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UNIVERSIDAD DE CHILE
FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS

Departamento de Fomento de la Produccin Animal

Unidad de Reproduccin

LA FECUNDACIN EN MAMFEROS

Mnica De los Reyes (DVM; MSc)

Al momento de la eyaculacin, los espermatozoides viajan desde la cola de los

epiddimos, conductos deferentes, hacia la uretra por medio de contracciones
musculares reflejas de la pared de estos conductos, donde se mezclan con el plasma
seminal que es producido por las glndulas sexuales accesorias, las cuales variarn
de acuerdo a la especie, constituyendo el semen.

El semen durante la eyaculacin es depositado en el genital de la hembra. En

rumiantes, felinos, caninos y humanos, la eyaculacin es vaginal, mientras que en
otras especies como porcinos y equinos, es uterina. Sin embargo, independiente del
sitio de depsito del semen, la gran mayora de los espermatozoides son eliminados
del genital de la hembra inmediatamente o posteriormente. En el tracto reproductivo
de la hembra, los espermatozoides deben atravesar ciertas barreras para alcanzar el
sitio de fecundacin, que en los mamferos es la ampolla del oviducto.

Existen barreras de tipo anatmico como son el cervix, especialmente para los
espermatozoides de aquellos animales de eyaculacin intravaginal y la unin terotubarica, especialmente para aquellos que depositan el semen a nivel uterino. Por otra
parte, est la accin fagocitaria de leucocitos en el genital femenino.

El mucus cervical tambin cumple un rol importante en el transporte espermtico,

dentro del tracto reproductivo de la hembra. Este mucus es una mezcla de sustancias
producidas por las clulas del epitelio endocervical y el transudado de protenas
plasmticas, describindose en este, dos fases: fase acuosa y fase gel. La primera se
caracteriza por contener un 98% de agua, adems de iones inorgnicos, protenas
solubles, enzimas, hidratos de carbono y aminocidos; la segunda, posee
principalmente mucina cervical, aminocidos hidroxilados, galactosa y glucosaminas.

El mucus sufre cambios fsico-qumicos dependiendo del estado endocrino de la

hembra. As, durante la fase ltea, debido al predominio progestacionlal, el mucus es
una barrera importante para el paso de los espermatozoides ya que cambia su
orientacin molecular impidiendo el avance espermtico a travs del mucus. Durante
la etapa periovular, por accin de los estrgenos, se estimula una mayor produccin
de mucus, hacindose ste ms filante y se dispone en forma longitudinal, asegurndo
as que los espermatozoides se muevan unidireccionalmente, proporcionando adems,
el medio adecuado para el movimiento progresivo espermtico y la actividad
metablica, cumpliendo tambin una actividad antimicrobiana a travs de los
leucocitos.

Estudios realizado en humanos y bovinos, especies caracterizadas por tener

abundante secrecin de mucus durante la fase preovular, muestran que los
espermatozoides que han penetrado el mucus cervical, no slo presentan una mayor
motilidad espermtica, sino que tambin aumenta la proporcin de espermatozoides
morfolgicamente normales, en comparacin con aquellos que no lo han atravesado.
Los espermatozoides que entran al mucus nadan a travs de las microestructuras
longitudinales de las glicoprotenas del mucus

hasta alcanzar la superficie del

epitelio. De esta forma, el tracto genital de la hembra selecciona el nmero de

espermatozoides que llega al sitio de fecundacin. En los mtodos de fecundacin in
vitro, es necesario contar con tecnologas que permita seleccionar a los
espermatozoides previo a la interaccin gamtica, como son los mtodos de Percoll o
Swim-up.

En las especies que presentan eyaculacin intravaginal, muchos espermatozoides se

eliminarn del tracto reproductivo de la hembra, luego del coito.

De los

espermatozoides que logran entrar al cervix, algunos migran inmediatamente al sitio

de fecundacin, transporte rpido; es probable que este transporte ocurra en parte por
la relajacin momentnea del cervix y las contracciones vaginales que se producen
por el estmulo coital; pero la mayora de los espermatozoides que logra entrar, se
depositan en los pliegues cervicales, denominadas criptas cervicales, de donde son
liberados cada ciertas horas, dependiendo de la especie, transporte lento.

