Prctica N 3

DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE HIERRO

EN VINOS
1. Clculos analticos
1. Instrumento Utilizado:
Marca: Shimadzu
Rango de lectura de 350 hasta 950nm
Tcnica: Espectrofotometra visible
Mtodo instrumental: Adicin estndar
Cuidados y precauciones: Ser lo ms exactos y precisos con las
concentraciones de las soluciones patrn usadas para la curva de
calibracin.
2. Calibracin analtica:
a. Barrido espectral (determinacin de la longitud de onda
mxima):
Concentracin del estndar del analito: 8ppm
Rango de longitud de onda: 350 a 950nm
Graficar la curva espectral, absorbancia versus longitud de onda
(nm), identificando la longitud de onda de mxima absorbancia
(max) para el cromforo (anexo 1).
b. Preparacin de la curva de calibracin:
Mtodo de Calibracin: Adicin estndar
Sustancia madre patrn: Solucin de Fe 100 ppm
Sustancia patrn diluido: Solucin de Fe 2, 4, 6 y 8 ppm.

N
mues
tra

Volume
n de
muestra
problem
a (mL)

Volumen
de
estnda
r
aadido
(mL)

Volum
en de
HCl
12M
(mL)

Volum
en de
H2O2

Volum
en de
KSCN

3%
(mL)

2.1M(
mL)

0.5

1.0

Concentra
cin de Fe
(ppm)

1.5

c. Curva de calibracin:

N
muest
ra

Concentra
cin de Fe
(ppm)

Volume
n total
(mL)

g de
Fe
aadid
o

Absorbanci
a

25

0.073

25

50

0.295

25

100

0.524

25

150

0.752

25

200

0.977

Graficar la curva de adicin estndar, absorbancia versus g/mL

de Fe y absorbancia versus g de Fe aadido (anexo 2)

3. Lecturas de la muestra problema de vino Uvita:

Muestra problema: Vino Uvita
Concentracin de referencia: 3 a 12 mg/L.
Lmite mximo permisible: 0.20 mg/Kg de peso segn unin
europea. Contenidos mximos en metales pesados en productos
alimenticios.

Interferentes: Otros metales presentes, soluciones orgnicas y

ruido.
N
muest
ra

Volumen
total (mL)

absorban
cia)

25

0.073

25

0.295

25

0.524

25

0.752

25

0.977

4. Tratamiento de datos analticos:

a. Determinacin de los parmetros de calidad del mtodo:

Determinar los siguientes datos estadsticos: Coeficiente

de correlacin r, la recta de regresin de y sobre x, el
lmite de deteccin (LDD) del mtodo aplicado, la
desviacin estndar de la regresin, del intercepto y de
la pendiente as como sus respectivos lmites de
deteccin. (anexo 3)

Calcular, la cantidad en ppm de hierro total en la

muestra de vino blanco y determine la desviacin
estndar del valor extrapolado.
En la curva de calibracin (anexo 2) y grfica 1 obtenemos la
ecuacin:
Y= 0.1133X + 0.0712 (1)
Donde:
Y = Abs.
X = ppm
Determinamos la concentracin de Fe cuando la Absorbancia es
0, lo cual se calcula haciendo Y = 0 en (1)
X = - 0.0712/0.1133

X = -0.628 ppm

** El signo negativo (-) se debe a que debemos quitar ppm de

Fe (los aadidos por la muestra) a la solucin de 100ppm de Fe
preparados para que la seal (absorbancia) sea 0.
Entonces la concentracin de la muestra de 5mL de vino Uvita
en 25mL (dilucin) es 0.628 ppm, por lo que el factor de
dilucin es 25mL/5mL igual a 5.
Finalmente, la concentracin de la muestra de vino (CM):
CM = 0.628 ppm x 5 = 3.142 ppm

CM = 3.142 ppm

Hallar los lmites de confianza de la muestra al 90 y 95 %

de confianza. (anexo 4)

