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FROMACION DE PRODUCTOS,

METABOLISMO E INGENEIRIA
METABOLICA

I.- FORMACION DE PRODUCTOS


La diversidad de productos formados por los microorganismos es amplia,
desde etanol hasta enzimas o antgenos.
Aspectos que deben considerarse:
Seleccin de una cepa microbiana apropiada.
Determinacin de los valores ptimos de temperatura, pH, presin
osmtica, y el requerimiento de oxgeno (para procesos aerobios).
Determinacin y optimizacin de los requerimientos nutricionales y de
la concentracin de biomasa. (OEA, 2006)
La velocidad de formacin de producto puede expresarse por:
Donde,
qp es la velocidad especfica de formacin de producto.
Esta ec. indica que tanto la concentracin celular como la capacidad
biosinttica de la misma (qp) son importantes en la obtencin de un
producto.
La productividad, puede ser mejorada entonces aumentando X, qp o
ambos.

I.- FORMACION DE PRODUCTOS


Se puede clasificar a los productos segn la funcin que
cumplen en el metabolismo, en tres grupos:
I.

Productos finales del metabolismo energtico.

II. Productos intermedios de metabolismo primario.


III. Productos de metabolismo secundario

1.1. Productos finales del metabolismo energtico.


Como el etanol, cido lctico, actico, butrico, butanol, y otros compuestos
asociados a procesos anaerobios.
En este caso la velocidad de formacin tendr dos contribuciones:

El primer trmino del segundo miembro expresa la velocidad de formacin de


producto debida al crecimiento, y el segundo la debida al mantenimiento.
La estrategia para la obtencin de estos productos consiste en tener una
concentracin celular elevada, de modo que el mantenimiento sea grande.
Tambin se puede limitar el contenido de nitrgeno, para impedir la duplicacin,
al no poder sintetizar ms componentes estructurales, y la fuente de carbono se
use para mantenimiento, y la formacin de producto.
Por ejemplo la obtencin del etanol por levadura puede dividirse en dos etapas:
1etapa: aerobia, donde el medio de cultivo contiene una relacin C/N apropiada
para el crecimiento.
2etapa ser anaerobia, en un medio con escasa concentracin de nitrgeno y
elevada concentracin de fuente de carbono, la cual es convertida en un 90% en
etanol y CO2 .

1.2. Productos intermedios de metabolismo primario.


Pertenecen a este grupo los
aminocidos, los nucletidos, las
vitaminas, los cidos orgnicos, y
biopolmeros como enzimas.
Los procesos de obtencin son aerobios
y la formacin de estos productos ocurre
principalmente en organismos que han
sido sometidos a mutaciones o que se los
hace crecer en medios deficientes.
Lo que se pretende es lograr una
regulacin anormal del metabolismo tal
que la fuente de carbono y energa se
derive hacia la formacin del producto
deseado.
Por ejemplo, para la obtencin de lisina
se emplean cepas de Corynebacteriuin
glutamicum que carecen de la enzima
Homoserina deshidrogenasa.

1.2. Productos intermedios de metabolismo primario.


Adems la enzima deshidroxipicolinato sintetasa no es inhibida por
lisina. Esta conjuntamente con la treonina ejercen inhibicin
concentrada sobe la Aspartatoquinasa de modo tal que an en este
mutante no se acumular lisina si en el medio de cultivo hay treonina
libre.
La estrategia para obtener lisina consiste en realizar el cultivo en
condiciones tales que la concentracin de treonina libre sea mnima, lo
cual se consigue alimentando pequeas cantidades de este
aminocido.
As se evita la inhibicin concertada, con lo cual la lisina, al no ejercer
retroinhibicin sobre la dihidroxipicolinato sintetasa, se acumula en el
medio de cultivo.
En este caso, no existe una relacin directa entre la generacin de
energa y la sntesis de productos.

1.3. Productos de metabolismo secundario.


Pertenecen a este grupo los antibiticos, las toxinas, los alcaloides y
las giberelinas.
Frecuentemente los precursores especficos para la biosntesis de
estos productos son obtenidos por modificacin de metabolitos
primarios.

As muchos antibiticos contienen en su molcula aminocidos


infrecuentes como D-aminocidos, N-metil aminocidos, Baminocidos o iminocidos; o azcares modificados, bajo la forma
de dimetil aminoazcares.
Por otra parte, estos precursores suelen ser limitantes de la
biosntesis.

I.- METABOLISMO.
Es el conjunto de todas las reacciones qumicas que se
producen en el interior de las clulas de un organismo. (Varela y
Grotiuz)
Las caractersticas metablicas especficas de un
microorganismo constituyen el principal criterio para
determinar su papel ecolgico, y su utilidad en los procesos
industriales.
Segn la utilidad de las molculas producidas, el metabolismo
puede ser primario o secundario.

II.- METABOLISMO PRIMARIO


Fases del metabolismo primario.
Se divide en dos procesos conjugados: catabolismo y anabolismo.
Las reacciones catablicas; como la gliclisis, que liberan energa.
Las reacciones anablicas, que utilizan la energa liberada para
construir enlaces qumicos y los componentes celulares como
protenas y cidos nucleicos.
En los procesos
catablicos se produce
energa en forma de
ATP y poder reductor
como NADH, la misma
que se utiliza para la
biosntesis durante el
anabolismo .

2.1.- Catabolismos
Se clasifican segn tres criterios:

1. La forma que el organismo obtiene el carbono para la


construccin de la masa celular:
Auttrofo. El carbono se obtiene del dixido de carbono.
Hetertrofo. El carbono se obtiene de compuestos orgnicos
(glucosa).
2. La fuente de equivalentes reductores para la biosintesis:
Littrofo. Los equivalentes reductores son compuestos
inorgnicos.
Organtrofo. Los equivalentes reductores son compuestos
orgnicos.
3. La forma en la que el organismo obtiene energa:
Quimitrofo. La energa se obtiene de compuestos qumicos.
Fottrofo. La energa se obtiene de la luz.

2.1.1.- Quimihetertrofo
Los quimiorganohetertrofos, oxidan los compuestos orgnicos
para producir energa (catabolismo) y usan su carbono para
sintetizar material celular (anabolismo).
Estos microorganismos son responsables de la degradacin de los
polmeros orgnicos naturales como celulosa, quitina, etc.
El catabolismo hetertrofo puede ocurrir por fermentacin o por
respiracin.

