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INTRODUCCIN

Tema1:IntroduccinalaHistologa

Histologa1

TEMA1
INTRODUCCINALAHISTOLOGA

DEFINICINDEHISTOLOGA

CONCEPTOSBSICOS

TIPOSDETEJIDOSBSICOS

TCNICASHISTOLGICASBSICAS
1.Paramicroscopaptica
2.Paramicroscopaelectrnicadetransmisin
3.Paramicroscopaelectrnicadebarrido

INTRODUCCIN

Tema1:IntroduccinalaHistologa

Histologa1

DEFINICINDEHISTOLOGA

LaANATOMAeslaramadelacienciaqueseocupadelestudiodelaformaexternaylaorganizacininterna
delasplantasylosanimales.LaAnatomasueleserdividida,segnelmtodoseguidoparaponerdemanifiesto
lasestructurasqueconfiguranunservivo,en:

1.ANATOMAMACROSCPICA:abarcaloaccesiblealadiseccinyalaobservacinoculardirecta
2.ANATOMAMICROSCPICA:abarcaaloselementosqueseescapanalaobservacinoculardirecta.
AnatomamicroscpicaessinnimadeHISTOLOGA

LaHISTOLOGAesladisciplinaqueestudialaorganizacinmicroscpicadelosseresvivosylamanerade
interrelacionarseestructuralyfuncionalmentesuscomponentesindividuales.Etimolgicamentesedefine
alaHistologacomoladisciplinaqueseocupadelestudiodelostejidos.

EnelsigloXVIIaparecieronlosprimerosmicroscopiosysefueronacumulandodatosalolargodelosdos
siguientessiglos,perolaHISTOLOGAalcanzelrangoderamaautnomadelacienciaenels.XIXalformularsela
TEORACELULAR(Schleiden,Schwann)queconsideraalasclulascomoorganismospotencialmente
independientesyalosseresvivoscomoagregadosdeestasunidadesvivas,distribuidasyordenadasdeacuerdoa
leyesfijas.Estageneralizacinbsicaenlascienciasmorfolgicassevioenriquecidacondoshechos:1)el
descubrimientodequelasclulasseformanpordivisindeotrasclulas(Virchow,Remack:"omniscellulae
cellula"),y2)lageneralizacindelateoracelularalapatologapueslosprocesospatolgicostambinse
correspondenconalteracionescelulares(Virchow).

Laaparicinenladcadadelosaos30delpasadosiglodelmicroscopioelectrnicoylaaparicinde
diversastcnicashistolgicasquepuedenponerdemanifiestolapresenciadecompuestosqumicosenrelacin
conlasestructurasenlasqueselocalizanhahechoqueelcampodelaHistologaseampleconsiderablemente.

CONCEPTOSBSICOS

UnTEJIDOesunconjuntodeclulasquetienencaractersticasestructuralesyfuncionalessimilaresyquese
organizandeunaformaespecfica.Haydostiposdetejidos:

tejidossimplesformadosporunsolotipodeclulas(tejidoadiposo=adipocitos;tejidomuscular=
miocitos)
tejidoscompuestosformadosporvariostiposdiferentesdeclulas(tejidonervioso=neuronas,clulas
gliales,clulasinmunitarias,clulasepiteliales;tejidoconectivo=fibroblastos,macrfagos,leucocitos...)

Estostejidos(simplesycompuestos)sonelobjetodeestudiodelaHISTOLOGAGENERAL.

UnRGANOesunaestructura,distinguibleanatmicamente,formadaporungrupodetejidosdiversosque
cumplenconunafuncinsimilar(corazn,rin...).

UnSISTEMAestformadopor:
Ungrupodeclulasconfuncinsimilarperodistribudaspordiversasestructurasanatmicas(sistema
inmunitario)
Ungrupoderganosquetienenfuncionessimilaresorelacionadas(sistemadigestivo,sistema
circulatorio...)

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LaestructuramicroscpicaderganosysistemaseselobjetodeestudiodelaHISTOLOGAESPECIALo
ANATOMAMICROSCPICA

TIPOSDETEJIDOSBSICOS

EnlostratadosclsicosdeHistologaseconsiderancincotiposbsicosdetejidos:

1.TEJIDOEPITELIAL
2.TEJIDOCONECTIVO
3.TEJIDOMUSCULAR
4.SANGRE
5.TEJIDONERVIOSO

EnalgunostratadosnuevosdeHistologa(verStevensLowe,1997)seatiendeaotroscriteriosde
clasificacinsurgidosdelaugeenlosltimosaosdelaBiologacelular.Enestecasosetomaenconsideracinlas
caractersticasdelasclulasyseagrupanaquellasquetienencaractersticasestructuralesyfuncionalessimilares:
clulascontrctiles,clulassecretoras,clulasdefensivasodelsistemainmunitario,clulasnerviosas...

