PRODUCCIN DE BIODIESEL A PARTIR DE LEVADURAS OLEAGINOSAS EN LA

CIUDAD DE CALI
Margarita Gmez Herrera 2110080
Daniela Mayor Gonzlez 2110079

Presentado a la profesora Consuelo Rojas Cruz

Curso: microbiologa ambiental
Noviembre 25 de 2013

Universidad Autnoma de Occidente

Facultad de Ingeniera
Santiago de Cali
2013

PROBLEMA Y PREGUNTA DE INVESTIGACIN

La contaminacin atmosfrica se dan principalmente por la quema de combustibles de

fsiles, los cuales produce gases contaminantes para el medio ambiente como el dixido
de carbono (CO2), monxido de carbono (CO), entre otros, siendo la capa de ozono las
ms afectada, ya que las plantas no son capaces de fijar nuevamente estos compuestos
por la complejidad de los enlaces qumicos, al suceder esto, los gases suben hasta la
atmsfera contribuyendo directamente al efecto invernadero; debido a esto, la salud de
las personas se ver comprometida, principalmente en enfermedades respiratorias,
afectando as, la calidad de vida de las personas.
Por ello la importancia de generar nuevas alternativas de biocombustibles hechos a partir
de microorganismos es ya una necesidad debido a que estas producen menos polucin.
De aqu nace la pregunta, Que microorganismos se pueden utilizar para producir
biodiesel?

OBJETIVOS
General:
Dar a conocer el uso de levaduras oleaginosas como alternativa para la
produccin de biodiesel en Cali.
Especficos:

Realizar las investigaciones pertinentes para saber cmo es el proceso de produccin de

biodiesel a partir de levaduras oleaginosas y qu especies pueden ser utilizadas para

este.
Mostrar que se puede generar una nueva alternativa de biodiesel, la cual traera
beneficios como la disminucin de la contaminacin atmosfrica y de los monocultivos de
palma para la produccin de biodiesel.
De estudio:

Conocer la importancia de los microorganismos en la investigacin cientfica y para el

desarrollo.
Aplicar los conceptos vistos en clase y a partir de estos conocimientos adquiridos, poder
optimizar procesos de produccin.

JUSTIFICACIN

Santiago de Cali, como la tercera ciudad ms poblada de Colombia, tiene una gran
congestin vehicular, debido al gran nmero de vehculos particulares y de transporte
pblico que transitan por sus calles, segn datos de La Secretara de Trnsito y
Transporte Municipal (STTM), en Cali circulan alrededor de 7000 motos, 240.000
vehculos particulares, con un total de 357.927 automotores. La quema de combustibles
como la gasolina para permitir la movilidad de estos vehculos, producen una gran
contaminacin atmosfrica al liberar gases como monxido de carbono y dixido de
carbono, siendo estos uno de los principales contribuyentes al deterioro de la salud de los
caleos, causando enfermedades respiratorias en poblacin vulnerable, que son personas
menores de 5 aos y mayores de 60 aos (DAGMA, 2009).
Esta es la razn por la cual el tema del proyecto es la bsqueda de biodiesel ms
amigables con el medio ambiente a partir de microorganismos como las levaduras
oleaginosas, ya que con el uso del biodiesel en los diferentes vehculos, el CO2 liberado
en el proceso de la combustin puede ser fijado nuevamente en la fotosntesis, aplicando
el concepto de desarrollo sostenible contribuyendo as al mejoramiento de la calidad de
aire en la ciudad, reduciendo los niveles de contaminacin para recuperar la salud de las
personas que se han visto afectadas por este problema y proteger la de futuras
generaciones.

MARCO CONCEPTUAL

Los Biocombustibles son steres que pueden hacerse a partir de distintos tipos de
aceites: girasol, soja, de palma e incluso de aceites usados provenientes de la industria
alimenticia, as como tambin de la grasa animal, se obtiene a partir de biomasa que
funciona en cualquier motor de ciclo disel, sin necesidad de realizar ninguna
modificacin en los mismos. (Corporacin colombiana de investigacin agropecuaria
CORPOICA. Produccin de biodiesel. 2008). Este tipo de combustible es biodegradable
segn ASOCAA: el 85% se degrada en aproximadamente 28 das, mientras que los
combustibles fsiles pueden durar aos para degradarse. (1)
Segn el diccionario ABC: La gasolina es una mezcla de hidrocarburos lquidos,
inflamables y voltiles logrados tras la destilacin del petrleo crudo. Tradicionalmente, se
emplea como combustible en los motores de explosin interna con encendido a chispa
convencional, o en su defecto, por compresin y tambin como disolvente. Esta se
obtiene a partir del petrleo, en un recinto especial conocido como refinera. (2)
Shchiffer y Lpez afirman: los vehculos a motor son la fuente de mayor contaminacin
ambiental, ya que son los generadores principales de monxido de carbono (CO), xidos
de nitrgeno (NOx), compuestos orgnicos voltiles (cov), y gases responsables del
efecto invernadero (CO2 y metano). Por cada litro de gasolina consumido por un
automotor, unos 2.4 kg de CO2, se van a la atmsfera. (3).
La corporacin colombiana de investigacin agropecuaria CORPOICA, afirma que El
biodiesel es un combustible sustituto del combustible para motores disel, que puede ser
producido partiendo de materias primas agrcolas (aceites vegetales y/o grasas animales),
aceites o grasas de fritura usados y metanol o etanol (estos tambin pueden ser
obtenidos a partir de productos agrcolas). (4)
Segn el grupo de investigacin del programa de maestra de sistemas energticos y
medio ambiente de la universidad de Strathclyde: Este tipo de biocombustible es una
mezcla de diferentes steres alqulicos producidos de aceites vegetales, a travs de un
proceso llamado transesterificacin. En este, los aceites vegetales y una cadena corta de
alcohol (metanol o etanol principalmente) en la presencia de un catalizador (usualmente
NaOH o KOH) se convierten en steres alqulicos y glicerine. (5). La corporacin
colombiana de investigacin agropecuaria CORPOICA, tambin afirma que El biodiesel

puro es biodegradable, no txico y esencialmente libre de azufre y compuestos

aromticos, sin importar significativamente el alcohol y el aceite vegetal que se utilicen en
este proceso. (4)

Figura No. 1. Proceso de produccin del biodiesel tradicional.