La fase de transporte rpido se caracteriza por contracciones del tracto genital de la

hembra, propulsando a los espermatozoides al oviducto. Durante esta fase se han
encontrado espermatozoides en el sitio de fecundacin entre 5 a 15 minutos despus
del coito. Existen evidencias cientficas en diferentes especies, que han demostrado
que la mayor parte de estos espermatozoides son de baja viabilidad. Durante la fase
de transporte lento en cambio, los espermatozoides se mueven del cervix hacia los
oviductos a la regin del Istmo, lo que puede tomar horas, ya que en el tero los
espermatozoides involucrados en el transporte lento, se unen a las clulas epiteliales
de la pared uterina, donde van avanzando hasta un poco ms abajo del istmo, cerca
de la unin tero-tubaria. Este lugar es otro reservorio
importante

en

aquellas

especies

que

presentan

espermtico, bastante

eyaculacin

intrauterina

principalmente, tambin se ha confirmado este reservorio en los rumiantes. La ltima

fase del transporte espermtico, es en el oviducto. Los cilios del epitelio oviductal
ayudan tambin en el transporte espermtico, como asimismo las contracciones de la
musculatura del oviducto.

Se sabe actualmente, que los espermatozoides fecundantes esperan en la parte baja de

la regin istmica del oviducto, la ovulacin. Por lo tanto, los espermatozoides
ascienden hacia la ampolla y los ovocitos descienden a la ampolla en forma
sincronizada. En este segmento bajo el istmo, donde los espermatozoides esperan a

los ovocitos, existen receptores adrenrgicos e irrigacin directa de la sangre, lo que

lo hace ms sensible a pequeos cambios en los niveles hormonales.

ovario
oviducto
ampolla
istmo
tero
vagina

cervix

Figura 1: Transporte espermtico desde la vagina al sitio de fecundacin (ampolla oviductal)

Capacitacin Espermtica

Austin (1951) y Chang (1951), observaron que la fecundacin no ocurra hasta varias
horas despus que los espermatozoides eran depositados dentro del tero de ratones y
conejas; este perodo de tiempo que deban permanecer los espermatozoides en el
tracto genital, previo a la fecundacin, se denomin genricamente capacitacin
espermtica, ya que en ese lapso de tiempo

algo debera ocurrirles a los

espermatozoides para hacerlos capaces de fecundar exitosamente a los ovocitos. Este

tiempo de capacitacin se observ posteriormente en otras especies animales,
reconocindose actualmente como un fenmeno generalizado en las diversas especies
estudiadas.

Muchos cambios ocurren en los espermatozoides durante la capacitacin, que son aun
objeto de innumerables estudios cientficos, sin embargo, existen dos fenmenos que
se han logrado identificar ms claramente durante este proceso, a pesar que los
mecanismos moleculares no estn aun completamente entendidos: cambios a nivel
del flagelo que hace que los espermatozoides se muevan ms activamente,
Hiperactivacin y cambios a nivel de la membrana plasmtica de la zona de la
cabeza, donde est el acrosoma, Reaccin Acrosmica (Fig. 2).

CAPACITACIO+ ESPERMTICA

Reaccin Acrosmica

Hiperactivacin

Interaccin con la Zona Pelcida

Fusin membranas gamtica

Figura 2. Esquema de las posibles relaciones entre los eventos de la capacitacin que llevan
a la fusin de las membranas gamticas

Hiperactivacin

La mayora de los espermatozoides de mamferos se aglutinan uniendo sus cabezas

cuando son mezclados con soluciones fisiolgicas como los medios de capacitacin
in vitro, o secreciones corporales, esta aglutinacin no es de carcter inmunolgico,
sino que se debe a las cargas negativas de superficie, ya que parte de este proceso de
capacitacin involucra la remocin

de los componentes de superficie del

espermatozoide, adquiridos principalmente durante su trnsito por el epiddimo y en

su encuentro con el plasma seminal. Luego de permanecer aglutinados por un

determinado tiempo, que vara entre las especies, son liberados los espermatozoides,
observndose en ellos un movimiento muy activo.

El trmino de hiperactivacin se ha utilizado para describir el cambio en el patrn de

motilidad espermtica que ocurre en la capacitacin y diferenciarla de aquella
activacin en el movimiento durante la maduracin en el epiddimo. El movimiento
durante la capacitacin, se hace muy vigoroso, con un fuerte batir del flagelo (Fig.
3). Lo importante de este movimiento, es aumentar la fuerza generada por la cola al
moverse y no un patrn de movimiento per se. La frecuencia del batir del flagelo
vara bastante entre las especies, por lo que es posible esperar que el patrn de
hiperactivacin tambin puede variar en las distintas especies animales. El patrn de
hiperactivacin se ve infludo en gran medida por la viscosidad y microestructuras
del medio.

