Cytogenetika Osetrovatele 2016 Rezim Kompatibility

Zklady klinick
cytogenetiky chromosomy
Mgr. Hankov
Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno
SHRNUT PEDNKY
chromosomy, karyotyp
metody ppravy chromosomovch prepart, hodnocen
chromosom metody klasick cytogenetiky
vrozen chromosomov aberace (stanoven karyotypu)
metody molekulrn cytogenetiky
onkocytogenetika zskan chromosomov aberace
(stanoven karyotypu malignch klon)
CHROMOSOMY, KARYOTYP
SCHEMA LIDSK BUKY
cytoplasma s organelami
bunn jdro
(DNA + proteiny, RNA)
V bunnm jde se nachzej molekuly DNA. V interfzi bunnho

cyklu jsou molekuly rozvolnn, bhem mitzy dochz k jejich postupn
spiralizaci za vzniku chromosom.
DEFINICE
KLINICK CYTOGENETIKY
klinick cytogenetika
zabv se analzou chromosom
- potem
- morfologi
- vztahem mezi nlezy chromosomovch
zmn a fenotypovmi projevy
DNA rozptlen v bunnm jde

v interfzi bunnho cyklu
chromosomy = spiralizovan molekuly DNA

bhem procesu bunnho dlen - mitzy
JADERN MATERIL
pojmy chromatin a chromosomy - tkaj se tho jadernho materilu
chromatin komplex DNA s chromosomovmi proteiny
- pojem lze pout pro jadern materil v interfzi
- i spiralizovan chromosomy jsou tvoeny chromatinem
jdro v interfzi
mitza
chromosom chromatin spiralizovan v mitze

(mitza - proces dlen buky, pi kterm dochz
k rozdlen genetickho materilu mezi 2 dceinn
buky)
DLEIT POJMY
MITZA proces dlen jdra a nsledn buky

- tak soubor chromosom pochzejc z jedn buky, mitzy
se nachzej na podlonm mikroskopickm sklku
mitza
CHROMATIN A CHROMOSOMY
BHEM BUNNHO CYKLU
kondenzace chromatinu, vznik chromosom
bhem bunnho cyklu
se chromatin nachz
v rznch fzch
spiralizace
(v interfzi nzk stupe
spiralizace, bhem mitzy
postupn kondenzace,
maximln v metafzi
mitzy)
CHROMOSOM
V METAFZI MITZY
vlknit struktura
chromosom s G-pruhy
(zakrcen, primrn
konstrikce)
chromatidy
sestersk chromatidy identick kopie molekuly DNA
chromatidy
chromatida - 1 kontinuln molekula dvouvlknov DNA ve vazb s chromosomovmi proteiny
CHROMOSOMY V PRAXI
tdn chromosom podle
umstn centromery
metacentrick chromosomy
centromera tm nebo pln uprosted,
tedy krtk a dlouh ramnka jsou
(tm) stejn dlouh
submetacentrick chromosomy
centromera mimo sted chromosomu, p a
q ramnka jsou jasn dlkov odliena
CHROMOSOMY V PRAXI
tdn chromosom podle
umstn centromery
akrocentrick chromosomy
centromera je umstna velmi blzko
jednomu konci;
od krtkch ramnek jsou odkrceny
satelity (mal vrazn sti chromatinu);
msto odkrcen = sekundrn konstrikce
(tenk stopky);
(sekundrn konstrikce obsahuje kopie
gen kdujcch rRNA = organiztor
jadrka)
CHROMOSOMY V PRAXI
tdn chromosom do skupin
podle velikosti a pozice centromery
normln musk karyotyp 46, XY
CHROMOSOMY V PRAXI
karyotyp
Karyotypem nazvme utdn a zhodnocen soubor chromosom v

bukch vyetovan tkn pacienta. Hodnocen spov v analze potu
a struktury chromosom standardn v 10 bukch vyetovan tkn.
Vsledn karyotyp je vyjden zpisem, v nm oznaujeme poet
chromosom, pohlavn chromosomy a ppadn aberace (patologick
zmny).
lidsk karyotyp se skld ze 46 chromosom, z toho 22 pr
autosom (nepohlavnch chromosom chromosomov pry 1 22)
a 2 gonosom (pohlavnch chromosom XX nebo XY)
chromosomov pr je tvoen homolognmi chromosomy, z nich jeden
je zddn od otce a druh od matky, neprov chromosomy jsou
nehomologn (somatick diploidn buky)
ZPIS KARYOTYPU
46,XX - normln ensk karyotyp

