Examen Cytobacteriologique Des Urines 2

Micro
CSB System
EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE DES URINES

E.C.B.U
(cystite), du bassinet (pylite) ou du rein
I. Mcanisme et agents des infections
(nphrite). Ce mcanisme explique la
urinaires
frquence de ces affections chez la femme

Les infections urinaires se prsentent
enceinte, la grossesse ralisant, par
classiquement sous la forme dune douleur
compression, la fois une stase intestinale
lombaire pouvant irradier vers la vessie et
et urinaire.
la cuisse (cas des infections hautes) ou par

une douleur la miction avec faux besoins
B. Infections dorigine exogne (dites
duriner (cas des infections basses). Parfois
encore ascendantes )
linfection est inapparente, elle est rvle

Des bactries dorigine intestinal ou
lors dun examen systmatique (par
provenant de lenvironnement sont
exemple la suite dune dcouverte
prsentes au niveau de l' urtre antrieur et
protinurie).
du mat urtral. Dans les conditions

La physiopathologie permet de les
normales leur progression ascendante est
classer en deux groupes.
contrarie par le courant urinaire qui les

ramne chaque miction vers le point de
Infections dorigine endogne (dites
dpart. Cependant, dans certaines
encore descendantes )
circonstances (toute affection entranant un

A la suite dune stase intestinale, des
stase urinaire, sondage) cet obstacle est
bactries de la flore intestinale passent
franchi, les bactries atteignent la vessie et
dans la circulation et parviennent au rein.
sy multiplient.
Dans le cas o prexiste une difficult
A partir de la vessie, la contamination du
dvacuation des urines, ces bactries
parenchyme rnal est possible ds que le
pourront se dvelopper et former des
franchissement du disponible du dispositif
foyers infectieux au niveau de la vessie
antireflux urtrovsical est ralis.

1
La cellule de Nageotte est constitue dun quadrillage de 10mm ct et de 0.5 de profondeur. Le volume de la cuve
ainsi dlimit est de 500mm3. elle est divise en 40 bandes verticales. Compter sparment le nombre de leucocytes et
dhmaties contenus dans 8 bandes, soit N : N reprsenter a le nombre dlments / mm3
URBM/FMPO/UCAD/Pr C S Boye
* le risque de multiplication des
Ltude de ces deux mcanismes explique

la frquence des bactries de la flore
contaminants (lurine est un bon milieu de
intestinale dans linfection urinaire.
culture, le dveloppement des germes

contaminants est suffisant en trois ou
quatre heures la temprature du
II. Les critres cytologiques de
laboratoire pour rendre ininterprtable la
linfection des germes urinaires
numrotation)
* le risque de destruction des
A. Importance du dnombrement
germes si les urines contiennent des
des germes urinaires
substances bactriostatiques ou
Principe
bactricides. Les aminosides, par exemple,

peuvent persister plusieurs jours dans
Une urine pathologique est

gnralement riche en germes, une urine
lurine aprs larrt de leur administration,
souille au cours du prlvement en
larrt de toute antibiothrapie quarante-
contient peu au moment de son recueil.
huit heures avant le prlvement ne
Les rsultats du dnombrement des
constitue donc pas une certitude quant
germes urinaires constituent donc un des
labsence de substances antibactriennes
critres les plus fiables de linfection
dans celui-ci.
lorsque les conditions qui suivent sont
Les mthodes
remplies.
a. Mthode de dilutions
- Dsinfection soigne du mat urinaire

et limination du premier jet (dans le cas
Des dilutions de lurine dans leau
dun prlvement au cours dun miction
physiologique 9% sont effectues dans la
spontane) afin de limiter le nombre des
gamme de 10-2 10-7.
contaminants.
Un millilitre de chaque dilution est
- Prlvement durines ayant sjournes
incorpor en bote de ptri 20 millilitres
un temps suffisamment long dans la vessie.
de glose nutritive fondue et refroidie 45
Les germes provenant du foyer infectieux
50. Mlanger soigneusement, laisser
sy multiplieront et sy concentreront.
solidifier.
Aprs 24 heures dincubation 37 les
- Ensemencement immdiat ou
colonies sont comptes dans la bote en
faiblement diffr afin dviter

2
contenant entre 75 et 150. Le nombre ainsi
c. Dnombrement des germes
dtermin, multipli par la dilution, fournit
urinaires par mesure de turbidimtrie
le nombre de bactries par millilitre
Lurine est inocule aseptiquement
durine.
un milieu de culture liquide dans les

proportions bien dfinies et invariables. Le
Cette mthode longue et dlicate ne

peut tre applique aux sries, donc la
dveloppement des germes urinaires
routine. Elle sert encore de mthode de
saccompagne dune lvation de turbidit
longue et dlicate ne peut tre applique
du mlange. Celle-ci ne dpendra, aprs
aux sries, donc la routine. Elle sert
incubation, que du nombre de germes
encore de mthode de rfrence.
prsents dans lurine si les deux conditions

