19 ]. No se realiz un anlisis directo para probar cmo estas mutaciones afectan a la
cohesin cromosoma. Por lo tanto, se desconoce si las clulas que llevan estas
mutaciones estn dispuestos a prematura separacin de cromtidas hermanas o al
fracaso de disyuncin cromosmica en anafase inicio, por lo que es imposible evaluar
su papel en la CIN. Sin embargo, el agotamiento aguda de cohesins o de los reguladores
de cohesin Sgo1 y separase (la enzima que escinde cohesins para iniciar la anafase)
utilizando la interferencia de ARN eleva el nmero de clulas tetraploides [19 21 ]. Las clulas tetraploides tambin surgen en las clulas que sobreexpresan separase
o una forma no degradable de securin (la protena que previene la actividad separase
antes de la anafase) [ 20 , 22 - 24 ], lo que indica que los trastornos de la cohesin
tienden a causar efectos globales sobre la segregacin de cromosomas en lugar de
elevando la incidencia de solo cromosoma mala segregacin. Adems, la secuenciacin
a gran escala de genomas tumorales revela que cohesin genes mutados son raramente
[ 25 - 29]. Sin embargo, la posibilidad de que las mutaciones dominantes en cohesin
subunidades aumentan el cromosoma mala segregacin mediante la prevencin de la
separacin de cromosomas oportuna permanece abierta, y este escenario encajara con
el comportamiento dominante de la NIC en los experimentos de fusin celular. Una
visin alternativa es la pena explorar si las mutaciones en subunidades cohesin
perjudican el empaquetamiento ordenado de la cromatina centromrica que conduce a la

interrupcin de la orientacin tpica de regreso a la parte posterior de los cinetocoros

hermanos. Ms all de estas mutaciones especficas, existen otros indicios de que la
interrupcin de la cohesin puede contribuir a la NIC. Por ejemplo, altos niveles de
separase se ven en muestras de tumores de cncer de mama en comparacin con los
controles de tejido normal [ 23 ]. Separase excesiva podra inducir la prematura
separacin de cromtidas hermanas que conduce al cromosoma mala segregacin. Sin
embargo, la interpretacin de los niveles de ARNm alterados en los tumores no est
claro debido a las diferencias en los ndices mitticos entre tumor y el tejido
normal.Esta discrepancia est muy extendida y se aplica a muchas otras reas que
comparan tejidos normales y tumorales.
Defectos SAC

Componentes moleculares de la SAC se identificaron en ciernes levadura utilizando

estrategias genticas que llevaron al aislamiento de cepas mutantes que no detuvieron la
progresin del ciclo celular en presencia de venenos del huso. Homlogos de la mayora
de estos genes de levadura han sido identificados en otras especies eucariotas, lo que
indica que las bases moleculares de este punto de control estn muy conservadas.Estos
componentes generan la seal de punto de control que emana de los cinetocoros para
prevenir la aparicin anafase hasta que todos los cromosomas forman los accesorios
bipolares adecuados a huso microtbulos. Deterioro de la SAC permite anafase inicio
precoz y aumenta significativamente la probabilidad para el cromosoma mala
segregacin, lo que significa que las mutaciones en los genes SAC pueden causar
CIN. El apoyo a esta vista proviene de aneuploida abigarrado mosaico, una enfermedad
extremadamente rara relacionado con mutaciones en el gen que codifica la quinasa
relacionada con Bub1 SAC protena (BubR1). Aneuploida abigarrado mosaico provoca
el retraso del crecimiento, microcefalia, cncer infantil, y con frecuencia resulta en la
muerte a una corta edad [ 30 , 31 ]. Separacin prematura de cromtidas hermanas se ve
a menudo en> 50% de los linfocitos de pacientes con aneuploida abigarrado mosaico, y
en muchos tejidos ms de 25% de las clulas son aneuploides; Presumiblemente, este
alto nivel de aneuploida contribuye a la elevacin de cncer en estos pacientes
[ 30 , 31 ]. Adems de la evidencia clnica, los datos experimentales muestran que las
clulas tumorales aneuploides con CIN no logran mantener detencin mittica cuando
se expone a los venenos del huso durante perodos prolongados, lo que resulta en un
ndice mittico inferior entre las clulas CIN y clulas diploides estables [ 32 ]. Esto
indica un fallo de la SAC para mantener la detencin en comparacin con lo que se ve
en las clulas normales. De hecho, se ha demostrado que algunas lneas de clulas
tumorales han disminuido los niveles de la protena SAC Mad2 [33 - 35 ], y se han
identificado mutaciones en algunas lneas celulares de cncer de colon en el gen que
codifica Bub1 [ 32 ], otra protena SAC, como as como en el gen Mad2 en una lnea
celular de cncer de mama y en mltiples lneas celulares tumorales de cncer gstrico
[ 36 , 37 ]. Finalmente, inducida experimentalmente delecin de una copia del gen