46,XY - normln musk karyotyp
pohlavn chromosomy
poet chromosom
CHROMOSOMY V PRAXI
normln karyotyp
Karyogram obrzek karyotypu 1 buky, sestaven z relnch chromosom
normln musk karyotyp 46,XY
normln ensk karyotyp 46,XX
HISTORIE KLINICK CYTOGENETIKY

klasick metody analzy
vznik modern lidsk cytogenetiky
- datuje se od roku 1956, kdy byl stanoven poet lidskch
chromosom a byly vyvinuty efektivn metodiky
analzy chromosom
klasick konvenn metoda barven chromosom
(chromosomy obarveny po cel dlce lze tdit
chromosomy podle velikosti a polohy centromery)
pruhovac metody (1968-70)

(prouky na chromosomech, kter umouj
individuln rozlien jednotlivch chromosom
a chromosomovch zmn)
METODY PPRAVY
CHROMOSOMOVCH PREPART,
HODNOCEN CHROMOSOM
- metody klasick cytogenetiky
Metody klasick cytogenetiky dokou vyetit genetick materil pouze ve

spiralizovan podob chromosomy.
METODY KLASICK CYTOGENETIKY

odbr materilu
kultivace zskn dostatenho mnostv dlcch se bunk,
v nich dochz ke spiralizaci chromosom
zpracovn suspenze bunk

nakapn suspenze na mikroskopick sklka
pruhovn / barven chromosom na sklcch
- metody 1. volby v indikovanch ppadech
- relativn levn metody (ve srovnn s metodami molekulrn cytogenetiky)
odbr materilu

odbr materilu
pro analzu vrozench
chromosomovch aberac
plodov voda
(obsahuje kon buky plodu)
perifern krev
nebo krev plodu
(obsahuje T-lymfocyty)
choriov klky

odbr materilu
ke potracench
plod
pro analzu vrozench

chromosomovch aberac
kostn de
solidn ndor
vhodn pro analzu zskanch chromosomovch

aberac u onkologickch pacient

odbr materilu
odbr materilu pro ely cytogenetickho
vyeten, vdy za sterilnch podmnek!!!
do heparinu (nesrliv krev) perifern krev, krev plodu
do heparinu a transportnho mdia kostn de
do transportnho mdia solidn tumory, ke, choriov
klky
bez pdavku mdia a dalch ltek plodov voda
kultivace

nasazen bunk do kultivanho mdia
steriln prce v laminrnm boxu
!!!!!!!STERILN PROSTED!!!!!!!
nasazen plodov vody

(do tekutho mdia)
nasazen perifern krve
(do tekutho mdia)

kultivace v termostatu pi 37C
- dlka kultivace se li v zvislosti na typu materilu a vyeten (72 hodin perifern krev,
piblin 10 dn plodov voda, choriov klky)
- vznam kultivace v bukch probh bunn cyklus, std se interfze s mitzou,
bhem mitzy se spiralizuj molekuly DNA do podoby chromosom

aplikace kolchicinu po kultivaci
aplikace kolchicinu ukonen kultivace
(alkaloid z ocnu jesennho Colchicum autumnale)
- zastaven dlen bunk v metafzi mitzy
jadern materil zstane spiralizovn v podob
chromosom, kter jsou vhodn k analze
zpracovn suspenze bunk

zpracovn suspenze
hypotonizace
lza erytrocyt, zvten objemu T - lymfocyt, rozestoupen
chromosom v dsledku psoben hypotonickho roztoku
pdavek roztoku KCl

(perifern krev)
inkubace hypotonizan smsi v termostatu 37C

zpracovn suspenze
fixace zskn suspenze

- kyselina octov (1) : metanol (3)
- odvodnn bunk, zviditelnn struktury a zlepen barvitelnosti chromosom,
rozruen cytoplasmy bunk, rozputn neistot

zpracovn suspenze
rekapitulace krok
1- vzorek po kultivaci a centrifugaci
2 po hypotonizaci a centrifugaci
3 po fixaci a centrifugaci (pdavek fixativu 3x)
4 vsledn suspenze T - lymfocyt
nakapn suspenze
na mikroskopick sklka

nakapn suspenze na sklka
sklka zasychaj pi pokojov teplot ve vodorovn poloze
pruhovn chromosom
(konvenn barven chromosom)