Fuente: Ecopetrol, (2008). Tomado de www.ecopetrol.com.co
Segn el Instituto Interamericano de cooperacin para la agricultura ICA: Los vehculos
que funcionan con biodiesel reduce las emisiones de dixido de carbono hasta en un
78%, disminuyen los hidrocarburos cancergenos hasta en un 75%, reduce la emisin del
holln en un 40% a 60% y reduce la emisin de monxido de carbono CO entre un 10% y
50%. Si se reemplaza una tonelada de ACPM por una tonelada de biodiesel, se evitara la
emisin de 3.3 toneladas de CO2. (6).
En el artculo Proceso para la produccin de biodiesel (metilester o steres metlicos de
cidos grasos), Refinacin de glicerina, el Ing. Rodolfo J. Larrosa dice que las emisiones
de gases con el biodiesel son:
Monxido de carbono (CO): la emisin durante la combustin del biodiesel en motores
disel es 50% menor a la producida cuando se usa el combustible disel.
Dixido de azufre (SO2): no se produce emisin de dixido de azufre por cuanto el
biodiesel no contiene azufre. Este gas es nocivo para la salud humana y tambin para la
vegetacin.

 Material particulado: la emisin de estas partculas finas nocivas para la salud con el
empleo del biodiesel, se reduce del 65% respecto del combustible diesel.
Productos orgnicos aromticos: el biodiesel no contiene productos aromticos
(benceno y derivados) siendo estos bastante txicos para la salud.
Balance de dixido de carbono (CO2): el dixido de carbono emitido durante la
combustin del este biocombustible es totalmente reabsorbido por los vegetales. Por lo
tanto, el biodiesel puede ser considerado un combustible renovable. (7)
Segn la empresa GNSA ingeniera:
En caso de prdidas de derrames de biodiesel en el terreno o en el ambiente en general,
el mecanismo predominante de la biodegradacin es aquel debido a la actividad
microbiana. La biodegradabilidad es la facilidad con la cual la molcula de un compuesto
qumico se rompe en otras ms simples llegando a formar CO2 y H2O.
El biodiesel est formado por cadenas hidrocarbonadas que forman steres con dos
tomos de oxgeno, lo que lo hace biolgicamente activo. En el proceso de degradacin
los cidos grasos se oxidan y degradan formando cido actico y un cido graso con
pocos tomos de carbono.
A diferencia del biodiesel, los componentes del diesel se biodegradan lentamente o no
son biodegradables. Esto es porque este combustible est formado por una mezcla de
alcanos, alcanos

ramificados, cicloalcanos e hidrocarburos aromticos. Muchas

especies de microorganismos pueden degradar los alcanos, los otros compuestos pero
los aromticos son ms resistentes a la degradacin. El diesel contiene pocos
componentes que poseen oxgeno en su molcula y por este motivo se considera como
poco activo biolgicamente. (8)
En la tabla que se muestra a continuacin, se realiza una comparacin entre el
combustible diesel tradicional y el biodiesel, evidencindose una menor emisin de
compuestos contaminantes con el uso del biocombustible.

Tabla No. 1. Beneficios ambientales del biodiesel.

Fuente: Universidad del Norte (2005). Emisiones gaseosas y opacidad del biodiesel de
palma.
Historia de los biocombustibles:
A finales del siglo XIX, Rudolf Diesel (1858-1913) un ingeniero alemn, invent un motor
de combustin que utilizaba fuel oil y a partir de all desarroll tempranas versiones de
una mquina que utilizaba aceite de man como energa, incorporando desde ese
entonces un combustible a parte de los fsiles, pero fue a partir del ao 1970 que el tema
de biocombustibles se desarroll de forma significativa a raz de la crisis energtica del
momento y del elevado costo del petrleo. A finales del ao 1979, debido a la
preocupacin que gener la primera crisis del petrleo, empresas estadounidenses como
Oil Company comenzaron a comercializar una mezcla de etanol para diluir la gasolina.
Los combustibles alternativos se convirtieron as en la solucin al problema que
representaba el agotamiento de los recursos no renovables. En 1982, en Austria y
Alemania, se llevaron a cabo las primeras pruebas tcnicas con este combustible vegetal
y en 1985, en Silberberg (Austria) se construy la primera planta piloto productora de
biodiesel a partir de las semillas de colza o canola (NextFuel. Historia del biodiesel. 2006),
pero originalmente fue Expedito Parente un cientfico brasileo desarroll el primer
proceso industrial de produccin de Biodiesel y defini los parmetros de fabricacin y

controles de calidad que sirven para calificar un combustible como Biodiesel. (Gautier,J.
Historia del biodiesel. 2012).
Aos despus, se fueron desarrollando medidas en pases como Austria, Italia, Francia y
Alemania para incrementar el uso de estos biocombustibles. En el ao 2005, en Estados
Unidos, especficamente en el estado de Minnesota, se hizo obligatorio mezclar la
gasolina con un mnimo de 2% de Biodiesel, esto con el fin de reducir las emisiones de
gases contaminan el medio ambiente. (NextFuel. Historia del biodiesel. 2006).
Historia: produccin de biodiesel a partir de microorganismos.
Prez, Otero y lvarez en su artculo Produccin de biodiesel a partir de
microorganismos oleaginosos. Una fuente de energa renovable, afirman que:
Desde finales del siglo XX aparece un creciente inters en la produccin de biodiesel
microbiano como una fuente de energa alternativa para la sustitucin de los combustibles
hidrocarbonados empleados en el transporte, debido a la posibilidad real del agotamiento
de los combustibles fsiles en el futuro, as como una va para reducir el calentamiento
global debido a las emisiones de gases con efecto invernadero. En la naturaleza se
encuentra un amplio rango de microorganismos capaces de incorporar en su biomasa
cantidades significativas de lpidos bajo ciertas condiciones de propagacin: microalgas,
levaduras, hongos y bacterias. Estos lpidos en algunos casos presentan un perfil de
cidos grasos adecuados para la produccin de biodiesel. Se ha demostrado que la
produccin de aceites microbianos presenta varias ventajas con relacin a su produccin
a partir de las plantas: poseen un tiempo de reproduccin ms corto, requieren
operaciones menos complejas, no se afectan por los cambios climticos o estacionales y
su produccin es mucho ms fcil de escalar. (9)