Figura 3: Patrones de hiperactivacin espermtica

En algunas especies, como los conejos, no se han encontrado espermatozoides

hiperactivados en la regin istmica, slo a nivel de la ampolla. En otras especies
como el hamster y ratn los espermatozoides comienzan a adquirir el movimiento

hiperactivado poco despus de dejar el istmo; en estas mismas especies si son

depositados espermatozoides hiperactivados en el tero de hembras en estro, stos no
entran al oviducto. Al parecer el fenmeno de hiperactivacin espermtica en las
diversas especies, ocurrira cerca o en el sitio de fecundacin.

La evidencia cientfica indica que existe una estrecha relacin entre la capacidad de
los espermatozoides de hiperactivarse y la capacidad de stos para fecundar. El
componente no direccional

de la motilidad hiperactivada pude ayudar a los

esperamatozoides a despegarse de las clulas epitelales del oviducto, favorecer el

desplazamiento a travs de los fluidos viscosos oviductales, como tambin
particularmente, a cruzar las cubiertas ovocitarias, especialmente la matriz
extracelular que une a las clulas del cmulo oosforo y alcanzar as, la zona pelcida.

Los procesos de generacin e inicio de la motilidad espermtica no estn aun claros,

particularmente los mecanismos que la gatillan; por lo que los mecanismos que
determinan inicialmente que se produzca la hiperactivacin

son aun menos

entendidos. Lo que se sabe es que se necesita calcio extracelular para iniciar y

mantener la hiperactivacin y la cola espermtica tiene tanto protena kinasa como
proteina G. La protena

G activara los canales de calcio, permitiendo el influjo

transitorio de calcio, el aumento del calcio intracelular estimulara la adenilciclasa

para iniciar la cascada cAMP-protena kinasa. La protean G, sin embargo, podra
estar estimulando otros canales ionicos.

Puede existir una hiperactivacin falsa, que ocurre en los espermatozoides

moribundos. Al empezar a morir los espermatozoides, van perdiendo la
impermeabilidad de la membrana plasmtica, lo que hace que el calcio extracelular
entre a la clula y se gatille la hiperactivacin, lo que se ha observado en cultivos in
vitro (Bedford et al., 1990).

Reaccin Acrosmica

La reaccin del acrosoma es un pre requisito para la penetracin de la zona pelcida y

para la fusin del espermatozoide con la membrana plasmtica del

ovocito,

contituyendo un mecanismo de control para la fecundacin.

La reaccin acrosmica se puede considerar como una exocitosis en que las

membranas plasmtica y acrosmica externa se fusionan y fenestran progresivamente
entre s, permitiendo que el espermatozoide establezca una unin secundaria con la
zona pelcida, iniciando as su paso a travs de ella para ms tarde fusionarse con la
membrana plasmtica del ovocito (Fig.4).

Figura 4: Estructuras espermticas antes y despus de la reaccin del acrosoma. A:

espermatozoide intacto; B: espermatozoide durante la fusin de la membrana plasmtica y
acrosomal externa, permitiendo la exposicin del contenido acrosomal; C y D:
espermatozoide luego de la reaccin acrosmica

Las evidencias indican que para que estos cambios ocurran, es necesario, al igual que
para la hiperactivacin, el calcio extracelular, al menos parte del que es internalizado.
No obstante, aun no estn completamente claros los mecanismos que controlan el
flujo de calcio, sugirindose que este podra producirse a travs de los canales de
calcio operados por receptores, o como resultado de estmulos extracelulares y

mecanismos de regulacin inica, donde estara involucrada la protena G. Se sabe

que el aumento de este ion, intracelularmente, provoca variadas respuestas, entre
ellas la estimulacin de la adenilato ciclasa, lo que a su vez induce un aumento del
AMPc y activacin de fosfolipasas asociadas a la membrana, con la consiguiente
perturbacin de la membrana plasmtica .

La reaccin acrosmica puede ocurrir en forma espontnea e independiente de la

presencia del ovocito; sin embargo, se ha probado que las envolturas ovocitarias
cumpliran un rol importante en este proceso. Evidencias experimentales estaran
demostrando que la reaccin del acrosoma es un proceso mediado por receptores y
regulado por ligandos derivados del ovocito o de sus cubiertas ms cercanas, esto
probablemente gatillara el influjo de calcio a travs de los canales operados por
receptores especficos. En el ratn se ha postulado que el componente proteico del
agonista espermtico de la zona pelcida, ZP3, estara asociado

a la actividad

inductora de la reaccin acrosmica.

