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Petrolina, PE
Dezembro, 2009
Autor
Mirtes Freitas Lima
Eng. agrn., Ph.D., Pesquisadora Embrapa Semirido.
E-mail:
mflima@cnph.embrapa.br
Tabela 1. Doenas de origem viral mais frequentes em videira no Brasil, seus agentes etiolgicos e plantas
indicadoras utilizadas na indexao biolgica.
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frequentemente detectados.
b) A malformao infecciosa ou doena dos entrens
curtos, causada pelo Grapevine fanleaf virus (GFLV),
foi uma das primeiras viroses descritas em videira,
podendo afetar os porta-enxertos americanos e outras
espcies de Vitis e/ou hbridos. Os sintomas podem ser
diferenciados em mosaico amarelo (Figura 2), folha em
leque e faixa das nervuras, dependendo da estirpe do
vrus. O GFLV disseminado por nematides do gnero
Xiphinema, destacando-se as espcies X. index e X.
italiae, as quais podem reter o vrus por at 8 meses na
ausncia de plantas hospedeiras (MARTELLI, 1986;
MARTELLI; SAVINO, 1994).
Quando videiras velhas e infectadas pelo GFLV so
eliminadas, parte de suas razes que ainda permanecem
no solo por muitos anos, constituem os reservatrios do
vrus que pode ser transmitido pelos nematides vetores.
No Brasil, as espcies X. americanum (=X. brevicolle), X.
index, X. brasiliensis e X. krugi j foram identificadas em
videiras (KUHN; FAJARDO, 2003). Entretanto, no h
informaes sobre a incidncia desses nematides, assim
como no h informaes sobre o seu papel como
agentes disseminadores de vrus, em parreirais do Pas.
Nas razes de videira, os nematides podem ser disseminados pelo solo, gua e por meio de prticas culturais
realizadas dentro do parreiral. Naturalmente, o GFLV
infecta apenas a videira (Vitis spp.), entretanto,
experimentalmente, pode ser transmitido pela frico do
extrato de plantas infectadas em folhas de plantas
herbceas dos gneros Chenopodium, Gomphrena e
Cucumis, utilizadas na diagnose da malformao
infecciosa.
Figura 4. Sintomas de
caneluras no cilindro
lenhoso de videira.
Mtodos Biolgicos
A diagnose de viroses em videiras era realizada
apenas por meio dos testes biolgicos, que so
trabalhosos e demandam muito tempo para a
obteno dos resultados. Entretanto, o
desenvolvimento dos mtodos sorolgicos e,
posteriormente, dos mtodos moleculares, viabilizaram
a identificao desses patgenos em material
propagativo infectado de forma rpida e acurada,
prevenindo a sua disseminao por meio de mudas e
gemas, garantindo a movimentao do material
propagativo de forma mais segura. Ainda hoje, os
mtodos biolgicos e os sorolgicos so considerados
os mais tradicionais, constituindo-se em ferramentas
Mtodos Sorolgicos
A sorologia apresenta diversos mtodos para deteco
viral que se caracterizam pelo emprego de anticorpos
especficos capazes de reconhecer protenas
capsidiais. Um dos mtodos sorolgicos mais comuns
para deteco de vrus em material vegetal e insetos
vetores o ELISA (Enzyme-linked immunosorbent
assay), utilizado na deteco de vrus em plantas pela
primeira vez por Clark e Adams (1977). Neste, os
anticorpos produzidos contra a protena capsidial de
um determinado vrus so empregados na sua
deteco (Figura 6). Nesta reao, extratos preparados pela macerao de tecido vegetal infectado em
tampo so utilizados como antgeno.
No teste dot-blot ou dot-ELISA, o extrato das amostras
fixado em membrana de nitrocelulose, ao contrrio do
ELISA tradicional, no qual as amostras so depositadas em
poos de placas de microtitulao. Alm
desta diferena, sistemas distintos de
substrato/enzima so usados nas
reaes.
Figura 5.
a Indexao em plantas lenhosas por enxertia. Corte realizado na muda do
porta-enxerto (a) para encaixe da gema do material a ser testado (b).
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Mtodos Moleculares
Dentre os mtodos moleculares, ou seja, aqueles
baseados na deteco do cido nucleico, a transcrio
reversa associada reao em cadeia da polimerase
(RT-PCR) (MULLIS et al., 1986) o mais utilizado. Os
vrus anteriormente citados podem ser identificados
por meio desta tcnica. A RT-PCR baseia-se na
amplificao e deteco do material gentico do vrus
de RNA ou apenas PCR, no caso de DNA, em
amostras vegetais infectadas. Neste mtodo, pelo
menos parte da sequncia do genoma do vrus a ser
detectado, precisa ser conhecida para dar origem
aos oligonucleotdeos que sero utilizados na reao.