Antecedentes de produccin de biodiesel a partir de microorganismos:

Como antecedente local, se tiene el estudio Produccin de biocombustibles de tercera
generacin: Transesterificacin de aceite sinttico de microalgas para la Produccin de
biodiesel, por V. Plata y V. Karkof, en el cual se realiza un anlisis de la mezcla de los
aceites obtenidos por transesterificacin de dos especies de microalgas: Chlorella
protothecoides y Nannochloropsis oculat, cuya composicin de cidos grasos se aproxima
a la del aceite de la microalga Chlorella Vulgaris, que es la especie utilizada para la

produccin de este tipo de biocombustibles pero por la imposibilidad de adquirir este

aceite o producirlo en cantidades necesarios en Colombia, se opt por seguir esta
metodologa propuesta en este proyecto de investigacin, el cual est apoyado por el
Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural de Colombia. El estudio concluye que la
produccin de biodiesel a partir de aceite de este tipo de microorganismos contribuir
notablemente a la disminucin de emisiones de gases de efecto invernadero producidos
en la combustin de combustibles fsiles y que igualmente evita el uso de cultivos que se
pueden emplear para la alimentacin humana como materia prima. (10)
.El otro antecedente es el proyecto: Bacterias: materias primas de los biocombustibles,
realizado por el grupo de investigacin de la facultad de ciencias naturales de la
Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco, en el cual se estudian bacterias
oleaginosas capaces de transformar los residuos orgnicos en aceites para biodiesel que
pueden ser obtenidos del ambiente, producto de la contaminacin.
El objetivo del proyecto es desarrollar y optimizar el proceso de produccin de aceites
para biodiesel a partir de residuos orgnicos por medio de bacterias oleaginosas. La
investigacin logr desarrollar un mtodo de tincin (mtodo de coloracin) de colonias
para la seleccin de bacterias oleaginosas del ambiente y obtuvo los valores de
rendimiento de biomasa y aceites, a partir de diferentes residuos orgnicos, utilizando
diferentes bacterias autctonas de la Patagonia.
Adems los investigadores involucrados encontraron algunos de los genes involucrados
de manera directa en la utilizacin de residuos orgnicos y en la produccin de aceites en
las bacterias objeto de estudio. Estos resultados contribuyen a mejorar el entendimiento
de los procesos bioqumicos que intervienen en la produccin de aceites en las bacterias
y a partir de estos conocimientos, se trabaja en la optimizacin y desarrollo del proceso de
produccin de aceites para biodiesel a mayor escala. El resultado que se busca es una
nueva fuente de biocombustibles, a travs de diferentes microorganismos, procesos y
mtodos de produccin. (11).

LEVADURAS:
Se denomina levadura a cualquiera de los diversos hongos microscpicos unicelulares
que son importantes por su capacidad para realizar la fermentacin de hidratos de
carbono, produciendo distintas sustancias.
En algunos textos de botnica han definido las levaduras verdaderas a aquellas que
pertenecen a la especie Ascomycota, pero desde la perspectiva microbiana, se han
denominado levaduras a todos los hongos de una fase unicelular en su ciclo de vida,
incluyendo a los hongos basidiomicetes.
A veces suelen estar unidos entre s formando cadenas. Producen enzimas capaces de
descomponer diversos sustratos, principalmente los azcares.
Las levaduras se reproducen asexualmente por gemacin o brotacin y sexualmente
mediante ascosporas o basidioesporas. Durante la reproduccin asexual, una nueva
yema surge de la levadura padre cuando se dan las condiciones adecuadas, tras lo cual
la yema se separa del padre al alcanzar un tamao adulto.
En condiciones de escasez de nutrientes las levaduras que son capaces de reproducirse
sexualmente formarn ascosporas. Las levaduras que no son capaces de recorrer el ciclo
sexual completo se clasifican dentro del gnero Candida. (12)
LEVADURAS OLEAGINOSAS:
Las levaduras oleaginosas conforman un grupo numeroso de estos microorganismos
hetertrofos. Se consideran levaduras oleaginosas aquellas capaces de acumular un 20
% o ms de su biomasa en forma de lpidos, generalmente TGCs. Para que se produzca
un almacenamiento significativo de grasas en la clula microbiana es importante, adems
de seleccionar las cepas adecuadas, formular los medios de cultivo pobres en nitrgeno y
fsforo. Por ello, en muchas levaduras la mayor sntesis de grasas se consigue cuando el
medio de cultivo tiene un contenido de nitrgeno de 50-70 % por debajo del contenido
ptimo. Con las cepas de levaduras adecuadas para la produccin de grasas pueden
obtenerse hasta un 50-70 % de las mismas respecto a su base seca. (9)

METODOLOGA

Para cumplir los objetivos planteados en este proyecto, se realizarn actividades

pertinentes a la problemtica planteada.
Primeramente, se realiz una bsqueda bibliogrfica del tema de microorganismos,
especficamente de las levaduras oleaginosas y sus caractersticas, asimismo, los
antecedentes investigativos acerca de la produccin de biodiesel.
A partir de esta informacin obtenida, se realiz una visita a la Universidad San
buenaventura de Cali, donde actualmente se adelanta una investigacin de levaduras
para la produccin de bioetanol.
Como parte de esta metodologa, se realiz la consulta a un experto, quien fue Mauricio
Ramrez, bilogo, magister en biologa celular y molecular, y actualmente estudiante de
postgrado, al cual se le realizaron las siguientes preguntas:
1. Cul es el principal beneficio de usar biocombustibles frente a los combustibles
tradicionales (combustibles fsiles)?
2. Es viable implementar la produccin de biodiesel a partir de microorganismos como
las levaduras en un pas como Colombia?
3. Qu caractersticas qumicas tienen este tipo de biocombustibles que hacen que las
plantas puedan fijar el CO2 producto del proceso de combustin?
4. Cmo es el medio de cultivo para este tipo de microorganismo? Que tan complejo
puede llegar a ser implementarlo?
Igualmente se consultaron fuentes bibliogrficas, como produccin limpia y energa
renovables.
Con base en los resultados de estas consultas, se proceder a realizar la discusin, en la
cual se desarrollara la propuesta de la produccin de biodiesel a partir de levaduras en la
ciudad de Cali.

