Guia de Biologia 2016 1

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL QUIMICA
MANUAL DE PRACTICAS
L A B O R A T O R I O DE
BIOLOGA
CH 061
SEMESTRE ACADEMICO 2016-I

PILAR GARCA AVELINO
Jefe de Prcticas
Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa, elaborado por Pilar Garca Avelino 2016-I

ESCUELA PROFESIONAL DE QUMICA
BIOLOGA (CH 061)
Cronograma de Practicas de Laboratorio de BIOLOGA

SEMANA
ACTIVIDAD
FECHA
21 marzo
29, 31 marzo
Presentacin del CURSO (Teora y Prctica)
Laboratorio 1: Reconocimiento de Biomolculas
05, 06 abril
Practica calificada 1: Laboratorio 1 + Tarea Academica*
12, 13 abril
Laboratorio 2: Extraccin de ADN
19, 20 abril
Prctica calificada 2: Laboratorio 2 + Tarea Academica*
26, 27 abril
SEMANA DE EXMENES PARCIALES

09 al 13 de mayo
** confirmar fecha
Laboratorio 3: Determinacin de grupo sanguneo
17, 18 mayo
11
Prctica calificada 3: Laboratorio 3 + Tarea Academica*
24, 25 mayo
12
Laboratorio 4: Actividad enzimtica de las oxidoreductas
07, 08 junio
13
Practica calificada 4: Actividad

oxidoreductas + Tarea academica*
14
Entrega de notas
enzimtica
de
las
14, 15 junio
21, 22 junio
16
SEMANA EXAMENES FINALES

04 al 08 de julio
** confirmar fecha
17
SEMANA EXAMENES SUSTITUTORIOS

18 al 22 de julio
** confirmar fecha
* Entregado por el profesor de prcticas.

** Indicado por el profesor de teora.
*** Los preinformes se entregaran en la fecha de realizacin de los laboratorios correspondientes, al
ingresar
Prof. Pilar Garca Avelino

Lima, 23 de marzo del 2016
PRESENTACION DEL MANUAL DE PRCTICAS

El propsito del Laboratorio es familiarizar al estudiante con la metodologa de trabajo de la
biologa, proporcionarle un ambiente donde tenga oportunidad de encontrarse con sustancias e
instrumentos que le motive a experimentar.
Considerando al laboratorio como un lugar donde el trabajo en equipo se facilita, da lugar a un
proceso de constante integracin, comunicacin, investigacin, construccin de ideas,
surgimiento de nuevas preguntas, donde las actividades experimentales propician la
reorganizacin de conocimientos y facilitan el alcanzar un aprendizaje significativo.
Para logra tales fines, se propone esta gua que, como material de apoyo didctico, reforzara el
proceso constante de enseanza aprendizaje, requiriendo la participacin y gua del profesor.
Material necesario para trabajar por alumno:
Individualmente: un mandil, gafas de seguridad, guantes, plumn marcador, toalla, cuaderno
de apuntes.
Por equipo: El que se indique para cada prctica.
INSTRUCCIONES GENERALES.
1. Busca conceptos, antecedentes previos a la realizacin de las prcticas.
2. Construye la hiptesis de trabajo, antes de solicitar su material.
3. Lee cuidadosamente los experimentos antes de ejecutarlos.
4. Recurre a tus libros de texto y/o consulta para aclarar dudas despus de realizadas las
practicas, o consulta al profesor responsable.
5. Al efectuar cada uno de los pasos del desarrollo experimental, observa minuciosamente
y anota los cambios ocurridos.
6. Al concluir el desarrollo experimental, resuelve el cuestionario para su futura revisin.
7. Elabora tus conclusiones.
PRECAUCIONES PARA EL DESARROLLO DE CADA EXPERIMENTO
Las medidas oportunas y la compresin de las prcticas a seguir, har del laboratorio un
lugar seguro como cualquier ambiente de clases.
Para ello debern tenerse en cuenta, en forma general las siguientes precauciones:
1.
Observa donde dejas el material caliente, cerciorndote que este frio antes de tomarlo
con la mano.
2. Cuando calientes un tubo de ensayo, no lo apuntes hacia ti o hacia tus compaeros,
pude proyectarse su contenido.
3. Si cae sobre ti o en tu ropa un material corrosivo, lvate inmediatamente con
abundante agua, e infrmalo al profesor del curso.
4. Nunca pruebes una sustancia.
5. Al detectar el olor de un lquido, no coloques la cara sobre la boca del recipiente, con
tu mano abanica hacia ti el aroma.
6. Antes de usar un reactivo lee dos veces la etiqueta de su contenido.
7. Los tubos de ensayo no pueden calentar ser por el fondo sino por las paredes, para
evitar su expulsin del contenido.
8. No arrojes cuerpos slidos en los lavaderos, no viertas directamente los cidos.
9. Rotula tu material de trabajo, as te ser fcil identificarlos.
10. Cuando trabajes con el mechero mantn tu cabello recogido.
11. Nunca emplear papel para encender el mechero.
3