2. Discusin de resultados
-

La espectroscopia de absorcin molecular es el mtodo utilizado en

este laboratorio. Una gran variedad de especies inorgnicas y
orgnicas absorben radiacin en las longitudes de onda del
ultravioleta y visible y, por tanto, es posible su cuantificacin
mediante medida de la radiacin absorbida, utilizando un
espectrofotmetro. La absorcin se cuantifica por unidades llamadas
"unidades de absorbancia", las cuales estn relacionadas linealmente
con la concentracin de analito existente.
En esta prctica, se aplica esta tcnica para determinar el contenido
total de hierro (Fe(II) y Fe(III)) en vinos blancos y poco coloreados,
mediante medida de la absorcin del complejo rojo formado entre el
ion Fe(II) y el tiocianato.
Los metales que se encuentran en el vino pueden provenir de
diversas fuentes: desde la propia uva hasta los propios recipientes de
almacenamiento por la transferencia de metales que puede
ocasionar el ataque de los cidos presentes en el vino, pasando por
las cesiones en el proceso de elaboracin. Un alto contenido en
metales puede provocar un enturbiamiento del vino ya que dichos
metales se insolubilizan quedando afectado el color o limpidez del
vino, originando lo que se denominan quiebras o depsitos. [1]
Las sales de hierro se encuentran en el vino en los estados de
oxidacin (II) y (III). Las sales ferrosas son totalmente solubles y
dejan el vino lmpido, mientras que ciertas sales frricas (que pueden
originarse por oxidacin de las sales ferrosas por el oxgeno
atmosfrico) son insolubles o coloreadas. Este es el caso del fosfato
frrico, sal blanquecina origen de la "quiebra blanca". Los vinos
blancos estn sujetos a la primera. Una concentracin total de hierro
del orden de los 10 mg/litro indica riesgo de quiebras frricas, si bien,
este valor lmite vara mucho en funcin de la composicin del vino.
Esto puede ser origen de la explicacin del porque cuando se realiz
el experimento, con el vino blanco de la marca Queirolo en el
laboratorio, los complejos preparados presentaron una turbidez
blanquecina por lo cual se decidi a cambiar el vino por el de la
marca UVITA. [3]
La cantidad mxima de Fe que tolerar un vino antes de que se
produzca una quiebra depende del tipo de vino, composicin y, hasta
en cierta medida, de las condiciones de almacenamiento. Los lmites
mximos recomendados son de 6 ppm para el Fe. El Fe que contiene
el vino (aprox. 3 mg/L) se encuentra en dos formas: Fe 2+ o Fe3+. El ion
Fe3+, en un medio moderadamente cido, reacciona con KSCN, para
dar lugar a una serie de complejos de color rojo: [Fe(SCN)] 2+;
[Fe(SCN)2]+; [Fe(SCN)6]3-, etc siendo los de estequiometria superior
los ms coloreados.

Fe3+ + nSCN-

Fe(SCN)n(3-n)

donde n = 1, 2, 3, ..., 6
La concentracin de los reactivos y el pH del medio condicionan el
predominio de cada uno de los posibles complejos, todos ellos de
color rojo, cuya intensidad aumenta a medida que lo hace el nmero
de coordinacin.
En general, en un medio poco cido y con concentraciones
moderadas de tiocianato, se forma el complejo [Fe(SCN)2]+ en
cantidad significativa, mantenindose estable durante,
aproximadamente 45 minutos. [1]

Imagen 1.0. Soluciones patrn de Hierro para la construccin de la

curva de calibracin.
-

No debe usarse cido sulfrico pues los iones sulfato forman

complejos con los iones frricos, disminuyendo la intensidad del color
a medida que aumenta la concentracin de cido. Por ello en el
experimento utilizamos cido clorhdrico.
Esta reaccin es la base de la determinacin espectrofotomtrica de
Fe en diferentes matrices, entre ellas los vinos blancos o poco
coloreados. Se elabor la recta de calibracin, cuyos resultados se
ajustan a un coeficiente R muy satisfactorio (0,9999).
Se tomaron los valores de las absorbancias obtenidos en las
muestras y el resultado obtenido est dentro de los rangos legales
en cuanto al contenido en hierro de los vinos (hasta 8-10 mg/L para
no provocar enturbiamientos).

3. Conclusiones.
-

Se logr determinar la cantidad de hierro que contiene el vino

de la marca UVITA por espectrofotometra ultravioleta usando
el mtodo de adicin estndar, la que result 0.628 ppm.