suivantes sont respectes :
b. Technique de la lame
Exemple : le dispositif DGU de
La mesure de lopacit doit tre
faite contre un blanc du mlange au temps
linstitue Pasteur
0 (cette prcaution tient compte des
Description
variations importantes de la turbidit
Une lame porte objet munie dun
initiale, les urines normales sont plus ou

moins limpides) ;
quadrillage en relief est recouverte de

glose CLED sur une face et de glose
Mac Conkey sur lautre. Lintrt de la
La mesure doit tre faite pendant
la phase exponentielle du dveloppement
glose de Mac Conkey est dinhiber les
du germe (en phase stationnaire la
bactries Gram+ et le dveloppement en
concentration bactrienne ne dpend plus
nappe des Proteus. La lame est conserve
du nombre de germes inoculs) et ds que
dans un flacon cylindrique strile en
les diffrences dopacit peuvent tre
matire plastique. Elle est fixe au
apprcies de faon significative. Ceci est
couvercle du mme flacon.
le cas en trois 6 heures avec un
Utilisation
nphlomtre laser .
Saisir la lame par lintermdiaire du
Cette mthode est automatise. A
couvercle auquel elle est fixe, immerger
nombre danalyse gal, le prix de revient
compltement les deux faces, retirer
est bien infrieur celui des autres
immdiatement, laisser goutter lexcs.
mthodes, le gain de temps aussi est
Incubation 18 24 heures 37.
sensible. Il devient possible, en effet,

3
dobtenir un rsultat ds le premier jour et
En gnrale moins de 101 germes / ml
de limiter la mise en culture aux seuls
traduisent une contamination de lurine et
urines donnant un rsultat significatif la
105 germes / ml et plus traduisent une
numration.
infection.
Entre ces deux concentrations
Lecture
lensemencement doit tre recommenc
La lecture est faite sur la glose CLED
avec un nouveau prlvement durine.
(face verte) en comparant la densit des

colonies prsentes sur chaque avec une
En effet, cest dans cette zone de
srie de reproductions talons
concentration bactrienne mdiane, que la
correspondant :
mthode est particulirement utile pour le
103, 104, 105, 106, 107 bactries / ml
diagnostic des infections de larbre

urinaire.
durine.
Ces chiffres indiquent le nombre de
germes / ml.
Aspect des colonies

Laspect des colonies sur le milieu C.L.E.D. permet une orientation
Par exemple :
Colonies jaunes, opaques centre
lgrement plus fonc..E. Coli.
Colonies trs muqueuses...Klebsiella.
Colonies bleues translucides..Proteus
Colonies surface mate.P. aeruginosa.
Colonies jaunes..Streptococcus faecalis.
Colonies jaune fonc, couleur uniformeStaphylococcus aureus.
Colonies jaune ple ou blanches, priphrie
souvent plus pleStaphylococcus coagulase (-)
4
Cette liste nest pas respective. Dautre
Si une substance
germes comme les Entrobacter et les
antibactrienne est limine dans
Serratia cultivent sur le milieu. Il est
lurine
vident que le diagnostic devra tre
confirm par les mthodes classiques de
bactriologie.
Sil y a occlusion de lurtre

Dans le cas dinfections
Pseudomonas aerugina (qui a tendance

Lecture dune numrotation des
former des amas ;
germes urinaires
une colonie
correspond donc plusieurs bactries)
(Document Institut Pasteur)
Les normes
Dans le cas dune pylonphrite

chronique.
En rpartissant sur un histogramme
B.
La leucocyturie et llimination de
les rsultats des dnombrements
cylindres
obtenus partir de deux populations,
1. La leucocyturie
lune aux urines infectes, lautre aux

urines striles, on constate que les
Son valuation fait appel trois types de
comptes de germes des premiers sont
mthodes
trs souvent suprieurs 104 105
1re mthode La mesure du dbit-
germes / ml alors que ceux des urines
minute ou compte dAddis :
striles sont infrieurs ces valeurs.

Cet examen fournit aussi le nombre
On les considre donc gnralement
dhmaties limines par minute dans les
comme valeurs limites entre
urines. La malade doit vider
infection et strilit .
compltement sa vessie le matin, la
Des rsultats infrieurs 104
totalit des urines est recueillie 3 heures
bactries / ml peuvent cependant
aprs. On note le volume V durines
correspondre une infection urinaire :
mises pendant ces 180 minutes.