LOCALIZACIN

Figura No.2 Mapa Santiago de Cali.

La ciudad Santiago de Cali, oficialmente la capital del departamento Valle del Cauca, dista
484 Km. de Santaf de Bogot, capital del pas. Ubicada en las coordenadas Latitud norte
327'26", Longitud oeste (Meridiano de Greenwich) 7631'42", con una Altura sobre el
nivel del mar (Coordenadas 110.000N, 110.000E) de 1,070m y una Superficie Total del
Municipio 560.3 (km2).
Limitando con los municipios de La Cumbre y Yumbo al norte, municipios de Palmira,
Candelaria y Puerto Tejada al oriente, el municipio de Jamund al sur y los municipios
de Buenaventura y Dagua al occidente.
FUENTE: DOCUMENTO PDF, CALI EN CIFRAS 2011 PROPORCIONADO POR LA
ALCALDIA

DE

CALI,

MEDIANTE

LA

PAGINA

WEB

OFICIAL

<http://www.cali.gov.co/publicaciones.php?id=49222>, 2011.

RESULTADOS
Las levaduras oleaginosas conforman un grupo numeroso dentro de los microorganismos
hetertrofos productores de aceite capaces de crecer en fuentes carbonatadas naturales
(como azcares), que pueden ser empleados para la produccin de biodiesel, aunque no
son tan eficientes como las microalgas fotosintticas.
Dentro de las especies de levaduras ms prometedoras para la produccin de grasas se
encuentran: Candida curvata, Cryptococcus curvatus, R. gracilis, R. mucilaginosa, Y.
lipolytica y R. toruloides, entre otras. (9).
En ese orden de ideas, se pudo confirmar gracias a la entrevista que se le realiz al
bilogo, magister en biologa celular y molecular, y actualmente estudiante de postgrado
Mauricio Ramrez, que a nivel de laboratorio, se hizo un experimento con levaduras
oleaginosas, con el fin de extraer los lpidos que ellas producen, para posteriormente ser
utilizados para la produccin de biodiesel, aunque esta ltima parte no se llev a cabo en
dicho procedimiento.
La tabla No.2 que se presentan a continuacin muestran el valor de rendimiento en g/L y
el porcentaje de lpidos que tienen diferentes especies de levaduras, y la No.3 muestra la
composicin de cidos grasos de los lpidos de las diferentes levaduras oleaginosas.

Tabla 2. Produccin de lpidos de algunas levaduras

Tabla 3. Composicin de cidos de los lpidos de diferentes levaduras oleaginosas.

Fuente: Adaptado de Faife-Prez, Evelyn, Otero-Rambla, Miguel A., lvarez-Delgado,

Amaury. Produccin de biodiesel a partir de microorganismos oleaginosos. Una fuente de
energa renovable. Parte I. Levaduras y bacterias ICIDCA. Sobre los Derivados de la
Caa de Azcar [en lnea] 2012, 46 (Enero-Abril): [Fecha de consulta: 20 de septiembre
de 2013] Disponible en:<http://estudiosterritoriales.org/articulo.oa?id=223123848004>
ISSN 0138-6204.

Con base en la tabla no. 2, se afirma que la levadura Rhodosporidium toruloides es la

que ms produce grasa, especficamente cidos grasos monoinsaturados, los cuales
pueden ser utilizados como sustrato para la produccin de biodiesel.
Para producir este tipo de biocombustible a escala de laboratorio, se deben realizar una
serie de procedimientos, los cuales se describirn a continuacin:
1. Obtencin del aceite de las levaduras:
El proceso a realizar para la obtencin del aceite consta de dos etapas: una fase de
crecimiento en un medio nutricionalmente completo, seguido por una etapa de
acumulacin de lpidos Novo que empezar cuando un nutriente diferente a la fuente
de carbono, comienza a ser limitante. (9).
Segn el bilogo Mauricio Ramrez:
En esta primera fase, se selecciona un medio en el cual se van a aislar las levaduras.
En este caso, se escogi el queso, ya que segn la licenciada Teresa Ober, en su
artculo Accin perjudicial de las levaduras sobre los alimentos, en esta clase de
producto lcteo predominan especies como Ya. lipolytica, Cry. albidus, Cry. laurentii,
Rho. minuta, Rho. glutinis, Rho. rubra y Deb. hansenii (13). Se aslan las levaduras en
un medio rico y nutritivo que tiene extracto de levadura al 0.5%, treptona 1%, glucosa
2% y agar. Es necesario adicionar de igual forma antibitico para inhibir el crecimiento
de las bacterias.
En la segunda fase, se seleccionan las cepas de inters y se realiza un test de
fluorescencia, para lo cual se utiliza como reactivo el rojo de nilo, este se intercala con
todos los cidos grasos y mediante microscopia de fluorescencia se pueden observar
las clulas. El reactivo reacciona con los cidos grasos y pasa a dar un color amarillo.
Entre ms amarillas estn las clulas, ms cantidad de cidos grasos tienen.
Despus de tener la cepa de la levadura, en este caso la Ya. lipolytica, se hace un
preinculo en un Erlenmeyer con 50 mL del medio seleccionado y se coloca una
cantidad de levadura, se deja crecer y cuando est terminando su fase exponencial de
crecimiento, se procede a hacer el inculo, que sera la segunda etapa del proceso.
Para esto, lo primero que se hace es poner la muestra en una centrifugadora, con el fin
de sacar la cantidad de la biomasa de levaduras que se encontraba precipitada. Se
estandarizar por cmara de Neubauer, la cantidad de clulas que se va a colocar en un
nuevo medio, 1 mL en agua o solucin salina. Despus de esto, ya se realiza la

inoculacin en un medio que va a inducir la acumulacin de lpidos. El medio contiene:

10% de glucosa, 0.1% de KH2PO4, 0.1% de (NH4)2SO4 y 0.05% de MgCl2-6H2O.
Este implica un desbalance energtico, por lo cual se va a colocar una concentracin
100 veces mayor de glucosa que de nitrgeno (relacin carbono/ nitrgeno = 10/1), ya
que en general, mientras mayor sea el contenido de nitrgeno, menor ser la
acumulacin de lpidos, esto es porque las clulas slo empiezan a transformar el
sustrato en grasas de reserva slo cuando la reserva de nitrgeno en el medio se ha
agotado y ha terminado, por lo tanto, la sntesis de protena y el consecuente
crecimiento celular. (9).
Despus, se ponen la cantidad de clulas previamente determinadas por cmara de
Neubauer, en 50 mL del medio; esto se pone en un shaker por 72 horas, con una
temperatura de 30C, a unos 150 rpm, ya que la concentracin de oxgeno disuelto
tiene una correlacin positiva con la acumulacin de lpidos (9). Este es un
experimento Batch.
Terminadas las 72 horas, se realiza otro proceso en el cual se toma una muestra de 10
uL de las clulas y se fijan con la solucin TBS en un portaobjetos, se colorean de
nuevo con el reactivo, se dejan durante 5 minutos, se lavan y se vuelven a mirar las
clulas de nuevo en el microscopio, las rojas son las que no sirven y las amarillas son
las oleaginosas. (M. Ramrez, comunicacin personal, 30 de octubre de 2013). Estas
ltimas se muestran en la figura No. 3.

Figura No. 3: Levaduras oleaginosas observadas a travs de un microscopio de

fluorescencia.
Fuente: Ramrez, Mauricio (2012).Levaduras oleaginosas do rio grande do sul:
expresso gnica envolvida na modulao de acmulo de lpidos.

2. Catlisis enzimtica con lipasas para producir el biodiesel

Llegado el momento de la catlisis, la enzima (lipasa), lleva a cabo la hidrlisis de los
triglicridos en los cidos grasos, esto provoca una disminucin en el estado de
transicin, logrando acercar las molculas para que se puedan llevar a cabo los
rompimientos de los enlaces del sustrato, y se forme los lpidos. (17)

Figura No.4 El mecanismo general de catlisis de las lipasas, independientemente del

disolvente (tomado de Andersch.P, et al. (1997), Ester Synthesis via acyl Transfer.
Methods in Enzimology 286 pp. 406-443).

3. Proceso de extraccin de los lpidos

Despus de que se tengan las clulas oleaginosas, se procede a extraer los lpidos, esto
se realiza con el mtodo de Bligh & Dyer (1959), Este mtodo comprende etapas de
agitacin, centrifugacin, filtracin y destilacin, usando metanol, cloroformo y agua como
solventes (14). El metanol es un solvente polar que disuelve los lpidos polares, y el
cloroformo es un solvente no polar el cual disuelve los lpidos neutros presentes en la
extraccin y el agua al ser un disolvente polar permite separar la fase metanol /lpidos
polares de la fase cloroformo/ lpidos neutros. (15).
Gonzlez y Kafarov afirman que:
El procedimiento consiste en la homogeneizacin a alta velocidad de la biomasa
con una mezcla metanol-cloroformo en una proporcin de 2 a 1, seguidamente se
agrega una parte de cloroformo y se deja homogeneizar por 30 segundos,
despus se agrega una parte de agua y se deja homogeneizar por otros 30
segundos. Luego de esto se realiza una filtracin y una centrifugacin, despus se
la cual quedan separadas las fases de metanol y cloroformo, se realiza una
evaporacin del cloroformo y se obtiene el aceite extrado. (16).
4. Transesterificacin
La transesterificacin es un proceso qumico a travs del cual aceites (maravilla y raps
principalmente) se combinan con alcohol (etanol o metanol) para generar una reaccin
que produce steres grasos como el etil o metilo ester. Estos pueden ser mezclados con
diesel o usados directamente como combustibles en motores comunes. (18)
El proceso de transesterificacin, consta de 3 ingredientes necesarios:
1. el primer ingrediente sera el aceite a partir de las levaduras oleaginosas
2. alcohol, metanol, o etanol.

3. catalizador. Se pueden utilizar el KOH hidrxido de potasio) o NaOH (hidrxido de sodio

o soda custica). el KOH, posee una ventaja, y es que la glicerina que queda al final del
proceso, es menos txica que cuando se utiliza NaOH, por lo que es posible, procesar
esta glicerina y producir un fertilizante artificial, igualmente, el KOH, se disuelve mejor en
metanol, pero el NaOH tambin posee ventajas, es econmico, y su manipulacin es fcil.
Para poder utilizarlos en el proceso, no deben de tener menos de 85% de pureza, con un
ptimo de 96% de pureza.
Siempre se deben de tomar medidas de bioseguridad, al momento de manipular estos
qumicos. (19)
Proceso:

Figura No. 5, Un alcohol acta como reactivo nucleoflico en la esterificacin de un

cido; en la hidrlisis de un ster, un reactivo nucleoflico desplaza a un alcohol.
Si se tiene esto presente, no es de sorprender que un alcohol pueda desplazar a
otro de un ster. Esta alcoholisis (escisin mediante un alcohol) de un ster se
denomina transesterificacin.