BIOLOGA (CH 061)
PRESENTACION DEL INFORME

INDICAR el grupo de laboratorio al que pertenecen: A, B, C
I.
Resumen (1 p)
Qu teoras lo sustentan? En relacin al desarrollo de los experimentos.
II.
Objetivos especficos (2 p)
Tema central de estudio para cada experimento desarrollado
III.
Observaciones experimentales, datos y resultados (para c/experimento) (3 p)

Durante el desarrollo del experimento:
Qu se observ? Qu datos hubieron? Cules fueron los resultados?Qu reacciones
se dieron?
Se indican los resultados tal y como se dieron durante la investigacin. Se debe
describir los pasos ejecutados durante la experimentacin
Se pueden presentar los datos en tablas, grficas, o figuras, debidamente numeradas
IV.
Discusin de las observaciones experimentales, datos y resultados (2 p)

Se obtuvieron los resultados correctos segn la teora? Si, no? Qu sucedi?
Es la etapa que encadena los resultados obtenidos por la investigacin. Se relaciona,
interpreta y discute los resultados.
Se pone a prueba la capacidad analtica y de autocrtica del investigador.
La discusin pone el toque personal al trabajo.
V.
Conclusiones (2 p)
Qu significan los resultados?
Las conclusiones estn relacionadas con los objetivos.
Es el anlisis del cumplimiento de cada uno de los objetivos de la prctica
VI.
Cuestionario (1.5 p)
Preguntas relacionadas al tema
VII.
Referencias (0.5 p)
Estas deben estar vinculadas a sus discusiones, de haberse empleado en el resumen

indicarlo.
Ejemplo de referencia
Paper:
Autor(es). Ao. Ttulo. Revista. Paginas.
Ivanov, V., Chu, J., 2008. Applications of microorganisms to geotechnical engineering
for bioclogging and biocementation of soil in situ. Rev Environ Sci Biotechnol 7, 139
153. doi:10.1007/s11157-007-9126-3
Libro:
Autor(es). Ao. Libro. Editorial, Edicin. Pginas

BIOLOGA (CH 061)
GUIA DE LABORATORIO N 1
RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS
INTRODUCCIN
En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes de molculas orgnicas en gran
cantidad: carbohidratos, lpidos, protenas y nucletidos. Todas estas molculas contienen
carbono, hidrgeno y oxgeno. Adems, las protenas contienen nitrgeno y azufre, y los
nucletidos, as como algunos lpidos, contienen nitrgeno y fsforo.
Se ha dicho que es suficiente reconocer cerca de 30 molculas para tener un conocimiento que
permita trabajar con la bioqumica de las clulas. Dos de esas molculas son los azcares
glucosa y ribosa; otra, un lpido; otras veinte, los aminocidos biolgicamente importantes; y
cinco las bases nitrogenadas, molculas que contienen nitrgeno y son constituyentes claves
de los nucletidos.
En esencia, la qumica de los organismos vivos es la qumica de los compuestos que contienen
carbono, es decir, los compuestos orgnicos.
El carbono es singularmente adecuado para este papel central, por el hecho de que es el
tomo ms liviano capaz de formar mltiples enlaces covalentes. A raz de esta capacidad, el
carbono puede combinarse con otros tomos de carbono y con tomos distintos para formar
una gran variedad de cadenas fuertes y estables y de compuestos con forma de anillo. Las
molculas orgnicas derivan sus configuraciones tridimensionales primordialmente de sus
esqueletos de carbono. Sin embargo, muchas de sus propiedades especficas dependen de
grupos funcionales. Una caracterstica general de todos los compuestos orgnicos es que
liberan energa cuando se oxidan. Entre los tipos principales de molculas orgnicas
importantes en los sistemas vivos estn los carbohidratos, los lpidos, las protenas y los
nucletidos.
OBJETIVOS
Determinar cualitativamente los azucares reductores.

Hidrolizar la sacarosa.
Reconocer la presencia de almidn.
Reconocer cualitativamente las protenas presentes en muestras biolgicas. .
Demostrar la solubilidad de los lpidos en diferentes tipos de solventes.
MATERIALES Y REACTIVOS
Tubos de ensayo, mechero, placas petri, vasos de precipitado, gradillas, pipetas graduadas,
propipetas, pinzas de madera, pisceta, almidn.
Reactivo de Fehling, solucin de azucares, solucin de almidn, acetona, cloroformo, sulfato de
cobre, hidrxido de sodio
Por grupo: un huevo, 5 ml leche, 1 papa (elementos crudos)
5
IDENTIFICACIN DE AZCARES REDUCTORES (I)

FUNDAMENTO
Los monosacridos (figura 1) y la mayora de los disacridos poseen poder reductor, que
deben al grupo carbonilo que tienen en su molcula. Este carcter reductor puede ponerse de
manifiesto por medio de una reaccin redox, llevada a cabo entre ellos y el sulfato de cobre (II).
Tras la reaccin con el glcido reductor se forma xido de cobre (I) de color rojo. De este modo
el cambio de color indica que se ha producido la reaccin y que el glcido presente es reductor.
Figura N1. Algunos monosacridos
Reaccin de Fehling:
Es una reaccin cualitativa que sirve para determinar la presencia de un azcar reductor que
no sea sacarosa (carece de carbono anomrico y no es azcar reductor).
El reactivo de Fehling presenta sulfato de cobre, carbonato de sodio, citrato de sodio, y agua.
En la reaccin para determinar a los azucares reductores los agentes estabilizantes de la
reaccin son el carbonato y citrato, el sulfato de cobre es el reactante especficamente el Cu
que va a reaccionar con los grupos qumicos de aldehdos y cetonas. Que en reacciones de
oxido reduccin el Cu se convierte en CuO dando un color rojo ladrillo que precipitar
posteriormente, como lo expresa la siguiente reaccin (figura 2):
Figura N2. Reaccin de Fehling
PROCEDIMIENTO
-
Rotular 4 tubos de ensayo, adicionar el azcar correspondiente.