2.1.1.1.- Fermentacin
Es un proceso catablico que realizan muchos organismos en ausencia
de un aceptor externo de electrones, en l ocurre una oxidacin
incompleta de compuestos orgnicos con liberacin de energa. El
producto final es un compuesto orgnico
Los organismos que fermentan no utilizan la cadena de transporte de
electrones para oxidar NADH a NAD+, sino que lo hacen a travs de la
oxidacin parcial de un compuesto orgnico.

fermentacin
los compuestos orgnicos producidos son generalmente cidos orgnicos
cortos y alcoholes. Ejemplos: el etanol, acetato, lactato y el butirato.

Hay 3 vas de fermentacin de la glucosa:


Embden-Meyerhof.
Va Heterolctica, o de la fosfocetolasa
Entner-Doudoroff

a.- Va Embden-Meyerhof-Parnas
Estas fermentaciones
pueden llevar a un
amplio espectro de
productos dependiendo
de los pasos de
reduccin despus de la
formacin de piruvato.

Fermentaciones a partir de glucolisis


De Butadienol

Homolctica

Del cido

propinico
De cidos mixtos

Butanol-acetona

a.1.- Fermentacin alcohlica.


Puede producirse por dos vas

Levaduras

Zymomonas mobilis

a.2.- Fermentaciones lcticas silvestres


La funcin principal de los cultivos iniciadores es la produccin
de cido, principalmente lctico, como consecuencia de su
metabolismo.
La contribucin de los starter a las caractersticas finales del
producto se completa con otras funciones como:
la actividad proteoltica,
la produccin de compuestos aromticos,
la produccin de CO2,
la sntesis de exopolisacridos
la produccin de compuestos inhibidores.
Actividad metablica de las BAL

Produccin de cido
La lactosa es el azcar mayoritario de la leche (4.2-5%).
En funcin de los productos resultantes se distinguen dos vas
principales:
Va homofermentativa, propia de los gneros Lactococcus,
Streptococcus, Enterococcus, Pediococcus y de especies de
Lactobacillus de los grupos I y II.
Metabolizan la glucosa a piruvato por la ruta glicoltica o de
Embden-Meyerhof-Parnas, obtenindose cido lctico como
producto mayoritario de la fermentacin.
La produccin de este cido como nico producto metablico tiene
lugar solamente en condiciones de exceso de fuente de carbono
(glucosa o lactosa).
Cuando sta se encuentra en condiciones limitantes y en
anaerobiosis, o cuando el azcar fermentado es la galactosa, tiene
lugar la fermentacin heterolecita.

Va heterofermentativa, propia
del gnero Leuconostoc y de
algunas especies de Lactobacillus.
La fermentacin de la glucosa
tiene lugar por la ruta de la
fosfocetolasa, siendo ste el
enzima clave de la misma.
Los productos originados por
esta va son cido lctico, CO2 y
cantidades variables de actico y
etanol.
El crecimiento de las bacterias
con este tipo de metabolismo se
ve favorecido en condiciones de
aerobiosis ya que la regeneracin
de NAD+ consumido en la
oxidacin de la glucosa se realiza
utilizando el oxgeno del medio
como aceptor de electrones, lo
que permite desviar el acetil-CoA
hacia la sntesis de actico y
generar una molcula extra de
ATP.

Actividad proteoltica

En la fermentacin quesera, la produccin de cido origina la


precipitacin de las casenas de la leche, aumenta la actividad del cuajo y
mejora la sinresis de la cuajada, todo lo cual conduce a una modificacin
de la materia prima, dando lugar al queso.
Adems, la acidificacin colabora en los procesos enzimticos que tienen
lugar durante la fase de maduracin, interviniendo en las caractersticas
finales del queso.

Produccin de aromas

Las bacterias del cido lctico contribuyen al desarrollo del aroma de los
productos fermentados mediante la produccin de determinados
compuestos (alcoholes, cetonas o steres) que actan modificando las
caractersticas organolpticas del producto.
As, la produccin de diacetilo es necesaria para un correcto desarrollo
del aroma en productos como la mantequilla y algunos quesos y leches
fermentadas, mientras que el acetaldehdo es el principal responsable del
aroma del yogur. Otros voltiles como el cido actico o las metilcetonas
tambin intervienen en el desarrollo de aromas en diferentes variedades
de quesos.

Sntesis de Acetilo

Destinos alternativos del


piruvato
ACK acetato kinasa
ADC acetolactato descarboxilasa
ADH alcohol deshidrogenasa
ALS acetolactato sintasa
DS diacetilo sintasa
LDH lactato deshidrogenasa
PDH piruvato deshidrogenasa
PFL piruvato formato liasa
POX piruvato oxidasa
Coa coenzima A

b.- Respiracin
Es la oxidacin de los sustratos reducidos, que ocurre con
transporte de electrones hasta una aceptor final externo.
Puede ser de dos tipos:
Aerobia: el aceptor final de electrones es O2 (se reduce y se
forma H2O).
Anaerobia: el aceptor final de electrones no es O2.

Respiracin aerobia: Proceso resumido


La respiracin aerobia,
genera siempre la formacin
de CO2, a partir de la
molcula carbonada del
sustrato.
Si el sustrato es glucosa, se
tiene:
Gluclisis + Ciclo (TCA)
Se produce la formacin de
NADH2 reducido, que
entrega sus electrones y
protones a la cadena
transportadora

Respiracin anaerobia

Los organismos anaerobios utilizan aceptores de electrones, como:


el sulfato, el nitrato, CO2, etc.

En este proceso tambin hay una cadena transportadora de


electrones similar a la de aerobios (compuesta de citocromos,
quinonas, protenas ferrosulfricas, etc.) en la que se reoxidan
los coenzimas reducidos durante la oxidacin de los substratos.
La nica diferencia radica, en que el aceptor final de electrones no es el
O2.

Respiracin anaerobia

b.1.- Desnitrificacin

La desnitrificacin usa el nitrato como aceptor terminal de electrones en


condiciones anxicas. Implica la reduccin del nitrato a nitrito (NO2- ), a
xido ntrico (NO), a xido nitroso (NO2) y a (N2).

NO3- NO2- NO N2O N2


Este proceso requiere un sustrato oxidable, orgnico o inorgnico que
acte como fuente de energa, y sucede por bacterias hetertrofas como
auttrofas.
En la desnitrificacin auttrofa, la fuente de energa es inorgnica, como
hidrgeno o compuestos reducidos de azufre: sulfhdrico (H2S) o tiosulfato
(S2O32-), la fuente de carbono es el CO2.
En: Thiobacillus denitrificans y Thiomicrospira denitrificans.

