Avances en Ciencias Veterinarias V28 N 2 2013

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Encapsulacin de Biomolculas Usando Polmeros Naturales:

Un Nuevo Enfoque en la Entrega de Frmacos en Medicina
Dr. Andrnico Neira-Carrillo1 (BQ; PhD), Diego Yez Muoz 1 (DVM), Paula Aguirre
Zazzali1 (DVM), Yazmn Amar Marini1 (DVM), Sonia Vidal Vilches1 (IBM), Rodrigo Egaa
Palma1 (DVM).
1

Laboratorios de Materiales Bio-relacionados (CIMAT) y Sntesis y Caracterizacin de Polmeros

Funcionalizados y Biomolculas (POLYFORMS), Departamento de Ciencias Biolgicas Animales,
Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias, Universidad de Chile. Avda. Santa Rosa 11.735, La
Pintana, Santiago, Chile.
Email: aneira@uchile.cl
Resumen
El uso de polmeros naturales en el rea biomdica ha sido empleado por dcadas en diferentes aplicaciones. En
este artculo se destaca la importancia del desarrollo de la formulacin de micropartculas como un nuevo sistema de
entrega de frmacos, agentes encapsulantes de drogas, clulas, tejidos y/o diversas biomolculas, sus perspectivas como
futuros biomateriales y sistemas de liberacin controlada de frmacos. Estas propiedades se basan en las mltiples y
favorables propiedades que poseen los polmeros naturales dentro de las cuales destaca la biocompatibilidad,
biodegradabilidad y ausencia de toxicidad, entre otras. Presentamos un resumen de resultados parciales obtenidos por
algunos estudiantes durante sus memorias de ttulo de pregrado y/o tesis de posgrado desarrollados en los laboratorios de
Materiales Bio-relacionados (CIMAT) y de Sntesis y Caracterizacin de Polmeros Funcionalizados y Biomolculas
(POLYFORMS) de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile.
Palabras clave: Polmeros naturales, quitosano, alginato, micropartculas, encapsulacin.

1. Introduccin
os polmeros son macromolculas formadas
por cientos o miles de unidades bsicas funcionales
denominadas monmeros. Los polmeros pueden ser de
naturaleza sinttica, artificial y/o natural; estos ltimos,
provenientes directamente del reino animal o vegetal,
presentan variadas propiedades y usos, destacndose en
el sector farmacutico, agrcola, alimenticio y textil. En
los ltimos aos, los polmeros naturales o biopolmeros
han adquirido gran importancia en el rea biomdica,
especialmente en el desarrollo de nuevas terapias
celulares (Caban y cols. 2011), donde se utilizan para
proteger y contener clulas y/o tejidos viables en
membranas semipermeables o como agentes

encapsulantes y transportadores de diversos frmacos y

principios activos.
Un polmero es apto para cumplir estas funciones
cuando rene ciertas caractersticas tales como:
biocompatibilidad,
biodegradabilidad,
resistencia
mecnica, estabilidad qumica, baja toxicidad, etc. Estas
propiedades fsico-qumicas en conjunto con la
aprobacin por la Administracin de Alimentos y
Frmacos de los Estados Unidos de Amrica (FDA, por
su sigla en ingls) han permitido en la ltima dcada un
aumento en la tendencia de la encapsulacin utilizando
polmeros naturales. Entre la gran gama de polmeros
naturales existentes y utilizados, dos destacan por sus
caractersticas, usos y su potencial: el quitosano y el
alginato.

Andrnico Neira-Carrillo et al, 2013.