4. Referencias bibliogrficas
1. Gallego Pic A.; Garcinuo Martnez, R.; Morcillo Ortega, M.
Experimentacin en Qumica Analtica. Uned. 2012.Skoog, D.A. et. al.
Principios de Anlisis Instrumental. 5 Ed. MacGraw Hill. ISBN
9788448127756.

2. Validacin interna del mtodo "determinacin de hierro por absorcin

atmica en harina de trigo fortificada" Yeffer alberto cardenas
gonzales, Facultad de Ciencias, Escuela de Qumica, Bucaramanga.
3. (2016). Prcticas de Anlisis Instrumental. [online] Available at:
http://ocw.usal.es/ciencias-experimentales/analisis-aplicado-a-laingenieriaquimica/contenidos/course_files/PRACTICAS_DE_ANALISIS_INSTRUMEN
TAL.pdf.
4. Skoog, West, Holler, Crouch, Fundamentos de Qumica Analtica,
Thomson, octava edicin, Mxico, 2005, 798 -800.
5. Harold F. Walton, Jorge Reyes, Anlisis Qumico e instrumental
moderna, Reverte, 2 edicin, Espaa, 1983, 180-188.

6. Cuestionario - problemas
a. Cules son los cromforos posibles de formacin en la
reaccin de Fe(III) con tiocianato y a qu longitud de onda
presenta cada uno su mxima absorbancia?

El KSCN, tiocianato de potasio, presenta en su estructura un

triple enlace del carbono que presenta su espectro hacia
173nm.
b. Revise otros mtodos de determinacin espectrofotomtrica
de hierro. Qu ventajas y desventajas posee el mtodo
usado en esta prctica? [2]

En la bibliografa consultada se mencionar dos mtodos

espectrofotomtricos:
Determinacin de Hierro en una muestra de latn por
mtodo espectroscpico de acuerdo con la norma ASTM
E478-03
ste mtodo se basa, principalmente, en la formacin de un
complejo colorido de hierro con fenantrolina, que al ser colorido
y seguir la ley de Lambert-Beer, permite que se pueda conocer
su
concentracin
por
mtodos
espectroscpicos.
La
fenantrolina, considerando los principales componentes del
latn y las principales posibles impurezas, slo forma complejos
coloridos, o que absorban a una longitud de onda de 510nm,
con el hierro, por lo que no hay interferencias provenientes de
la muestra en la determinacin. Adems, la reaccin de
formacin del complejo de hierro con fenantrolina es
cuantitativa, por lo que, al determinar la concentracin del
complejo, se puede tener una muy buena aproximacin de la
concentracin de hierro siempre y cuando el hierro se
encuentre en el estado de oxidacin adecuado, Fe(II). Para
asegurar que el hierro se encuentra en la forma esperada de

Fe(II) y que no ha pasado a Fe(III), se agrega un exceso de

cloruro de hidroxilamina (NH2OH.HCl), con lo que se asegura
que todo el Fe(III) formado dentro de la solucin pase a Fe(II) (la
cual es la especie que nos interesa para el anlisis
espectrofotomtrico). La concentracin del complejo se puede
conocer si se mide la absorbancia del complejo colorido y se
aplica la ley de Lambert-Beer, que dice que la absorbancia es
igual al producto de longitud de paso ptico, la absortividad
molar del compuesto y la concentracin: A = klC.
Mtodo espectrofotomtrico de absorcin atmica
Destruccin de la materia orgnica y extraccin cuantitativa del
contenido de hierro con cido clorhdrico, posteriormente la
muestra es atomizada en una llama aire acetileno y la
absorcin es medida a 248nm, para determinar la
concentracin del hierro.

c. La cantidad de cromo en una disolucin puede determinarse

por el mtodo de la difenilcarbazida, donde el cromo
previamente
oxidado
a
Cr(VI)
reacciona
con
la
difenilcarbazida formando un complejo amarillo. Para conocer
la concentracin de cromo en un suelo de cultivo se tom
0.50g de muestra, se digest con cido ntrico y cido
sulfrico, y se llev a un volumen de 100.00 mL. En varias
fiolas de 25.00 mL se agregaron exactamente alcuotas de
2.00 mL de la solucin anterior y a cada fiola se aadieron los
siguientes volmenes de una disolucin patrn de Cr(VI) 10
g/mL: 0.0, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0 y 2.5 mL. Finalmente se agreg
0.5 mL de difenilcarbazida al 0.125% y se complet el
volumen con H2SO4 0.2 N. Si las medidas de absorbancia a 542
nm de cada una de las disoluciones fueron: 0.257; 0.314;
0.364; 0.413; 0.468 y 0.528 respectivamente, calcule la
concentracin de cromo en la muestra de suelo original.