Fuente: Adaptado de transesterificacin. Recuperado el da 14 de Noviembre de

<http://organica1.org/qo1/ok/acidos2/acido20.htm>

Figura No.6 La transesterificacin es catalizada por cidos (H2SO4 o HCI seco) o

bases

(generalmente

un

ion

alcxido). As,

para

la

transesterificacin

cida,

tenemos:

Fuente: Adaptado de transesterificacin. Recuperado el da 14 de Noviembre de

<http://organica1.org/qo1/ok/acidos2/acido20.htm>
Figura No. 7 transesterificacin catalizada por bases:

Fuente: Adaptado de transesterificacin. Recuperado el da 14 de Noviembre de

<http://organica1.org/qo1/ok/acidos2/acido20.htm>

La transesterificacin es una reaccin de equilibrio. Osea que para desplazarlo

hacia la derecha, es necesario

utilizar un gran exceso del alcohol cuyo ster

queremos, o bien eliminar uno de los productos de la mezcla reaccionante. Este

ltimo enfoque es preferible siempre que sea aplicable; de esta manera puede
llevarse la reaccin hasta la conversin total. (20)
En la bsqueda de investigaciones actuales que se estn realizando en el Valle del
Cauca acerca de los usos biotecnolgicos que pueden tener las levaduras, se encontr el
banco de levaduras ubicado en la universidad de San Buenaventura en Cali. Segn Ral
Cuervo, director del grupo investigativo, en este banco hay levaduras autctonas del Valle
del Cauca, estas son procedentes de suelos, frutas y bebidas fermentadas, las cuales se
utilizan para la produccin de etanol. Segn los experimentos realizados por el grupo de
investigacin en esta rea, hasta ahora se ha podido comprobar que 10 de estas
levaduras producen el alcohol para hacer bioetanol. (R. Cuervo, comunicacin personal,
25 de octubre de 2013).
DISCUSIN
El uso de biodiesel en general trae grandes ventajas, ya que al ser un combustible
generado a partir de elementos naturales (palma, grasas animales, y microorganismos)
las emisiones que genera son menos nocivas tanto para el ambiente como para la salud
de las personas, esto se da porque estn conformados por compuestos menos complejos
que los que se encuentran en los combustibles fsiles (hidrocarburos aromticos, sulfuros
y partculas de holln (Balat y Balat., 2010), por lo cual las plantas son capaces de fijarlo
nuevamente, para realizar su proceso de fotosntesis (J. Wilches, comunicacin personal,
29 de octubre de 2013). Esto disminuira la contaminacin atmosfrica, pero si se realiza
a gran escala, ya que si implementa en menor escala no tendra un porcentaje
significativo frente al problema tan grande que existe a nivel mundial de la contaminacin
atmosfrica por gases como el CO2.
Comparacin de los impactos en los diferentes campos del biodiesel de palma y el
biodiesel por levaduras:

IMPACTOS EN:

BIODIESEL DE PALMA LEVADURAS

AFRICANA

AGRICULTURA

La
produccin
de
biodiesel a partir del
aceite de esta palma,
causa en los medios
acuferos, un exceso de
eutrofizacin, gracias al
uso masivo de pesticidas
y fertilizantes, ya que
estos poseen grandes
cantidades de Nitrgeno
(N) y fsforo (P).
As mismo causa gran
erosin y degradacin de
la tierra, ya que son
cultivos que requieren
una gran cantidad de
nutrientes, dejando el
suelo infrtil para el
cultivo
de
alimentos.
(Gmez,
Samaniego,
Antonissen.
Consideraciones
ambientales en torno a
los
biocombustibles
lquidos. 2008).

Para cultivar este tipo de

microorganismo no es
necesario el uso de
grandes extensiones de
terreno, que se pueden
utilizar para el cultivo de
alimentos.

INDUSTRIA

Afecta la industria en el
sentido, que utiliza tierras
que pueden ser aptas
para la produccin de
insumos necesarios para
la realizacin de los
diferentes
procesos
industriales; igualmente
se puede ver afectado, de
manera
indirecta
los
recursos hdricos que
podran
utilizarse
en
dichos procesos, pero
que
se
encuentran
contaminados
por
pesticidas y fertilizantes.

Aporta a la solucin que

tiene la industria lechera
con el depsito de
algunos residuos
de
productos lcteos, ya que
algunos de estos, como
los quesos que ya estn
en
proceso
de
descomposicin, son el
medio adecuado para
que crezcan especies de
levaduras
oleaginosas,
sin afectar el alimento
para las personas. (13).
La
ventaja,
en
comparacin con las
microalgas, es que su

crecimiento
puede
llevarse a cabo en
plantas
de
biomasa
convencionales, lo que
reducira los costes de
produccin. (21)
Adems,
se
pueden
utilizar un amplio abanico
de materias primas como
fuente
de
carbono
durante su crecimiento y
pueden
manipularse
genticamente
para
mejorar u optimizar la
acumulacin de lpidos.
(21)
SOCIAL

El
instituto
de
Investigacin
de
Recursos
Biolgicos
Alexander Von Humboldt
informa que debido al
monocultivo de la palma
africana: se pierde la
base del sustento de la
poblacin nativa y en
algunos casos se produce
el desplazamiento de las
comunidades
negras,
indgenas y campesinas
de la zona(22); esto
afecta directamente la
calidad de vida de las
personas, ya que al
ocurrir este evento, se
podran
crear
asentamientos
suburbanos,
que
no
poseern
condiciones
bsicas de saneamiento,
por lo cual llevara a la
aparicin de mltiples

Debido
que
la
produccin de levaduras
oleaginosas, no est
determinada por grandes
extensiones de cultivo,
por consiguiente, no se
van a crear monocultivos,
que puedan afectar de
manera
directa,
el
sustento
de
las
comunidades, que viven
de la agricultura.

enfermedades.
ECOSISTEMA

Segn el Instituto de
Investigacin
de
Recursos
Biolgicos
Alexander Von Humboldt,
se afirma que las
plantaciones de palma no
son
bosques,
sino
ecosistemas
uniformes
que
sustituyen
los
ecosistemas naturales y
su biodiversidad. Esto
usualmente resulta en
impactos
sociales
y
ambientales
negativos:
decrece la produccin de
agua, se modifica la
estructura y composicin
de los suelos, se altera la
abundancia
y
composicin de especies
de fauna y flora, (22).