S2O32- + 1.6 NO3- + 0.2 H2O ---- 2 SO42- + 0.8N2 + 0.4 H+


En desnitrificacin hetertrofa. La reduccin del nitrato a nitrgeno
molecular en condiciones anxicas por Pseudomonas, Paraccocus,
Alcaligenes, Thiobacillus, Bacillus, ocurre usando un sustrato orgnico como
fuente de carbono y energa (metanol, etanol, cido actico, glucosa, etc.).
La oxidacin del cido actico:

1.25 CH3COOH + 2NO3- ---- 2.5CO2 + N2 + 2OH- + 1.5 H2O.

b.2.- Reduccin de sulfatos


En algunos sistemas anaerbicos, el sulfato (forma ms oxidada
del azufre), es el aceptor de electrones, y se reduce a sulfuro (H2S).
Otros pueden utilizar compuestos oxidados, como sulfito,
tiosulfato o azufre elemental, y producen (H2S).

SO4 ----- H2S


Algunos reductores del sulfato son hetertrofos, y emplean
compuestos del carbono como: lactato y piruvato (entre otros)
como donadores de electrones mientras que otros son auttrofos,
y usan hidrgeno como donador de electrones.
Como el sulfato es energticamente estable, antes de ser
metabolizado debe primero ser activado por adenilacin para
formar APS (adenosina 5-fosfosulfato) de tal modo que se consume
ATP.
El APS es entonces reducido por la enzima APS reductasa a sulfito
(SO32- ) y AMP. (Espinoza et al 2010)

reduccin de sulfatos.
Proceso
Los electrones donados por el
sustrato (lactato) en el citoplasma son
recibidos por la enzima hidrogenasa,
la cual los transfiere al citocromo c3 y
ste a su vez al complejo Hmc. Este los
transporta por la membrana celular
hasta el citoplasma donde los recibe la
APS (Adenosin-fosfo-sulfato) que se
reduce a sulfuro por accin de la
sulfato reductasa.
Si el lactato o piruvato es el donador
de electrones se genera otra molcula
de ATP producida por la oxidacin del
piruvato a acetato.
Este es un proceso tpico en
Desulfovibrio desulfuricans.
Transporte de electrones en bacterias
reductoras de sulfato

b.3.- Reduccin de CO2


Utilizan al CO2 como aceptor terminal de e-.
A pesar de que el poder reductivo del CO2 es muy bajo, esta
anin es una de las ms comunes en la naturaleza.
Lo usan las metangenas y arqueas.

CO2 + 4 H2 CH4 + 2H2O


En la metanognesis el donador de electrones es el H2, y el
aceptor de electrones es el CO2.

Aplicacin: Generacin de electricidad con microorganismos


La electricidad, se manifiesta a travs de un flujo de
electrones.
La transferencia extracelular de electrones es un proceso por
el cual los electrones derivados de la oxidacin de
compuestos orgnicos son transferidos a la superficie externa
de la clula para reducir un aceptor terminal de electrones.
En los organismos aerobios, el oxgeno se utiliza como
receptor de electrones, en los anaerobios los receptores de
electrones son compuestos inorgnicos (nitratos, sulfatos,
CO2).

Mecanismos de transferencia de electrones


Existen varios mecanismos para la transferencia de electrones:
a) Transferencia con ayuda de mediadores externos.
Un mediador es un compuesto que entra a la clula, acepta
los electrones que estn dentro y sale de la clula donando los
electrones al nodo.
Puede producir sus propios mediadores y as transferir electrones
a metales localizados a ms de 50 m de la superficie celular.
Estas bacterias pueden respirar empleando aceptores de
electrones.
Existen especies que tambin necesitan un mediador externo.La
desventaja de esos mediadores es que generalmente son txicos
para los seres humanos.

b) Transferencia directa a un electrodo


Los electrgenos son microorganismos que provocan la
oxidacin de compuestos orgnicos a CO2, con la transferencia
directa de electrones a un nodo.
Entre estos organismos estn: Geobacter Sulfurreducens y
Rhodoferax; las cuales poseen mecanismos de transporte de
electrones internos y no requieren la ayuda de mediadores para
liberar los electrones.
c) Transferencia por medio de cables bacterianos
Usan nanocables (pili), presentes en bacterias como Geobacter
Sulfurreducens, Synechocystis y Pelotomaculum
thermopropionicum.
Geobacter Sulfurreducens se agrupan formando un biofilm. Posee
unos Pili, que funcionan como cables conductores de electrones,
que tienen una longitud de 10 a 20 m y un dimetro aproximado
de 3 a 5 nm.
El Pili contiene citocromos tipo C. Durante la respiracin y la
fotosntesis, las molculas de citocromo aceptan y liberan
alternativamente electrones, que pasan a otro citocromo en una
cadena de reacciones qumicas de transferencia de electrones, que
funciona con liberacin de energa.

Celdas de combustible Microbiana CCM


Una CCM, opera como una batera. Consiste de un nodo, un ctodo y
una membrana o electrolito.
El nodo alberga a las bacterias, es el borde negativo y se debe mantener
libre de oxgeno.
El ctodo recibe los electrones y los transfiere al exterior de la celda, es el
borde positivo, puede estar expuesto al aire.
En el electrolito
hay una
membrana
semipermeable
que separa al
nodo del
ctodo y bloquea
el paso de los
electrones,
limitando as la
distribucin de
oxgeno del
ctodo al nodo.

Funcionamiento de una Celda de Combustible Microbiana


Las biopilas para lograr una adecuada transferencia electrnica
requieren catalizadores de Pt, un metal caro y contaminable.

Por eso, se est investigando la generacin de nuevos


catalizadores o, la generacin de bioelectrocatalizadores a base
de enzimas o bacterias que sean capaces de efectuar
directamente la transferencia electrnica.
Algo que caracteriza los sistemas anteriores es que todos los
microorganismos involucrados son anaerobios estrictos.
Una alternativa es implementar una pila con microorganismos
aerbicos, y que puedan trabajar en condiciones atmosfricas
normales, con una gran ventaja operacional.

