DEGRADACIN DE COLORANTES CON HONGOS LIGNINOLTICOS

DIAPOSITIVA 2.

OBJETIVO GENERAL.
Evaluar la actividad ligninolitica de las enzimas producidas por hongos
ligninoliticos crecidos en condiciones de cultivo.
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
- Determinar la capacidad ligninolitica de los hongos utilizando el colorante azul
de coomassie como sustrato, y modificando variables como el pH y la adicin de
manganeso.
-Realizar un grfico que permita visualizar la degradacin en el tiempo del
colorante azul de coomassie
HISTORIA
La lignina es un polmero de naturaleza aromtica con alto peso molecular que tiene como
base estructural unidades de fenil-propano.
La lignina est presente en todas las plantas vasculares, es uno de los biopolmeros ms
abundantes en las plantas, conforman la pared de las plantas con la celulosa y la
hemicelulosa. La madera y otros tejidos contienen alrededor del 20-30% de lignina.
Microorganismos ligninoliticos
La capacidad para catabolizar la celulosa y la hemicelulosa es una caracterstica
comn para diversos hongos y otros microorganismos. Por el contrario, al ser la
lignina un heteropolmero muy fuerte, solamente es mineralizado en forma limitada
por algunas bacterias y extensivamente por un grupo de hongos. Estos hogos
ligninolticos, denominados hongos de la pudricin blanca de la madera,
comprenden un grupo de organismos cuya caracterstica es su capacidad para
mineralizar eficientemente la lignina. Estos organismos secretan varias enzimas
extracelulares que son esenciales para la transformacin inicial de la lignina y que
en conjunto logran su mineralizacin.
Los hongos ligninolticos han desarrollado un sistema enzimtico nico que
funciona en el ambiente extracelular. El mecanismo del sistema degradador de
lignina est basado en la produccin de radicales libres. Este mecanismo permite
que estas enzimas sean catalticamente activas sobre una gran diversidad de
sustratos orgnicos.
Hongos de la podredumbre blanca
Phanerochaete chrysosporium: su nombre se debe a la capacidad que presentan
de crecer sobre material con alto contenido de celulosa como los troncos de los
arboles; su pared celular posee una mezcla de compuestos fibrilares y amorfos.

Degradacin ligninoltica
Los hongos de la pudricin blanca de la madera han mostrado un gran potencial
para degradar compuestos qumicos recalcitrantes y generalmente txicos como
hidrocarburos poli-aromticos, explosivos, plaguicidas, tintes, etc.
Mecanismos biolgicos para la remocin y degradacin de colorantes.

Cerca del 15% de los colorantes empleados en la industria se pierden, los cuales en la
mayora de los casos son vertidos en cuerpos de agua generando contaminacin. Estas
aguas residuales son difciles de tratar debido a que los tintes contienen estructuras
moleculares aromticas complejas, que los hacen estables en el ambiente y difciles de
degradar. Se han empleado diferentes procesos fsicos y qumicos para eliminar o
remover la carga colorante en los efluentes industriales, sin embargo se presentan
inconvenientes entre ellos:
i)

ii)
iii)
iv)

altos costos de tratamiento

los contaminantes qumicos no son destruidos sino simplemente removidos de
los efluentes y relocalizados en otro sitio donde el problema persiste
en procesos donde se utiliza el cloro para la decoloracin, se puede producir
compuestos organoclorados que son altamente txicos y recalcitrantes
en ciertos tratamientos qumicos se produce ruptura del anillo aromtico del
colorante generando sustancias aun ms txicas.

