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romatografa lquida de alta eficacia o high performance liquid chromatography (HPLC)

es un tipo de cromatografa en columna utilizada frecuentemente en bioqumica y qumica


analtica. Tambin se la denomina a veces cromatografa lquida de alta
presin o cromatografa lquida de alta resolucin (high pressure liquid
chromatography) (HPLC), aunque esta terminologa se considera antigua y est en desuso.
El HPLC es una tcnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basndose en
diferentes tipos de interacciones qumicas entre las sustancias analizadas y la columna
cromatogrfica.,
ndice
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1Principio
o

1.1Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC)

1.2Tipos de HPLC

1.3Cromatografa de fase normal

1.4Cromatografa de fase inversa (o reversa)

1.5Cromatografa de exclusin molecular

1.6Cromatografa de intercambio inico

1.7Cromatografa basada en bioafinidad


1.8Cromatografa lquida de alta eficacia en condiciones desnaturalizantes

o
(DHPLC)

2Parmetros
o

2.1Dimetro interno

2.2Medida de las partculas

2.3Tamao de poro

2.4Presin del sistema

3Fabricantes de aparatos de HPLC

4Fabricantes de columnas de HPLC y accesorios

5Vase tambin

6Referencias

7Enlaces externos

Principio[editar]
Cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC)[editar]
En la HPLC isocrtica el compuesto pasa por la columna cromatogrfica a travs de la fase
estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeas partculas redondeadas con ciertas
caractersticas qumicas en su superficie) mediante el bombeo de lquido (fase mvil) a alta
presin a travs de la columna. La muestra a analizar es introducida en pequeas cantidades
y sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones qumicas o
fsicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna. El grado de retencin
de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto, de la
composicin de la fase estacionaria y de la fase mvil. El tiempo que tarda un compuesto a
ser eluido de la columna se denomina tiempo de retencin y se considera una propiedad
identificativa caracterstica de un compuesto en una determinada fase mvil y estacionaria. La
utilizacin de presin en este tipo de cromatografas incrementa la velocidad lineal de los
compuestos dentro de la columna y reduce as su difusin dentro de la columna mejorando la
resolucin de la cromatografa. Los disolventes ms utilizados son el agua, el metanol y
el acetonitrilo. El agua puede contener tampones, sales, o compuestos como el cido
trifluoroactico, que ayudan a la separacin de los compuestos.
Una mejora introducida a la tcnica de HPLC descrita es la variacin en la composicin de la
fase mvil durante el anlisis, conocida como elucin en gradiente. Un gradiente normal en
una cromatografa de fase reversa puede empezar a un 5% de acetonitrilo y progresar de
forma lineal hasta un 50% en 25 minutos. El gradiente utilizado vara en funcin de la
hidrofobicidad del compuesto. El gradiente separa los componentes de la muestra como una
funcin de la afinidad del compuesto por la fase mvil utilizada respecto a la afinidad por la
fase estacionaria. En el ejemplo, utilizando un gradiente agua/acetonitrilo los compuestos ms
hidroflicos eluirn a mayor concentracin de agua, mientras que los compuestos ms
hidrofbicos eluirn a concentraciones elevadas de acetonitrilo. A menudo, hace falta realizar
una serie de pruebas previas con tal de optimizar el gradiente de forma que permita una
buena separacin de los compuestos.

Tipos de HPLC[editar]
Cromatografa de fase normal[editar]
La cromatografa de fase normal o normal phase HPLC (NP-HPLC) fue el primer tipo de
sistema HPLC utilizado en el campo de la qumica, y se caracteriza por separar los
compuestos sobre la base de su polaridad. Esta tcnica utiliza una fase estacionaria polar y

una fase mvil apolar, y se utiliza cuando el compuesto de inters es bastante polar. El
compuesto polar se asocia y es retenido por la fase estacionaria. La fuerza de adsorcin
aumenta a medida que aumenta la polaridad del compuesto y la interaccin entre el
compuesto polar y la fase estacionaria polar (en comparacin a la fase mvil) aumenta el
tiempo de retencin.
La fuerza de interaccin no slo depende de los grupos funcionales del compuesto de inters,
sino tambin en factores estricos de forma que los ismeros estructurales a menudo se
pueden diferenciar el uno del otro. La utilizacin de disolventes ms polares en la fase mvil
disminuye el tiempo de retencin de los compuestos mientras que los disolventes ms
hidrofbicos tienden a aumentar el tiempo de retencin.
La NP-HPLC cay en desuso a los aos setenta con el desarrollo del HPLC de fase reversa
o reversed-phase HPL

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