Nuevas celdas.
Existen una serie de bacterias Shewanella y Geobacter que son capaces de
transferir directamente electrones a electrodos slidos.
Esta celda no requiere catalizadores ni membranas.
Usando bacterias Rhodoferax ferrireducens, como electrocatalizador, y
glucosa, como combustible, la oxidacin de glucosa puede generar 24 e/mol, mayor que la de otros combustibles, como el hidrgeno (2
electrones) o metanol (6 electrones).
La glucosa se oxida en el nodo liberando electrones, iones
compensadores de carga y productos de la oxidacin (nCO2, donde n
representa el nmero de equivalentes).
Los iones de compensacin de carga elctrica migran a travs de un
electrlito, mientras que los electrones fluyen a travs de un circuito
externo y generan la potencia elctrica, utilizando O2 como aceptor final
de electrones generando nH2O que se extrae del sistema.

Caractersticas de la pila microbiana aerobia


Hay microorganismos capaces de realizar las funciones anteriores en
ambientes aerbicos.
Se ha encontrado que dos tipos de bacterias, Acidiphilium spp. y
Acidithiobacillus ferrooxidans, pueden conjugar la degradacin aerbica de
compuestos orgnicos del tipo (CH2O)n en CO2 y H2O de forma asociada a
la reduccin del Fe(III), siendo tolerantes al oxgeno.
Las bacterias Acidithiobacillus ferrooxidans, son capaces de oxidar el Fe(II)
a Fe(III), siendo tambin tolerantes al oxgeno.
Junto a lo anterior, estas bacterias demuestran tener la capacidad de
transferir electrones directamente a electrodos de carbono sin necesidad
de electro-mediadores, por lo que se podra trabajar con los electrodos
catdicos y andicos en un solo compartimento.
Esto es relevante ya que evitara la necesidad de membranas polimricas,
que perjudican la actividad de la pila y disminuyen su capacidad de
generacin de potencia elctrica.

Estas bacteria tienen la capacidad de usar la superficie del electrodo como


un terminal oxidante al que le transfiere los electrones liberados en la
oxidacin de la glucosa (con un 83% de eficiencia).
Fig. Detalle de la transferencia electrnica bacteria-grafito
Rhodoferax ferrireducens

Esta pila, en primera instancia, trabajara con combustible glucosa


(C6H12O6) y sales de hierro, con las siguientes reacciones:

Oxidacin de la Glucosa y reduccin del Fe(III)


C6H12O6 + 6 H2O ---- 6CO2 + 24H+ + 24e24 Fe3+ + 24e- ---- 24 Fe2+
_________________________________________
C6H12O6 + 6H2O + 24Fe3+ --- 6CO2 + 24H+ + 24Fe2+

Oxidacin del Fe(II) y formacin de agua


6 O2 + 24H+ + 24 e- ---- 12 H2O
24 Fe2+ ----- 24 Fe3+ + 24 e_____________________________________
6 O2 + 24 H+ + 24Fe2+ ----- 12H2O + 24 Fe3+

Reaccin global de la pila:

C6H12O6 + 6O2 --- 6CO2 + 6H2O

Se observa en las reacciones involucradas, que un adecuado


funcionamiento de la pila requiere la presencia del hierro en forma
catinica en la disolucin.
Si este faltase, por ejemplo debido a procesos de precipitacin, podra
hacer inviable la operacin de la pila, ya que inhibira las reacciones de
xido-reduccin asociadas a la glucosa y a la formacin de agua.

Esquema de PCM (Pila de Combustible microbiano).


PCM, que podra generar
energa elctrica
alimentndose con
compuestos orgnicos.

La PCM que tendra las


siguientes caractersticas
nicas:
1. No necesita
catalizadores ni electromediadores de ningn
tipo.
2. La pila no necesita de
una membrana de
separacin de los
compartimentos
catdico/andico.
3. Podra operar en
condiciones de presin
y temperatura
ambientales.

2.2.2.- Quimiolitotrofa
Uso de un compuesto inorgnico como fuente de energa.
(donadores de electrones)
Littrofos aerobios: remueven electrones del substrato inorgnico
y los ponen en un sistema de transporte de electrones hasta el O2,
que producir ATP.
Fuentes de donadores inorgnicos de electrones: S, N y Fe:
agricultura, minera.

Los littrofos anaerobios metabolizan las formas reducidas de:


nitrgeno (NO2, NH3, N2), de azufre (H2S), etc. a sus estados
oxidados NO3 y SO4 respectivamente; para producir energa.
Ejemplos: bacterias del hidrogeno, metanognicas, nitrificantes,
sulfuro oxidantes, bacterias del hierro
La mayora de los organismos quimiolitotrofos son tambin
auttrofos

Oxidaciones litotrficas

a.- Oxidacin de hidrogeno


Muchos organismos son capaces de usar hidrgeno (H2) como fuente de
energa.
El hidrgeno se puede utilizar como fuente de energa aerobia.

H2 + O2 H2O
Go = -237 kJ
En estos organismos, el hidrgeno es oxidado por una hidrogenasa ligada
a la membrana, realizando el desplazamiento del protn va una
transferencia de electrones a varias quinonas y citocromos.

Oxidacin de hidrogeno: Ralstonia eutrophia


Las hidrogenasas tolerantes al oxgeno de Ralstonia eutropha han
sido estudiadas para diversos propsitos:
R. eutropha ha sido estudiada por tratarse de un organismo
atractivo en vistas de sostener la vida en el espacio.
R. eutropha puede fijar CO2 como fuente de carbono, utilizar
la urea de la orina como fuente de nitrgeno y utilizar el hidrgeno
como fuente de energa para crear densos cultivos que pueden
servir como fuente de protenas.
Una forma posible de obtener atmsferas ricas en oxgeno en el
espacio es a partir de la Electrlisis del agua y en este caso R.
eutropha podra reciclar el hidrgeno producido en la electrolisis.

b.- Oxidacin de compuestos reducidos de azufre


Algunas bacterias oxidan
compuestos reducidos de azufre,
como H2S, S0 y S2O32-, para formar
cido sulfrico (H2SO4). Como
Beggiatoa.
Reacciones:
H2S + 2O2 SO42- + 2H+
HS- + O2 + H+ S0 + H2O
S0 + H2O + 102 + H+ SO42-+ 2H+
S2O32- + H20 + 202 2SO42- + 2H+

La oxidacin del azufre se realiza


generalmente en dos etapas. Los
compuestos de azufre reducidos se
convierten en sulfito (SO32- ) que
transforma a sulfato por la enzima
sulfito oxidasa.