Adicionar los reactivos en el orden sealado
Mezclar por inversin el reactivo con cada uno de sus componentes
Someter a la accin del calor hasta ebullicin
La reaccin ser positiva si en la muestra se forma un precipitado color rojo ladrillo
(CH2O), y ser negativa si se queda azul o cambia a un tono de azul-verdoso.
Tabla N1. Azucares reductores

TUBO DE ENSAYO
COMPONENTES
1
1.Solucin de glucosa
1%
2.Solucin de lactosa
1%
1ml
1 ml
1%
Reactivo de Fehling A
1 ml
3.Solucin de fructuosa 1%
4.Solucin de sacarosa
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
mezclar
Reactivo de Fehling B
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
mezclar
Calor por ebullicin
Bao mara 1 minuto

(CH2O), ser negativa, si la hidrolisis no se ha realizado correctamente, apareciendo una
coloracin verde en el tubo de ensayo.
ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS
(De las distintas muestras)
HIDROLISIS DE LA SACAROSA (II)

FUNDAMENTO
La sacarosa (figura 3) es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres por lo que
carece de poder reductor y la reaccin con el licor de Fehling es negativa, como ha quedado
demostrado en el anterior experimento. Sin embargo la presencia de HCl y el calor, la sacarosa
se hidroliza, es decir incorpora una molculas de agua y se descompone en los monosacridos
que la forman: glucosa y fructuosa, que s son reductores (figura 4).
Figura N 3. Sacarosa
Figura N 4. Disacridos: (a) reductor, (b) no reductor
PROCEDIMIENTO
-
Mezclar por inversin el reactivo con cada uno de sus componentes, ver la tabla 3.
Someter a la accin del calor hasta ebullicin
Tabla N2. Componentes de la hidrolisis de la sacarosa
Muestra
sacarosa
COMPONENTES
Solucin de sacarosa
0.5%
2 ml
cido clorhdrico HCl
1M
1 ml
Calentar por bao mara
1 5
Enfriar
Hidrxido de sodio NaOH 1M
1 ml
Reactivo de Fehling A
1 ml
Reactivo de Fehling B
1 ml
bao mara
1 minuto
(CH2O), ser negativa, si la hidrlisis no se ha realizado correctamente, apareciendo
una coloracin verde en el tubo de ensayo.
Calor por ebullicin

8
RECONOCIMIENTO DE POLISACARIDOS: ALMIDN (III)

FUNDAMENTO
El almidn es un polisacrido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la
amilopectina. Esta prueba usa como reactivo el lugol, se basa en la especificidad del almidn
cuando est presente en solucin, la cual da un color azul en presencia del Yodo. El lugol
presenta: yoduro de potasio y yodo, ms agua (solucin de Lugol). El yodo de la solucin
tiene afinidad por los enlaces 1-4 y 1-6 de la molculas de almidn, esta interaccin del
yodo por dichos enlaces producen el cambio de coloracin no por una reaccin qumica sino
por una reaccin de adsorcin o fijacin de iodo en la superficie de la molcula de amilosa, lo
cual solo ocurre en frio (a temperatura ambiente) La amilosa en disolucin coloidal y en
presencia de iodo se colorea de azul toma color azul, la amilopectina da una coloracin rojo
violcea.
Figura N 5. Fragmento de la molcula del almidn (amilopectina)
En el crculo un monmero de glucosa.
PROCEDIMIENTO
-
Colocar los componentes indicados en la tabla 4, adicionar el reactivo de lugol y

observar los primeros cambios de coloracin.
Tabla N 3. Reconocimiento del almidn
COMPONENTES
Solucin de almidn 2%
TUBO DE ENSAYO
1
1 ml
Papa rallada
1 gr
Albmina
Reactivo de Lugol
-
1 ml
3 gotas
3 gotas
3 gotas
Mezclar por inversin y anotar los resultados, ser positivo si se torna azul, violceo.
Calentar suavemente, sin que llegue a hervir, hasta que pierda el color.
Enfriar el tubo de ensayo en agua fra, observar como a los 2-3 minutos reaparece el
color azul.
// ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS
9
RECONOCIMIENTO DE PROTENAS (IV)