El quitosano es un biopolmero catinico lineal obtenido

por la desacetilacin parcial de la quitina mediante
hidrlisis alcalina a altas temperaturas. La quitina,
segundo biopolmero en abundancia despus de la
celulosa a nivel mundial, es un polisacrido estructural
del exoesqueleto de los crustceos, presente tambin en
insectos, hongos, levaduras y moluscos. El quitosano
posee un nmero variado de aplicaciones en diversas
reas, especialmente en el rea biomdica, dada su alta
biocompatibilidad y baja toxicidad (Mena y cols. 2013,
Fernndez y cols. 2012, Alburquenque y cols. 2010,
Senz y cols. 2009, Neira-Carrillo y cols. 2008, Gmez
y cols. 2006, Neira-Carrillo y cols. 2005).
Por su parte, los alginatos son sales copolimricas de
cido algnico, un polisacrido natural formado por
cadenas lineales constituidas por dos unidades
repetitivas agrupadas en bloques derivadas de los cidos
-L-gulurnico (G) y -D-manurnico (M) unidos por
enlaces y (14) glucosdicos, proveniente de
especies de algas marinas pardas como: Laminaria
hyperborean, Ascophyllum nodosum y Macrocystis
pirifera. La importancia de los alginatos viene dada por
su capacidad para formar hidrocoloides, es decir la
capacidad de hidratarse en agua caliente o fra dando
lugar a soluciones muy viscosas, dispersiones o geles.
Luego, son muy tiles como espesantes, estabilizantes,
gelificantes y formadoras de pelculas. Una de las
principales caractersticas del alginato es su naturaleza
aninica, es decir, presenta numerosos grupos qumicos
cargados negativamente, los cuales le permiten formar
geles en presencia de cationes divalentes como: calcio,
bario y estroncio. En los ltimos aos, los alginatos han
sido estudiados en diferentes campos de aplicacin, tales
como: sistemas para la liberacin de frmacos, remocin
de metales pesados, biomineralizacin de carbonato
clcico, entre otros. Recientemente, en nuestro
Laboratorio se ha extrado y purificado alginato desde
dos algas marinas presentes en Chile: Lessonia
nigrescens y Lessonia trabeculata (Egaa 2013).
Resultados preliminares de encapsulacin usando
esferas de alginato purificado desde L. nigrescens con
tejido humano trasplantado de glndula paratiroides
(TGPTTh) mostraron excelentes resultados de
proliferacin celular (viabilidad celular) y de
funcionalidad del tejido encapsulado respecto de
alginatos comerciales (Egaa 2013).

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Tanto el quitosano como el alginato, debido a su alta

biocompatibilidad y baja toxicidad son buenos
candidatos
como
agentes
encapsuladores
y
transportadores de frmacos y principios bioactivos.
La Figura 1 a,b muestra la estructura qumica de los
polmeros quitosano y alginato (incluyendo sus
relaciones co-monomricas y formacin de los bloques
MM, MG, unidos por enlaces glucosdicos (14) y
bloques GG, GM, unidos por enlaces glucosdicos
(14) segn las proporciones de las unidades cidas
-L-gulurnico (G) y -D-manurnico (M)(Matsushiro
2001). La forma que adopta el alginato depende de su
composicin, los bloques MM originan zonas ms
planas, con estructura semejante a una cinta, mientras
que las de GG son diametralmente opuestas.
La encapsulacin consiste en el recubrimiento de un
compuesto por un material que en la mayora de los
casos es de naturaleza polimrica. Se han descrito
diversas metodologas para encapsular, destacndose: el
secado por atomizacin, la gelificacin inica (Figura
2), la polimerizacin interfacial, la coacervacin (Figura
3), entre otras.
La Figura 3 muestra micropartculas de quitosano
preparadas por nuestro grupo mediante una
modificacin del mtodo de coacervacin (Van der
Lubben y cols. 2001). Las micropartculas presentan una
forma esfrica, superficie lisa y tamaos entre 5 y 14 m
(Figura 3a). Adems, se observan micropartculas
colapsadas, las cuales se forman comnmente durante el
proceso de secado por atomizacin. Al encapsular la
protena BSA, las micropartculas de quitosano
presentan tamaos similares a las micropartculas
vacas, por lo tanto no se afecta el proceso de
incubacin, distribucin de tamao ni la forma de las
micropartculas (Figura 3b). Este resultado fue
independiente de la concentracin de BSA cargada,
como se muestra en la Figura 3b, el mismo resultado se
obtuvo a una concentracin de BSA de 2,5 mg/ml,
conservando stas tanto su esfericidad como su
superficie lisa.
En la eleccin de la tcnica de encapsulacin a utilizar
se debe considerar algunos factores tales como: el
agente biolgico a encapsular, las aplicaciones del
compuesto encapsulado, el tamao de partcula

Encapsulacin de Biomolculas Usando Polmeros Naturales.