G - pruhovn chromosom
1 - inkubace prepartu v roztoku enzymu trypsinu

(natrven chromosomovch protein proteolytickm
enzymem)
2 barven barvivem
Giemsa Romanowski - A

G-pruhovn chromosom
analza karyotypu
chromosomy s G pruhy stdav tmav a svtl prouky rzn tlouky

G pruhovn chromosomu . 1 vzor (idiogram) a reln chromosom

konvenn barven chromosom
chromosomy jsou obarven tmav, bez pnch pruh

barven v barvivu Giemsa Romanowski
(vynechme inkubaci v trypsinu)
hodnocen karyotypu
souboru chromosom v bukch

hodnocen
chromosomy hodnotme ve SVTELNM MIKROSKOPU pi zvten
piblin 1000x pracujeme se svtlem o vlnov dlce ve viditeln
sti spektra

hodnocen
ke tdn chromosom a sestaven karyotypu lze vyut potaovho
programu
svteln mikroskop
s CCD kamerou
napojen na pota

hodnocen
karyogram sestaven na potaovm programu Lucia

hodnocen
Poznmka na podlonm mikroskopickm sklku se krom mitz nachzej tak interfzn jdra bunk,
kter nen mon analyzovat metodami klasick cytogenetiky (G-pruhovn chromosom, konvenn
barven). Pochzej z bunk, kter se pi ukonovn kultivace ( pi pdavku kolchicinu) nachzely
v interfzi bunnho cyklu. Jejich ptomnost je ale dleit pi vyeten metodou FISH (pouvme
stejnm zpsobem pipraven mikroskopick sklko, pouze msto klasickho barven nebo pruhovn
nechme navzat fluorescenn znaenou sondu viz. kapitola metody molekulrn cytogenetiky. ).
Metoda FISH doke pracovat nejen s chromosomy, ale i s interfznmi jdry.
interfzn jdro
mitza
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
VSTUPN MATERILY K VYETEN

VROZENCH CHROMOSOMOVCH
ABERAC
postnatln materily: perifern krev, ke

prenatln materily: plodov voda, choriov klky,
krev plodu, ke potracench plod
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
vznamn se podlej na mnoha ppadech poruch reprodukce,

vrozench malformac, mentlnch retardac
cytogenetick poruchy jsou ptomny piblin u 0,6% iv
narozench dt
CHROMOSOMOV ABNORMALITY
(ABERACE)
vrozen chromosomov aberace (VCA)

(vyeten karyotypu) poetn
- strukturn
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
abnormality potu chromosom
-
polyploidie zmnoen potu chromosomovch sad

(1 sada (n) = 23 chromosom) pouze u potracench plod
(triploidie 3n= 69, tetraploidie 4n = 92)
triplodidn buka plodu
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
- aneuploidie nejastj a klinicky velmi vznamn typ
chromosomovch poruch
- abnormality potu chromosom v pru
(normln poet chromosom v pru = 2,
abnormln nejastji 3 nebo 1)
- tento stav je vdy spojen s poruchou fyzickho

nebo mentlnho vvoje
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
aneuploidie
trisomie
nejastj porucha
(ptomnost nadbytenho chromosomu v pru)
trisomie autosom - (trisomie celho chromosomu je jen vzcn