Mediante el mtodo de adicin estndar se tiene que:

[ppm]
0
0.5
1
1.5
2
2.5

seal
0.257
0.314
0.364
0.413
0.468
0.528

seal
f(x) = 0.11x + 0.26
R = 1

Hallando el facto de dilucin:

Ppm= (0.4141mg/L) 25mL
0.4141mg 2510-3 = C 100
C = 0.1035 ppm

ANEXO N1:

Abs. vs Longitud de onda

1
0.8
0.6

Abs

0.4
0.2
0
300

350

400

450

500

-0.2

nm

Leyenda:
Y = Abs.
X = nm
Longitud de onda mximo: 480nm

550

600

650

700

ANEXO N2:
Grfica N1.

Abs. vs ppm
1.2
1
f(x) = 0.11x + 0.07
0.8
0.6

Abs.

0.4
0.2
0
-1

ppm Fe

Leyenda:
Y = Abs.
X = ppm Fe

Grfica N2.

Abs. vs ug Fe
1
0.9

f(x) = 0x + 0.07

0.8
0.7
0.6
Abs.

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0

50

100
ug Fe

Leyenda:
Y = Abs.

150

200

250

X = ug Fe

Grfica N3.

Abs. vs V (mL)
1.2
1
f(x) = 0.45x + 0.07
0.8
0.6

Abs.

0.4
0.2
0
-0.4

0.1

0.6

1.1

1.6

2.1

2.6

V de Fe (mL)

Leyenda:
Y = Abs.
X = V de Fe (mL)

ANEXO N3:
TABLA N1: Anlisis de los datos de la curva de calibracin.
(xi
e2
X2
prom)2
X
Y
0
2
4
6
8
SUMA:
PROMEDI
O:

0.073
0.295
0.524
0.752
0.977

0.0712
0.2978
0.5244
0.751
0.9776

3.24E-06
7.84E-06
1.6E-07
0.000001
3.6E-07
1.26E-05

0
4
16
36
64
120

n=5

Coeficiente de correlacin r:
R = 1.0

Lmite de deteccin (LDD):

Y = b + 3 Sy/x

Dnde:

b = 0.0712 ,Sy/x = 0.00205

16
4
16
36
64
136

LDD = 0.0773

Desviacin estndar de la regresin:

(2)
Usando los datos de la Tabla N1 en la ecuacin (2) obtenemos:
Sy/x = 0.002049

Desviacin estndar del intercepto:

(3)
Usando los datos de la Tabla N1 en la ecuacin (3) obtenemos:
Sa = 0.00086

Desviacin estndar de la pendiente:

(4)
Usando los datos de la Tabla N1 en la ecuacin (4)
obtenemos:
Sb = 0.00018

Lmites de confianza al 95% de confianza:

LC(a): Lmite de confianza del intercepto
LC(b): Lmite de confianza de la pendiente

(5)
Dnde: a = 0.0712, b = 0.1133 y t = 3.18 (=0.05 y 3 grados
de libertad) y se reemplazan en la ecuacin (5)
LC(a)=
LC(b)=

ANEXO N4:

0.0712
0.1133

0.0027
0.0006

 (6)

(7)
Donde el t se lee en una tabla de t de Student para (m+n-3)
grados de libertad. Y tenemos los valores de:
m=1
n= 5.
Sxo = 0.976
Lmite de confianza de la muestra a 90%
t = 2.35 y 3 grados de libertad.
LC(XO) = 3.14 2.29

Lmite de confianza de la muestra a 95%

t = 3.18 y 3 grados de libertad.
3.10

LC (XO) = 3.14