Mad2 en otra forma estable clulas de carcinoma de colon HCT116 diploide de

cromosomas aumentado mala segregacin [ 38 ].
Estos informes iniciales que vinculan a CIN defectuoso actividad SAC engendraron una
serie de experimentos utilizando modelos de ratn para probar si la aneuploida y CIN
contribuyen a la tumorignesis.Debido a ablacin completa SAC es letal para las clulas
cultivadas [ 9 , 10 ], no es de extraar que la delecin homocigtica de muchos genes
SAC, incluyendo Mad2, Mad1, Bub1, BubR1, y Bub3, son embriones letal en ratones
[ 39 - 43 ]. Sin embargo, los ratones heterocigotos para las mutaciones en genes
especficos SAC son viables. Estos animales desarrollan con normalidad, pero muestran
elevada cromosmicas tasas mala segregacin en comparacin con los animales control,
en consonancia con la actividad atenuada puesto de control. Muchos de estos animales
heterocigotos tienen una mayor incidencia de tumores tarde en la vida, aunque esto
depende de el gen que fue altamente orientados y tambin hay variabilidad en el tejido
afectado [ 38 , 40 , 41 , 44 ]. Por ejemplo, los ratones heterocigotos para las mutaciones
en Mad2 desarrollar tumores pulmonares espontneas despus de 18 meses [ 38 ], y los
ratones con alelos Bub1 hypomorphic mostrar un aumento en los carcinomas
hepatocelulares, adenocarcinomas de pulmn, sarcomas, linfomas y despus de 19
meses [ 41 ]. En contraste, los ratones heterocigotos para Bub1, BubR1, Bub3, o Rae1
no forman tumores espontneos [ 41 , 45 , 46 ], a pesar de tener niveles similares de
aneuploida en las clulas de bazo y los fibroblastos de embriones de ratn en
comparacin con otros ratones de punto de control deficiente que hacen obtener los
tumores. El hecho de que los tumores se observan en muchos de estos modelos de
ratones transgnicos sugiere que la aneuploida o CIN promueve la tumorignesis,
aunque el trabajo reciente muestra que la prdida de fidelidad mittico tambin puede
suprimir la tumorignesis dependiendo del contexto del tejido [ 47 ]. Suponiendo que
estos modelos animales han una frecuencia elevada de cromosoma mala segregacin
durante toda la vida, el tiempo transcurrido entre la aparicin del tumor y la aparicin de
aneuploida y CIN (que comienza en la embriognesis) - a menudo de 18 meses o ms sugieren que el cromosoma mala segregacin promueve la tumorignesis en las clulas
que han adquirido mutaciones adicionales. La prdida del cromosoma es un mecanismo
conocido para revelar mutaciones recesivas en genes supresores de tumores en tumores
humanos [ 48 ]. Es importante destacar que estos estudios en animales no distinguen
entre las distintas contribuciones de aneuploida (un estado de nmeros incorrectos de
los cromosomas) y CIN (una alta tasa de cromosoma mala segregacin) en la
promocin o la supresin de la tumorignesis porque ambos CIN y aneuploida son
inducidos en estos modelos.
A pesar de la evidencia mencionada anteriormente, el papel de deterioro puesto de
control en los numerosos casos de CIN sigue siendo un tema de debate. Cada vez es
ms aceptado que la mayora de las clulas cancerosas con CIN tienen un SAC
funcional. Por ejemplo, se inform ninguna diferencia entre las capacidades de las
clulas diploides y las clulas cancerosas con CIN para detener en la mitosis en