El ecosistema, se ve
beneficiado ya que no se
necesitan
grandes
extensiones de cultivos,
para
producir
las
levaduras
oleaginosas,
igualmente, superan el
rendimiento
de
produccin de lpidos, en
comparacin a otros
microorganismos como
hongos y bacterias. (21)

Desventajas del proceso de produccin de biodiesel a partir de levaduras

oleaginosas:
Este procedimiento, a pesar de tener muchas ventajas, tambin posee algunas
dificultades que pueden complicar la utilizacin de este tipo de microorganismos para una
produccin del biocombustible a gran escala. Estas son:
1. El uso para la extraccin de lpidos de sustancias de un alto grado de contaminacin
como el cloroformo, ya que este tiene peligrosos efectos en:

La salud: Una persona expuesta a este compuesto en altas concentraciones puede

presentar narcosis, paro cardiorrespiratorio o muerte tarda por lesiones hepticas y
renales. Es nocivo cuando penetra en el organismo por inhalacin, ingestin o por va
percutnea, por esta ltima puede provocar desengrasado de la piel y quemaduras de

tipo qumico. En la fase de extraccin del lpido, es necesaria para el manejo de los
solventes, la presencia de obreros. Estos estaran expuestos a concentraciones bajas de
este producto adquiriendo una dependencia que presentan sntomas de ndole
neurolgico y gastrointestinal, parecidos a los que se dan en los casos de alcoholismo
crnico. Tambin tendra consecuencias como agrandamiento y degeneracin grasa del
hgado y hepatitis txica. (Portal de prevencin de riesgos del trabajo. Los riesgos del
cloroformo. 2013). Por esta razn, actualmente no se recomienda el uso de esta sustancia

como solvente industrial.

En el medio ambiente: En caso de una exposicin ambiental del cloroformo, este puede:
viajar del suelo a las aguas subterrneas y llegar hasta las reservas de agua, ya que se
disuelve fcilmente en medios acuosos y permanecer mucho tiempo tanto en el aire
como en el agua subterrnea, debido a que se evapora fcilmente. Entre los productos de
su descomposicin en el aire se incluyen el fosgeno, que es ms txico que el cloroformo,
y el cloruro de hidrgeno, que tambin es txico. Cierta cantidad de cloroformo tambin
puede descomponerse en el suelo, pudindose encontrar en pequeas cantidades en los
alimentos. (Agency for Toxic Substances and Disease Registry. Resumen de salud
pblica: cloroformo. 2010).
En este proyecto se propone que se realicen investigaciones para mejorar el proceso de
extraccin de lpidos, como las que se estn realizando actualmente el Centro de
Investigaciones para el Desarrollo sostenible en Industria y Energa de la Universidad
Industrial de Santander, con el apoyo de por el Ministerio de Agricultura y Desarrollo
Rural, la Corporacin Instituto de Morrosquillo, el Instituto Colombiano del Petrleo ICPECOPETROL, la Universidad Industrial de Santander y el Programa Iberoamericano de
Ciencia y Tecnologa para el Desarrollo CYTED y tesis como Adaptacin del mtodo de
Bligh & Dyer (1959) a la extraccin de lpidos de microalgas nativas para la produccin de
biodiesel de Leislly Dariana Galindo Vega y Silvia Susana Gonzlez Muoz, tambin de
la universidad Industrial de Santander, en las cuales se realiza la bsqueda de posibles
adaptaciones y mejoras en este proceso de extraccin, en los dos casos es para el
biodiesel a partir de microalgas, ya que este es el microorganismo que ms se est
trabajando en investigaciones para la realizacin del biodiesel, sin embargo, si este nueva

fuente de lpidos como son las levaduras oleaginosas, se conocieran ms, tambin se
podran realizar este tipo de investigaciones con el fin de que sea ms viable el proceso.
Para una mayor viabilidad econmica, se propone continuar con la exploracin de nuevas
fuentes de carbono adems de la glucosa, debido a su alto costo; entre las que se han
encontrado hasta ahora estn la xilosa, la arabinosa, la manosa, el glicerol y otros
desechos agroindustriales.(9).
CONCLUSIONES

Los microorganismos juegan un papel fundamental en el desarrollo de la biotecnologa, ya

que son una fuente de energa renovable para la produccin de biocombustibles como el
biodiesel. El uso masivo de este en una ciudad con tantos problemas de contaminacin
atmosfrica como Santiago de Cali, traera grandes beneficios tanto al medio ambiente
como a la salud de la poblacin, disminuyendo la emisin de gases nocivos por parte de
las fuentes mviles.
Por medio de la investigacin, se logr establecer, que las microalgas, no son los nicos
microorganismos que pueden ser utilizados para la produccin de biodiesel, sino que por
el contrario, actualmente, se est explorando en nuevos microorganismos, que seran
igual de eficiente a las microalgas como es el caso de las levaduras oleaginosas; siendo
el cultivo de estas simple y menos costoso; ya que se puede utilizar como medio para su
crecimiento residuos lcteos como quesos, evitando el uso de grandes plantaciones que a
su vez traen problemas sociales, ecolgicos y agrcolas. Como todo, esta alternativa
tambin tiene algunas dificultades, como el uso de solventes contaminantes para la
extraccin de los lpidos, por lo cual sera bueno continuar explorando las opciones para
mejorar este proceso, realizndolo con sustancias menos peligrosas para el medio
ambiente y que a su vez, sea eficiente.
Un avance muy positivo en este tema en la ciudad es el trabajo investigativo que se est
realizando con el banco de levaduras de la Universidad San Buenaventura, por lo cual es
nuestro deseo que se continen realizando estudios como estos, no solo para producir
etanol sino tambin biodiesel, ya que esta es una excelente opcin que merece ser tenida
en cuenta para proyectos en el futuro.

BIBLIOGRAFA

1. ASOCAA (2012).Fedebiocombustibles: la produccin de biocombustible no afecta la

seguridad

alimentaria.