Otros organismos, realizan la misma oxidacin usando un sistema


inverso de APS reductasa, invirtiendo el usado por las bacterias
reductoras del sulfato.
En todos los casos, la energa liberada se transfiere a la cadena de
transporte de electrones para la produccin de ATP y NADH.
Los organismos que oxidan el azufre generan el potencial reductor
para la fijacin de CO2 va el ciclo de Calvin usando el flujo inverso de
electrones para producir NADH.

Bacteriasoxidantes de azufre
Microorganismos que crecen en mediosde cultivo orgnicos
Gneros y especies

Donador inorgnico Rango de pH


de electrones
de crecimiento
6-8

Thiobacillus denitrificans

H2S, sulfuros, S, S2O3 2H2S, S, S2O3 2-

Halothiobacillus neapolitanus

S, S2O3 2-

68

Acidithiobacillus thiooxidans

2-4

Acidithiobacillus ferrooxidans*

S, sulfuros metlicos,

Starkeya movella*

S2O3 2-

Thiobacillus thioparus

Thiomomas intermedia*

S2O3

6-8

Fe2+

2-

Acidithiobacillus thiooxidans
Oxida el S y produce cido sulfrico. Aunque ha sido aislado del
suelo se le ha observado en la corrosin del concreto de tubos de
alcantarilla, transformando el sulfuro en cido sulfrico en aguas
residuales.

2-4
6-8
3-7

c.- Oxidacin de compuestos de nitrgeno: nitrificacin


Proceso por el cual el amonaco (NH3) es convertido en nitrato (NO3-).
Dos procesos distintos:
la oxidacin de amonaco a nitrito (NO2-) por bacterias nitrificantes
como, Nitrosomonas, y la oxidacin de nitrito a nitrato por bacterias
nitrito-oxidantes, como, Nitrobacter.
Ambos procesos son muy poco energticos y llevan a tasas de
crecimiento muy lentas.
En la nitrificacin toman lugar dos microorganismos:
Etapa 1:
NH4 + 1.5O2 2 + 2H+ + H2O
Etapa 2:
2 + 0.5O2 3
Reaccin global de la nitrificacin
H4+ + 2O2 O3 + 2H+ + H2O
Reaccin de sntesis celular
4O2 + HO3 + H4+ + H2 5H7O2 + 5O2

Oxidacin de amonio a nitrito


La oxidacin del amonaco
ocurre previo paso a
hidroxilamina (NH2OH) por la
enzima amonio
monooxigenasa (AMO) en el
citoplasma, seguida por la
oxidacin de la hidroxilamina
a nitrito por la enzima
hidroxilamina oxidoreductasa
(HAO) en el periplasma.
Como beneficio neto
solamente un protn se
desplaza a travs de la
membrana por cada molcula
de amonaco oxidada.

Oxidacin de nitrito a nitrato


El nitrito es oxidado por
la enzima nitrito
oxidoreductasa (NOR)
unida al desplazamiento
de un protn por una
cadena de transporte de
electrones muy corta.
Esto conduce de nuevo a
tasas de crecimiento muy
bajas para estos
organismos.

nitrito oxidoreductasa (NOR)

Desnitrificacin
El proceso de desnitrificacin consiste en la reduccin del nitrato a
nitrito y, posteriormente, a compuestos de nitrgeno gaseoso (xido
ntrico NO, xido nitroso N2O y nitrgeno diatmico N2) en
presencia de una fuente de carbono orgnica.
El nitrato y el nitrito reemplazan al oxgeno en la cadena de
transporte de electrones (respiracin microbiana), por lo que la
desnitrificacin suele producirse en ambientes denominados
anxicos, carentes de oxgeno y con disponibilidad de nitrito y
nitrato como aceptores de electrones
Desnitrificacin con metanol como fuente de carbono orgnico
6O3 + 5H3OH 32 + 52 + 7H2O + 6OH

Procesos no convencionales de eliminacin de nitrgeno


Los procesos biolgicos de
eliminacin de nitrgeno
amoniacal va nitrito han
sido considerados como
alternativas interesantes,
desde el punto de vista de
eficiencia energtica y de
produccin de fangos, para
alcanzar elevados
rendimientos de
eliminacin de nitrgeno.
Reduccin del consumo
energtico
Reduccin de las
necesidades de materia
orgnica

Proceso Anammox
La oxidacin anaerobia del amonaco, en Candidatus Brocadia
anammoxidans, implica el acoplamiento de la oxidacin de
amonaco con la reduccin de nitrito, en ausencia de oxigeno.

Durante el metabolismo del anammox se produce hidracina


(N2H4), un combustible para cohetes como compuesto intermedio.
Para resolver la alta toxicidad de hidracina, estas bacterias tienen
un orgnulo llamado anammoxasoma rodeado por una membrana
lipdica muy compacta en la que queda confinada la hidracina.
Los organismos del Anammox son auttrofos, y debido a esta
caracterstica, son organismos que se utilizan industrialmente para
eliminar el nitrgeno en los procesos del tratamiento de aguas
residuales.

d.- Degradacin del cianuro


Toxicidad del cianuro en aerobios. El cianuro inhibe de manera
competitiva el metabolismo aerbico al unirse a la citocromo oxidasa c
(CcO) impidiendo que en el complejo IV se asimile el oxigeno. El efecto
final es el bloqueo del ciclo de Krebs y la acumulacin de piruvato

Un microorganismo para degradar el cianuro debe poseer las


siguientes caractersticas:
Ser alcalfilo
Poseer una ruta degradativa que le permita asimilar CN-,
incorporndolo como fuente de N.
Principales rutas degradativas microbianas
formamida

cido cianrico

Proceso con Pseudomonas Pseudoalcaligenes.


Esta bacteria asimila cianuro aun en presencia de amonio y nitrato a
pH alcalino.
Presenta una enzima llamada oxidasa alternativa (AOX), que usa una
va distinta a la del citocromo c oxidasa.
La degradacin del cianuro sucede a travs de cianhidrinas y la
adquisicin de fierro sobre la produccin de sideroforos (quelante
de hierro secretado por microorganismos)

cianato

2.2.3.- Fottrofos
Utilizan la luz como fuente de energa, convierten la energa
luminosa en energa qumica utilizable como ATP.
La fotosntesis puede ser: oxigenica o anoxigenica.

