UNIVERSIDAD CENTROCCIDENTAL

LISANDRO ALVARADO
DECANATO DE AGRONOMA
PROGRAMA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL
CTEDRA PRINCIPIOS DE BIOINGENIERA

ACTIVIDAD ENZIMTICA DE LA
CATALASA
(Ensayo para los tubos del 1 al 4 empleando
trozos de hgado de res enteros)

Autores:
Delgado Mara Jos C.I. 20.322.793
Montero Adriana C.I. 19.482.012
Rovero Luisauly C.I.18.881.005
Suarez Miguel C.I. 18.333.032
Navea Junior C.I. 19.727.983
Profa: Rita Mara vila
Fecha y hora de practica: Lunes 20/10/2014- 2:00 pm

BARQUISIMETO, OCTUBRE 2014Introduccin

Las sustancias que aceleran la velocidad de reaccin de las reacciones qumicas
se denominan catalizadores. En el mundo vivo, los catalizadores se denominan enzimas
las cuales son protenas de aspecto globular. El mundo mineral (no vivo) carece de
enzimas, pero posee catalizadores inorgnicos, los cuales tambin actan en el mundo
vivo. Las reacciones qumicas orgnicas en una clula son lentas en condiciones de
temperatura y presin normales, por ende, las enzimas ayudan acelerando las
velocidades de dichas reacciones qumicas. Las caractersticas propias de la qumica de
diferentes clulas o de diferentes compartimentos de una clula, pueden derivar del
contenido y actividad enzimtica diferentes. (Rebolledo, Rebolledo s/f)
Las enzimas se caracterizan por 3 propiedades fundamentales: estn presentes
en pequeas cantidades, aumentan la velocidad de las reacciones qumicas sin que se
consuman o alteren por la reaccin y aumentan la velocidad de las reacciones qumicas
sin alterar el equilibrio qumico entre los reactantes y los productos. (Morris, Susan
2001)
Este ensayo se realiza con el fin de de estudiar cmo influyen algunos factores
(T, pH, grado de subdivisin) sobre la actividad enzimtica de la catalasa la cual segn
(Chance, Maehly 1955) es una de las enzimas ms abundantes en la naturaleza y se
encuentra ampliamente distribuida en el organismo humano, aunque su actividad vara
en dependencia del tejido; sta resulta ms elevada en el hgado y los riones. En el
laboratorio se uso hgado de res para evidenciar la accin de la catalasa sobre el
perxido de hidrogeno a distintas temperaturas, pH y grado de subdivisin.

FUNDAMENTACIN TERICA
Enzimas
Las enzimas son biocatalizadores de naturaleza proteica. Todas las reacciones
qumicas del metabolismo celular se realizan gracias a la accin de catalizadores o
enzimas. La sustancia sobre la que acta una enzima se denomina substrato (Hernndez,
2007).
Antiguamente las enzimas fueron nombradas atendiendo al substrato sobre el
que actuaban, aadindole el sufijo -asa o haciendo referencia a la reaccin catalizada.
As tenemos que la ureasa, cataliza la hidrlisis de la urea; la amilasa, la hidrlisis del
almidn; la lipasa, la hidrlisis de lpidos; la ADNasa, la hidrlisis del ADN; la ATPasa,
la hidrlisis del ATP, etc. (Hernndez, 2007).
Cofactores que requiere la enzima para su funcionamiento
Segn Hernndez (2007), entre los cofactores que requieren las enzimas para su
funcionamiento estn las coenzimas: NADPH+H (nicotinamida adenina dinucletido
fosfato reducido), NAD (nicotinamida adenina dinucleotido), FAD (flavina adenina
dinucletido), piridoxal, biotina, tiamina, cido tetra hidroflico,cobalamina, etc. As
mismo, muchas enzimas requieren activadores metlicos, y he de all la importancia de
los minerales para el buen funcionamiento y crecimiento de las plantas.
Clasificacin de las enzimas
Segn Hernndez (2007), debido al gran nmero de enzimas conocidas en la
actualidad, se ha adoptado una clasificacin y nomenclatura ms sistemtica, en la que
cada enzima tiene un nmero de clasificacin que la identifica.
1. Oxidorreductasas. Reacciones de transferencia de electrones.
2. Transferasas. Transferencia de grupos funcionales. Ej. UDP-glucosa-fructosaglucotransferasa.
3. Hidrolasas. Reacciones de hidrlisis. Ej. lipasa, proteasa, celulasa.
4. Liasas. Adicin a dobles enlaces. Ej. carboxilasa, fenilalanina amonioliasa.
5. Isomerasas. Reacciones de isomerizacin.Ej. fosfoglucosaisomerasa.
6. Ligasas. Se conocan como sintetasas. Participan en la formacin de enlaces
con hidrlisis de ATP.
Actividad enzimtica
Se define la unidad de actividad enzimtica (U) como la cantidad de enzima que
cataliza la conversin de 1 mol de sustrato en un minuto .Recientemente, el Sistema
Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de actividad enzimtica como la

cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por segundo. Esta unidad se llama
katal (kat) (Gonzales, S/F).
Factores que afectan la actividad enzimtica
o Temperatura: la actividad enzimtica se incrementa al aumentar la temperatura,
hasta que la enzima se desnaturaliza (Giraldo, 2013).
o pH: las enzimas son ms activas a pH de 6 (Giraldo, 2013).
o Concentracin del sustrato: al aumentar la concentracin del sustrato, la
velocidad de reaccin se incrementa, hasta que se ocupan todos los centros
activos (Giraldo, 2013).
o Inhibidores: competitivos y no competitivos (Giraldo, 2013).
Enzima catalasa
La catalasa es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales
y vegetales. La funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el
metabolismo celular, se forma una molcula txica que es el perxido de hidrgeno.
Esta enzimalo descompone en agua y oxgeno, por lo que se soluciona el problema.
(Cspedes et al., 2011).
La catalasa (oxidorreductasa) es una de las enzimas ms abundantes en la
naturaleza y se encuentra ampliamente distribuida en el organismo humano, aunque su
actividad vara en dependencia del tejido; sta resulta ms elevada en el hgado y los
riones, ms baja en el tejido conectivo y los epitelios, y prcticamente nula en el tejido
nervioso (Cspedes et al., 2011).
Segn Cspedes et al., (2011), la catalasa como parte del sistema antioxidante
H 2 O2
est involucrada en la destruccin del
generado durante el metabolismo
celular. Esta enzima se caracteriza por su alta capacidad de reaccin pero relativamente
poca afinidad por el sustrato. La reaccin general entraa la reduccin del sustrato
tomando los tomos de hidrgeno aportados por el donador, y los productos finales
seran el sustrato reducido y el donador oxidado. En la funcin cataltica, el donador es
H 2 O2
otra molcula de
. Esta funcin slo puede ser realizada por la enzima en su
forma tetramrica.

MATERIALES Y MTODOS
Materiales y equipos

Hgado de res entero

Hielo
12 tubos de ensayo sin tapa
Pipetas
Esptula
Cuchillo
Vidrio reloj
Termmetro
Cocina elctrica
Bao termostatado
Regla
Reactivos