sluiteln se ivotem)
- Downv syndrom 47,XX,+21 (47,XY,+21)
- Edwardsv syndrom 47,XX,+18 (47,XY,+18)
- Patauv syndrom 47,XX,+13 (47,XY,+13)
aneuploidie gonosom - (fenotypov dsledky jsou mn zvan
ne u trisomie autosom)
- Klinefelterv syndrom 47,XXY (mu)
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
abnormality potu autosom
Downv, Edwardsv a Patauv syndrom
Edwardsv syndrom
47, XY, +18
Downv syndrom
47, XX, +21
Patauv syndrom
47, XY, +13
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
abnormality potu gonosom
Klinefelterv syndrom aneuploidie gonosom
Klinefelterv syndrom 47,XXY
Fenotyp mu
s nktermi
abnormlnmi
fenotypovmi
znaky,
neplodnost
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
aneuploidie
monosomie mn ast porucha
(chybn 1 chromosomu v pru)
- monosomie gonosomu X (Turnerv syndrom)
45,X (ena), ast vskyt
Fenotyp ena
s nktermi
abnormlnmi
fenotypovmi
znaky,
ve vtin ppad
neplodnost, vjimen
plodnost zachovna
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
strukturn pestavby
strukturn abnormality chromosom
mn ast ne aneuploidie
dochz k pestavbm a nsledn ke zmnm morfologie chromosom
pedpokladem je vznik zlom na chromosomech
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
strukturn pestavby
balancovan pestavby - v sad chromosom je zachovno
normln mnostv chromosomovho materilu (dn materil
nechyb ani nepebv)
- nosii maj vtinou normln fenotyp bez patologie (nejsou ptomny
poruchy fyzickho nebo mentlnho vvoje), v bukch je ptomen
veker chromosomov materil, i kdy v odlinm uspodn
nebalancovan pestavby st chromosomovho materilu

v karyotypu chyb (parciln, sten monosomie) a (nebo) st pebv
(parciln trisomie)
- vtinou dochz k fenotypovm abnormalitm
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
strukturn pestavby, balancovan
translokace
translokace
nejastj ze strukturnch aberac, pedpokladem

je vznik dvou zlom, kad na jednom chromosomu
nosii translokace maj normln fenotyp (bez patologie)
vmny segment mezi dvma chromosomy
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
strukturn pestavby
translokace
translokace u svch nosi vtinou nezpsobuj abnormln fenotyp,
ale jsou spjaty s vysokm rizikem vzniku nebalancovanch gamet
a s tm souvisejcch potrat nebo narozen potomk s nebalancovanm
karyotypem (parciln monosomie jednoho a parciln trisomie druhho
chromosomu)
rodie normln fenotyp,

matka nosika translokace
dt postien, po matce zddilo
1 derivovan chromosom pochzejc
z translokace
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
strukturn pestavby
translokace
rodi
dt
46,XX,t(16;21)(q22;q22.1)
46,XY,der(21)t(16;21)(q22;q22.1)mat
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
strukturn pestavby, balancovan
inverze
inverze
na jednom chromosomu vzniknou 2 zlomy, segment

mezi nimi se oto o 180 a opt se zalen
do chromosomu
inverze u svch nosi vtinou nezpsobuj

abnormln fenotyp, ale jsou spjaty s vysokm
rizikem vzniku nebalancovanch gamet
a narozen postiench potomk nebo
samovolnch potrat
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
strukturn pestavby, nebalancovan
delece
delece
vznik zlom a ztrta seku chromosomu, kter zpsobuje

vznik nebalancovanho karyotypu
(parciln monosomie)
Pacienti jsou ve vtin ppad postieni.
VROZEN CHROMOSOMOV
ABERACE (VCA)
strukturn pestavby
duplikace
duplikace nadbyten chromosomov segment, kter
zpsobuje vznik nebalancovanho karyotypu
(parciln trisomie)
- bvaj mn nebezpen ne delece, pacienti
maj ve vtin ppad patologick fenotyp
- vznik de novo
v dsledku
nerovnomrnho
crossing overu
duplikace segmentu
ZPIS KARYOTYPU
Zpisy patologickch karyotyp:
47,XX,+21
45,X
nadbyten autosom v jdrech bunk (poetn zmna)
47,XXY
46,XX,t(8;21)
chybjc nebo nadbyten gonosom v karyotypu (poetn zmna)