FUNDAMENTO
Las protenas son macromolculas formadas por la unin de muchos aminocidos (figura 6) por
enlace peptdico (estructura primaria). Adems pueden darse uniones por enlaces dbiles de
distinta naturaleza que hacen que la protena adquiera una conformacin tridimensional
caracterstica (estructura terciaria) ver la figura 7. Las variaciones de pH, temperatura o
concentracin salina pueden destruir esos enlaces dbiles de manera que la protena pierde
su conformacin y se dice que se desnaturaliza.
Figura N6. Unidad de la protena:

aminocido
Figura N7. Estructura de las protenas
Las protenas debido al gran tamao de sus molculas forman con el agua soluciones
coloidales que pueden precipitar formndose cogulos al ser calentadas a temperaturas
superiores a 70C o al ser tratadas con soluciones salinas, acidas, alcoholes, etc.
Una de las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven para su
identificacin, cabe resaltar la reaccin de Biuret (figura 8). Esta reaccin los producen los
pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ello se debe a la presencia del enlace
peptdico CO-NH que se destruye al liberarse los aminocidos
Reaccin de Biuret (figura 8)
Se debe a los componentes que presenta: el hidrxido de sodio y sulfato de cobre (II); el cual el
agente denaturante de las protenas es el hidrxido y el reactante es el sulfato de cobre. Las
protenas despus de ser denaturadas facilitan la interaccin del Cu con los pares de
electrones sin compartir del grupo amino del pptido mediante enlaces de coordinacin con la
formacin de un complejo coloreado prpura violceo, cuya intensidad depende de la
concentracin de protenas.
10
Figura N8. Complejo de cobre formado en la reaccin de Biuret
PROCEDIMIENTO
-
Rotular tres tubos de ensayo, en el primero agregar 2 ml de albmina (huevo), en el

segundo tubo 2 ml de leche, y en el tercero 2 ml de la solucin de almidn.
Aadir 0.5 ml de hidrxido de sodio (NaOH) al 5%, y 0.5ml de sulfato de cobre
(Cu2SO4) al 1% a cada tubo.
Tabla N4. Ensayos de protenas
TUBO DE ENSAYO
COMPONENTES
1
Albmina (huevo)
1 ml
Casena (lcteo)
1 ml
Sol. almidn
NaOH
1 ml
5%
0,5 ml
0,5 ml
0,5 ml
Rvo. Biuret:
Cu2SO4 1%
0,5 ml
0,5 ml
0,5 ml
Observe la formacin del color violeta en los tubos que presentan protenas, siendo
Biuret (+), de no haber un cambio de color ser Biuret (-).
11
SOLUBILIDAD DE LOS LPIDOS (V)

FUNDAMENTO
Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en
pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso que es transitoria, pues al
dejarlo en reposo desaparece por la reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que por
su menor densidad se sita sobre el agua. Las grasas son solubles en disolventes orgnicos.
En este experimento el reconocimiento de lpidos ser por la prueba de solubilidad,
identificando el comportamiento de las molculas de aceite con el agua, las cuales no se
homogenizan, debido a que estas presentan caractersticas diferenciales, mientras que el agua
es polar, el aceite es no polar, esto hace que microscpicamente se note que el aceite forme
micelas en solucin acuosa. Donde las colas hidrofbicas de las molculas de aceite se
esconden del agua adoptando la forma de micelas.
PROCEDIMIENTO
Tabla 9. Reconocimientos de lpidos por solubilidad
TUBO DE ENSAYO
COMPONENTES
Aceite
1 ml
1 ml
1 ml
Agregar por las paredes del tubo cada componente:

Agua destilada
2 ml
Acetona
Cloroformo
-
2 ml
2 ml
Rotular los tubos y en cada uno de ellos adicionar 1 ml de aceite

Luego por las paredes de cada tubo adicionar: 2ml de agua para el primer tubo, 2ml de
cloroformo para el segundo tubo y cloroformo para el tercer tubo
NO HOMOGENIZAR! Hacer la primera observacin.
Mezclar por inversin cada tubo, dejar en reposo por 5 minutos
Anotar las observaciones respectivas.
ANOTR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS
12

BIOLOGA (CH 061)
GRUPO
INFORME DEL LABORATORIO N 1
RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS
Nombre del alumno
(Apellidos, Nombre)
Prueba de
entrada
(5 p)
Informe
(15 p)
Desempeo
(-)
Nota
(20)
1 Resumen (1p)
13
2 Objetivos especficos (2.5p)

1.
2.
3.
4.
5.
14
3 Datos y observaciones experimentales (3.5 p)

Experimento N 1: Identificacin de Azucares Reductores
Tabla N1. Resultados de azucares reductores
GLCIDO
glucosa
lactosa
fructuosa
sacarosa
Reductor
Importante: Es necesario indicar la formacin de precipitado y la cantidad con un signo (+++).
15
Experimento N 2: Hidrlisis de la sacarosa

Tabla N2. Resultado de la hidrlisis de la sacarosa
Muestra
SI
NO
Hidroliza
16
Experimento N 3: Reconocimiento de polisacridos: Almidn

Tabla N3. Resultado de reconocimiento del almidn
Muestra
almidn
papa
huevo
Almidones?
Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++).
17
Experimento N 4: Reconocimiento de Protenas

Tabla N4. Ensayos de protenas
Muestra
albmina
casena
almidn
Protenas
Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++).
18
Experimento N 5: Solubilidad de los Lpidos