En

lnea:

<http://www.eldulcesabordelprogreso.com/home/contentDetail/idCntnt/142.>
2.

Diccionario

ABC

(2007).Definicin

de

gasolina.

En

lnea:

<http://www.definicionabc.com/medio-ambiente/gasolina.php#ixzz2f0u9tXYP.>
3. Schifter I.Lpez E. (2011). Usos y abusos de la gasolina. (2da Ed). Fondo de cultura
econmica de Espaa, S.L.
4.

Corporacin

colombiana

de

investigacin

agropecuaria

CORPOICA

(2006).

ESTRATEGIA DE DESARROLLO DE BIOCOMBUSTIBLES: IMPLICACIONES PARA EL

SECTOR

AGROPECUARIO.

En

lnea:

<http://www.corpoica.org.co/sitioweb/Convenio/Documentos/EstrategiaDesarrolloBiocomb
ustiblesColombia.pdf.>
5. Programa de maestra en sistemas energticos y medio ambiente, Universidad de
Strathclyde

(s.f).

Biodiesel:

barreras,

potenciales

impactos.

En

lnea:

<http://www.esru.strath.ac.uk/EandE/Web_sites/06-07/Biodiesel/index.htm.>
6. Instituto Interamericano de cooperacin para la agricultura ICA (2007). Preguntas y
respuestas

ms

frecuentes

sobre

biocombustibles.

En

lnea:

<http://www.iica.int/Esp/organizacion/LTGC/agroenergia/Documentos%20Agroenerga
%20y%20Biocombustibles/Preguntas%20y%20respuestas%20m%C3%A1s
%20frecuentes%20sobre%20biocombustibles.pdf>
7. R. Larosa (2001). Proceso para la produccin de BIODIESEL (metilester o steres
metlicos de cidos grasos), Refinacin de glicerina. En lnea: <http://www.biodieseluruguay.com/articulos/Biod-rev2.pdf.>
8.

GNSA

ingeniera

(2007).

Biodiesel

Paraguay.

http://biodieselparaguay.blogspot.com/2007/08/propiedades.html

En

lnea:

9. Faife-Prez, Evelyn, Otero-Rambla, Miguel A., lvarez-Delgado, Amaury. Produccin de

biodiesel a partir de microorganismos oleaginosos. Una fuente de energa renovable.
Parte I. Levaduras y bacterias ICIDCA. Sobre los Derivados de la Caa de Azcar [en
lnea] 2012, 46 (Enero-Abril): [Fecha de consulta: 20 de septiembre de 2013] Disponible
en:<http://estudiosterritoriales.org/articulo.oa?id=223123848004> ISSN 0138-6204.
10. V. Plata, V. Kafarov (s.f). PRODUCCIN DE BIOCOMBUSTIBLES DE TERCERA
GENERACIN: TRANSESTERIFICACIN DE ACEITE SINTTICO DE MICROALGAS
PARA

LA

PRODUCCIN

DE

BIODIESEL.

En

lnea:

<http://www.uniquindio.edu.co/uniquindio/eventos/siquia/siquia2009pon13.pdf.>
11. Grupo de investigacin de la facultad de ciencias naturales de la Universidad Nacional
de la Patagonia San Juan Bosco (2011). Bacterias: materias primas de los
biocombustibles, en lnea:< http://infouniversidades.siu.edu.ar/noticia.php?id=1141.>

12. [en lnea].Anlisis Microbiolgico de levaduras. Recuperado el da 3 de septiembre de

<http://www.calidadmicrobiologica.com/analisis-microbiologico/microbiologia/analisismicrobiologico-de-levaduras>

13. Ober, T. (2004). Accin perjudicial de las levaduras sobre los alimentos. En lnea:
<http://www.bvs.sld.cu/revistas/spu/vol30_3_04/spu16304.htm>
14. Bligh, E.G y Dyer, W.J. A rapid method of total lipid extraction and purification. En
Galindo, L y Gonzlez, S. (2010). Adaptacin del mtodo Bligh y Dyler a la extraccin de
lpidos de microalgas nativas para la produccin de biodiesel.
15. Metherel, Adam H., Taha, Ameer Y., Izadi, Hamid y Stark, Ken D. The application of
ultrasound energy to increase lipid extraction throughput of solid matrix samples. En
Galindo, L y Gonzlez, S. (2010). Adaptacin del mtodo Bligh y Dyler a la extraccin de
lpidos de microalgas nativas para la produccin de biodiesel.
16. Gonzlez, A. y Kafarov, V. (2009). PRODUCCIN DE BIOCOMBUSTIBLES DE
TERCERA GENERACIN: EXTRACCIN DE ACEITE DE MICROALGAS PARA LA
PRODUCCIN DE BIODIESEL. En lnea:
http://www.uniquindio.edu.co/uniquindio/eventos/siquia/siquia2009pon12.pdf.

17. Catlisis enzimtica. (2013, Septiembre 19). En lnea. [Archivo video]. Recuperado de
<https://www.youtube.com/watch?v=vRoE-r0Dz_M>
18.

[en

lnea].transesterificacin.

Recuperado

el

da

14

de

Noviembre

de

<http://cer.gob.cl/tecnologias/biomasa/bioquimica/transesterificacion/>
19. (la produccin de biodiesel) <http://www.biodisol.com/biodiesel-que-es-el-biodieseldefinicion-de-biodiesel-materias-primas-mas-comunes/la-produccion-de-biodieselmaterias-primas-procesos-calidad/>
(20). [en lnea]. Transesterificacin. Recuperado el da 14 de Noviembre de
<http://organica1.org/qo1/ok/acidos2/acido20.htm>

(21) (Microorganismos para la produccin de biodisel)

<http://www.ecologiaverde.com/microorganismos-para-la-produccion-de-biodiesel/>
22. Buitron, R. (2001). Monocultivos de la palma aceitera: Impactos en Colombia y
Ecuador. En lnea: http://alicealocombia.wordpress.com/la-palma-in-colombiahistorial/monocultivos-de-palma-aceitera-impactos-en-colombia-y-ecuador/.