translokace v karyotypu (strukturn zmna)
46,XX,inv(1)
inverze v karyotypu (strukturn zmna)
46,XX,del(5)
delece v karyotypu (strukturn zmna)
46,XX,dup(6)
duplikace v karyotypu (strukturn zmna)
Klinick indikace
k postnatlnmu stanoven
karyotypu
problmy asnho rstu a vvoje
neprospvn, opodn vvoje, dysmorfick facies, mnohoetn
malformace, mal postava, obojetn genitl, mentln retardace
narozen mrtvho plodu a mrt novorozence
vskyt chromosomovch abnormalit je vy u ppad narozen
mrtvho plodu (tm 10%) ne u iv narozench dt (asi
0,6%), zven vskyt tak u dt, kter umraj v
novorozeneckm obdob (okolo 10%)
problmy s fertilitou
eny s amenoreou, infertiln pry, opakovan spontnn aborty,
partnei ped IVF
rodinn anamnza
znm nebo suspektn chromosomov abnormalita u pbuznch
drci gamet, dti k adopci
Klinick indikace
k prenatlnmu stanoven karyotypu
(karyotypu plodu)
invazivn metody vyeten karyotypu plodu jsou indikovny pi vym riziku
narozen dtte s VCA (vrozenou chromosomovou aberac)
- patologick hodnoty biochemickch marker z krevnho sra matky
(screening I., II. trimestru)
- VVV nalezen na UZ (screening I., II. trimestru)
- balancovan VCA u rodi nebo v rodin
- vskyt VCA v rodin
- pedchoz porod dtte s VCA
- po umlm oplodnn (IVF in vitro fertilizace)
- vk matky 35 let v roce porodu - pouze vy vk nen indikac k vyeten
- vk otce nad 40 let (riziko vyho vskytu monogennch chorob) - II - souet vku rodi nad 70 let - pouze vy vk nen indikac k vyeten
Stanoven karyotypu (analza

vrozench chromosomovch aberac)
- karyotyp m vznam analyzovat jen 1x za ivot (nemn se)

- chromosomov aberace zstanou v bukch po cel ivot pacienta
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY,
pklady vyuit v klinick
cytogenetice
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY
molekulrn cytogenetika aplikuje metody molekulrn biologie
na cytogenetick rovni, vizualizuje a lokalizuje genetick materil
v bukch
pracuje s metafznmi chromosomy nebo interfznmi jdry
potvrzuje a upesuje nlezy klasick cytogenetiky
(metody klasick cytogenetiky zkladn vyetovac metody,
metody molekulrn cytogenetiky speciln metody s vy rozliovac
schopnost, nkter detekuj pouze specifick seky genetickho materilu,
jin vyet cel genetick materil)
zatek rozvoje pelom 60.- 70. let 20. stolet
metodami klasick cytogenetiky (ve svtelnm mikroskopu) lze

na chromosomech rozliit strukturn zmny pouze o urit velikosti
(>5 10 Mb)
zmny men lze detekovat metodami s vy rozliovac schopnost
metodami molekulrn cytogenetiky
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY
molekulrn cytogenetickmi technikami nelze nahradit klasick

karyotypovn
(ped pouitm metod molekulrn cytogenetiky je teba vdt, co chceme
hledat pi klasickm karyotypovn vidme karyotyp jako celek za
relativn nzkou cenu, vysok cena molekulrn cytogenetickch
metod)
oblasti uplatnn FISH klinick cytogenetika (postnatln vyeten
u sterilnch pr, postiench dt a dosplch
s podezenm na genetickou pinu onemocnn,
genetick analza pro ely umlho oplodnn,
prenatln diagnostika karyotypu plodu)
- ndorov cytogenetika
- vzkum (evolun studie karyotypu, mapovn
genomu ...)
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY
FISH (fluorescenn in situ hybridizace)
fluorescenn in situ hybridizace (FISH) je metoda umoujc pesnou detekci

a lokalizaci specifickch sek DNA na chromosomech nebo v interfznm jde
pomoc vazby specifickch krtkch molekul DNA - sond, kter jsou znaeny
fluorescenn znakou.
fluorescenn znaka
sonda (krtk molekula DNA)
in situ na pvodnm mst (clov sek vizualizujeme na pvodnm mst na chromosomu

nebo v interfznm jde pozorujeme na podlonm sklku ve fluorescennm mikroskopu;
(pro srovnn - DNA analza izolujeme DNA, konkrtn seky namnome (amplifikace),
analyzujeme oddlen od ostatnho genetickho materilu - jen st genu))
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY
- FISH (fluorescenn in situ hybridizace)
vazba sondy (prby) k clovmu mstu na chromosomu nebo v interfznm jde.