Homogniser, prlever 10 ml durine et
centrifuger 5 minutes 2 000 tours.
Si le dbit urinaire est lev
Pipetter et jeter 9 ml de surnageant,

remettre le culot en suspension dans le ml
5
restant : lurine est ainsi concentre 10 fois.
L limination des leucocytes ltat
Dnombrer les leucocytes la cellule de
normal ne dpasse pas chez ladulte
Malassez. Soit N le nombre de leucocytes
2 000 par minute soit environ 5 par mm3
compts dans toute la cellule, n/10 reprsente
ou 5 par champ (x 40). Chez lenfant, ces
le nombre de leucocytes par mm3 durine.
limites sont portes 10 par mm3 pour le
100n sera le nombre par ml. 100 x n x V
garon et 50 chez la fille.
180
Lexamen du sdiment ltat frais suffira
sera le nombre de leucocytes limins en une
lorsquun nombre important de leucocytes
minute. On compte aussi sparment les
par champ sera observ, surtout si les

polynuclaires apparaissent altrs et
hmaties. Le calcul est le mme que pour les
rassembls en plaques. Dans les cas
leucocytes.
douteux, lvaluation quantitative est
2e mthode la numrotation de
ncessaire. La numrotation en cellule de
lurine entire la cellule de Nageotte
Nageotte est prfre au compte dAddis car

3 1
elle fournit le nombre de leucocyte par mm .
cet examen est beaucoup plus rapide. Le

compte daddis est cependant souvent
3e mthode lexamen ltat frais
demand au laboratoire car il est utile pour
du culot de centrifugation
le clinicien pour suivre lvolution dune
Le rsultat fourni est labor partir du
glomrulonphrite.
nombre moyen de leucocytes par champ (cf.

sdiment urinaire)
Lobservation dune leucocyturie lev est un bon

argument faveur dune infection des voies
La concordance des rsultats nest pas
urinaires hautes ou basse ou dune infection
toujours bonne entre la mesure du dbit-
du parenchyme rnal. La rciproque nest
minute (mesure prcise) et lexamen du
pas toujours vraie : on ne peut conclure
sdiment ltat frais (rsultats
labsence dune infection urinaire en
approximatifs). Elle est par contre convenable
labsence dune infection de pyurie.
avec la simple numrotation en cellule (ce qui

semble logique dans les cas o llimination
En effet, la quantit de polynuclaires
des leucocytes est continue).
prsents dans lurine est fonction de la

ractivit propre chaque individu. Il existe
des ractions inflammatoires non
infectieuses au niveau de larbre urinaire et
toutes les infections urinaires ne
6
saccompagnent pas dune raction
sajoute la matire fondamentale diverses
inflammatoire. La persistance dune raction
cellules.
inflammatoire en labsence dinfection ou plus
de quinze jours aprs sa gurison doit
Des leucocytes : cylindres

leucocytaires
cependant faire rechercher une tiologie

tuberculeuse, en labsence dune autre

explication satisfaisante.
Des hmaties : cylindres hmatiques
Des cellules pithliales : cylindres

pithliaux (beaucoup plus rares).
2. Elimination de cylindres
Lorsque les cellules dgnrent, leur
Les cylindres sont des lments de grande taille
contour devient moins net, le cytoplasme

pousant la forme dune partie du tubule rnal.
a.
plus granuleux : les cylindres les contenants

sont les cylindres granuleux. Il est donc
La formation des cylindre
assez rare de rencontrer des cylindres
Le mcanisme de leur formation :
granuleux ou des cylindres leucocytaires

Au cours dune nphrite ou dune
sans cylindres hyalins sur une mme
pylonphrite, lirritation du tubule rnal peut
prparation.
se traduire par la scrtion de quantit assez

importantes dun mucopolysaccharide : lacide
Le lieu de leur formation
mucotine sulfurique. Dautres protines, dans
Cest au niveau du tube collecteur que
ces circonstances, sont prcdentes dans
lurine se concentre et sacidifie
lurine, telle lalbumine ou dautres protine
suffisamment pour permettre la formation
sriques filtres par les glomrules dfaillants.
des cylindres. Il est rare quun cylindre se

forme au niveau du tube proximal (cest le
Dans une premire tape se forme donc

un moule protique, les protines tant
cas pourtant des cylindres hyalins
prcipites lorsque lacidit et la concentration
accompagnant le mylome multiple et
de lurine atteignent des valeurs suffisantes. A
composs principalement de la protine de
ce stade apparaissent dans lurine des cylindres
Bence Jones).
exclusivement protiques : les cylindres
Selon leur lieu de formation, la forme et les
hyalins.
dimension des cylindres seront variables (cf.
A partir du moule protique peuvent se
schma donn ci-contre).
constituer dautres types de cylindres selon que
b.
La signification dune
cylindrurie
7
La prsence de quelques cylindres hyalins dans
cylindres hmatiques lexamen du
lurine na pas une grande signification. On
sdiment, dans le cas dune atteinte
peut lobserver chez des individus normaux
glomrulaire,
lorsque lurine est trs concentre ou trs acide
, ou encore aprs un effort musculaire trs
dans les cystites hmorragiques
tuberculeuses, gonococciques, germes
intense. Lexcrtion de cylindres hyalins peut
banaux,
accompagner dautre part nimporte quelle