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requerido, el mecanismo de liberacin deseado, el costo,

entre otros.
Figura 1. Estructura qumica de a) quitosano y b) alginato de sodio.

a)

6
CH2OH

5
4

1
HO

OH

OH

OH

OH

NH

C
CH3

R= -COCH3 y
R= -H
y

NH

NH 2

NH

b)

OH

CH2OH

CH2OH

CH2OH

X mayor 50% = quitina

Y mayor 50% = quitosano

6
4
1
6
1

Figura 2. SEM de micropartculas alginato-quitosano obtenidas mediante gelificacin inica y secado por atomizacin.
a) partculas alginato-quitosano cargadas con albmina srica bovina (BSA), b) y c) partculas multicapas alginatoquitosano-alginato cargadas con BSA.

Andrnico Neira-Carrillo et al, 2013.

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Figura 3. SEM de micropartculas quitosano obtenidas mediante coacervacin y secado por atomizacin. a) partculas
quitosano, y b) partculas quitosano cargadas con BSA al 1,5% (Aguirre 2011).

.ltimamente ha existido un gran aumento en el uso de

frmacos basados de naturaleza proteica y peptdica
(hormonas, vacunas), lo que constituye un gran
problema en la ruta de administracin a usar, ya que las
protenas son muy sensibles a las condiciones
fisiolgicas, no recomendndose administrarlas por va
oral. De esta manera, la administracin va oral es la ms
comn pero la baja biodisponibilidad que exhibe del
principio activo obliga a aplicar sucesivas dosis, lo cual
presenta una alta probabilidad de generar efectos
colaterales en el individuo tratado. Esto ha impulsado la
bsqueda de sistemas novedosos para la entrega

controlada de principios activos que permitan superar

estas barreras. La tcnica de encapsulacin de frmacos
o principio activo se ha diversificado al incorporar
nuevos reactivos y mtodos como: el uso combinado de
biopolmeros, marcaje del agente bioactivo con
molculas fluorescentes y posterior uso de microscopia
ptica de fluorescencia y/o confocal (Figura 4),
permitiendo superar algunas de las dificultades descritas
y transformndose en una lnea de investigacin
altamente requerida en diferentes laboratorios.

Figura 4. Micropartculas de quitosano-Ca-alginato cargadas con cido 5-aminosaliclico (5-ASA). quitosano. a)

quitosano marcado con fluorescena isotiocianato (FITC), b) alginato marcado con rodamina B isotiocianato (RBITC), c)
Imagen de superposicin de las micropartculas. Figura tomada de referencia (Mladenovska y cols. 2007).

Encapsulacin de Biomolculas Usando Polmeros Naturales.

2. Micropartculas como nuevo sistema de

entrega de frmacos
Por mucho tiempo la bsqueda de nuevos mtodos
de liberacin de frmacos o principios activos basados
en polmeros se centr en la formacin de partculas de
polisteres alifticos a base de cidos lctico (PLA) y
gliclico (PGA), sus combinaciones como poli (lcticoco-gliclido) (PLG), poli (-caprolactona) (PCL), entre
otros, los cuales fueron muy utilizados como
biomateriales, suturas y soportes de los sistemas de
administracin
de
frmacos.
Hoy,
nuevas
investigaciones apuntan al uso de otros biopolmeros
como alginato y quitosano, en la forma de micro o
nanopartculas como nuevos mtodos para la entrega de
stos.
Las partculas de tamao controlado a micro o
nano-escala, compuestas de una cubierta mono o
multicapa del biopolmero de alginato y/o quitosano,
obtenidas por la deposicin electrosttica de forma
secuencial tienen las siguientes caractersticas: otorgan
proteccin al principio activo encapsulado, aumentan su
biodisponibilidad, ofrecen mayor facilidad en la
incorporacin y permiten disponer de diferentes vas de
administracin, etc. A su vez, la creacin de partculas
con mltiples capas se proyecta como un sistema de
encapsulacin an ms interesante de explorar ya que
aumentara la biodisponibilidad del compuesto
encapsulado, mejorara la capacidad de carga y