presencia de venenos del huso [ 49 ]. Por otra parte, la observacin directa de mltiples
lneas de clulas en mitosis CIN revel que no hay clulas entraron en la anafase antes
de la alineacin de todos los cromosomas [ 8 , 50]. En conjunto, estos resultados
proporcionan pruebas slidas de que el puesto de control en muchas lneas celulares
CIN est funcionando para prevenir la aparicin anafase hasta cinetocoros en todos los
cromosomas se unen a los microtbulos del huso. Recientemente se demostr que las
clulas con CIN tienen una mayor tasa de muerte durante la detencin prolongada en la
mitosis, proporcionando una explicacin razonable para la disminucin observada
previamente en el ndice mittico de las lneas celulares CIN [ 51 ], a pesar de las
diferencias en la respuesta a los frmacos microtbulos orientados entre las clulas con
CIN y MIN pueden no ser universales [ 50 , 52 ]. Por otra parte, la ablacin completa
del SAC es letal debido a la masiva cromosoma mala segregacin [ 9 , 10 ], y la
supuesta prdida de la funcin de la SAC en clulas CIN no encaja con el
comportamiento dominante de la NIC en los estudios de fusin celular [ 5 ] . Por ltimo,
no se encontraron mutaciones en los genes de punto de control cuando el ADN se
secuenci a partir de ms de 100 lneas celulares de cncer [ 19 ] o de cientos de
tumores de mltiples tejidos [ 25 - 29 ]. Tomados en conjunto, parece que las
mutaciones que erosionan funcin SAC son bastante raros en los tumores de CIN
humanos. Mientras que algunas clulas tumorales pueden tener una capacidad reducida
para mantener la mitosis durante perodos prolongados cuando es desafiado con
venenos del huso, la mayor parte de la evidencia indica que el SAC en la mayora de las
clulas cancerosas con CIN es funcional y evita la anafase precoz en condiciones de
crecimiento normales.
Los centrosomas supernumerarios

El anlisis directo de lneas de clulas tumorales humanas con CIN muestra que el
defecto ms comn mittico se est quedando cromosomas en la anafase
[ 8 ]. Cromosomas rezagados tambin se pueden observar durante la anafase en tumores
humanos, lo que indica que estos errores no son exclusivos de lneas celulares
cultivadas ( Figura 2 ). El examen de lneas celulares CIN utilizando celular fijo anlisis
muestra que este defecto mittica representa una cromtida que no segregar porque el
cinetocoro est unido al husillo microtbulos que estn orientados hacia los polos
opuestos del huso en una conformacin merotelic [ 8 ].Merotely slo es posible en las
clulas eucariotas, donde cinetocoros individuales se unen mltiples microtbulos y por
lo general se desfavorecido por la geometra de regreso a la parte posterior de los
cinetocoros hermanos [ 14 - 16 ]. Sin embargo, muchos cinetocoros convierten
merotelic en las primeras fases de la mitosis debido a la interaccin entre estocstico
cinetocoros y los microtbulos del huso [ 17 ]. La ocupacin de los microtbulos de
cinetocoros merotelic es equivalente a la de los cinetocoros de los cromosomas
correctamente biorientado, por lo que el SAC es apropiadamente satisfecho en presencia
de estos accesorios errneas [ 18 ]. Por lo tanto, es fundamental que los cinetocoros
merotelic corregirse antes de la anafase inicio para asegurar la segregacin de

cromosomas sin errores. De hecho, la incidencia de retraso cromosomas durante la

anafase aumentos en las clulas con actividad SAC atenuada, lo que sugiere que estas
clulas no tienen tiempo suficiente para corregir todos los archivos adjuntos merotelic
antes de la aparicin anafase.

Figura 2
los cromosomas menos en el melanoma humano
La prevalencia de los archivos adjuntos merotelic est determinada por dos tasas: la tasa
de su formacin y la tasa de su correccin ( Figura 3 ). Los tratamientos que alteran la
geometra del husillo aumentan significativamente la formacin de los archivos
adjuntos merotelic. Por ejemplo, las clulas mitticas se recupera de agentes
despolimerizacin de microtbulos, tales como nocodazol, proceder a travs de un
husillo intermedio multipolar que induce altas tasas de merotely y posteriores
cromosomas rezagados [ 17 ,53 , 54 ]. La recuperacin de los inhibidores de la protena
motora quinesina Eg5-5 proceder a travs de intermediarios del huso monopolar y del
mismo modo tienen niveles elevados de merotely y cromosomas rezagados en la
anafase [ 55 ]. Estos enfoques de recuperacin de drogas se han utilizado para demostrar
que CIN puede ser inducida en clulas de otro modo estables por transitoriamente
interrumpir la geometra del husillo para aumentar la prevalencia de merotely [ 8 ]. Las
clulas con ms de dos centrosomas a menudo se unen los centrosomas adicionales
durante la mitosis para asegurar que la anafase se produce con un huso bipolar [ 56 ]. Se
ha demostrado recientemente que los centrosomas adicionales inducen multipolar ejes
transitorios antes de la coalescencia de los centrosomas en husillos bipolares, y este
evento aumenta significativamente la incidencia de merotely y eleva las tasas de
cromosoma mala segregacin ( Figura 3 ) [11 , 57 ]. Esto proporciona una explicacin
sencilla para la correlacin de larga data entre los centrosomas adicionales y CIN en
muchas clulas tumorales. Un anlisis ms directa demostr que la induccin de
centrosomas adicionales en las clulas de otro modo cromosmicamente estables era
suficiente para elevar los cromosomas menos e inducir el cromosoma mala segregacin
a travs excesiva inducida por merotely multipolar ejes transitorios [ 11 ].