protinurie quelle quen soit lorigine.
dans la tuberculose rnale.
Mais lhmaturie peut tre associe aussi
Lobservation de cylindre hyalins en
dautres affections dtiologie non
nombre important identique, par contre,
infectieuse : cancer, ou lithiase rnale,
une affectation svre du parenchyme rnal.
tumeurs de la vessie.
La prsence de cylindres leucocytaires ou
d. La nature du germe isol
de cylindres granuleux est presque toujours
Parmi les germes cits, plusieurs peuvent
pathologique et signe alors une nphrite
tre trouvs en tant que contaminants
grave.
(Serratia, Pseudomonas, E. coli). On voit

b. Lhmaturie
tout lintrt de lexamen du sdiment

(pyurie), du dnombrement des germes et
Cest lmission dun mlange de sang et
des leucocytes qui permettront daffirmer ou
durine. Au-del de 5 hmaties par champ, le
dinfirmer leur rle dans linfection.
passage des globules rouges dans les urines

peut tre considr comme pathologique. La
A noter aussi limportance des variations
mesure du dbit minute est prfrable (la limite
de la frquence de certaines espces selon
suprieure est de
lorigine des chantillons durine.
2 000 hmaties/minute). Les hmaties intactes
e. La production danticorps dirigs

contre le germe isol
ont une fortes probabilit de venir de la vessie

ou de lurtre. Les hmaties altres viennent
Certains auteurs suggrent de la pratiquer
du rein.
assez systmatiquement pour les urines

denfants. Cette recherche nest pas
Lhmaturie sobserve :
effectue encore en routine. Chez lenfant,

dans les formes hmorragiques des
la localisation de linfection urinaire ne peut
nphrites : on pourra alors dcouvrir des
parfois tre dtermine ni par les examens

8
cliniques, ni par les examens de laboratoire

habituels.
Deux techniques sont utilises pour les

dceler :
Lattitude thrapeutique est pourtant trs

diffrente. Or, pour 75 % des enfants de plus
Le srodiagnostic
dun an, la localisation parenchymateuse de

Lantigne est constitu dune suspension
linfection est associe la production
prpare avec la souche isole de lurine
danticorps dirigs contre la souche isol de
lurine. Cette raction immunitaire est en
La recherche par
gnral absente au cours des infections basses.
immunofluorescence indirecte de
Les anticorps produits passent dans lurine et
bactries enrobes
recouvrent les bactries en cause.
dimmunoglobulines dans lurine. Le

dtail de ces deux techniques figure en
annexe.
c.
Les grandes tapes de
Dnombrement des germes urinaires
lanalyse cytobactriologique
Il est effectu ds que lurine parvient
des urines
au laboratoire. Les diffrentes techniques

Prlvement
employes ont t dcrites prcdemment

ainsi que leur interprtation.
Lurine est recueillie au cours dune

miction spontane. Quelques prcautions
Lexamen du sdiment
sont ncessaires chez la femme : toilette

Une partie de lurine sera centrifuge et
intime (dsinfection au Dakin et rinage

leau physiologique), rejet des 10 premiers
servira aux examens microscopiques ;
millilitres de la miction.
lurine restante sera utilises

ultrieurement pour les ensemencements.
Le prlvement par sondage est

dconseill par certains car il peut tre
1. Prparation du sdiment
lorigine dinfections ascendantes ou la
Agiter doucement pour mettre les
cause dune hmaturie.
sdiments en suspension homogne.

Remplir au un tube centrifuger.
9
Les cylindres sont reprs lobjectif x
Centrifuger 5 minutes 2 000
10 puis lexamen seffectue au x 40. on
tours/minutes.
distingue deux types dlments :
Rejeter le surnageant en retournant le

tube, sans -coup (on peut pratiquer sans
inconvnient les examens biochimiques sur
possdent une organisation cellulaire et
le surnageant).
sont donc de la matire vivante.
Les lments organiss : ceux qui
Homogniser le surnageant en
aspirant et refoulant doucement trois fois
Les lments inorganiss : cristaux
correspondant des substances
avec une pipette Pasteur.
chimiques dont la concentration dans

lurine est suprieure leur solubilit.
2. Prparation des lames pour

lexamen microscopique
a. Les lments organiss
Prparer trois frottis. Scher et fixer
On repre dabord selon leur taille, puis
lalcool. Un frottis sera color par la
selon leur structure :
mthode de Gram, lautre au bleu de

mthylne, lautre la mthode de Zeihl.
Des petits lments ronds ou

ovodes : hmaties , leucocytes,
Placer enfin une goutte sur une lame,
levures
recouvrir dune lamelle pour lexamen

ltat frais.
Des lments nucls de taille

moyenne : cellules pithliales
La lame colore au Gram permettra

dorienter le diagnostic par lexamen des
De grandes formations
lments cellulaires dans des conditions
allonges : cylindres, ou des lments
moins traumatisantes que le Gram. Cest
ovodes de grande taille : ufs de
cependant la prparation ltat frais qui
parasites.
fournira la plupart des renseignement sur la

nature des lments cristallins et cellulaires
1. Les petits lments globulaires
prsents dans le sdiment.
Hmaties : les hmaties se
3. Description des lments
reconnaissent par leur forme en disque
rencontrs dans un sdiment urinaire
biconcave et par labsence de noyau. Elles
sur une prparation ltat frais
peuvent se prsenter dans lurine sous trois