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eficiencia de encapsulacin del agente y retrasara la

erosin de las partculas en el medioambiente
gastrointestinal.
Todas estas ventajas se explicaran por la
estabilizacin de la partcula proporcionada por la unin
electrosttica de un polmero catinico (como el
quitosano) con uno aninico (como el alginato) y por el
control alcanzado de la porosidad en las capas
depositadas. Lo anterior proporciona una liberacin
sostenida y controlada a lo largo del tiempo segn el
tamao de las capas subyacentes. De este modo la
obtencin de partculas basadas en estos biopolmeros o
en combinacin con otros, abre nuevas oportunidades
para la administracin de frmacos o principios activos
sensibles al medio biolgico, permitiendo por ejemplo
la administracin de protenas por va oral, lo cual
mejora de manera sustancial su estabilidad y por
consiguiente, su biodisponibilidad, disminuyendo la
frecuencia de administracin de estos frmacos.
Las cpsulas de otros biopolmeros como agarosa y
carragenina (Figura 5) pueden ser obtenidas usando o no
diferentes agentes entrecruzantes y/o cargadas con
distintos tipos de frmacos o principios activos, entre los
cuales se incluyen: biomolculas, polipptidos (Figura
6),
antgenos
vaccinales,
antineoplsicos,
antiinflamatorios, antimicrobianos, antirretrovirales,
etc.

Figura 5. SEM de micropartculas quitosano:carragenina (3:1) obtenidas mediante vrtex y ultrasonicacin para uso
como adyuvante de una vacuna peptdica contra la hormona liberadora de gonadotrofinas (GnRH-I). a) micropartculas
obtenidas por vrtex durante 10 min. b) micropartculas obtenidas por ultrasonicacin con amplitud 10x, y c) amplitud
de 50x (Amar 2013).

Andrnico Neira-Carrillo et al, 2013.

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Figura 6. SEM de micropartculas quitosano: SSX1 (polipptido recombinante de somatostatina) obtenidas por
gelificacin inica. Se usaron quitosanos con diferentes pesos moleculares (PM) y agentes entrecruzantes: 1-etil-3-(3dimetill aminopropil) carbodiimida (EDC) y tripolifosfato (TPP) mediante gelificacin inica. Micropartculas de
quitosano: SSX1 con quitosano de bajo (a) y alto (b) PM usando EDC. Micropartculas de quitosano de bajo PM usando
TPP (c,d). Micropartculas de quitosano:SSX1 con quitosano de alto (d,e) y bajo (f y g) PM usando TPP (Vidal 2011).

3. Perspectivas de nuevos materiales

en la entrega de frmacos.
3.1. Biopolmeros
La variacin del pH a travs del tracto
gastrointestinal es bien conocida y no ha sido
completamente considerada en el desarrollo de
administraciones orales. El estmago tiene un pH
fuertemente acdico alrededor de 1.5, mientras que
el pH en el intestino delgado y colon es casi neutro.
Por lo tanto, frmacos o principios activos
sensibles a cidos tales como pptidos y protenas
no debieran ser administrados por va oral. El pH
extracelular de clulas tumorales se desva
levemente a la regin cida a partir de 7.4, por lo
cual es posible desarrollar sistemas de liberacin de
agentes bioactivos anti-cncer sensibles a pH. El

pH de tejidos inflamatorios tambin presenta una

tendencia a la acidez. La variacin de pH en los
diferentes compartimentos celulares es la base de
la liberacin intracelular de frmacos o principios
activos sensibles a pH, especialmente para
liberacin de ADN (Sato y cols. 2011).
Por lo tanto, sera posible disear sistemas de
liberacin de frmacos o principios activos
gatillados por variaciones de pH. Dos rutas
diferentes estn disponibles para liberacin de
frmacos a partir de pelculas (films) capa por capa
(LbL, por su sigla en ingls Layer-by-Layer) y
microcpsulas. La Figura 7 muestra una ilustracin
esquemtica de liberacin de frmacos a partir de
films LbL (a) y desde microcpsulas (b) gatillada
por cambio de pH (cambios en la permeabilidad de
la membrana de la cpsula o por descomposicin
completa de sta). Un frmaco puede ser embebido

