Citometra de Flujo

Lic. Silvana Munayco Coronado

Definicin

La citometra de flujo (CMF) es, bsicamente, un mtodo

analtico que permite la medida de emisin de fluorescencia y
dispersin de luz, inducidas por la iluminacin apropiada de
clulas o partculas microscpicas, a medida que desfilan, de
una en una y arrastradas por un flujo portador, frente a un
sistema de deteccin.

Fundamento
la CMF desarrolla sus aplicaciones a travs de un soporte fsico:
el citmetro de flujo.
El principio en el que se basa esta tecnologa es simple: hacer
pasar clulas u otras partculas en suspensin, alineadas y de
una en una por delante de un haz luminoso.
La interaccin de las clulas o partculas con el rayo luminoso
genera seales que se llevan a los detectores adecuados.
Las seales luminosas detectadas se transforman en impulsos
elctricos, que se amplifican y se convierten en seales
digitales que se procesan en un ordenador.

Anlisis celular. Fundamento de los

sistemas de deteccin
1. Los derivados de la
dispersin de la luz

2. Los relacionados con la emisin de luz

por fluorocromos presentes en la partcula
al ser excitados por la fuente de luz.

Dispersin de la luz
La dispersin de la luz es un proceso fsico en el que una clula interacciona con

la luz incidente y como consecuencia de esta interaccin cambia la direccin de

la luz, no la longitud de onda.
Las caractersticas celulares que contribuyen a la dispersin de la luz son el
tamao celular, la membrana celular, el ncleo y el material granular del
interior de la clula.

La luz dispersada hacia delante, en ngulos cercanos a 0 (forward

scatter, FSC), es una medida del tamao celular.
La luz dispersada en ngulo recto (side scatter, SSC) depende de la
estructura interna de la clula, la granularidad, y no del tamao.

Fluorescencia
Los compuestos fluorescentes absorben energa luminosa de

una longitud de onda caracterstica para cada compuesto.

Esta absorcin hace que suba un electrn a un nivel
energtico superior. El electrn excitado cae rpidamente al
estado normal, desprendiendo energa. Esta transicin
radiante se denomina fluorescencia.

Fluorocromos

7. Sistema informtico
1. Sistema de inyeccin
de la muestra
2. Cmara de flujo

6. Amplificador

3. Fuente de luz

Componentes de un citmetro de flujo

Anticuerpos Monoclonales

Fuentes biolgicas y medio

Mdula sea :- EDTA K2

Sangre perifrica o total - EDTA K2

Lquidos corporales (derrame,lavados)-Heparina
Tejidos slidos (piel, ganglios linfticos, otros)- Suero salino

ANALISIS CELULAR

CDs
Cmulo de diferenciacin (Cluster of differentiation en ingls)
(CD) son molculas marcadoras en la superficie celular, que
reconocen ciertos anticuerpos, usadas para la identificacin del
tipo de clula, estadio de diferenciacin celular y actividad de la
misma.
Son un sistema de antgenos de superficie celular de los
leucocitos humanos, que se caracterizan mediante anticuerpos
monoclonales, permitiendo la categorizacin de los leucocitos y
otras clulas hematopoyticas (de la sangre). Tambin se
conocen como cmulo de determinantes o de designaciones.

STEM CELL HEMATOPOYETICA

LINFOCITO B

LINFOCITO T NAIVE

LINFOCITO Th1

LINFOCITO Th 2

NEUTROFILO

EOSINOFILO

BASOFILO

HEMATIE

MADURACION CELULAR

MADURACION CELULAR MIELOIDE

CD45
CD33
CD68
CD117

CD33
CD34
CD38
CD41
CD61

CD33
CD34
CD38

MASTOCITO
BFU-Meg

CD45
CD68
CD21
CD35

CFU-Meg

MULTIPOTENT
STEM-CELL

MEGACARIOCITO

CD33
CD34
CD36
CD38
CD71
CD117

CD33
CD34
CD38
CD117

CD33
CD34
CD38

DENDRITICA
BFU-E

CFU-E

CD41
CD42b
CD61
CD62P (activated)

CD41
CD42b
CD61

CD36
CD38
CD71
CD117
Glico A
ERITROBLASTO

PLAQUETAS

CD36
CD71
Glico A
NORMOBLASTO

CD36
CD71
Glico A

Glico A

RETICULOCITO ERITROCITO

CD34

PLURIPOTENT
HEMATOPOIETIC
STEM-CELL

CD11b
CD13
CD15
CD33
CD34
CD38
CD64
HLA-DR

CD13
CD33
CD34
CD38
CD64
HLA-DR
CD13
CD33
CD34
CD38
CFU-GM HLA-DR

CFU-M

CD13
CD33
CD34
CD38
HLA-DR

CFU-G
CD34
CD38
HLA-DR
CD10
LYMPHOID STEM CELL

PROMONOCITO

MONOBLASTO

CD13
CD33
CD34
CD38
HLA-DR

MIELOBLASTO

CD11b
CD13
CD15
CD33
CD64
CD38
HLA-DR

PROMIELOCITO

LYMPHOID DIFFERENTIATION

CD11b
CD13
CD14
CD15
CD33
CD64
HLA-DR

CD11b
CD13
CD15
CD33
CD64
HLA-DR

CD11b
CD13
CD15
CD33

MIELOCITO

MONOCITO

CD11b
CD13
CD15
CD16
CD33

METAMIELOCITO

CD10
CD11b
CD13
CD15
CD16
CD33
GRANULOCITO
MADURO

MADURACION CELULAR MIELOIDE

MADURACION CELULAR LINFOIDE B

MADURACION CELULAR LINFOIDE T

NEUTROFILOS

MONOCITOS
C, ROJAS
LINFOCITOS

MEDULA OSE NORMAL

NEUTROFILOS

BLASTOS

MONOCITOS

C, ROJAS
LINFOCITOS