TCNICASHISTOLGICASBSICAS

1.PARAMICROSCOPIAPTICA

1.1.Seleccionarlamuestraaestudiar

1.2.Fijacindelamuestra
Lafijacindelamuestratieneundobleobjeto:
Quelostejidossepreservenlomsparecidoposibleasuestadoinvivo
Queaumenteladurezadelamuestra,loquefacilitarsuposteriorcorteencortesdelgados
Elfijadormsusadoesunasolucinacuosadeformaldehdoal5%.Tambinsepuedenusarotrosfijadores
(alcohol,cidopcrico...).Losfijadoreshacenqueprecipitenlasprotenastisulares.

1.3.Inclusinenparafina
Lainclusinenparafinatienecomoobjetoelconseguirquelamuestratengaunadurezasuficientey
homogneaparapoderobtenercortesdelgadosdelamisma.
Comolaparafinaesunproductoinmiscibleconelaguahayquedeshidratarlamuestraantesdeincluirlaen
laparafina.Ladeshidratacindelamuestraseconsiguehacindolapasarporalcoholesdegradacin
progresivamentecreciente(alcohol50%70%96%alcoholabsoluto).
Despusdehacerpasaralamuestraporalgnsolventeintermedio(benzol...)seintroducelamuestraen
unrecipienteconparafinalquidadurantevariashorasdas(laparafinasemantienelquidaenunestufaa
temperaturasuperioraladelpuntodefusindelaparafina)hastaquelaparafinahaembebido
perfectamentelamuestra.Finalmente,enunmolde,sehaceunbloquedeparafinaquecontengala
muestraysedejasolidificarlaparafinaatemperaturaambiente.
Enalgunasocasionesnoesposiblehacerlainclusinenparafinaporqueelprocesopreviode
deshidratacindisuelvealgunosproductoscelularesquesequierenestudiar(porejemploloslpidos,quese
disuelvenconlosalcoholesduranteelprocesodedeshidratacin,algunasprotenasconcretasquese
quierenponerdemanifiestoconalgunatcnicainmunocitoqumica).Enesecasosepuedenhacercortes
delgadosendureciendolamuestra(fijadaoinclusoantesdelafijacin)porcongelacin.

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1.4.Cortedelamuestra
Elbloquedeparafinaconlamuestradentrosepuedecortarenseccionesdelgadas(habitualmentede510
mdegrosor)conunmicrotomoconvencional(oconunmicrotomodecongelacinoconuncriotomoenel
casodequesehayacongeladolapieza).Loscortesobtenidossecolocansobreunportaobjetosdecristal
paraseguirelprocesodetincin.