signl pozorujeme ve FLUORESCENNM MIKROSKOPU,
barevn zen vypovd o mst vazby sondy
sonda ped naznaenm fluorescenn znakou

znaen sonda
denaturace rozvolnn vodkovch
mstk mezi etzci molekul DNA
(clov DNA a SONDY) vliv
teploty a chemickch ltek
hybridizace znovuspojen vlken
DNA vznikaj hybridn vlkna
clov DNA - sonda
vazba sondy na clovou DNA
v mst navzn sondy pozorujeme fluorescenn zen
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY FISH
(fluorescenn in situ hybridizace)
vyhodnocen a zpracovn signlu FISH - fluorescenn
mikroskop napojen na pota vizualizace a kvantifikace (signl
z v tmavm poli) modr barvika (DAPI) obarvuje vechny chromosomy,
erven, zelen signl = fluorescenn znaen sonda
trisomie chromosomu 21
potvrzen ptomnosti
translokace v karyotypu
FISH na metafznch chromosomech
(Downv syndrom)
FISH na interfznch jdrech
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY FISH
Fluorescenn mikroskop
detekce signl pi vyeten metodou FISH
potvrzen ptomnosti
translokace v karyotypu
speciln filtry
zdroj krtkovlnnho vysokoenergetickho

UV zen
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY FISH
Princip detekce signl ve fluorescennm mikroskopu:
-
na podlonm mikroskopickm sklku se nachzej mitzy a intefzn jdra bunk (viz postup ppravy
prepartu metodami klasick cytogenetiky). Pi vyeten metodou FISH dle postupujeme jinak ne jak je
uvedeno v kapitole pprava prepart metodami klasick cytogenetiky:
denaturujeme fluorescenn znaenou sondu i clovou DNA (mitzy a interfzn jdra na podlonm sklku)
pi zven teplot a pi pidn chemickch ltek (rozvolnn vodkovch mstk mezi vlkny dvouvlknov
DNA)
hybridizujeme sondu na clovou DNA (viz kapitola metody molekulrn cytogenetiky - obrzek)
mikroskopick sklko umstme do fluorescennho mikroskopu. Jeho soust je UV vbojka, zdroj UV
zen. Vysokoenergetickm UV zenm jsou excitovny molekuly fluorochrom (= fluorescenn znaky
na sondch na prepartu). Nsledn fluorochromy vyz (emituj) fluorescenn zen o vlnov dlce
ve viditeln sti spektra (proto signly vidme barevn zelen, erven, modr, jejich vlnov dlky
se li v rmci viditeln sti spektra). Fluorescenn zen pozorujeme ve fluorescennm mikroskopu jako
zc body na prepartu nebo jako barevn chromosomy (podle typu pouit sondy, nkter se vou jen
potvrzen ptomnosti
na centromery nebo na mal oblasti
genomu
tvo bodov signly, jin pokrvaj cel chromosomy)
translokace
v karyotypu
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY
MODIFIKACE FISH
sloitj metody, kter vypovdaj o zmnch v genetickm
materilu v celm karyotypu (nejen v jednotlivch
specifickch secch), kter jsou detekovateln na
cytogenetick rovni
pracuj se sms sond, kter je specificky pipraven pro danou
metodu
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY
MODIFIKACE FISH CGH
(komparativn genomov hybridizace)
metoda odhaluje nebalancovan genetick materil (chybn nadbytek DNA)
- systm fluorescenn mikroskop kamera pota, analyzan software m pomr
fluorescence pi vlnovch dlkch odpovdajcch ervenmu a zelenmu fluorochromu
celogenomov sonda
bez patologie
celogenomov sonda
z DNA pacienta
zelen oznaeny seky na chromosomech, kter jsou v karyotypu malignho klonu zmnoeny,
erven oznaeny chybjc seky chromosom (obrzky pevzaty z internetu)
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY array-CGH
vy
rozliovac schopnost odhalme men zmny
rozdl od CGH je jen v podkladu
CGH
Clov DNA je sklko s chromosomy na kter

hybridizuj fluorescenn znaen sondy.
Array-CGH
Clov DNA je sklko s naspotovanmi seky DNA