figura 3
La formacin y la correccin de los archivos adjuntos kinetochore-microtbulos
merotelic
Centrosomas adicionales se producen ya sea por la desregulacin del ciclo de
duplicacin del centrosoma o como un subproducto de las clulas que se convierten en

tetraploide. Por ejemplo, la amplificacin centrosoma se ha demostrado que surgir a

travs de la sobreexpresin de Aurora A quinasa [ 58 , 59 ] o una infeccin viral
[ 60 ]. Tetraploidia puede surgir a travs de la fusin celular inducida por virus [ 61 ], la
sobreexpresin de Eg5 [ 62 ], o el fracaso de la citocinesis. Tetraploidia es un precursor
probable que las clulas tumorales con cariotipos cerca-tetraploide y mucho tiempo se
ha planteado la hiptesis de que es un precursor de aneuploida ya que se encuentra
antes de la aneuploida bruto en tumores tempranos en el esfago de Barrett y cncer
cervical [ 63 , 64 ], y p53- clulas deficientes tetraploides (pero las clulas diploides no
deficientes en p53) forman tumores cuando se inyectan en ratones
inmunocomprometidos [ 65 ].Desde tetraploidia de generacin de mecanismos tambin
como resultado la presencia de centrosomas adicionales, es probable que las clulas
tetraploides son altamente propensos a tener CIN. Tomados en conjunto, parece que una
ruta comn a CIN puede ser a travs de la adquisicin de los centrosomas adicionales
que aumentan significativamente la tasa de formacin de los archivos adjuntos del
cinetocoro merotelic. Presumiblemente, los niveles de merotely en estas situaciones
exceden la capacidad de la maquinaria de correccin para reparar eficientemente ellos
antes de la aparicin anafase.
Los defectos en la dinmica de fijacin cinetocoro microtbulos

Unin de los microtbulos a cinetocoros es reversible [ 66 ] y la etapa limitante de la

velocidad en la correccin de los archivos adjuntos kinetochore-microtbulos errneas
es la liberacin de los microtbulos del cinetocoro [ 67 ]. La asociacin repetida y la
disociacin de los microtbulos individuales de cinetocoros genera un archivo adjunto
de kinetochore-microtbulos dinmica que es necesario promover la correccin de
errores. El gran nmero de microtbulos unidos a cada cinetocoro asegura que los
cromosomas permanecen atados al husillo microtbulos a pesar de la continua
asociacin / disociacin de microtbulos individuales.La facturacin dinmica de
archivos adjuntos kinetochore-microtbulos se ha medido en diversas lneas celulares y
es rpido en la mitosis temprana (t 1/2 = 2-3 minutos), disminuye a medida que los
cromosomas se alinean en la metafase (t 1/2 = 5-7 minutos) y ralentiza an ms cuando
las clulas entran en la anafase (t 1/2= 50 minutos) [ 67 - 69 ]. Por lo tanto, la estabilidad
kinetochore- unin de los microtbulos se regula en un rango muy estrecho durante las
diferentes fases de la mitosis, particularmente en la etapa crucial entre prometaphase y
metafase cuando muchos archivos adjuntos errneos deben ser corregidos.
La maquinaria molecular implicada en la regulacin de la dinmica de los microtbulos
de unin kinetochore- est empezando a surgir. La Aurora B quinasa centrmerolocalizado es un controlador central de este proceso ya que la inhibicin de esta quinasa
hace que la unin de los microtbulos a los cinetocoros prcticamente irreversible
[ 69 , 70 ]. Entre los muchos objetivos centrmero y / o kinetochore de Aurora B
quinasa son el complejo Ndc80, que se requiere para la unin de los microtbulos del
cinetocoro-, y miembros de la familia kinesin-13 de enzimas microtbulos

