BIOQUMICA

DETERMINACIN CUANTITATIVA DE PROTENAS SOLUBLES POR

EL MTODO DE BIURET

Joven, Jeisson Fermin. Murcia, Diana Maritza.

Bioqumica. Docente, ngela Obando Mora. Universidad de la Amazona
Avd. Circunvalar, Barrio el Porvenir, Florencia, Caquet, Colombia.

Resumen
En la presente practica se llev a cabo una determinacin
del
porcentaje de protena soluble en una solucin de cloruro de sodio al 0.5
M de una farincea, por el mtodo de Biuret. Seguidamente se extrajo
por solubilidad en cloruro de sodio las protenas, albminas y globulinas
presentes en una muestra de harina, para concluir se realiz la curva de
calibracin con los datos que se obtuvieron a partir de una serie de
muestras para determinacin cuantitativa de las protenas solubles, de
acuerdo a las leyes de Lambert Beer.
Palabras claves: muestra de harina, curva de calibracin, Biuret,
protenas solubles.
Abstract
In practice this is carried out a determination of percent soluble protein
in a solution of sodium chloride 0.5 M of farinaceous by the Biuret
method. Then it extracted by solubility in sodium chloride proteins,
albumins and globulins present in a sample of flour, to complete the
calibration curve was performed with the data obtained from a series of
samples for quantitative determination of soluble proteins, according to
Beer Lambert law .
Keywords: flour sample, calibration curve, biuret, soluble proteins.

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Introduccin
El mtodo de biuret se basa en la formacin de un complejo coloreado
entre el CU2 + y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio
bsico 1CU2 + se acompleja con 4NH. La intensidad de coloracin es
directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces
peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas
sustancias interfieren. La sensibilidad del mtodo es muy baja y solo se
recomienda para la cuantificacin de protenas en preparados muy
concentrados (por ejemplo en sueros).
Los compuestos que tienen dos o ms enlaces peptdicos, dan un color
rosado o lila caracterstico, cuando se trata con reactivo de biuret.
El color es debido al complejo de coordinacin del tomo de cobre con
cuatro tomos de nitrgeno provenientes de los enlaces peptdicos. Los
espectros de absorcin de los complejos de cobre formados por
diferentes protenas son similares y por consiguiente es posible utilizar
una protena cualquiera como patrn de coloracin.
La reaccin de biuret tiene importancia cuantitativa; debido al color
resultante de la formacin del complejo de coordinacin que sigue las
leyes de Lambert Beer y por lo tanto resulta de utilidad prctica para
conocer el contenido de protenas en una solucin, siempre y cuando la
concentracin de la misma sea relativamente elevada (1-20mg/ml) pues
la sensibilidad del mtodo no permite discriminar pequeas variaciones
del contenido proteico. Por tal motivo el objetivo de esta prctica es
determinar el porcentaje de protena soluble en una solucin de cloruro
de sodio al 0.5 M de una farincea, por el mtodo de Biuret, extrayendo
por solubilidad en cloruro de sodio las protenas, albminas y globulinas
presentes en una muestra de harina y por ultimo realizar la curva de
calibracin para determinacin cuantitativa de las protenas solubles, de
acuerdo a las leyes de Lambert Beer.

Metodologa

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Inicio
2. Preparacin de la
muestra.

1. Curva de
Rotular
tubos de
ensayo

Pesar g de
harina
correspondientes
Patrn de albumina,
muestra, agua y
biuret.

Adicionar Solucin
correspondiente.
Agitar en tiempo
correspondiente en
centrifuga.

Dejar actuar
tiempo
correspondient
e
T. ambiente

Recibir sobrenadante
en un matraz.
Realizar la
determinacin de los
tubos 6 y 7 como
indica en la tabla

Leer
absorbancia.

Observar y
anotar cambios

Resultado

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MUESTRA / TUBO

Patrn de albmina

0.0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

Muestra

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

0.0

Agua

2.0

1.8

1.6

1.4

1.2

1.0

Biuret

4.0

4.0

4.0

4.0

4.0

4.0

Concentracin

0,5

1,0

1,3

2,0

2,5

Absorbancia

0,001

0.020

0,140

0,164

0,360

0,493

Tabla1. Resultados de Concentracin y Absorbancia de las muestras 1

hasta la 5

MUESTRA / TUBO

Patrn de albmina

0.0

0.0

Muestra

0.5

1.0

Agua

1.5

1.0

Biuret

4.0

4.0

Concentracin

-0,146

0,411

Absorbancia

0,140

0,196

Tabla 2. Absorbancia y Concentracin tubos 6 y 7

Y=0,1003x-0,1547
M=0,1003
B= 0,1547
R2=0,9324
y=mx +b

x=

yb
m

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Tubo 6:
x=

0,1400,1547
0,1003

x=0,146

Tubo 7:
x=

0,1960,1547
0,1003

x= 0,411

Curva de calibracin
0.6
0.5

0.49

0.4
Absorbancia

0.36

0.3
0.2
0.14

0.1
00
0

0.02
0.5

0.16

1.5

2.5

Concentracin

Grafica 1. Curva de calibracin de la Absorbancia respecto a la

Concentracin.

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Discusin y Conclusin

Al momento de obtener los datos en el espectrofotmetro se

tuvo un inconveniente al momento de graficar, no se dio una
curva de calibracin correcta, diferente a la esperada.
El espectrofotmetro no se encontraba calibrado
correctamente.
Las celdas se encontraban sucias y obstaculizo la lectura de
la muestra.
Al momento de realizar las muestras en los tubos de ensayo
algunos de estos tenan impurezas lo cual nos trajo
consecuencias al momento de la lectura, tanto as, que se
repiti todo el montaje.