La fotosntesis oxignica sucede en: Cianobacterias, algas y


plantas, que usan agua como donador de electrones para la
transferencia de electrones durante la fotosntesis.
Las Cianobacteria y los cloroplastos, usan un esquema Z de flujo de
electrones que es utilizado para formar NADH.
Se utilizan dos fotosistemas y el flujo de electrones genera una
fuerza protn motriz .

La fotosntesis anoxgena, se caracteriza por que utiliza un slo


fotosistema, tiene receptores de Bacterioclorofilas i/o carotenos, y
no produce oxgeno.
En este caso el flujo de electrones es cclico, de modo que los
electrones empleados en la fotosntesis, son reciclados al nico
centro de la reaccin.
Suelen usar como donador de electrones sulfuro de hidrgeno
(H2S), para producir sulfato.

2.4.- Rutas anabolicas


El anabolismo es el conjunto de reacciones de formacion de las
biomoleculas complejas a partir de otras mas sencillas (precursores)
formadas en el catabolismo.
Las rutas anablicas emplean energa qumica en forma de ATP y
poder reductor del NADH o NADPH para sintetizar componentes
celulares a partir de molculas ms sencillas.
Principales rutas:
Biosntesis de carbohidratos (fotosntesis, gluconeognesis, etc)
Biosntesis de lpidos
Biosntesis de aminocidos y protenas (sntesis de aminocidos, y
traduccin)
Biosntesis de purinas y pirimidinas

a. Autotrofa: fotosntesis.
La mayora de los
microorganismos
fotosintticos son
auttrofos, fijan CO2 va el
ciclo de Calvin.
Algunas bacterias
fotosintticas (por ejemplo,
Chloroflexus aurantiacus)
son fotohetertrofos, es
decir que utilizan
compuestos orgnicos como
fuente de carbono para el
crecimiento.

b.gluconeognesis
Proceso inverso
a la va glicoltica

c.- Sntesis de cidos grasos


En la etapa preparatoria, se produce malonil-CoA a partir de
acetil-CoA.
El malonil-CoA, aporta dos de sus tres tomos de carbono al
esqueleto carbonado del cido graso en crecimiento.

Por accin enzimtica se condensan un acetil-ACP y un malonilACP (derivado del anterior), dando una molcula de 4 carbonos.

En los ciclos siguientes ya solo


se aadir un malonil-ACP, por lo
que se irn aadiendo carbonos
de dos en dos.
El producto final del proceso es
siempre cido palmtico, un
cido graso saturado de 16
carbonos.
A partir de l, pueden
sintetizarse otros cidos grasos.
8 Acetil-CoA + 14 (NADPH + H+)
+ 7 ATP cido palmtico (C16)
+ 8 CoA + 14 NADP+ + 7 (ADP +
Pi) + 6 H2O

d.- Sntesis de aminocidos


Utilizan diferentes rutas como:
Derivados del alfa-cetoglutarato
Derivados del oxalacetato.
Derivados del 3- fosfoglicerato.
Derivados del fosfoenolpiruvato.
Derivados de la riboas-fosfato.

e.- Fijacin de nitrgeno.


El nitrgeno es un elemento requerido para el
crecimiento por todos los sistemas biolgicos. Aunque es
extremadamente comn (80% por volumen) en la
atmsfera en forma de gas (N2) es generalmente
inaccesible biolgicamente debido a su alta energa de
activacin.
Solamente las bacterias especializadas son capaces de la
fijacin de nitrgeno, convirtindolo en amonaco (NH3)
que es asimilado fcilmente por todos los organismos.
La enzima nitrogenasa, responsable de la fijacin de
nitrgeno, es muy sensible al oxgeno que la inhibe
irreversiblemente, todos los organismos fijadores de
nitrgeno deben tener un cierto mecanismo para mantener
la concentracin de oxgeno baja.

III.-UTILIZACIN DE LA ENERGA POR LOS


MICROORGANISMOS
La clula microbiana
utiliza la energa para:
Supervivencia:
Transporte
molecular
El movimiento
La produccin de
calor
Reproduccin.

Cadena Metablica De Montaje


Consta de cinco etapas secuenciales: mecanismos de entrada para
transportar los nutrientes del exterior. Reacciones catablicas que
dan lugar a los 12 metabolitos precursores, energa y poder reductor.
Biosntesis que produce los bloques bsicos de las macromolculas.
Polimerizacin que forma la macromolculas. Ensamblaje que une las
macromolculas para dar forma a las estructuras celulares.

Reacciones

catablicas

Biosntesis

Polimerizacin

Ensamblaje

V.- METABOLISMO SECUNDARIO


Los metabolitos secundarios son compuestos sintetizados
por el organismo que no tienen un rol directo en el
crecimiento o reproduccin del mismo.
Las caractersticas bsicas son:
Se producen por rutas anablicas especializadas cuando
no hay crecimiento.
Significado evolutivo controvertido. Pueden ser una
estrategia para mantener en funcionamiento los sistemas
metablicos cuando no hay crecimiento.
Son indicativos de diferenciacin y se producen durante la
idiofase de los cultivos.
En el caso de los microorganismos, los metabolitos
secundarios mejor conocidos son los antibiticos.

Rutas metablicas de los metabolitos secundarios


En el esquema se muestra
la interconexin existente
entre el metabolismo
primario y secundario
En este caso los
metabolitos secundarios se
dividen a grandes rasgos en
tres grupos: compuestos
terpenicos, compuestos
fenlicos y compuestos con
nitrgeno.
Figura. Interconexin
entre el metabolismo
Primario y Secundario.

Rutas metablicas de los metabolitos secundarios


Pueden distinguirse que las siguientes rutas:
ruta del MEP (metileritritolfaosfato), ruta del MVA (cido mevalnico), ruta del
cido malnico y la ruta del cido siquimico (en ingles shikimico).
Es igual de importarte la participacin de aminocidos tanto alifticos como
aromticos, ya que son la fuente biosinttica principal de nitrgeno.