despolimerizacin de [ 67 , 71 - 73 ]. La prdida de la funcin del complejo Ndc80

elimina virtualmente adjuntos kinetochore-microtbulos estables, lo que indica que
desempea un papel clave en la kinetochore-microtbulos de unin [ 74 , 75 ]. Por el
contrario, la prdida de la funcin de Kinesin-13 protenas, tales como Kif2b y MCAK,
se traduce en tasas ms altas de los cromosomas menos, demostrando que son
instrumentales en la correccin de los archivos adjuntos errneas kinetochoremicrotbulos [ 67 , 76 - 78 ]. Dos de los tres miembros de la subfamilia quinesina-13
tienen la superposicin de responsabilidades en este papel en las clulas humanas. Kif2b
localiza a cinetocoros exteriores y desestabiliza adjuntos kinetochore-microtbulos en
prometaphase [ 67 , 79 ]. Este papel parece ser crtica para corregir los numerosos
adjuntos errneas kinetochore-microtbulos que surgen en prometaphase. A la inversa,
MCAK localiza en centrmeros y desestabiliza adjuntos microtbulos kinetochorepredominantemente durante la metafase [ 67 , 79 ], que parece ser esencial para evitar la
formacin de nuevos archivos adjuntos merotelic una vez que los cromosomas se han
alineado en el eje.
La evidencia indica que la tensin generada entre los cinetocoros hermanos regula estos
mecanismos de correccin. Aurora B quinasa genera un gradiente de fosforilacin que
emana del centrmero interno [ 80 ,81 ] que influye tanto en la localizacin y
actividades de MCAK y Kif2b. Con pocos accesorios microtbulos en la mitosis
temprana, la tensin entre los cinetocoros hermanos es bajo y el gradiente de
fosforilacin se extiende a suprimir la actividad MCAK y reclutar Kif2b a cinetocoros
exteriores. Como los cromosomas biorient, la tensin crece entre los cinetocoros
hermanos y cambia la posicin de las protenas diana de los lmites del gradiente de
fosforilacin. Esto resulta en la liberacin de Kif2b de los cinetocoros y la activacin de
MCAK [ 67 , 71 , 82 ]. En consecuencia, la alteracin de los lmites espaciales de este
gradiente de la fosforilacin mediante el reposicionamiento de Aurora B quinasa cerca
del cinetocoro desestabiliza fuertemente adjuntos kinetochore-microtbulos y evita que
el inicio de la anafase [ 81 ]. Estos (y probablemente otros cambios moleculares) se
reflejan en la estabilizacin de los microtbulos-kinetochore archivos adjuntos como
clulas progresan de prometaphase de metafase y, presumiblemente, en la anafase.Una
pregunta que queda es si los cambios en la dinmica de fijacin indiscriminados
kinetochore-microtbulos que se producen durante estas transiciones mitticas son
suficientes para la correccin de errores eficiente [ 67 ] o si los archivos adjuntos del
cinetocoro errneos se reconocen de forma nica por la maquinaria celular para
promover su correccin [ 55 ].
La gama estrecha para la regulacin de la dinmica de los microtbulos del cinetocorocomo las clulas progresan a travs de la mitosis hace que sea un objetivo sensible para
la interrupcin de la fidelidad mittico.Insultos que desestabilizan adjuntos kinetochoremicrotbulos, tales como el reposicionamiento de Aurora B quinasa se describe
anteriormente [ 81 ], significan que la satisfaccin del puesto de control y la progresin
en la anafase son imposible porque cinetocoros nunca alcanzan suficiente ocupacin de

los microtbulos. Por el contrario, los insultos que estabilizan adjuntos kinetochoremicrotbulos impediran correccin eficiente de errores de fijacin (mediada por la
liberacin de los microtbulos inapropiadamente adjuntos) y promover cromosoma
mala segregacin. En consecuencia, se ha demostrado recientemente que los archivos
adjuntos kinetochore-microtbulos son ms estables en las clulas tumorales con CIN
que en una lnea celular diploide cromosmicamente estable [ 83 ]. Las clulas
cancerosas CIN muestran los archivos adjuntos kinetochore-microtbulos hiperestables
en prometaphase, o metafase, o ambos, y esto no depende de la cantidad de centrosomas
presentes, lo que indica que las lneas celulares analizadas tienen un defecto inherente
en la correccin de los archivos adjuntos kinetochore-microtbulos errneas. Por otra
parte, la sobreexpresin de los microtbulos kinesin-13 despolimerasas MCAK y Kif2b
reduce kinetochore- estabilidad de unin de microtbulos y restaur la segregacin
cromosmica fiel a las clulas cancerosas que de otra manera mostraban CIN
[ 67 ]. Este es el nico ejemplo en el que la fidelidad segregacin cromosmica se ha
restablecido a las clulas cancerosas que tienen CIN y proporciona pruebas
concluyentes de que los archivos adjuntos kinetochore-microtbulos excesivamente
estables son la causa fundamental de la NIC en muchas clulas cancerosas.
La lista de centrmero / kinetochore protenas cuya perturbacin reduce la fidelidad de
segregacin debido a la elevacin de los microtbulos kinetochore- mala fijacin est
creciendo rpidamente. La perturbacin de muchos de estos (Kif2b [ 67 ], MCAK
[ 76 , 77 ], CENP-E [ 84 , 85 ], CENP-F [ 86 ], el Ndc80 complejo [73 , 87 ], Aurora B
[ 55 , 69 , 70 ], Sgo2 [ 88 ], Mps1 [ 89 ], corchetes [ 84 , 90 ], Ndel1 [ 91 ], y APC
[ 83 ,92 - 94 ]) se ha demostrado que elevar la frecuencia de merotely y el retraso
cromosomas en la anafase. De esto se deduce que los archivos adjuntos kinetochoremicrotbulos se hacen excesivamente estable sobre la perturbacin de estas protenas y
esto a su vez reduce la eficiencia de la correccin de los archivos adjuntos kinetochoremicrotbulos errneas que conducen a CIN. Esta inferencia se ha verificado en varios
casos.Como se mencion anteriormente, la perturbacin de cualquiera de Aurora B o
actividad MCAK estabiliza los microtbulos adjuntos kinetochore- y aumenta el
nmero de cromosomas rezagados en la anafase [ 69 ,70 , 95 ]. Por otra parte, APC es
frecuentemente mutado en el cncer de colon y clulas con mutaciones en APC
muestran altas tasas de cromosomas rezagados en la anafase [ 92 - 94 ]. Se ha
demostrado recientemente que el agotamiento de APC aumenta la estabilidad de los
microtbulos del cinetocoro-y cromosomas rezagados inducidos en las clulas diploides
de otro modo estable, y este defecto fue rescatado por la sobreexpresin concomitante
de protenas que promueven la dinmica de los microtbulos del cinetocoro[ 83 ]. Adems, el agotamiento de CENP-E estabiliza adjuntos kinetochoremicrotbulos [ 84 ] y hemos observado un aumento consiguiente de retraso cromosomas
en la anafase en las clulas HCT116 humanos que carecen de CENP-E (SLT y DAC,
observaciones no publicadas).