(ne cel chromosomy) na kter hybridizuj
fluorescenn znaen sondy.
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY
MODIFIKACE FISH
SKY (spektrln karyotypovn),
M-FISH (multicolor FISH)
objasnn sloitch pestavech (nap. translokace)
sms sond, kter barevn odli genetick materil jednotlivch chromosomovch pr
SKY mitza po hybridizaci

se sms sond znaench fluorochromy
SKY seazen chromosomy po prav obrazu
METODY MOLEKULRN
CYTOGENETIKY
MODIFIKACE FISH m-BAND
(mnohobarevn pruhovn)
pestavby v rmci jednoho

chromosomu (inverze, delece)
ONKOCYTOGENETIKA
- zskan chromosomov aberace
ONKOCYTOGENETIKA
zklady
zhoubn bujen je genetick onemocnn
vznik ndoru (malign transformace) je mnohastupov proces
zahrnuje sled genetickch zmn mutace gen dcch bunn
dlen, rst a diferenciaci, bunn znik, reparaci DNA,
pestavby na rovni chromosom a genomu, naruen
integrity genomu (defekty v genech zajiujcch chromosomovou
stabilitu a pesn rozchod chromosom v mitze)
malign buky maj bhem vvoje ndoru tendenci akumulovat
chromosomov abnormality
cytogeneticky jsou u onkologickch pacient analyzovny
chromosomov pestavby, kter vznikaj v prbhu progrese
onemocnn, jedn se o zskan aberace (nikoli vrozen)
ONKOCYTOGENETIKA
protoonkogeny - onkogeny
protoonkogeny normln geny ptomn ve vech bukch,
jsou zahrnuty do proces regulace bunn
proliferace (bunnho dlen, rstu
a diferenciace) a reparace (opravy) DNA
onkogeny mutovan (aktivovan) alely protoonkogen,
mutace vede k zisku funkce nebo zmn funkce
(atypick aktivace). Usnaduj malign transformaci.
K aktivaci dochz v dsledku mutace.
ONKOCYTOGENETIKA
tumor supresorov geny
tumor supresorov geny (antionkogeny) normln bunn
geny, jejich funkc je zabraovat nekontrolovanmu dlen bunk.
Jejich onkogenicita se projev pi ztrt funkce (inaktivaci) obou
alel genu.
K inaktivaci dochz vtinou v dsledku delece.
VSTUPN MATERILY K VYETEN
kostn de
solidn ndory
perifern krev
VYETEN CHROMOSOM
vyeten v laboratoch
klasick a molekulrn cytogenetiky
klasick cytogenetika kultivace, zpracovn vstupnch materil zaloeny
na obdobnch principech
- G-pruhovn chromosom
molekulrn cytogenetika metoda FISH, SKY, CGH a dal metody
stanovujeme KARYOTYP MALIGNCH KLON

v ndorov tkni mohou bt ptomny skupiny bunk s odlinm
karyotypem klony v rmci klonu stejn karyotyp
ZSKAN CHROMOSOMOV
ABERACE
u onkologickch pacient
souvis se vznikem a progres onkologickho onemocnn (poruchy dlen
somatickch bunk), vyetujeme buky postien ndorovm bujenm
poetn abnormality
abnormality potu chromosomovch sad (obv. se nejedn o pesn nsobek haploidnho
potu)
- polyploidie (hypo-, hyper- (di-, tri- atd.) ploidie)
abnormality potu chromosom v pru
- aneuploidie (trisomie, monosomie)- asto se tk jinch chromosom ne
u vrozench chromosomovch aberac
strukturn abnormality
translokace, inverze, delece, duplikace a dal zmny konkrtn aberace odlin
od VCA (vrozench chromosomovch aberac)
amplifikace (mnohonsobn zmnoen onkogenu, detekovateln cytogeneticky)
pouze u onkologickch pacient
ONKOCYTOGENETIKA
typy chromosomovch zmn
chromosomov zmny poetn
- chybn nebo nadbytek chromosom v pru (typick jsou abnormality
jinch chromosom ne u VCA) - aneuploidie
45,XX,-7
47,XX,+8
ONKOCYTOGENETIKA
chromosomov zmny poetn
- chybn nebo nadbytek vtho potu chromosom
- polyploidie nsobek potu

chromosomovch sad asto
sady nejsou kompletn
- hypo - diploidie
- hyper - triploidie
ONKOCYTOGENETIKA
chromosomov zmny - strukturn
asto typick zmny pro urit typy ndor (jin msta zlom ne u VCA)
translokace nejznmj translokace t(9;22) Ph chromosom
(Philadelphsk chromosom) u chronick myeloidn
leukemie (CML)
- inverze
- delece
- amplifikace - v buce je ptomno mnoho
kopi genu
mnohonsobn zmnoen onkogen MLL
(normln poet gen na 1 chromosomu je 1)