Cada una de estas vas est relacionada de la siguiente manera con el


metabolismo primario:
-La ruta del cido siqumico, es originada por el fosfoenolpiruvato y la eritrosa-4fosfato, su vez este cido es precursor de los aminocidos aromticos.
- La ruta MEP se origina del piruvato y del gliceraldehido-3-fosfato.
- Los aminocidos alifticos son obtenidos a partir del ciclo de krebs (ciclo del
cido ctrico).
- Las rutas malnica y mevalnica, a partir de la Acetil Acetil-CoA.
- La ruta MEP se origina del piruvato y del gliceraldehido-3-fosfato.
Las relaciones existentes entre estas rutas y los grupos de metabolitos
secundarios son las siguientes:
- Los compuesto terpenoides se biosintetizan por las rutas MEP o MVA
- Los compuestos fenlicos por la ruta del cido siqumico, a partir los
aminocidos actuar solas o combinarse de las siguientes maneras: ruta cido
siqumico-aminocidos aromticos-ruta cido malnico.
- Los compuestos de nitrgeno fundamentalmente provienen de los
aminocidos aromticos y/o alifticos.

Metabolitos Secundarios y las rutas metablicas que le dan origen.


En el siguiente
esquema se
muestra de manera
ms detallada los
metabolitos
secundarios y las
rutas metablicas
que le dan origen.
Sin embargo, en
este caso ya se
detallan algunos
ejemplos de grupos
de metabolitos.

MACROMOLCULAS ESPECIFICAS COMO


METABOLITOS SECUNDARIOS
De los 100.000 productos naturales producidos por microorganismos y
plantas y alrededor de 50.000 son producidos por microorganismos.
De los 12.000 antibiticos conocidos el 55% son producidos por
bacterias filamentosas del gnero Streptomyces, 11% de otras bacterias
filamentosas, 12% de bacterias no filamentosas y 22% por hongos
filamentosos.
Familias de metabolitos secundarios: poliqutidos, terpenos, y
aminocidos
A. POLIQUTIDOS
Presente en bacterias, hongos y en plantas.
Sirve nicamente para la produccin de metabolitos secundarios.
Parte del malonil-CoA que forma el primer paso en la sntesis de
cidos grasos.

Ejemplos:
Griseofulvina (antibitico producido por Penicillium griseofulvum)
Aflatoxinas (toxinas producidas por Aspergillus flavus y por A. parasiticus)
Ocratoxinas (toxinas producidas por algunos tipos de Aspergillus y de
Penicillium)
Lovastatina (producida por A. terreus). Figura N 11.8

Estructuras qumicas de micotxinas producidas por Aspergillus y Penicillium

B. TERPENOS
Se inician a partir del Acetil-CoA.
Produce tanto metabolitos primarios (carotenos, esteroles) como secundarios.
Ejemplos:
Ciertos carotenos.
Toxinas como la toxina T2 y los tricotecenos (producidos especies de Fusarium).
Ahora ya es posible distinguir como aminocidos alifticos precursores al triptfano,
lisina y a la ornitina y como aminocido aromticos a la fenilamina y a la tirosina. A la par
ya podemos reconocer nuevos intermediarios como el cido glico, cido cinmico y los
isoprenoides.
Los grupos de metabolitos secundarios pueden ser reordenados segn la clasificacin
anterior de la siguiente manera:
Compuestos terpenoides: Terpenos y esteroides
Todos los terpenoides, tanto los que participan del metabolismo primario como los ms
de 25.000 metabolitos secundarios, (son derivados del compuesto IPP (Isopentenil
difosfato o "5-carbono isopentenil difosfato") que se forman en la va del cido
mevalnico.
Es un grupo grande de metabolitos con actividad biolgica importante.
Compuestos fenlicos: Compuestos fenlicos como los fenilpropanoides y sus derivados.
Los ms de 8.000 compuestos fenlicos que se conocen estn formados o bien por la va
del cido shikmico o bien por la va del malonato/acetato. Incluyen a los
fenilpropanoides, lignanos, cumarinas, taninos galicos, antraquinonas, flavonoides y
taninos condensados.

Productos finales del Metabolismo Secundario

Compuestos con nitrgeno:


Compuestos nitrogenados o alcaloides. Los alrededor de 12.000 alcaloides
que se conocen, se incluye a los: Alcaloides indlicos, quinolnicos,
pirrolidinicos, tropanicos, pirrodizilinicos, piperidinicos y quinolizidinicos;
protoalcaloides isoquinoleicos y benzilisoquinoleicos.

Formacin de metabolitos secundarios por la va del cido shikmico o por la va


del mevalonato.

VI.- REGULACIN DEL METABOLISMO


La regulacin se realiza por: la actividad enzimtica y la sntesis de
las enzimas.

Regulacin de la actividad enzimtica, se produce generalmente


por: inhibicin de enzimas alostricas.
Ejemplo: en clulas anaerobias facultativas la fermentacin es
bloqueada en presencia de oxgeno, asegurando que el suministro
de energa se produzca por respiracin, que es un proceso mas
eficiente.
En este fenmeno denominado efecto Pasteur, la enzima
fosfofructoquinasa (enzima alostrica) es activada o inhibida segn
la relacin entre el ATP y el ADP, regulando as el consumo de
glucosa.

Regulacin de la sntesis de enzimas, como el opern lactosa.


Hay tres enzimas que participan en la utilizacin de la lactosa (galactosidasa, galactsido permeasa y galactsido
transacetilasa), las cuales tienen un promotor nico.
En ausencia de lactosa, la transcripcin para estas enzimas est
bloqueada por un represor que se une al promotor inhibiendo la
accin de la ARNpolimerasa.
Cuando se agrega lactosa al medio, sta se une al represor,
bloqueando de este modo su accin y permitiendo la accin de
la ARNpolimerasa y la sntesis de las tres enzimas anteriormente
mencionadas.

VII.- INGENIERIA METABOLICA


Llamada tambin ingeniera de vas metablicas (IVM). Se define como la
modificacin racional de las reacciones que constituyen el metabolismo de un
organismo, con el propsito de mejorar sus propiedades o su productividad
La IVM surge como una nueva rea dentro de la biotecnologa como resultado
del cmulo de conocimientos generados por varias disciplinas biolgicas que
incluyen principalmente a la bioqumica, la gentica, la biologa molecular y las
ciencias genmicas
La figura muestra un esquema del flujo de informacin gentica en la clula, as
como las reas de la biologa y la ingeniera que son utilizadas en la IVM.