1.5.Tincindeloscortes
Losdiversoscomponentestisularestienenunosndicesderefraccintansimilaresentresquenose
podrandistinguirunosdeotrossinoseusarancolorantesquetienunosuotroscomponentessegnsu
composicinqumica.
Comoloscolorantessuelenusarsedisueltosenagua(ylaparafinaqueembebeloscortesesinmiscible
conelagua)hayquedesparafinizar(poniendolosportasenxilol)yrehidratarloscortes(haciendopasar
losportasporalcoholesdegradacinprogresivamenteinferior:alcoholabsolutoalcohol90%alcohol
70%alcohol50%agua).
Despusdelarehidratacinsetienloscortesconelcoloranteolamezcladecolorantesadecuados:
Hematoxilinaeosina:lahematoxilina(uncolorantebsico)tiedecolorazulvioletalasestructuras
cidas(ncleo,ribosomas,RER)ylaeosina(uncolorantecido)tiedecolorrosarojolas
estructurasbsicas(lamayoradelasprotenascitoplasmticas,mitocondrias).Engeneral,con
estatincinsevenlosncleosdelasclulasenazulyelcitoplasmaenrosa.Lasfibrasdecolgena
delamatrizextracelularsetienderosa.
Azan(AZocarmn+ANilineblue)conestatcnicasetiedecolorrojolosncleoscelulares,de
colorrosaelcitoplasmacelularydecolorazullasfibrasdecolgena.Elmsculoyloshematesse
tiendecolorrojonaranja.
TricrmicodeMallory:estatcnicautilizalafucsinacidaquetiederosaelcitoplasmayderojo
elncleocelular,elazuldeanilinaquetiedeazullasfibrasdecolgenayelnaranjaGquetiede
colornaranjaloseritrocitos
VanGieson:estatcnicatiedecolorazuloscuronegrolosncleoscelulares,decoloramarilloel
citoplasmacelular(yloshemates)ydecolorrojolasfibrasdecolgena.
PAS(cidoperydicoreactivodeSchiff[fucsinabsica]):estatcnicatieespecficamentelos
carbohidratoscomplejosdelasclulasdecolorrojooscuro(glucgeno,mucoprotenas,
proteoglicanos...).Estastcnicasquetiendeformaespecficaalgncompuestoqumicodelas
clulasselesdenominatcnicasdetincinhistoqumica.
Tincionesdelpidos:paravisualizarlosdepsitosdelpidosenlasclulas(adipocitosuotras)olas
estructurascelularesmuyricasenlpidos(comolamielina)seutilizancolorantescomoelSudano
eltetrxidodeosmio.
Tincionesargnticas:lastincionesargnticassonutilizadasparaverfibrasdecolgenafinas(fibras
dereticulina)oclulasconprolongacionescelularesfinasricasenelementosdelcitoesqueleto
(dendritasyaxonesneuronales...).Suelendaruncolornegroomarrnoscuroyelfondodela
preparacinpuedeversedorado.
Inmunocitoqumica:conlastcnicasinmunocitoqumicas(unavariedaddetcnicasdetincin
histoqumica)sepuedeponerdemanifiestouncompuestoqumicodeterminadoenunamuestra
histolgicausandoanticuerposespecficoscontraesecompuestoquehansidomarcadosconuna
sustanciafluorescenteoconunproductoquesepuedeconvertirenuncolorante(cromgeno)con
latcnicahistoqumicaadecuada.SiseusanACmarcadosconsustanciasfluorescenteshayque
utilizarunmicroscopiodefluorescenciaparaobservarlospreparados.

Despusdeteirloscortesseaclaraelexcesodecolorantesquequedesinfijarenlostejidosyse
vuelvenadeshidratarloscortes.

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1.6.Montajedeloscortes
Antesdeobservarloscortesalmicroscopiohayquecubrirlosconuncubreobjetosdecristal.Paraconseguir
quetodosloselementos(portaobjetospreparacincubreobjetos)seanpticamentehomogneoshayque
cubrirelcorteconunaresina(DPX,Permount...)antesdeponerelcubreobjetosyprocurarquenoqueden
burbujasdeairealcolocarste.
Unavezquelaresinasehapolimerizadoyasepuedeexaminarlapreparacinconelmicroscopio.

Lacapacidadderesolucindeunmicroscopioestalimitadafundamentalmenteporlalongituddeondadela
radiacinutilizada.Enelmicroscopiopticoseutilizaluzvisible(elespectrodelaluzvisiblevade400nma
700nm).Aunquesegnlalongituddeondadelaluzvisiblelacapacidadderesolucinserade0.4m,la
aperturanumricadelosobjetivosdegrancalidad(n.a.=1.4)hacequepuedaaproximarsealos0.2m.En
laprctica,losmicroscopiospticospuedendistinguirelementosdeaproximadamente0.5m(mitocondrias,
bacterias...)[capacidadderesolucindeunmicroscopio:ladistanciamnimaquedebesepararadosobjetos
paraqueseanvistosconelmicroscopiocomodosobjetosdiferentes]

Cuandosenecesitaunacapacidadderesolucinsuperior,hayqueiluminarelobjetoaestudiarconuna
radiacinquetengaunalongituddeondainferioralos0.4mdelaluzvisible.Estoseconsigueconlos
microscopioselectrnicosiluminandolaspreparacionesconunrayodeelectronesquetieneunalongitud
deondavariable:cuantomayoreslavelocidadalaquecirculanloselectrones,menoressulongituddeonda.
Elrayodeelectronessegeneraenunctodoysuvelocidadesproporcionalalvoltajedelacorrienteelctrica
aplicada.Assepuedeconseguirunaresolucinde0.002nm,peroenlaprcticalosmicroscopios
electrnicosconsiguenresolucionesde0.2nm

2.PARAMICROSCOPIAELECTRNICADETRANSMISIN

Lospasosaseguirparaobtenerloscortesdeunamuestrahistolgicaquehandeestudiarseconelmicroscopio
electrnicosonsimilaresalosseguidosanteriormente,aunquehaydiferenciasquesesealanacontinuacin.