O processo envolve as enzimas transcriptase reversa
e Taq DNA polimerase e a reao automatizada pela
incubao em um termociclador programado para
executar a transcrio reversa do RNA em DNA
complementar e os mltiplos ciclos da PCR, que visam
produo de um grande nmero de cpias do
fragmento alvo deste DNA. Dessa forma, a
amplificao seletiva de um fragmento do genoma do
vrus, compreendido entre dois oligonucleotdeos,
realizada a partir do RNA do vrus utilizado como
molde. Vale ressaltar que mais de 90% dos vrus de
plantas e todos os que infectam a videira possuem
RNA como material gentico.
O preparo do extrato da planta infectada a ser
utilizado na RT-PCR muito importante, tendo em
vista que os tecidos da videira contm altas
concentraes de polissacardeos e de compostos
fenlicos que podem inibir a ao das enzimas
utilizadas na PCR. A vantagem deste mtodo a sua
alta sensibilidade, isto , mesmo que o patgeno
esteja presente na amostra vegetal em pequenas
quantidades, a amplificao pela PCR propicia a sua
deteco. Os produtos da reao so visualizados por
meio de eletroforese em um gel de agarose. O
emprego de brometo de etdeo, corante mais
recomendado e utilizado, forma um complexo com o
Seleo Sanitria
A aquisio e o plantio de mudas certificadas, livres de
vrus, de fundamental importncia no estabelecimento
de novas reas, pois, esta medida diminui o risco da
introduo desses patgenos no parreiral e, assim, reduz a
sua disseminao via material propagativo infectado. A
qualidade sanitria do material propagativo a ser utilizado
na produo de mudas primordial, e a seleo sanitria
constitui a primeira etapa desse processo.
As estacas enraizadas e as gemas devem ser originadas de
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Controle de Vetores
No Brasil, so escassas as informaes disponveis
sobre as espcies de cochonilhas presentes nas
principais regies vitcolas e a magnitude de atuao
destas como vetores de vrus. Apesar disso,
recomenda-se que o seu controle seja feito no
parreiral considerando, principalmente, se so vetores,
esto virulferos e podem transmitir vrus para plantas
sadias. Segundo Botton e Fajardo (2003), algumas das
espcies j identificadas em parreirais brasileiros so
Pseudococcus viburni, P. vitis, P. longispinus e
Planococcus citri. Ainda de acordo com Botton e
Fajardo (2003), o controle desses insetos ainda uma
prtica pouco frequente, pois as cochonilhas so
difceis de serem observadas e permanecem no solo
ou sob a casca das videiras grande parte do tempo.
Dessa maneira, o estabelecimento de medidas
racionais essencial, a exemplo do monitoramento do
vetor em campo para deteco dos focos de
infestao, como tambm, do perodo de migrao das
ninfas do solo para a parte area das plantas
(BOTTON; FAJARDO, 2003).
A realizao de inspees rotineiras - monitoramento dos parreirais para deteco de pragas constitui a
base do Manejo Integrado de Pragas (MIP), que um
dos componentes mais importantes da Produo
Integrada da Uva (PI-Uva) (LOPES et al., 2009). Estas
visam dar suporte definio do melhor momento
para a utilizao do controle qumico, na tentativa de
reduzir a disseminao da doena quando esta
encontra-se estabelecida no parreiral.
No caso do GFLV que transmitido por nematides,
videiras infectadas devem ser eliminadas e as razes
remanescentes no solo devem ser arrancadas e
destrudas, sendo que o replantio de mudas de videira
em solo infestado com nematides, no deve ser
efetuado imediatamente; somente aps um perodo de
10 anos (MARTELLI; SAVINO, 1994). Nestas reas e
naquelas ainda no implantadas, mtodos como o
pousio prolongado, a eliminao de plantas daninhas e a
Agradecimentos
Referncias
ANURIO BRASILEIRO DA FRUTICULTURA: brazilian fruit
yearbook. Santa Cruz do Sul: Gazeta Santa Cruz, 2006. 136 p.
BOTTON, M.; FAJARDO, T. V. M.; MORANDI FILHO, W. J.;
GRUTZMACHER, A. D.; PRADO, E. Vetor encoberto,
cochonilhas algodonosas em uva. Revista Cultivar Hortalias
e Frutas, Pelotas, v. 7, p. 28-29, 2003.
CLARK, M. F.; ADAMS, A. N. Characteristics of the microplate
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GOHEEN, A. C. Virus and virus-like diseases of grapes.
HortScience, Alexandria, v. 12, n. 5, p. 465-469, 1977.
HAMMOND, J. Western blotting and the use of membranes
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HAMPTON, R.; BALL, E.; BOER, S. de (Ed.). Serological
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2009.
Circular
Tcnica, 90
Comit de
publicaes
Expediente
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