Encapsulacin de Biomolculas Usando Polmeros Naturales.

en films LbL y liberado ante un cambio de pH, a
travs de un aumento en la permeabilidad del film
o descomposicin de ste. En este tipo de
liberacin, es posible construir dispositivos de
liberacin de pulso en los cuales la liberacin del
frmaco es acelerada y suprimida alternativamente
en un modo on-off en respuesta a cambios de pH.
Por otra parte, en el caso de las microcpsulas, la
descomposicin del film tambin podra resultar de
una liberacin de total del frmaco por efecto
estallido. En este aspecto, uno de los aspectos
claves en el desarrollo de
films LbL y
microcpsulas sensibles a pH es disear materiales
polimricos sensibles a pH apropiados y ocupar
combinaciones idneas para estos depsitos (Sato
y cols. 2011).
Figura 7. Rutas posibles para la entrega de
frmacos sensibles a pH a partir de: a) film LbL,
y b) microcpsulas.

Por otro lado, un rea en constante

desarrollo es el uso de biopolmeros como sistemas
de transporte de frmacos o principios activos para
el diagnstico y tratamiento del cncer. La idea
surge ya que las principales dificultades de la
quimioterapia antineoplsica convencional podran
verse superadas y disminuidas por el uso de
biopolmeros inteligentes, los cuales permitiran
que el frmaco, al ser encapsulado se libere en
forma controlada, slo al pH cido que presentan
los tumores, de manera continua, logrndose altas
concentraciones del frmaco antitumoral. Esto
permite, a su vez, disminucin en la frecuencia de
administracin de los frmacos antineoplsicos.
Por tanto, el uso de cpsulas a base de
biopolmeros permitira la acumulacin de los
frmacos de forma selectiva en las neoplasias

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debido a la mayor irrigacin y nmero de vasos

sanguneos permeables que presentan estos tejidos.
Adems, se disminuye simultneamente los efectos
secundarios, producto de la alta citotoxicidad y
baja especificidad de los frmacos o principios
activos utilizados. Para formular distintos tipos de
partculas y/o cpsulas que contengan frmacos
antineoplsicos, por ejemplo, ciclofosfamida,
doxorrubicina, paclitaxel, vincristina, entre
otros. Al comparar la cintica de liberacin y el
efecto citotxico, las partculas cargadas con
frmacos ofrecen ventajas en comparacin con las
formulaciones farmacuticas comnmente usadas,
lo que avala la formulacin y uso de estas
cpsulas
en la teraputica antineoplsica
incluyendo, a su vez, el uso de otros frmacos que
pudieran administrarse solas o en conjunto, a fin de
mejorar an ms las propiedades beneficiosas del
tratamiento indicado.
Por otra parte, existen alternativas an
ms avanzadas como por ejemplo, el uso de
cpsulas a base de polmeros naturales y/o
sintticos funcionalizados, que posteriormente son
decoradas con anticuerpos que son capaces de
reconocer en forma especfica a antgenos
superficiales o receptores presentes en la
membrana de clulas neoplsicas. Estas
modificaciones pueden llevar a una mayor
especificidad en el ingreso de las microcpsulas a
las clulas, que bien pueden estar cargadas con uno
o ms frmacos antineoplsicos, las cuales pueden
adems ser cargadas con compuestos que
detectaran por ejemplo mediante la emisin de
radiacin o fluorescencia, las neoplasias en fases
muy precoces de su desarrollo. Estos sistemas a
bases de biopolmeros mejoraran no slo la
eficiencia diagnstica sino que tambin el
pronstico de vida de los pacientes. As el uso de
biopolmeros en el diagnstico y teraputica
simultnea del cncer (teranosis), es una
herramienta promisoria que requiere sin duda un
desarrollo interdisciplinario an mayor.
Otra rea que est adquiriendo cada vez
mayor realce es el uso de polmeros como
adyuvantes vaccinales. Todas las caractersticas
fsico-qumicas mencionadas, tanto para quitosano
como para alginato, y su probada capacidad

Andrnico Neira-Carrillo et al, 2013.