Perxido de hidrogeno
Procedimiento

Nota:Se realiz la aplicacin del tratamiento para los tubos del 1 al 4,

empleando trozos de hgado entero.
1. Se etiquetaron los tubos del 1 al 4, tomando en cuenta que se realizara la
experiencia por triplicado para cada uno de los tubos.
2. Se cortaron fragmentos del hgado de res y se coloc un trozo en cada uno de los
tubos.
3. Se tomaron los tubos de ensayo correspondiente al tratamiento 1 que se
encontraban a temperatura ambiente y se le adiciono a cada una 5 ml de
perxido de hidrogeno. Se observaron los resultados y se procedi a medir la
altura alcanzada por la espuma en el tubo de ensayo con ayuda de una regla.
4. Se tomaron los tubos asignados al tratamiento 2 y se colocaron en un bao
termostatado hasta que las muestras contenidas en dicho tubo alcanzaron una
temperatura de 37C (temperatura corporal) verificando esto con ayuda de u
termmetro, para adicionarles posteriormente 5 ml de perxido de hidrogeno a
cada una. Se observaron los resultados y se procedi a medir la altura alcanzada
por la espuma en el tubo de ensayo con ayuda de una regla.
5. Se tomaron los tubos de ensayo correspondiente al tratamiento 3 y se colocaron
en un bao de hielo hasta que las muestras contenidas en los tubos de ensayo
alcanzaron una temperatura de 4C verificando esto con el termmetro. Una vez
alcanzada la temperatura deseada se les adiciono a cada uno de los tubos 5 ml de
perxido de hidrogeno, se observaron los resultados y se procedi a medir la
altura alcanzada por la espuma en el tubo de ensayo con ayuda de una regla.

6. Se tomaron los tubos de ensayo correspondiente al tratamiento 4, se les adiciono

a cada uno un poco de agua previamente hervida y se colocaron en un bao
termostatado, midiendo la temperatura de las muestras contenidas en los tubos
de ensayo con ayuda de un termmetro hasta que estas alcanzaran una
temperatura de 90C. Al alcanzar la temperatura deseada se les adiciono a cada
tubo 5 ml de perxido de hidrgeno, se observaron los resultados y se procedi
a medir la altura alcanzada por la espuma en el tubo de ensayo con ayuda de una
regla.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Tabla N 1. Altura alcanzada por la espuma para los tratamientos del 1 al 4 empleando
trozos de hgado de res enteros

TUBO DE
ENSAYO

TEMPERATURA DEL
TRATAMIENTO

Temperatura
ambiente

37C

4C

90C

REPETICIN

1.1
1.2
1.3
2.1
2.2
2.3
3.1
3.2
3.3
4.1
4.2
4.3

ALTURA
ALCANZADA
POR LA
ESPUMA (cm)

5,5
6,5
6,5
7,8
9
5,4
3,9
5,5
8
0
0
0

MEDIAS

6,17
7,4
5,8
0

Grafico N1. Efectos de la temperatura sobre la reaccin enzimtica.

(Hgado entero) Tubo 1 vs tubos 2, 3, 4.

Cm

8
7
6
5
4
3
2
1
0
1

N de tubo

Tabla N 2. Altura alcanzada por la espuma para los tratamientos del 5 al 8 empleando
trozos de hgado de res triturados

TUBO DE
ENSAYO

TEMPERATURA
DEL
TRATAMIENTO

Temperatura
ambiente

37C

4C

90C

REPETICIN

5.1
5.2
5.3
6.1
6.2
6.3
7.1
7.2
7.3
8.1
8.2
8.3

ALTURA
ALCANZADA
POR LA
ESPUMA (cm)
15
15
15
14
15
15
15
15
15
0
0
0

MEDIAS

15

14.66
15
0

Cm

Grafico N 2. Efectos de la temperatura sobre la reaccin enzimtica.

(Hgado triturado) Tubo 5 vs tubos 6, 7, 8.

N de tubo

Tabla N 3. Altura alcanzada por la espuma para los tratamientos del 1, 5, 9, 10

empleando trozos de hgado de res enteros y triturados
TUBO

TEMPERATURA
DEL

pH

REPETICIN

ALTURA
ALCANZADA

MEDIAS

DE
ENSAYO

TRATAMIENTO

Temperatura
ambiente

Temperatura
ambiente

Temperatura
ambiente

10

Temperatura
ambiente

5
5
5
5
5
5
1
1
1
1
1
1

1.1.a
1.2.a
1.3.a
6.1.a
6.2.a
6.3.a
9.1
9.2
9.3
10.1
10.2
10.3

POR LA
ESPUMA (cm)
9.5
10.2
6.3
3.3
16
9.3
0.3
0
0
0.5
0.6
0.4

8.6
9.5
0.1
0.5

10.01
9.01
8.01
7.01
6.01

cm

5.01
4.01
3.01
2.01
1.01
0.01
N de tubo

Grafico N 3.
Efectos de la temperatura sobre la reaccin enzimtica.
(Hgado triturado) Tubo 1 vs tubos 5, 9, 10.