Ingeniera metablica.
En la parte central de la figura se muestra la relacin existente
entre la informacin gentica contenida en el genoma de una
clula, la composicin de protenas y su efecto sobre el
metabolismo.
Este esquema representa el dogma central de la biologa molecular,
el cual dicta que la informacin gentica fluye del cido
desoxirribonucleico (ADN), hacia el cido ribonucleico (ARN) y,
finalmente, hacia las protenas.
Las protenas son las responsables de llevar a cabo la mayora de
las funciones celulares; por lo tanto, el tipo y la cantidad de
protenas especficas (proteoma) presentes en una clula
determinan qu funciones celulares estarn activas.
El metabolismo es un proceso celular en que participan un gran
nmero de protenas diferentes.
La clula posee mecanismos para coordinar cules protenas y en
qu cantidad son necesarias dependiendo de las condiciones
externas.

Cualquier clula microbiana tpica tiene el potencial gentico en su


genoma para sintetizar un nmero considerable de protenas.
En el caso de la bacteria Escherichia coli, se estima que este nmero es
cercano a 4400 protenas diferentes.
El control sobre cules protenas se sintetizan ocurre principalmente a
nivel de la sntesis del ARN. Existen protenas, llamadas reguladores, que
tienen la funcin de facilitar o impedir que un gen sea transcrito en ARN.
De esta manera, mediante la regulacin gentica, la clula tiene
mecanismos para controlar que slo se sinteticen las protenas necesarias
para una condicin ambiental determinada.
La posibilidad de modificar de manera directa el metabolismo es el
resultado del conocimiento actual sobre las reacciones qumicas que lo
constituyen, las enzimas que catalizan dichas reacciones y los genes que
las codifican.
Debido a que el metabolismo es una red muy extensa y compleja de
reacciones, se necesitan metodologas que permitan analizarlo
cuantitativamente.

Herramientas de la ingeniera metablica


Como el metabolismo es una compleja red de reacciones, se
necesitan metodologas que permitan analizarlo
cuantitativamente.
Tambin, se requieren herramientas especializadas para
modificar los componentes celulares.
La biologa estructural y las tcnicas de ADN recombinante se
aplican al estudio y modificacin de protenas, desarrollndose
as la ingeniera de protenas.
La ingeniera de protenas generalmente se aplica al
mejoramiento de enzimas.
Entre las mejoras que se realizan a este tipo de protenas, se
pueden citar: incrementar la actividad especfica, cambiar la
especificidad hacia nuevos substratos, eliminar la inhibicin
alostrica, entre otros.

herramientas
La relacin entre una actividad enzimtica y el flujo metablico
se expresa como un coeficiente de control de flujo (CCF).
El CCF se define como el cambio en el flujo en una va
metablica que resulta al incrementar la actividad de una
enzima en particular.

La determinacin de los CCF para las enzimas dentro de una va


metablica especfica, permite establecer cules de ellas son las
que limitan el flujo.
Una vez que se identifican las enzimas limitantes, mediante la
aplicacin de la ingeniera gentica se puede incrementar el nivel
de expresin de sus genes y por consecuencia la actividad
especfica.

Estrategias generales de ingeniera de vas metablicas para


incrementar la produccin de un metabolito de inters
Existen estrategias generales de IVM que se pueden aplicar con este fin,
independientemente del metabolito que se desee producir:
1) Con base en el conocimiento bioqumico de la va metablica que sintetiza al
compuesto de inters, se identifica a las enzimas que son sujetas a control por
inhibicin alostrica. Estas son las enzimas clave que regulan el flujo de carbono
hacia una va especfica.
2) Para incrementar el flujo de carbono hacia la va biosinttica de inters,
identificar y eliminar los controles alostricos y transcripcionales en las enzimas
clave de esa va y en los genes que las codifican.
3) Lograr un alto nivel de expresin de los genes que codifican para las enzimas
clave a las que ya se les elimin el control alostrico.
4) Identificar y eliminar posibles pasos limitantes dentro de la va de inters.
5) Incrementar la disponibilidad metablica de los intermediarios del metabolismo
central que sean los precursores del metabolito que se desea producir.

Sntesis en E. coli de compuestos aromticos con aplicacin


industrial mediante la introduccin de genes heterlogos (caso
melanina)
Utilizando la IVM, es posible desarrollar cepas bacterianas con
potencial para sintetizar esos compuestos aromticos, a partir de
glucosa u otras fuentes renovables de carbono.

Por ingeniera gentica, ha sido posible generar cepas de E. coli


con la capacidad de sintetizar protenas humanas de uso
teraputico.
De la misma manera, se ha logrado insertar en E. coli, genes que
codifican para enzimas y con esto modificar su metabolismo.
Se abre la posibilidad de dotar a esta bacteria con capacidad de
sintetizar metabolitos que normalmente no lo hacen. En el caso de
los compuestos aromticos, existen ya varios ejemplos de cmo se
pueden extender las vas biosintticas naturales para que este
microorganismo pueda sintetizar nuevos compuestos.

Compuestos aromticos sintetizados por Escherichia coli mediante la


introduccin de genes de otras especies microbianas. El nombre de los genes
introducidos y el organismo del que provienen estn indicados en las flechas que
dan lugar a cada compuesto

sntesis de compuestos aromaticos


Se han construido cepas de E. coli con la capacidad de producir
directamente a partir de glucosa: cido qunico, catecol, melanina e
ndigo.
Con lo cual, se abre la posibilidad de desarrollar tecnologas
biolgicas sustentables no contaminantes.
Entre los compuestos aromticos con un papel protector se
encuentran las melaninas. Estos son pigmentos que se han
identificado en organismos desde bacterias hasta el hombre.
Existen varios tipos de melaninas, uno de ellos, las eumelaninas,
provienen de la transformacin de la tirosina por medio de la accin
de la enzima tirosinasa
En los ltimos aos se han identificado algunas propiedades
fisicoqumicas importantes en este tipo de polmeros, por lo que ha
crecido su inters.
Se sabe que la melanina puede actuar como fotoprotector,
intercambiador catinico, agente quelante, semiconductor amorfo,
y posee actividades antioxidantes y antivirales.

sntesis de compuestos aromticos


Las melaninas se pueden obtener mediante sntesis qumica a
partir de L-dihidroxifenilalanina (L-dopa) u otras molculas
qumicamente similares, mediante extraccin a partir de tejidos
animales o a partir de cultivos de bacterias u hongos.
La extraccin de melanina a partir de tejidos animales presenta el
problema de un bajo rendimiento y, sobretodo, de variabilidad en
la composicin qumica del producto.
Las limitaciones anteriores, desatan el inters en el desarrollo de
cepas microbianas modificadas que permitan la sntesis de
melanina qumicamente homognea y con un nivel de produccin
elevado.

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