Tabla N5. Resultados de la solubilidad de los lpidos
Muestra
Aceite
+ agua destilada
Aceite
+ acetona
Aceite
+ cloroformo
Soluble?
19
4. Discusin de observaciones, datos y resultados (3.5 p)
20
5. Conclusiones (2.5 p)
1.
2.
3.
4.
5.
6. Cuestionario y referencias (2 p)
a. Qu azcares son reductores?
b. En el experimento 2: reconocimiento del almidn, al trabajar con el lugol Por qu se da
el cambio de coloracin despus de sometido al calor? Fundamente su respuesta.
c. Cules son los factores que afectan la naturaleza de las protenas?
21
Cuestionario (2 p)
22

BIOLOGA (CH 061)
ANEXO 1
PREPARACION DE REACTIVOS
LABORATORIO: RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS
a. Soluciones de azucares glcidos al 1%
Glucosa, maltosa, lactosa, fructuosa, galactosa, sacarosa, almidn.
Se pesa 1 gramo de un glcido y se disuelve en 100 ml de agua destilada, agitando
hasta disolverse por completo.
Se vierte en un frasco limpio y se rotula, indicando la fecha de preparacin.
As para cada uno de ellos.
Para el caso del almidn, debe emplearse agua destilada caliente y agitacin constante
b. Solucin de almidn al 2%
Se pesa 2 gramos de almidn y se disuelve en 100 ml de agua destilada caliente y en
agitacin constante.
c. Hidrxido de sodio al 5%
Se pesa 5 gramos de NaOH y se disuelve en 100 ml de agua destilada.
d. Reactivo de Fehling
Solucin A:
solucin al 3% de sulfato cprico cristalizado
Pesar 30 g de sulfato cprico Cu2SO4 y aforar en un litro con agua
destilada
Solucin B:
solucin al 15% de sal de Rochelle (tartrato de sodio y potasio) en
solucin acuosa al 5% de hidrxido de sodio NaOH.
Preparar un litro de hidrxido de sodio al 5% (50 grs en 1 L) y adicionarle
150 g de tartrato de sodio y potasio
e. Solucin de lugol: yodo/yoduro de potasio
Adicionar 2 g de yoduro de potasio y1 g de yodo a 80 ml de agua destilada, agitar hasta
solubilizar los reactivos Aforar 100ml de agua.
f.
Reactivo de Biuret
Solucin A:
17.3 g de sulfato de cobre Cu2SO4 en 100 de agua destilada caliente
Solucin B:
17.3 g de citrato sdico Na2CO3y 100 g de bicarbonato de sodio anhidro
NaHCO3 en 800 ml de agua destilada caliente.
Se mezclan ambas soluciones, se enrazan a un litro y se ponen en un matraz cubierto
para evitar la accin de la luz. El reactivo se guarda en un frasco color mbar.
23
GRUPO

BIOLOGA (CH 061)
PREINFORME DEL LABORATORIO N 2
EXTRACCION DE ADN DEL EPITELIO MUCOSO BUCAL

Nombre del Alumno
Calificacin
Fecha
Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el da de realizacin del laboratorio,
escrita a mano, se presenta en hojas A4 bond, Nota mxima de 4 puntos
1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO de los experimentos a desarrollar PROCEDIMIENTO,

realice un esquema de trabajo de cada experimento.
Es el plan ordenado de la forma en que se realiz la prctica para lograr el objetivo de la
misma. (2 puntos)
Ejemplo:
A
Se indica el proceso (Se adiciona se separa)
2. Cuestionario:
- Qu es cdigo gentico?
- Cuntos genes tiene el hombre?
- Presente un diagrama de flujo de la extraccin de ADN en una de las siguientes
muestras: en cabellos, sangre, tejido seo,
- Cmo se puede preservar el ADN despus de haberlo extrado?
- Cul es la diferencia de extraer ADN animal, vegetal y bacteriano? (sealarlas)
- Elabore el diagrama de flujo del procedimiento de la extraccin de ADN vegetal
3. Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada
24