Grafico N 4. Tubo 1 vs tubo 5 Efectos del estado fsico (entero o molido) del hgado
de res a temperatura constante (T ambiente)

16
14
12
10
cm

8
6
4
2
0
N de tubo

Tabla N4 altura (cm) de

N tubo

Altura cm

6.17

15

los tubos 1 y 5

Grafico N 5. Tubo N 2 vs tubo N6 Efectos del estado fsico (entero o molido) del
hgado de res a temperatura constante (37C)

16
14
12
10

cm

8
6
4
2
0
N de tubo

2
6

Tabla N5 altura (cm) de los tubos 2 y 6

N tubo

Altura cm

7.4

14.66

Grafico N 6. Tubo 3 vs tubo 7 Efectos del estado fsico (entero o molido) del hgado
de res a temperatura constante (4C)

16
14
12
10
Cm

8
6
4
2
0

3
7
N de tubos

Tabla N6 altura (cm) de los tubos 3 y 7

N tubo
Altura Cm
3

5.8

15

0.6
0.5
0.4
cm 0.3
0.2
0.1
0
N de tubos

Grafico N7
. Tubo 9 (h. Entero) vs tubo vs 10 (h. triturado) Efectos del estado fsico (entero o
molido) del hgado de res a temperatura constante (4C) y pH constante 1 sobe la
reaccin enzimtica

Tabla N7 altura (cm) de los tubos 9 y 10

N tubo

Altura cm

0.1

10

0.5

6.7
5.7
4.7
3.7
cm
2.7
1.7
0.7
-0.3
N de tubo

Grafico N8.
Tubo 1 vs tubo vs 9 hgado entero. Efectos del pH sobre la reaccin enzimtica

Tabla N8 altura (cm) de los tubos 9 y 10

N tubo

Altura cm

pH

6.17

0.1

1
9

Grafico N9. Tubo 5 vs tubo vs 10 hgado molido, a temperatura constante. Efectos del
pH sobre la reaccin enzimtica
16
14
12
10

cm

8
6
4
2
0

5
10

N de tubos

Tabla N9 altura (cm) y pH de los tubos 5 y 10

N tubo

Altura cm

pH

15

10

0.5

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Cspedes, E., Hernndez. I y Llopiz N. 2011. Enzimas que participan como barreras
fisiolgicas para eliminar los radicales libres: Catalasa. Instituto de Ciencias Bsicas y
Preclnicas "Victoria de Girn".
Chance B, Maehly AC. Assay of catalases and peroxidases. En: Colowick SP, Kaplan
NO, eds. Methods in enzymology. New York: Academic, 1955;764-5.
Giraldo, C. 2013. Enzimas y actividad enzimtica. Ibagu - Tolima. Colombia
Gonzales, J. S/F. Curso de Biomoleculas. Departamento de Bioqumica y Biologa
molecular de la Universidad del pas Vasco.
Hernndez, R. 2007. Enzimas. Fisiologa Vegetal, Departamento de Botnica, Facultad
de Ciencias Forestales y Ambientales. Universidad de Los Andes - Mrida Venezuela.
Hein, Morris; Arna, Susan. 2001 Fundamentos de Qumica. Thomson Learning.
Mxico.
Luis Rebolledo, Ivn Rebolledo ENZIMAS (s/f) documento en lnea consultado el
20/10/2014
http://bibmed.ucla.edu.ve/edocs_bmucla/materialdidactico/celular/enzimas.p
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