38

inmuno-estimulante nos instan a desarrollar

mtodos an ms sofisticados en la sntesis de
derivados inteligentes a base de biopolmeros o
polmeros sintticos como polianilinas con
funcionalidades qumicas cidas, como un rea a
fascinante a desarrollar en el campo de la
biomedicina.

base de cristales de CaCO3 tambin pueden ser

marcados mediante molculas fluorescentes. A su
vez, Wei y cols. (2008) demostraron que la
liberacin de doxorrubicina desde micropartculas
hbridas de CaCO3 aumenta gradualmente de
acuerdo a la disminucin del pH del medio,
coincidiendo con el pH que presentan tejidos
neoplsicos (pH 6.0) y lisosomas de clulas
tumorales (pH 5.0).

3.2. Biomateriales inorgnicos

Figura 8. Imagen ptica de CaCO3 fluorescente

obtenido con silicona aninica con 2.6 mM

Para el desarrollo de estos biomateriales

en la entrega de frmacos y/o agentes bioactivos
diversos autores han utilizado alginato y quitosano
de manera individual o combinados con otros
compuestos inorgnicos tales como: almina
nanoporosa (Al2O3) (Kwak y cols. 2010), cementos
de fosfato conteniendo calcio (hidroxiapatita,
fosfato triclcico y fosfato de calcio bifsico)
(Ginebra y cols. 2006), oro coloidal (Paciotti y cols.
2006), nanopartculas de xido de titanio (TiO2)
(Mcmaster y cols. 2012), nanotubos de carbn
(Bianco y cols. 2005), partculas mesoporosas de
dixido de silicio (SiO2) (Anglin y cols. 2008),
vidrio bioactivo (Li y cols. 2013), etc.
Entre las propiedades de los materiales
inorgnicos para su uso en encapsulacin de
agentes bioactivos destacan: gran rea de superficie
especfica, volumen de poro ptimo, se pueden
cargar y liberar eficientemente diferentes
categoras de frmacos y/o principios activos,
estructura jerrquica o mesoporosa, la eficiencia de
carga y cintica de liberacin, la cual puede ser
controlada ajustando la composicin del material
inorgnico, presencia de grupos qumicos que
pueden funcionalizarse con molculas bioactivas,
etc (Wu y cols. 2013). En este contexto, Qiu y cols.
(2012) describieron que el uso de microesferas de
carbonato de calcio (CaCO3) no present toxicidad
al realizar un estudio de viabilidad celular y
citotoxicidad, en el cual no se observ apoptosis ni
inhibicin de la proliferacin de clulas. NeiraCarrillo y cols. (2012) obtuvo cristales esfricos
tipo vaterita, un poliformo de CaCO3, estabilizado
en presencia de un polimetilsiloxano (silicona) con
grupos caroboxlicos, un polmero aninico
sinttico, capaz de contener biomolculas para la
entrega de agentes bioactivos. Microcpsulas a

a)

b)

4. Conclusiones.
El uso de polmeros naturales en el rea biomdica
est llamado a convertirse en una disciplina
revolucionaria dado sus mltiples aplicaciones a
escala macro, micro y nano tanto en medicina
humana como veterinaria, las cuales que dependen
de la naturaleza de los polmeros, sus
funcionalidades qumicas reactivas, su nanoestructura, morfologa, tcnica utilizada y
propiedades fsico-qumicas.

5. Agradecimientos.
El Dr. A. Neira-Carrillo agradece a los
proyectos Fondecyt 1110194, Fondef D08I1085,
Conicyt-Mincyt PCCI-12038, Proyecto interno
OIAC415/10 y al Programa U-Redes -VID de la
Universidad de Chile, por el apoyo financiero
otorgado en estas investigaciones

Encapsulacin de Biomolculas Usando Polmeros Naturales.

39

6. Referencias
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