BIOLOGA (CH 061)
EXTRACCIN DE ADN DEL EPITELIO MUCOSO BUCAL

INTRODUCCIN
El ADN es una cadena de nucletidos, es un polinucletido. Esta
cadena est formada por muchas unidades de nucletidos unidas entre
s, por un enlace peptdico, y cada nucletido est formado por un
azcar (desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adenina
(A), timina (T), citosina (C) guanina (G)) y un grupo fosfato que acta
como la unin de nucletidos. Ver la figura 1.
La secuencia del ADN se especifica nombrando slo la secuencia de
sus bases. La disposicin secuencial de estas cuatro bases a lo largo
de la cadena, es decir, el ordenamiento de los nucletidos, es la que
codifica la informacin gentica. El ADN se presenta como una doble
cadena de nucletidos, en la que las dos hebras estn unidas entre s
por enlaces. El ADN forma el gen, que es la unidad bsica de la
herencia.
En esta practica se emplearan las clulas de descamacin del epitelio
mucoso del interior de la boca, poniendo de manifiesto u estructura
fibrilar y el extraordinario grado de arrollamiento, que permite el
empaquetamiento en el nucleo celular de las largusimas cadenas de
esta molcula.
Figura 1. Estructura del ADN
En las plantas, los animales y los hongos, el ADN se encuentra mayormente en el ncleo de las
clulas. Para extraer el ADN de las clulas vegetales hay que romper la fuerte pared celular
exterior, emulsionar los lpidos de la membrana plasmtica y la envoltura nuclear.
La extraccin del ADN celular es una etapa clave en muchos procedimientos de biologa
molecular y aplicaciones de ingeniera gentica. El mtodo vara dependiendo de la clula o
tejido desde donde se necesita extraer el DNA, sin embargo, cualquier protocolo tiene las
siguientes etapas bsicas:
Primero las clulas deben ser homogenizadas, lisadas (rotas) para liberar el ncleo (si est
presente). El ncleo tambin debe ser roto para liberar el DNA. En este punto el DNA debe ser
protegido de enzimas que podran degradarlo (nucleasas). Una vez que el DNA es liberado.
Debe ser precipitado con alcohol (etanol) para purificarlo y concentrarlo. Dependiendo de las
aplicaciones posteriores, puede ser necesario someter el DNA a etapas de purificacin
adicionales. Usualmente el DNA extrado se analiza mediante electroforesis en geles de
agarosa y/o espectrometra UV.
OBJETIVOS
Lograr la extraccin y visualizacin de ADN de una muestra animal.
25
Tubos de ensayo, agua mineral, palillo, vasos desechables, pipeta de 10 ml, bagueta,
propipeta, gradilla de madera, tubos eppendorf, NaCl 6%, alcohol de 96 muy frio, alcohol de
70, detergente/shampu, una probeta.
Por persona: vasos desechables, cucharitas de plstico, agua mineral, alcohol de 96,
alcohol de 70, (100ml), muestra biolgica: epitelio bucal
Por grupo:
alcohol de 96, alcohol de 70, (100ml)
FUNDAMENTO
El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y replegado, unido a protenas
para formar la cromatina. Para extraerlo es necesario homogenizar el tejido y romper las
clulas para separar el ncleo, al lograrlo se libera el ADN, se debe separar de las protenas y
precipitarlo para extraerlo de la solucin. Se visualizara como un agregado de fibras
blanquecinas que se podrn adherir a una varilla de vidrio.
EXTRACCION DE ADN ANIMAL

PROCEDIMIENTO
Preparar un tubo de ensayo con alcohol etlico de 96 por cada alumno y poner a enfriar lo
mximo que sea posible (p.e. en bao de agua con hielo, mientras se realizan los pasos
siguientes.
1.
Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca enrgicamente durante al menos

un minuto, para arrastrar el mayor nmero posible de clulas de descamacin de la
mucosa bucal (antes de hacerlo conviene haber tragado la saliva para eliminar la accin
de los enzimas contenidos en ella).
Mientras tanto, pondremos una pequea cantidad de agua destilada (o mineral) en el
mismo vaso, unos 10 ml y aadimos 1 ml de NaCl, 5 gotas de detergente/shampu,
removiendo suavemente para disolver estos componentes evitando la formacin de
espuma.
Expulsar el agua en el vaso de precipitados sobre la solucin anterior y remover con la
cucharilla suavemente durante varios minutos para que acten el NaCl y el detergente,
evitando la formacin de espuma.
Luego, aadir la solucin suavemente al tubo de ensayo que contiene el alcohol muy frio
dejndola resbalar por la pared del tubo inclinado. El filtrado ms denso que el alcohol y
algo turbio se deposita en el fondo del tubo. Dejar reposar durante unos 3 minutos sin
moverlo.
Comprobar la estructura fibrilar del ADN
2.
3.
4.
5.
26

BIOLOGA (CH 061)
GRUPO
EXTRACCIN DE ADN DEL EPITELIO MUCOSO BUCAL

Nombre del alumno
(Apellidos, Nombre)
Pre
informe
(4 p)
Test
(4p)
Reporte
(12 p)
Desempeo
(-)
Nota
(20)
1. Resumen (1p)
27
2. Objetivos especficos (2p)
3. Datos y observaciones experimentales (2 p)

Experimento: EXTRACCION DE ADN ANIMAL
28
4. Discusin de observaciones, datos y resultados (3 p)
5. Conclusiones (2 p)
29
6. Cuestionario y referencias (2 p)
a. Explique, cmo se puede determinar la concentracin del ADN.
b. Cul es la importancia de estudiar el ADN en muestras arqueolgicas?
Y en la actualidad?
30

BIOLOGA (CH 061)
GRUPO
PREINFORME DEL LABORATORIO N 3
DETERMINACION DE GRUPO SANGUNEO

Nombre del Alumno
Calificacin
Fecha
Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el da de realizacin del laboratorio,
escrita a mano, se presenta en hojas A4 bond, Nota mxima de 4 puntos
Realice el DIAGRAMA DE FLUJO del experimento a desarrollar: PROCEDIMIENTO