La reaccin acrosmica permite la liberacin del contenido acrosomal, que incluye a

la serina proeteasa acrosina. La acrosina ha sido demostrada en espermatozoides de
diferentes especies mamferas. Esta enzima se almacena en el compartimento
acrosomal en su forma zimgena, proacrosina; la proacrosina autocataliza su propia
conversin a la forma activa, acrosina durante la reaccin acrosmica. Se ha
demostrado que Proacrosina/acrosina estaran involucradas el la dispersin de la
matriz acrosomal y en la unin y penetracin a travs de la zona pelcida.

Despus de la induccin de la reaccin acrosmica, la matriz acrosomal queda

expuesta, perdindose la primera unin entre el espermatozoide y la zona pelcida.
Sin embargo, el espermatozoide penetrante establece un segundo tipo de interaccin,
llamada unin secundaria. Esta segunda unin se mantendra durante la penetracin
espermtica a travs de la zona pelcida; otra protena de la zona pelcida, la ZP2,
sera responsable de esta segunda unin. Por parte del espermatozoide, se ha

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postulado

que la protena responsable de la segunda unin, sera el sistema

proacrosina/acrosina.

La reaccin acrosmica permite adems, cambios en la composicin de la membrana

plasmtica del espermatozoide, a nivel de la regin posterior de la cabeza, cerca del
segmento ecuatorial. Estos cambios son esenciales para que esta regin se pueda
fusionar ms tarde con la membrana plasmtica del ovocito, despus que el
espermatozoide haya atravesado la zona pelcida.

Fusin de los gametos

Una vez que el espermatozoide ha atravesado la zona pelcida, ste cruza el espacio
perivitelino rpidamente. La cabeza espermtica se une a la membrana plasmtica del
ovocito, siendo la membrana plasmtica de la regin ecuatorial del espermatozoide la
que se fusiona con el ovocito. La regin posterior de la cabeza espermtica y la cola
son incorporadas subsecuentemente al ovocito a travs de la fusin de las membranas
de ambos gametos.

La membrana plasmtica del ovocito (oolema), est cubierta por numerosas

microvellosidades, excepto en el rea que est sobre el huso meitico, donde se
encuentra la placa metafsica de la segunda divisin meitica, en esta zona
justamente, no ocurre la fusin gamtica. Al parecer, esta zona libre de vellosidades,
estara carente de receptores espermticos, por lo que se ha sugerido, que el
espermatozoide no se fusione en esta rea por la falta de receptores, ms que por estar
desprovista de vellosidades. No obstante, este hecho evita que el espermatozoide sea
eliminado del ovocito, junto con el segundo corpsculo polar al reiniciarse la meiosis.

Activacin del ovocito

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El contacto del espermatozoide fecundante con la membrana plasmtica del ovocito,

inicia una serie de cambios en el huevo. Durante la activacin del ovocito, un evento
crucial es el bloqueo a la poliespermia, vale decir, que ms de un espermatozoide
pueda penetrar la zona pelcida del huevo y llegar a fusionarse con la membrana
plasmtica. El bloqueo a la polispermia, puede ocurrir en los mamferos a nivel de la
zona pelcida, como se ha visto en bovinos, ovinos y cerdos, o a nivel de la
membrana plasmtica del ovocito como ocurre en los conejos.

El bloqueo a la poliespermia se debe a la fusin de los granulos corticales del ovocito

con la membrana plasmtica de ste, este fenmeno de fusin permite que el
contenido de los grnulos se libere al espacio perivitelino, lo que se conoce como
Reaccin de Zona. La zona pelcida se altera despus de la exocitosis de los
granulos corticales, probablemente por accin enzimtica; de esta forma, los
espermatozoides no son capaces de entrar o continuar atravesando la zona.

Otro efecto importante durante la activacin del ovocito, es el reinicio de la meiosis,

lo que conduce a la formacin de los proncleos. La envoltura nuclear del
espermatozoide se desintegra debido a factores intracitoplasmaticos del ovocito y la
cromatina espermtica se decondensa, sincrnicamente con la cromatina del ovocito.
La cromatina espermtica se condensa nuevamente durante su transformacin a
proncleo masculino, similar a lo que ocurre en la formacin del proncleo femenino
(Fig. 5).
La formacin de los proncleos implica la culminacin del complejo fenmeno de la
fecundacin.

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Figura 5: Cigoto de mamfero (cerdo), obtenido por fecundacin in vitro.

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