aspects principaux :
10
o Intactes : sous la forme de
liquide. On les trouve en effet souvent

dans les urines concentres.
petits disques bleutres de 8 de diamtre

environ.
o En fantme :
o En oursin : (crneles)
Les limites sont irrgulires et prsentent
des asprits. Ces hmaties sont assez
rtractes (5 6) du fait dune fuite de
Elles sont alors de grande taille car plus
Elments ovalaires ou sphriques de 5 12
tales. Ce sont des hmaties lyses. La
bourgeonnants, de taille variable les
limite est seule bien visible car elles ont
unes par rapport aux autres. Il est
perdus une partie, voire la totalit de leur
frquent de trouver, associe la forme
contenu. On les retrouvent dans les urines
levure, la forme filamenteuse.
hypotoniques.
Leucocytes : ils peuvent se prsenter

sous trois formes :
Comment exprimer la quantit

dhmaties dans le sdiment ?
Intacts : disque de 10 12 , les
Au grossissement 40,
noyaux sont souvent visibles en faisant

varier la vis micromtrique ; le cytoplasme
Si lon dnombre :
est trs granuleux.
on notera au compte rendu
Altrs : plus petits, granuleux,
0 2 hmaties par champ
dforms.
Rares hmaties
En amas de leucocytes altrs, sous
la forme de pus.
Quelques hmaties
La prsence de leucocytes doit tre
quantifie sur le compte rendu Au
Assez nombreux hmaties
grossissement 40, les repres utiliss sont

plus de 20 hmaties par champ
habituellement les suivants :
Nombreuses hmaties
0 5 leucocytes par champ
Levures : Ne pas confondre avec les
Rares leucocytes
hmaties.
11
Il y a quelques annes, encore, la
Quelques leucocytes
localisation de linfection urinaire tait

souvent dtermine sur la base de
laspect des cellules pithliales
Assez nombreux leucocytes
retrouves dans le sdiment.

plus de 20 leucocytes intacts par
Lexprience a montre que de telles
champ
conclusions taient le plus souvent
Nombreux leucocytes intacts
hardies si ce nest errones car :

o la dgnrescence des cellules
Paquets de plus de 20 leucocytes
en modifie la morphologie
altrs
o il est trs difficile de leur
Nombreux leucocytes altrs prsence
attribuer avec certitude une origine

de pus
prcise car des cellules dorigine
Paquets de plus de 50 leucocytes
diffrentes peuvent prsenter des

aspects voisins selon quelles
altrs
proviennent de couches plus ou moins

Pus abondant
profondes dun pithlium stratifi.
Autres lments de petite taille
On se contente donc aujourdhui
Parmi les autres sdiments organiss de
dassimiler les cellules observes lun
petite taille, on peut rencontrer :
des trois groupes suivants :
* des spermatozodes :
- cellules dorigine tubulaire

probable
tte de 5 , long flagelle de 50 .
- cellules de transition
Observs dans les urines de lhomme.

* Trichomonas :
- cellules pavimenteuses
Elments ovodes de 15 environ
en donnant des indications relatives
remarquables par leur mobilit en vrille.
leur nombre : rares, quelques, assez

nombreuses, nombreuses, trs
2. Les lments de taille moyenne :
nombreuses.
les cellules pithliales
Cellules tubulaires : moiti
plus grandes que les leucocytes

12
alors par le renouvellement de lpithlium
Elles peuvent se prsenter sous
vaginal.
diffrents aspects :
o grossirement cubiques, sans
3. les lments de grande taille
bordure en brosse
Des cylindres
allonges, prismatiques, en
colonnes , avec bordure en brosse
Leur contenu est transparent. Les bouts
trs souvent, la morphologie
sont ronds ou effils. Lindice de rfraction
dorigine nest pas conserve, elles
est trs voisin de celui du milieu
prennent alors une forme ovalaire avec un
environnant ce qui les rend difficile
ou deux noyaux bien visibles. Le rapport
dceler en microscopie ordinaire.
nucloplasmique est assez lev.
Cylindres hyalins
Cellules de transition : 2 4 fois
Cylindres leucocytaires
Cylindres contenant des leucocytes plus ou
la taille dun leucocyte
moins altrs. Le cylindre leucocytaire
Elles sont trs souvent piriformes,
peut tre plus ou moins rempli.
parfois ovalaires, avec un noyau lui aussi

ovalaire et relativement petit par rapport
Cylindres pithliaux
la taille de la cellule.
Cylindres granuleux
Elles proviennent en gnral de la
Proviennent des prcdents. Ils sont
vessie ou du bassinet.
constitus de leucocytes ou cellules

pithliales trs altrs dont on devine le
Cellules pavimenteuses :
contour, et des cellules lyses dont le
les plus grandes.
contenu libr forme le rond granuleux.
Elles ont un rapport nucloplasmique