Es el plan ordenado de la forma en que se realiz la prctica para lograr el objetivo de la
misma. (2 puntos)
Ejemplo:
A
Se indica el proceso (Se adiciona se separa)
Cuestionario:
a. Qu es un grupo sanguneo?
b. Qu es el factor Rh? De dnde proviene?
c. Cmo se da reaccin para identificar un grupo sanguneo?
d. Cul es la importancia del grupo sanguneo en el trasplante de rganos?
e. Que es coagulacin? Que es aglutinacin?
Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada
31

BIOLOGA (CH 061)

INTRODUCCIN
Los glbulos rojos o hemates son clulas sanguneas, por lo tanto todos los tenemos. Sin
embargo, en la membrana de los glbulos rojos pueden existir unas protenas especiales: son
las glucoprotenas A y B. As, un glbulo rojo puede tener protena A, protena B, tener ambas
o no tener ninguna. De manera que un individuo tendr grupo sanguneo A si sus glbulos
rojos tienen la glucoprotena A en su membrana, siguiendo el mismo criterio para el resto de los
grupos (si no existe protena, entonces ser de grupo sanguneo O). Estas protenas
corresponderan a lo que denominan antgenos.
Ahora bien, en el plasma sanguneo tenemos anticuerpos. Evidentemente, un individuo del
grupo A no podr tener anticuerpos anti-A, pues sto no sera viable (la sangre coagulara).
As,
-
Los individuos A tendrn anticuerpos anti-B

Los individuos B tendrn anticuerpos anti-A
Los individuos AB no tendrn anticuerpos de este tipo
Los individuos O tienen los dos tipos de anticuerpos.
Grupo sanguneo
AB
Glbulos rojos
En la membrana
Antgeno A
En el plasma
Anti-B
Antgeno B
Anti-A
No antgenos
Antgenos A y B
No anticuerpos
Anti-A y
Anti-B
Tabla N1 Representation de los anticuerpos en los globules rojos.
Es importante saber el tipo de sangre en procesos de donaciones de sangre. Como hemos

visto, un individuo A tiene en su plasma anticuerpos anti-B, as que no podr recibir sangre de
un individuo B, pues estos anticuerpos provocaran la coagulacin de la sangre del donante en
los vasos sanguneos de la persona receptora.
32
OBJETIVOS
Determinar el grupo sanguneo.
Presenciar la tcnica, observar la aglutinacin de los hemates e interpretar dicha
tcnica.
Portaobjetos, lanceta (material punzocortante estril), alcohol 96C, algodn, agua oxigenada,
palillos mezcladores.
Reactivos: suero anti A, anti B, anti D IgG/IgM
Por grupo:
alcohol medicinal.
Por persona: muestra: sangre capilar del dedo

cartulina blanca de 13 x 10 cm.
PROCEDIMIENTO
1. Divide el portaobjetos en tres secciones con el rotulador de vidrio. Marca en una casilla
la letra A, en otra la letra B y en la ltima D.
Hazlo con letra pequea en cada esquina de cada seccin.
2. Deposita una gota de suero anti-A en la casilla con la letra A; (Intenta poner stas gotas
en la parte superior de cada casilla) otra gota del suero anti-B en la casilla B; Por
ltimo, en la casilla D colocar una gota del suero Anti-D
3. Con ayuda del agua oxigenada y el algodn desinfecta la yema del dedo que vayas a
hincar. Coge el material punzante previamente desinfectado e hinca el dedo. Aprieta la
yema del dedo hasta que haya una gota de tamao similar a la que has echado antes
de anti-suero.
4. Sita una gota de sangre en cada seccin del porta, justo debajo de la gota de
antisuero (sino tiene sitio colquela a un lado, pero de forma que no se junten las dos
gotas)
Con un palillo mezclar las dos gotas de cada seccin utilizando un palillo distinto cada
vez y formando un crculo de 2 a 2,5 cm de dimetro. Es muy importante utilizar un
palillo distinto cada vez, ya que si no, nos dar falsos resultados.
5. LECTURA DE LOS RESULTADOS
Observar los resultados: presencia o ausencia de aglutinacin.
Hay aglutinacin cuando aparecen unos grumos rojos que flotan en un lquido claro.
El resultado puede observarse en unos segundos, aunque conviene reexaminar las
reacciones al cabo de dos minutos para comprobar que no se ha pasado por alto
ninguna reaccin dbil.
33

BIOLOGA (CH 061)
GRUPO
Nombre del alumno

(Apellidos, Nombre)
1.
Pre
informe
(4 p)
Test
(4p)
Reporte
(12 p)
Desempeo
(-)
Nota
(20)
Resumen (1p)
34
2. Objetivos especficos (2 p)
3. Datos y observaciones experimentales (2 p)

Tabla N1 Determinacin del grupo sanguneo
AGLUTINACIN
A
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
*Indicar:
reaccin positiva +: hay aglutinacin

reaccin negativa -: no hay aglutinacin
35
4. Discusin de observaciones, datos y resultados (3 p)
36
5. Conclusiones (2 p)
6. Cuestionario (2 p)
a. Qu es un antgeno?
b. Qu es un anticuerpo?
c. En qu consiste una reaccin antgeno-anticuerpo?
d. Cal es el grupo donante universal? Por qu?
37