A pesar de esta evidencia celular, el nico gen de la lista anterior para los que las
mutaciones se han observado directamente en las frecuencias altas en los tumores es
APC y mutaciones en otros son bastante raras (Aurora B [ 28 ] y los corchetes [ 26 ]) o
no se detecta en absoluto [ 25 de - 29 de ]. Sin embargo, no se espera que las
mutaciones de prdida de funcin en funcin del comportamiento dominante de la NIC
en los experimentos de fusin celular, y no hay evidencia de un efecto dominante de
mutaciones en APC [ 5 , 96 ,97 ]. Por lo tanto, un escenario ms probable es que los
desequilibrios en los niveles de estas protenas actan predominantemente para
estabilizar adjuntos kinetochore-microtbulos ms all de un cierto umbral, que
conduce a deficiencias en la correccin de errores y el cromosoma mala
segregacin. Estos desequilibrios en los niveles de protena podran ser generados por
un evento inicial cromosoma mala segregacin o por mecanismos epigenticos. La idea
de que los desequilibrios de protenas inducen CIN se ha propuesto con anterioridad en
base a la consistencia con la que inducido qumicamente asociados con la
transformacin de aneuploida y CIN en clulas de hmster en cultivo [ 98 , 99 ]. Este
punto de vista se ve apoyada por los experimentos que muestran que la sobreexpresin
de Hec1, un componente del complejo Ndc80, provoca altos niveles de cromosomas
menos y puentes de la cromatina en clulas de ratn y puede inducir tumores
[87 ]. Sobreexpresin Mad2 tambin aumenta la frecuencia de retraso cromosomas en la
anafase y puede aumentar la tasa de formacin de tumores espontneos [ 100 ]. Adems,
los datos recientes muestran una variabilidad sustancial en los niveles de protenas
mitticos que participan en la dinmica de los microtbulos del cinetocoro-en las
clulas tumorales en comparacin con las clulas diploides estables [ 83 ]. Por
consiguiente, cuando las clulas diploides se vuelven tolerantes para un genoma no
diploide a travs de la prdida de p53, muestran CIN siguiente eventos cromosoma mala
segregacin iniciales [ 101 ], lo que demuestra que la perturbacin de contenido
cromosmico (y por tanto una gran cantidad de niveles de transcripcin) pueden tener
un efecto cclico en la conduccin de un estado perpetuo de la NIC. Este punto de vista
es contrario a los datos iniciales que muestran que la trisoma 3 fue insuficiente para
inducir [CIN 5 ], pero esta trisoma en particular puede no puede haber surgido de
desequilibrio kinetochore-microtbulos dinmica de fijacin y otros cambios
compensatorios. Se desconoce si los archivos adjuntos kinetochore-microtbulos son,
en efecto estabilizadas por protenas desequilibrios que surgen de espontnea
cromosoma mala segregacin. Sin embargo, una imagen clara ha surgido que puede
explicar por qu los cromosomas rezagados son la causa ms comnmente observados
de CIN en clulas de cncer: la gama relativamente estrecha aceptable de la dinmica
kinetochore-microtbulos necesarios para la mitosis libre de errores, que se acopla a la
gran cantidad de dianas proteicas disponibles que podran interrumpir esta dinmica,
hace CIN que causan alteraciones altamente probable.
Los defectos en el Reglamento del ciclo celular