1.1.Seleccionarlamuestraaestudiar
Losbloquesdetejidosehacenmuchomspequeosparapermitirquelafijacinsearpidayquesepuedan
hacercortesmuyfinos

1.2.Fijacindelamuestra
Lospequeosbloquesdetejidosesumergenenunasolucintamponadadeglutaraldehdoal2.55%(oen
unasolucintamponadadeglutaraldehdoyparaformaldehdo)porqueelglutaraldehdopreservamejorla
estructuradeloscomponentestisulares.Enmuchasocasioneslasolucinfijadoraseperfundeporva
vascularalanimaldeexperimentacinvivoyanestesiadoporqueasseconsigueunafijacinmejoralllegar
elfijadoralostejidostodavavivos.
Despusdelavarlosbloquescontampn,habitualmentesehaceunapostfijacinentetrxidodeosmio
que,ademsdefijarlostejidos,contrastalasestructurastisularesporlaapetenciaquetienenloslpidos
porelosmio.

1.3.Inclusinenresinassintticas(Epon,Araldit,...)
Paraconseguirquelasresinasinfiltrenlamuestrasehacenvariospasosprevios:
Selalavaelexcesodefijadorconunasolucintampn
Secontrastalamuestraenbloque(conacetatodeuranilo,porej.)
Sedeshidrataconconcentracionescrecientesdealcoholoacetonahastallegaralalcoholoalaacetona
100%
Sepasalamuestraporundisolventeintermedio(xidodepropileno,porej.)

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Infiltracindelbloqueenlaresinaartificial(seusaunamezcla1:1deresinaydisolventexidode
propileno)atemperaturaambiente
Inclusindelamuestraenresinaypolimerizacindelaresinaa600Cenunacpsuladegelatinaoplstico.
Cuandolaresinahapolimerizadosesacadelacpsulaelbloquederesinaquecontienelamuestra

1.4.Cortedelamuestra
Elbloquederesinaconlamuestraseponeenunportabloques,setallaelexcesoderesinaquehayalrededor
delamuestra(sehaceunapirmide)ysehacencortesconunultramicrotomoqueusacuchillasdevidrioo
dediamante.
Sehacencortessemifinos(de0.52mdegrosor)quesetienconazuldetoluidinaypermitenexplorary
controlarlazonaquesequiereestudiarconelM.E.
Sehacencortesultrafinos(de50nmdegrosoryunaanchuraylongitudde0.51mm)queserecogenen
unarejilladecobreonquel(3mmdedimetro)

1.5.Contrastedeloscortes
AntesdeestudiarloscortesconelM.E.setien(enrealidadnoseutilizaningncolorante)osecontrastan
loscortesultrafinosconunasolucintamponadadecitratodeplomo(enocasionessehaceeneste
momentoelcontrasteconacetatodeuranilo)

3.PARAMICROSCOPIAELECTRNICADEBARRIDO

Elmicroscopioelectrnicodebarridopermiteestudiarlasuperficiedemuestrasnocortadas,algoqueno
puedehacerseconelM.E.detransmisinporqueloselectronesatraviesanporcompletoelcorte.

Lamuestraaexaminarsefijaysesecaenunevaporadordevaco
Tambinenvaco,lamuestrasecubreconunafinacapadeunmetalpesado:unfilamentodeplatinou
orosecalientaelctricamentehastaqueelmetalseevaporaypartedelcaesobrelamuestraformando
unacapamuyfina.Paraestabilizarlacapademetalstasecubreconunacapadecarbonoevaporadade
unelectrododecarbnadyacente
Enelinteriordelmicroscopio,unintensohazdeelectronesbarrerpidamentelasuperficiedela
muestra:lasmolculasdelamuestraseexcitanyliberanelectronessecundariosqueseconcentranenun
detectordecentelleo.
Lasealresultantesemuestraenuntuboderayoscatdicos:comoelnmerodeelectronessecundarios
producidosencadapuntodelamuestradependedelngulodeincidenciadelhazdeelectronesenrelacin
conlasuperficie,laimagenproducidacontienezonasluminosasalternandoconzonassombreadasquedan
unaaparienciatridimensionalalaimagen
Elinconvenientedeestatcnicaesquesolopuedenexaminarselascaractersticassuperficialesdela
muestrayquetieneunacapacidadderesolucinlimitadaporelgrosordelacubiertametlica(10nm)