trs faible. Sauf lorsquelles sont
Les cylindres semi-granuleux proviennent
accompagnes de pus ou prsentes en
de lvolution de cylindre leucocytaires ou
grand nombre, lobservation de telles
de cylindres pithliaux peu remplis : les
cellules (qui proviennent en gnral de
granulations ne garnissent pas tout le
lurtre ou du vagin) na pas grande
cylindre.
signification car ce sont des cellules de
desquamation. Leur prsence sexplique
Cylindres hmatiques
Cylindres bruns, remplis dhmaties

altres.
13
ufs de parasites
Cylindres graisseux
Rares, prsents dans les cas de nphrose

lipodique. Les bouts sont biens arrondis,
ufs de Shistosoma hematobium
ufs de Shistosoma mansoni
les bords bien nets avec des incisions.

Couleur : jaune. Solubles dans lther.
b. Les lments inorganiss: les
Ne pas confondre avec des cylindres
cristaux
Lurine contient des substances peu
-1- Des amas de grains de
solubles qui sy trouvent pratiquement
phosphates : confusion avec les cylindres
ltat de solution sature. Dans le cas dune
granuleux
excrtion accrue de ces substances, elles
Ces amas sont courts et bouts
peuvent prcipiter sous forme cristalline et
rectilignes contrairement aux cylindres
on les retrouve dans le sdiment.
granuleux dont les bords sont arrondis ou
Les cristaux observs peuvent
effils et dont la longueur est suprieure.
correspondre un constituant normal de
- 2 - Des amas de mucus
lurine ou bien un mtabolite anormal
ceux-ci ont une extrmit filamenteuse qui
dont elle est physiologiquement
les diffrencie des cylindres hyalins avec
dpourvue.
lesquels on pourrait les

1. confondre.
Cristaux de substances prsente dans

lurine normale
Autre cause derreur
Des cristaux assez frquents
De nombreuses particules peuvent

sabsorber la surface des cylindres :
o Oxalate de Ca : en forme denveloppe
cocci, grains de phosphates, dbris. On
de lettre ou en cacahute.
peut dans ces conditions confondre un
Acide unique : en losange, en
o
cylindre hyalin ayant fix de telles
carr, en lame de forme irrgulire, en
particules avec un cylindre granuleux.
fleur , en fins filaments rassembls en
Cette confusion est viter car la
oursins, en double houppe....
signification des deux catgories de
Couleur ou brun rougetre.
cylindres est trs diffrente. Cest pourquoi

il est trs important, avant de donner le
rsultat : cylindre granuleux , de bien
Urates ammoniacaux
magnsiens : en glomrules hrisses de
observer un reste dorganisation.

14
pointes ou en paquets daiguilles. Jaune
forme daiguille, arrangs en botte de
(20 ).
foin . 100 200
Phosphates triples : en
Tyrosine : cristaux long et fins en
couvercle de cercueil, en feuille de fougre.
Leucine et tyrosine sont retrouves dans le
Incolore
sdiment urinaire dans certaines affections

hpatiques graves.
Sulfate de calcium : lames plates
et longues, isoles ou en paquet.
50 , incolore trs rfringentes. Elles
Phosphate bicalcique : amas de
Cystine : lames hexagonales de 30
apparat dans les urines lors dune maladie
lames en toile. Incolore.
appele cystinurie. Elle est soluble en

Le sulfate de calcium et le phosphate
milieu alcalin, donc dans lammoniaque, et
bicalcique pourront tre diffrencis par le pH
de ce fait ne peut tre retrouve dans les
de lurine. Le premier est retrouv dans les
urines fraches.
urines acides, le second dans les urines alcalines

o
ou neutres.
Sulfamides : on les retrouve dans
les urines des malades traits aux

De mme, oxalate de Ca et acide urique ne
sulfamides sous des formes diverses (cf.
seront retrouvs que dans les urines acides,
tableau).
urates et phosphates dans les urines alcalines ou

La prsence de tels cristaux na donc
neutres.
aucune signification pathologique.

Lobservation en quantit importante
Cependant les cristaux peuvent
de cristaux correspondant une de ces
endommager le rein. Ils doivent donc tre
substances doit tre signale. Elles peut
mentionns sur le compte rendu.
tre lie une lithiase. Leur limination en
o Cholestrol : plaque carre avec un
petite quantit na pas grande signification.
cot en escalier. Soluble dans
2. Cristaux de substances
lther.
anormalement prsentes dans lurine
3. Elments minraux amorphes
o Leucine : cristaux jauntre de
Deux types dlments amorphes ;
forme ronde avec de nombreuses striations

radiales ou plus rarement striation
concentrique. Rfringents.
Phosphates amorphes :
solubles dans lacide actique 10% (une

goutte de culot plus une goutte dacide).
15
Petites granulations blanchtres. Culot
renseignements concernant son utilisation
blanchtre, urine alcaline ou neutre.
et la lecture des rsultats).