Adems de las protenas que funcionan directamente en el proceso de segregacin de

los cromosomas durante la mitosis, hay numerosos reguladores del ciclo celular que se
han asociado con CIN (incluyendo BRCA1 y BRCA2 [ 102 ], Rb [ 103 ], hCDC4
[ 104 ], ciclina E [ 105 ], FoxM1 [ 106 , 107 ], p53 [ 101 ,108 ], REST [ 109 ], Von
Hippel Lindau [ 110 ], Kruppel como factor de [ 111 ], Mdm2 [ 112 ], MDMX [113 ], y
RanBP1 [ 114 ]). El papel exacto que muchos de estos reguladores del ciclo celular
juegan en la induccin de la NIC no est clara, pero tres vas generales son posibles. En
primer lugar, estos reguladores del ciclo celular conocidas pueden participar
directamente en el apoyo a la segregacin cromosmica durante la mitosis fidelidad en
papeles que no haban sido reconocidos previamente. En segundo lugar, la
desregulacin de los eventos del ciclo celular fuera de la fase M (por ejemplo, la
duplicacin del centrosoma durante la fase S) puede promover indirectamente
cromosoma mala segregacin durante la mitosis siguiente.Por ltimo, la alteracin de
los puntos de control del ciclo celular puede permitir que las clulas que tienen
cromosomas mis-segregadas para seguir la progresin del ciclo celular. En los prrafos
siguientes se resumen los datos que destacan cmo algunas de estas protenas
reguladoras del ciclo celular participan en la generacin de la NIC. Hemos seleccionado
estos ejemplos particulares simplemente hacer hincapi en los principios generales de
cmo la desregulacin del ciclo celular puede conducir a la NIC.
hCDC4 (tambin llamada Fbw7) es una ubiquitina ligasa E3 que se dirige a la ciclina E
para la degradacin y por lo tanto regula el G1-S del ciclo celular transicin
[ 104 ]. hCDC4 est mutado en muchos tipos de cncer, incluyendo el ~ 12% de los
cnceres colorrectales [ 104 ]. Knockout homocigticas de hCDC4 en clulas HCT116
de otro modo cromosmicamente estables genera CIN, que puede ser mejorado por el
agotamiento de la ciclina E, lo que indica que los defectos mitticos se crean a travs de
la actividad de ciclina E-Cdk exagerada [ 104 ]. Ciclina E regula la duplicacin del
centrosoma durante el ciclo celular [ 115, 116 ] y los centrosomas adicionales promover
CIN mediante el aumento de la frecuencia de los archivos adjuntos del cinetocoro
merotelic, proporcionando un enlace mecnico entre los niveles de ciclina E y CIN.Sin
embargo, el papel de las mutaciones en hCDC4 CIN es an objeto de debate [ 117 ], y
no parece ocurrir con ms frecuencia en los tumores en comparacin con el CIN,
tumores MIN cromosmicamente estables [mutaciones en hCDC4 118 ].
Reguladores del ciclo celular tambin controlan los niveles de componentes de la
SAC. Por ejemplo, represor-element-1-silenciar factor de transcripcin (REST) es un
represor transcripcional que debe ser degradado para permitir la transcripcin del gen
Mad2 [ 109 ]. Destruccin oportuna de descanso en la fase G2 del ciclo celular est
mediada por la ligasa E3 -TrCP. La expresin de un mutante REST que no
interacciona con los resultados? -TrCP En los niveles bajos de Mad2 que conducen a
defectos de segregacin de los cromosomas en la mitosis similar a los observados en los
heterocigotos Mad2 [ 109 ]. Otro ejemplo es la protena supresora de tumores Rb. Rb
regula el activador transcripcional E2F [ 103 ]. Uno de los objetivos de la activacin de