BIOLOGA (CH 061)
GRUPO
PREINFORME DEL LABORATORIO N4
TEMA PENDIENTE
Nombre del Alumno
Calificacin
Fecha
TEMA PENDIENTE
TEMA PENDIENTE
38

BIOLOGA (CH 061)
GRUPO
ANALISIS DEL ARTICULO CIENTIFICO

Un artculo cientfico es un informe escrito que describe los resultados
originales de una investigacin ya realizada. La caracterstica principal de un artculo de
investigacin es que siempre debe producir avances en el conocimiento
Debern buscar 1 artculo cientfico que cumpla las siguientes condiciones:
1. Pertenecer a alguna revista arbitrada,
2. No ser mayor a 5 aos de antigedad.
La presentacin del anlisis del artculo: en un folder entregarn la versin impresa del
artculo y su respectivo anlisis (este ltimo con las pginas numeradas, mrgenes
preestablecidos). Tendr los siguientes tems:
1. TITULO
2. Justificacin del artculo:
Por qu realizaron esa investigacin?, Cul es el propsito de la investigacin? que
buscaban?
3. Objetivos: que se plantean en el artculo, es la importancia y relevancia de la
investigacin
4. Metodologa en diagramas de flujo*:
Realizar el proceso secuencial de la metodologa.
* Para el caso de las especialidades de Ciencias de la Computacin y Matemtica es
posible que este sistema no sea apropiado, as que se deja a su criterio interpretacin.
* Para un mejor entendimiento, de ser el caso deber explicar trminos, anlisis y
procesos mencionados en el articulo
5. Anlisis e interpretacin de los resultados del artculo:
Cules fueron los resultados del artculo?
Cumplieron los objetivos establecidos al inicio de la investigacin?
El anlisis debe expresarse a travs de un lenguaje claro
6. Conclusin del articulo
7. APRECIACION PERSONAL: Indicar
Por qu selecciono ese artculo?
Cul es el aporte a la Biologa?
Existe estudios iguales, cercanos o similares en nuestro pas?
39

Guia de Biologia 2016 1

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

SEMESTRE ACADEMICO 2016-I

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

Cronograma de Practicas de Laboratorio de BIOLOGA

Presentacin del CURSO (Teora y Prctica)

Laboratorio 1: Reconocimiento de Biomolculas

Practica calificada 1: Laboratorio 1 + Tarea Academica*

Laboratorio 2: Extraccin de ADN

Prctica calificada 2: Laboratorio 2 + Tarea Academica*

SEMANA DE EXMENES PARCIALES

Laboratorio 3: Determinacin de grupo sanguneo

Prctica calificada 3: Laboratorio 3 + Tarea Academica*

Laboratorio 4: Actividad enzimtica de las oxidoreductas

Practica calificada 4: Actividad

SEMANA EXAMENES FINALES

SEMANA EXAMENES SUSTITUTORIOS

* Entregado por el profesor de prcticas.

Prof. Pilar Garca Avelino

PRESENTACION DEL MANUAL DE PRCTICAS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

PRESENTACION DEL INFORME

Observaciones experimentales, datos y resultados (para c/experimento) (3 p)

Discusin de las observaciones experimentales, datos y resultados (2 p)

Estas deben estar vinculadas a sus discusiones, de haberse empleado en el resumen

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

Determinar cualitativamente los azucares reductores.

IDENTIFICACIN DE AZCARES REDUCTORES (I)

Figura N2. Reaccin de Fehling

Rotular 4 tubos de ensayo, adicionar el azcar correspondiente.

Tabla N1. Azucares reductores

Bao mara 1 minuto

La reaccin ser positiva si en la muestra se forma un precipitado color rojo ladrillo

HIDROLISIS DE LA SACAROSA (II)

Figura N 4. Disacridos: (a) reductor, (b) no reductor

cido clorhdrico HCl

Calentar por bao mara

ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

RECONOCIMIENTO DE POLISACARIDOS: ALMIDN (III)

Colocar los componentes indicados en la tabla 4, adicionar el reactivo de lugol y

RECONOCIMIENTO DE PROTENAS (IV)

Figura N6. Unidad de la protena:

Figura N7. Estructura de las protenas

Figura N8. Complejo de cobre formado en la reaccin de Biuret

Rotular tres tubos de ensayo, en el primero agregar 2 ml de albmina (huevo), en el

ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

SOLUBILIDAD DE LOS LPIDOS (V)

Agregar por las paredes del tubo cada componente:

Rotular los tubos y en cada uno de ellos adicionar 1 ml de aceite

ANOTR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

INFORME DEL LABORATORIO N 1

2 Objetivos especficos (2.5p)

3 Datos y observaciones experimentales (3.5 p)

Experimento N 2: Hidrlisis de la sacarosa

Experimento N 3: Reconocimiento de polisacridos: Almidn

Experimento N 4: Reconocimiento de Protenas

Experimento N 5: Solubilidad de los Lpidos

4. Discusin de observaciones, datos y resultados (3.5 p)

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

PREINFORME DEL LABORATORIO N 2

EXTRACCION DE ADN DEL EPITELIO MUCOSO BUCAL

1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO de los experimentos a desarrollar PROCEDIMIENTO,