Actualmente los procesos biotecnolgicos para la eliminacin de contaminantes

ambientales estn en pleno proceso de investigacin y son muy promisorios gracias a
que se pueden alcanzar altas eficiencias de remocin de contaminantes, adems
poseen un costo competitivo respecto a tratamientos fsico-qumicos equivalentes y
son amigables con el medio ambiente. Estos procesos emplean hongos o bacterias en
tecnologas aerobias y anaerobias y son conocidos como procesos de Biorremediacin.
Los hongos de la podredumbre blanca de la madera han mostrado ser potencialmente
tiles en Biorremediacin, debido a que su crecimiento filamentoso permite una
colonizacin y una exploracin ms eficiente en suelos contaminados, adems estos
microorganismos poseen un importante grupo de enzimas con capacidad para oxidar
diversos sustratos entre ellos una amplia variedad de contaminantes ambientales. El
mecanismo principal de biodegradacin empleado por este grupo de hongos, es el
sistema enzimtico de degradacin de la lignina, compuesto por las enzimas
Manganeso Peroxidasa dependientes de Mn+2 (MnP), Ligninoperoxidasas (LiP) y
lacasas (Lac) y la peroxidasa verstil (PV). Estas enzimas extracelulares poseen una
baja especificidad y producen ataques oxidativos a una amplia gama de
contaminantes ambientales con potenciales de ionizacin menores de 8,0 eV.

Accin enzimtica de los hongos de podredumbre blanca

Las enzimas ligninolticas pueden actuar separadas o en conjunto, dependiendo
de la capacidad del hongo para producirlas.

La enzima manganeso peroxidasa (MnP), puede oxidar una amplia

variedad de compuestos fenlicos, como los anillos aromticos de los
colorantes.
La lignina peroxidasa (LiP), puede oxidar compuestos aromaticos como el
alcohol veratrlico y metoxibencenos.
La peroxidasa verstil (pv) puede oxidar hidroquinonas y fenoles los cuales
no son oxidados eficientemente por LiP y MnP
Las lacasas (Lac), oxidan algunos compuestos fenlicos(considerados
altamente cancergenos), provocando su precipitacin eliminndolos de las
aguas contaminadas por las industrias.
Procedimiento:
Inicialmente y con ayuda de asa bacteriolgica, se siembran algunas fragmentos
de un hongo ligninoltico, en un medio de cultivo (agar al 1.5 % y extracto de malta
al 3.0%) previamente esterilizado con calor hmero (15 psi/ 121 C/ 20 minutos).
Paralelamente y esterilizado bajo las mismas condiciones, se preparar un medio
de cultivo lquido que por su composicin permita la expresin enzimtica. Para
lograr esto se utiliza un erlenmeyer de 500 mililitros en el que se prepara un
volumen final de 100 mililitros que incluye: glucosa 1g, tartrato de amonio 0.02 g,
tween 80 0.05 g, alcohol veratrilico 2.5 mmol (0.02 mL de alcohol veratrlico
1.25M), manganeso a 40 ppm (4ml de solucin de manganeso de concentracin
inicial 1000ppm), cido tartrico 0,3 g y un pH: 4.5 previo a la adicin de un
colorante (azul de coomassie) al 0.002%. En caso de no utilizar agua como
blanco de calibracin, se debe preparar un poco mas de este medio y esterilizarlo
en pequeas alcuotas.
Una vez ha esporulado el microorganismo en el medio de cultivo inicial (agar
malta), se cortan 4 o 5 pequeos fragmentos de agar (hongo incluido), se
transfieren al medio de expresin enzimtica y se somete a agitacin orbital
(aproximadamente 150 r.p.m.), en temperatura ambiente y por espacio de una o
dos semanas aproximadamente. En este lapso de tiempo, se deben tomar
pequeas alcuotas del medio a partir del cuarto o quinto da, y con ellas realizar
unas cuantificaciones espectrofotomtricas (598 nm) que faciliten la elaboracin
de un grfico que evidencie el decoloramiento progresivo del color.
Metodo alternativo

Aplicaciones
Los colorantes sintticos son ampliamente utilizados
como:
Textil, papel, cosmtica, farmacutica y alimentaria.

en muchas industrias

Por su fcil uso, bajo costo y alta estabilidad, sin embargo, algunos estudios
sugieren que estos colorantes pueden ser txicos, cancergenos y generadores
de reacciones alrgicas y asmticas en personas susceptibles.