(tato zmna se nevyskytuje u VCA,
je typick pro onkologick
onemocnn)
ONKOCYTOGENETIKA
kombinace poetnch a strukturnch chromosomovch zmn
translokace chromosom
strukturn zmny
poetn zmny
chromosom
ONKOCYTOGENETIKA
komplexn karyotyp
56,XY,der(X)t(X;5),+der(1),add(2),+3,der(4)t(4;?),+6?,+8,
+10,der(11),+der(11)t(11;21)?,+der(11),+der(12)t(7;12)
qdp(12p),+17,der(18)
smen germinln tumor
ONKOCYTOGENETIKA
nahromadn vce chromosomovch zmn v karyotypu =
KOMPLEXN KARYOTYP
(charakteristick znak zhoubnch ndor zvlt
v pozdjch stdich progrese ndoru)
VZNAM VYETEN ZSKANCH

CHROMOSOMOVCH ABERAC
u onkologickch pacient
U onkologickch pacient vyetujeme buky postien ndorovm bujenm,

v souvislosti s onemocnnm v nich vznikaj chromosomov zmny.
Cytogenetick vyeten pesnji charakterizuje ndor, typ nalezench aberac
vypovd o prognze, fzi onemocnn. Pomh zpesnit diagnzu,
stanovit prognzu onemocnn, sledovat spnost lby a prbh onemocnn,
zvolit lebn postup.
Clem je zchrana ivota pacienta.
nkter translokace vznik fznch gen, jejich produkty maj zmnnou funkci
podporujc nebo zpsobujc ndorov bujen
- nkter chromosomov zmny souvisej s hor/ lep/ stedn prognzou
Doporuen literatura
Klinick genetika, Thompson 2001
Zklady klinickej genetiky, Sre, Srov 1995
Zklady lkask genetiky, Pritchard, Korf 2003
Dkuji za pozornost

Cytogenetika Osetrovatele 2016 Rezim Kompatibility

Загружено:

Сведения о документе

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Cytogenetika Osetrovatele 2016 Rezim Kompatibility

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

Zklady klinick

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

SCHEMA LIDSK BUKY

V bunnm jde se nachzej molekuly DNA. V interfzi bunnho

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

DNA rozptlen v bunnm jde

chromosomy = spiralizovan molekuly DNA

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

chromosom chromatin spiralizovan v mitze

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

MITZA proces dlen jdra a nsledn buky

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Karyotypem nazvme utdn a zhodnocen soubor chromosom v

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

46,XX - normln ensk karyotyp

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

normln ensk karyotyp 46,XX

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

HISTORIE KLINICK CYTOGENETIKY

pruhovac metody (1968-70)

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Metody klasick cytogenetiky dokou vyetit genetick materil pouze ve

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

METODY KLASICK CYTOGENETIKY

zpracovn suspenze bunk

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

METODY KLASICK CYTOGENETIKY

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

METODY KLASICK CYTOGENETIKY

pro analzu vrozench

vhodn pro analzu zskanch chromosomovch

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

METODY KLASICK CYTOGENETIKY

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

METODY KLASICK CYTOGENETIKY

nasazen plodov vody

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

METODY KLASICK CYTOGENETIKY

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

METODY KLASICK CYTOGENETIKY

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

zpracovn suspenze bunk

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

METODY KLASICK CYTOGENETIKY

pdavek roztoku KCl

inkubace hypotonizan smsi v termostatu 37C

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

METODY KLASICK CYTOGENETIKY

fixace zskn suspenze

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

METODY KLASICK CYTOGENETIKY

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

Vytvoilo Oddlen lkask genetiky FN Brno

METODY KLASICK CYTOGENETIKY

sklka zasychaj pi pokojov teplot ve vodorovn poloze