Lantibiogramme est simultanment mis en
o Urates amorphes : petits grains
route.
jauntre rassembls en amas plus denses et

plus larges que les phosphates. Culot ros,
Remarque importante
urine acide. Insoluble dans lacide, soluble
Dans le cas durines bimicrobiennes,
par chauffage doux de lurine.

D.
deux ventualits sont envisager

o Prsence dun germe
Culture
signification pathologique (donc

Lisolement est pratiqu partir de lurine
prdominant si lanalyse suit le
entire. Dans le cas durine claires, on peut
prlvement sans latence trop importante)
travailler partir du sdiment.
et dun contaminant (prsent en petit
Tout les germes susceptibles de
nombre et souvent assimilable un
provoquer des infections urinaires cultivent
staphylocoque non pathogne, un
sur les milieux ordinaires et y dveloppent
Microcoque, un Bacillus).
des colonies assez caractristiques pour
Lanalyse est poursuivie partir du
orienter le diagnostic (avec les examens
premier.
microscopiques). On peut donc

o Prsence de deux germes
logiquement se contenter densemencer
signification pathologique
une seule bote de glose BCP, tout autre
Dans le premier des cas, les rparations
milieu napportant pas de renseignements
sont peu prs quivalentes et, pour
supplmentaires justifiant son emploi.
chaque colonie diffrente, on peut orienter
Lidentification est pratique le
le diagnostic vers un des germes
deuxime jour partir de colonies isoles
frquemment prsents dans une infection
en ensemenant la galerie biochimique
urinaire.
adapte. Deux systme miniaturiss sont
Lanalyse est poursuivie sur les deux types
trs utiliss dans ce but : la galerie Micro
de colonies.
CSB dont lusage est aujourdhui trs

rpandu, et la galerie Pasteur
Dans tout les cas, la prsence de deux
Uroculture de commercialisation plus
types de colonies doit tre signale et
rcente (on trouvera en annexe les
dcrite dans le compte rendu.

16
Schma rcapitulatif
(ne figure pas la recherche de bacilles tuberculeux)
surnageant : jeter
er
1 jour
Urine entire
Centrifugation
Numrotation
des leucocytes
isolement
sdiment :
et des hmaties
sur BCP
examens microscopiques
( cellules de Nageotte)
quelquefois, isolement
Numrotation des
Germes, compte dAddis
24 h 37
2e jour
colonies isoles
Galerie pour chaque

Colonie suspecte
3e jour
24 h 37
Antibiogramme pour
chaque colonie suspecte
24 h 37
Lecture
Lecture
17
c. Porter au bain-marie bouillant
-ANNEXE-
100 pendant 2 heures.

I. SERODIAGNOSTIC DES INFECTIONS
Centrifuger en cube conique 5000
URINAIRES
tours / minute pendant 15 30 min. Le

surnageant (qui doit tre limpide) contient
Deux ractions sont utilises :
lhaptne polysaccharidique.
o Agglutination directe entre le germe isol
d.
de lurine et le srum prlev sur le mme
Absorption sur hmaties de
mouton : laisser en contact 1 heure 37 1
individu ;
ml dantigne plus 0,1 ml dhmaties

o Hmagglutination passive : la fraction
50%
polysaccharidique de lantigne O est fixe sur des

e.
hmaties de mouton et lagglutination des
Lavage : centrifuger pendant
3 minutes 2.000 tours / minute, rejeter le
particules sensibilises recherches dans le srum
surnageant, reprendre le culot par 2 ml
diffrentes dilutions.
deau physiologique, centrifuger, rpter

Cest la technique de lhmagglutination,
lopration trois fois.
beaucoup plus sensible, qui est dcrite ici.

Aprs le lavage, reprendre le culot
globulaire par 4,9 ml deau physiologique.
1. Prparation du srum
o Diluer au 1/10 dans leau physiologique,
3. Raction
o Absorber les ventuelles agglutinines anti
On pratique une micromthode.
GRM en laissant en contact 24 heures 0 le

A laide du rpartiteur, placer 1 goutte
srum dilu et dcomplment avec 0,1 ml
deau physiologique dans toutes les
dhmaties de mouton.
cupules (1 12) sauf la premire.

2. Prparation de lantigne
Placer une goutte de srum dans la

premire cupule et une goutte dans la
a. Raliser une culture en nappe sur glose
range rserv au tmoin.
ordinaire. Incuber 24 heures. A partir de cette
Dplacer le dilueur de la cupule n 1
culture, prparer une suspension laiteuse dans 5
dans la cupule n2 et ainsi de suite jusqu'
10 ml deau physiologique dans un tube vis
la 12e cupule en homognisant chaque
b. Extraction du polysaccharide
fois par une rotation du rpartiteur.

18
Dans la cupule- tmoin, placer une
1. Traitement des urines
goutte dhmatie 50% dilue au 1/55e en
Centrifuger 5 ml durines 2.000 tours
eau physiologique.
/ minute.
Incuber 1 heure 37 puis 24 heures
Laver le culot de centrifugation laide
plus de 4C
de 2 ml deau physiologique tamponne.