la transcripcin E2F es el gen Mad2 y la prdida de los resultados de RB en la

sobreexpresin de Mad2, que ha demostrado inducir CIN [ 100 , 103 ].
Finalmente, FoxM1 es un regulador del ciclo celular que se ha asociado con CIN: 80%
de fibroblastos de embrin de ratn que carecen de FoxM1 son aneuploides en
comparacin con 20% de los controles de tipo salvaje [ 106 ]. Clulas U2OS humanas
agotadas de FoxM1 tienen mltiples problemas, ya que entrar en anafase con
cromosomas no alineados, tienen un alto nmero de los cromosomas menos, ya menudo
fallan en la citocinesis [ 106 ]. Adems, FoxM1 sobreexpresin se ha informado en las
lneas de clulas tumorales con CIN [ 107 ]. FoxM1 activa la transcripcin de muchas
protenas mittico, incluyendo la ciclina B, CENP-F, y PLK 1 [ 106 ]. Por lo tanto, la
prdida de FoxM1 puede causar CIN mediante la alteracin de la expresin de una o
ms de estas protenas mitticas o mediante la creacin de desequilibrios en las
protenas mitticas que interrumpen la progresin mittica normal.
Ir:
CIN como un objetivo para la terapia del cncer
CIN en los tumores se asocia con un mal pronstico del paciente [ 119 - 121 ] y
contribuye a la evolucin del tumor a travs de la adquisicin de potencial metastsico y
la resistencia a algunos agentes quimioteraputicos [ 52 , 122 , 123 ]. A travs de
barajado persistente cromosoma, las clulas tumorales con CIN muestrean
continuamente el paisaje gentico con un nmero casi ilimitado de combinaciones,
basado en pruebas en las clulas de vertebrados que todos los cromosomas tienen una
probabilidad igual para la mala segregacin [ 124 ]. Mientras que algunas
combinaciones de cromosomas pueden proporcionar ninguna ventaja selectiva o una
desventaja, otros podran proporcionar ventajas de crecimiento a las clulas en el
microambiente tumoral, en particular bajo la presin selectiva aplicada por la
quimioterapia. En este contexto, CIN proporciona clulas tumorales con capacidad de
adaptacin que les permite adquirir nuevos fenotipos, tales como resistencia a los
medicamentos. Por lo tanto, puede resultar teraputicamente beneficiosa para suprimir
CIN y eliminar as la capacidad de adaptacin de las clulas tumorales. Supresin de
CIN a travs de la sobreexpresin de MCAK y Kif2b proporciona una prueba de
principio de que la CIN puede ser suprimida en las clulas tumorales [ 67 ], y esta calle
podra ser explotado para prevenir la adquisicin de resistencia a la quimioterapia
convencional.
Una estrategia alternativa sera promover intencionadamente cromosoma mala
segregacin. A diferencia de las clulas tumorales aneuploides, las clulas diploides no
pueden propagar de manera eficiente siguiente cromosoma mala segregacin [ 8 ]. Una
va molecular que limita el crecimiento de las clulas diploides siguientes cromosoma
mala segregacin implica p53 [ 101 ] y sirve para poner de relieve que las clulas
tumorales aneuploides han adquirido tolerancia para los genomas no diploides. Esta

tolerancia permite que se propagan de manera eficiente, ya que constantemente missegregar los cromosomas individuales a tasas elevadas en asociacin con la NIC. Sin
embargo, la tolerancia est limitada porque las clulas tumorales aneuploides mueren
cuando un gran nmero de cromosomas mis-segregan en un solo ciclo de divisin
celular. Surgen tales cambios masivos de cromosomas cuando se suprima el SAC
[ 9 , 10 ] o cuando las clulas progresan a travs de una anafase multipolar inducida por
centrosomas adicionales [ 11 ]. Por lo tanto, las estrategias que elevan cromosoma mala
segregacin all de los niveles tolerables podran ser teraputicamente beneficioso. Un
enfoque obvio para esto sera que se suprime la SAC en las clulas tumorales, y una
variacin de este tema incluye la inhibicin parcial del puesto de control junto con los
tratamientos que alteran la segregacin cromosmica adecuada [ 125 ]. Otro enfoque
implicara la induccin de la anafase multipolar letal en las clulas tumorales que llevan
centrosomas adicionales por la orientacin protenas implicadas en la agrupacin
centrosoma (por ejemplo, el motor quinesina-14 PONH). Prueba de principio para esta
estrategia viene del trabajo reciente que muestra que la anafase multipolar es inducido
por el agotamiento de PONH [ 11 ] y que los inhibidores de Cdk2 suprimir el
crecimiento de tumores de pulmn que sobreexpresan ciclina E mediante la induccin
de anafases multipolares [ 126 ].
Ir:
conclusiones
En resumen, las investigaciones sobre los mecanismos bsicos de la segregacin
cromosmica han revelado muchos defectos cromosmicos que aumentan las tasas de
mala segregacin y causan CIN. Estas ideas proporcionan las herramientas para
manipular directamente la frecuencia del cromosoma mala segregacin en las clulas
tumorales para inducir o suprimir la NIC. Es importante destacar que estas herramientas
ser de gran valor en la determinacin de cmo CIN, independientemente de
aneuploida, contribuye a la tumorignesis y podra ser utilizado teraputicamente para
limitar el crecimiento del tumor.