Rpter deux fois lopration.
4. Rsultats
Des titres infrieurs 1/160 sont
2. Prparation des talements
considrs comme ngatifs.
Prvoir 3 lames porte-objet par urine.
Des titres suprieurs 1/2560 sont
Tracer au centre de chaque lame un cercle
considrs comme significatifs de
denviron 1 cm de diamtre laide dun
pylonphrite.
diamant.
Les titres intermdiaires sont
Etaler le culot de centrifugation dans le
rencontrs dans les infections basses ou en
cercle de chaque lame laide dune ose.
priode de surveillance du traitement.

Scher la temprature du laboratoire, puis
II. IMMUNOFLUORESCENCE DE LA
fixer la chaleur douce (sur la veilleuse
BACTERIURIE
dun bec Bunsen).

Les lames peuvent tre gardes plus
Elle prsente lnorme avantage sur le
4C pendant une semaine.
srodiagnostic de fournir des

renseignements quivalents en utilisant la
3. Recherche des IG fixes sur le
seul urine.
corps bactrien
Cette raction nest utile que sur les
Recouvrir une lame de chaque srie
urines denfants dont la numration donne
laide du srum fluorescent antiglobulines
un rsultat suprieur ou gal 105 bactries
humaines dilus au (dilution valable
/ ml ; les urines sont stockes au
avec le ractif welcome).
rfrigrateur et utilises aprs la lecture de
Incuber les lames en chambres humide
la numration et ltude du sdiment.
(sous cristallisoir avec coton humide) la

temprature du laboratoire pendant 30
minutes.
19
Les lampes gouttes sont ensuite
Contrles
immerges trois fois 5 minutes dans une
Par saturation des sites bactriens
cuve coloration contenant de leau
spcifiques par un srum anti-lg non
physiologique tamponns. Elles sont alors
marqu. Lapplication ultrieure de
essuyes soigneusement, except la zone
lantisrum marqu ne doit plus provoquer
de ltalement.
la fluorescence.
Dposer lintrieur de chaque cercle une
En pratiquant la mme raction
goutte de glycrine tamponne. Recouvrir
sur un talement effectu partir de la
dune lamelle. Les lames sont examines
culture ; on ne doit pas observer de
au microscopes fluorescence x 40.Un
fluorescence (les bactries se sont
rsultat positif se concrtise par
multiplie et nont plus dIG fixes).
visualisation de la bactrie qui prsentera

un contour vert intense bien limit et un
centre noir.
20

Examen Cytobacteriologique Des Urines 2

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Micro

EXAMEN CYTOBACTERIOLOGIQUE DES URINES

I. Mcanisme et agents des infections

(nphrite). Ce mcanisme explique la

frquence de ces affections chez la femme

enceinte, la grossesse ralisant, par

classiquement sous la forme dune douleur

compression, la fois une stase intestinale

lombaire pouvant irradier vers la vessie et

la cuisse (cas des infections hautes) ou par

B. Infections dorigine exogne (dites

duriner (cas des infections basses). Parfois

linfection est inapparente, elle est rvle

lors dun examen systmatique (par

provenant de lenvironnement sont

exemple la suite dune dcouverte

prsentes au niveau de l' urtre antrieur et

du mat urtral. Dans les conditions

normales leur progression ascendante est

classer en deux groupes.

contrarie par le courant urinaire qui les

Infections dorigine endogne (dites

dpart. Cependant, dans certaines

circonstances (toute affection entranant un

stase urinaire, sondage) cet obstacle est

bactries de la flore intestinale passent

franchi, les bactries atteignent la vessie et

dans la circulation et parviennent au rein.

Dans le cas o prexiste une difficult

A partir de la vessie, la contamination du

dvacuation des urines, ces bactries

parenchyme rnal est possible ds que le

pourront se dvelopper et former des

franchissement du disponible du dispositif

foyers infectieux au niveau de la vessie

antireflux urtrovsical est ralis.

* le risque de multiplication des

Ltude de ces deux mcanismes explique

contaminants (lurine est un bon milieu de

intestinale dans linfection urinaire.

culture, le dveloppement des germes

II. Les critres cytologiques de

laboratoire pour rendre ininterprtable la

linfection des germes urinaires

germes si les urines contiennent des

des germes urinaires

bactricides. Les aminosides, par exemple,

Une urine pathologique est

lurine aprs larrt de leur administration,

souille au cours du prlvement en

larrt de toute antibiothrapie quarante-

contient peu au moment de son recueil.

huit heures avant le prlvement ne

Les rsultats du dnombrement des

constitue donc pas une certitude quant

germes urinaires constituent donc un des

labsence de substances antibactriennes

critres les plus fiables de linfection

lorsque les conditions qui suivent sont

- Dsinfection soigne du mat urinaire

Des dilutions de lurine dans leau

dun prlvement au cours dun miction

physiologique 9% sont effectues dans la

spontane) afin de limiter le nombre des