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Carlos Murillo
Lineth Bolvar
8-922-995
8-936- 1464
Contenido
Introduccin............................................................................................................................3
Objetivo...................................................................................................................................4
Materiales y Mtodos..............................................................................................................4
1.
2.
Filtrado.........................................................................................................................4
3.
4.
5.
Observacin en el Microscopio....................................................................................5
Resultados y Discusin...........................................................................................................6
Figuras y Cuadro...................................................................................................................12
Conclusin............................................................................................................................16
Infografa...............................................................................................................................17
Introduccin
Extraccin de ADN es la tcnica utilizada para aislar el ADN en una muestra biolgica.
ADN (cido desoxirribonucleico) es una molcula larga fibrosa que se puede extraer a
partir de cualquier material biolgico tales como la vida o conservados tejidos, clulas y
partculas de virus. Una serie de procedimientos bsicos se llevan a cabo para aislar y
purificar el ADN. En primer lugar la clula se rompe abierta para exponer su ADN. Esto se
consigue mediante la mezcla o la molienda de la clula. El siguiente paso consiste en
romper y emulsionar la grasa y las protenas que componen la membrana de la clula. Esto
se logra mediante la adicin de ambas soluciones de sal y detergentes. Despus de esto, el
ADN se separa de la solucin lquida mediante la adicin de un alcohol y centrifugacin.
Esto proporciona el ADN purificado listo para su uso en diferentes aplicaciones.
Como se muestra en esta foto (FIGURA 1), ADN, una molcula fibrosa larga, se puede
levantar de una solucin mediante el uso de una varilla de vidrio o palo de madera que,
naturalmente, se envuelve alrededor.
Objetivo
Materiales y Mtodos
NOTA: Los instrumentos usados despus del paso 3 han sido colocados en hielo
previamente.
1. Las clulas se rompen abierta para liberar el ADN
a) Fuente de ADN (ms o menos 2500 g de Espinaca)
b) Un pellizco grande de sal de mesa (menos de un ml o 1/8 de cucharadita)
c) El aadir agua fra doble de la cantidad de tu fuente de ADN (ms o menos 300
ml)
Licuar todo a alta velocidad por hasta que se haya triturado.
El licuado separa las clulas de espinaca unas de otras, por lo que se obtuvo una muy
diluida sopa de clulas de espinaca. Debido a que este paso es un revoltijo, ciertas fuentes
de ADN no deben ser usadas.
2. Filtrado
a) Verter el homogneo de clulas de espinaca a travs de un colador dentro de otro
contenedor.
b) Obtener aproximadamente 40 ml del extracto. (Figura 2)
El ADN se elevar desde la mezcla de espinaca hasta la capa de alcohol. Se puede usar un
palito de madera o un gotero, con mucho cuidado, para extraer el ADN que est en el la
capa de alcohol. (Figura 5)
5. Observacin en el Microscopio
a)
b)
c)
d)
Resultados y Discusin
1.Por qu se de filtrar la muestra despus de licuarla?
El proceso de filtrado se utiliza para recoger el lquido rico en ADN y separarlo de los
restos celulares y de los otros tejidos de la muestra que se desechan.
Cabezas, que se adhieren el agua. Colas, que repelen el agua. Ambas molculas de jabn y
grasa se organizan en burbujas (esferas) con la cabeza fuera para hacer frente al agua y sus
colas en el interior de ocultar al agua.
estructuras
grasienta
membranas de la
clula
(grasa) con
Cuando
protenas.
Resumen: FIGURA 11
ADN, la neutralizacin de la carga elctrica del ADN. Esto permite que las molculas de
ADN se unan en lugar de repelerse entre s.
8.
Primero, revisa una vez ms si hay ADN. Busca cuidadosamente burbujas pequeitas cerca
de la capa de alcohol. Comnmente grumos de ADN se unen suavemente a las burbujas.
Si ests seguro de que no ves ADN, entonces el primer paso es estar seguro de que
empezaste con suficiente ADN desde el principio. Muchas fuentes de ADN, como por
ejemplo las uvas, tambin contienen mucha agua. Si la sopa de clulas molidas est muy
aguada, no habr suficiente ADN visible. Para arreglar esto regresa al primer paso y aade
menos agua. La sopa de clulas debe ser opaca, lo que significa que no debes poder ver a
travs de ella.
Otra posibilidad por la cual no puedes ver ADN es por no dar suficiente tiempo para que
cada reaccin ocurra. Asegrate de que la mezcla con el detergente est bien hecha y que
repose por al menos 5 minutos. Si las membranas de las clulas y del ncleo estn an
intactas, el ADN estar sumergido en la capa del fondo. Regularmente, si se dela reposar el
tubo de ensayo con la mezcla de espinacas y alcohol por 30-60 minutos, el ADN se
precipitar dentro la capa de alcohol.
9.
Las molculas de ADN, cuando estn separadas, son largas y fibrosas. Cada clula de tu
cuerpo contiene seis pies de ADN, pero el mismo tiene slo una millonsima de pulgada de
ancho. Para poder meter todo este ADN dentro de tus clulas debe estar empacado
eficientemente. Para resolver este problema, el ADN se enrolla de manera muy apretada
formando grumos dentro de las clulas. Aun cuando se extrae el ADN de las clulas, ste se
agrupa en grumos pero no tan ajustados como los que estaran dentro de la clula.
Imagnate esto: el cuerpo humano contiene un trilln de clulas, cada una de las cuales
contiene seis pies de ADN. Si haces los clculos, te dars cuenta que nuestros cuerpos
contienen ms de un billn de millas de ADN!
10.
Puedo usar este ADN como muestra para realizar una electroforesis en gel?
S, pero todo lo que veras ser una mancha. El ADN que extrajiste es genmico, lo que
significa que tienes todo el ADN de cada clula. Amenos que cortes el ADN con enzimas
de restriccin, este es demasiado largo y pegajoso para que se mueva a travs de los poros
del gel. O sea que, en vez de ver los grumos, todo lo que veras ser una mancha.
11.
13. Hay diferencias entre fuentes de ADN y las cantidades de ADN que producen?
Diferentes fuentes de ADN producidos diferentes cantidades de ADN. Las molculas
pueden interferir con la extraccin de ADN, que se unen al ADN y evitan que se precipite.
Cuando se extrae una gran cantidad, hay menos sustancias interferentes. La misma fuente
de ADN producidos diferentes cantidades en cada tubo de ensayo. La cantidad de ADN
extrado depende de la fuente: nmero de clulas, la edad, la frescura y el contenido de
agua. El exceso de agua aadida a la fuente, o si la fuente tiene un alto contenido de agua
produce menos DNA.
Ilustracin 1
Figuras y Cuadros
FIGURA 1
FIGURA 3
FIGURA 2
FIGURA 4
FIGURA 7
Comparacin ADN de
hgado (izq.) espinaca (der.)
FIGURA 6
FIGURA 8
FIGURA 5
FIGURA 9
FIGURA 10
FIGURA 21
Conclusin
La tcnica utilizada para aislar el ADN de una muestra biolgica, es un proceso muy
sencillo, que se puede realizar con cualquier cosa viviente. Porque todo ser viviente
contiene su ADN.
La extraccin del ADN, se puede resumir en tres fases:
Liberacin del ADN del ncleo de la clula
Limpieza de Residuos
Precipitacin.
EL ADN como molcula tiene su propio comportamiento. Por tanto es necesario conocerlo
para poder extraerlo con xito. Primero que todo saber dnde se encuentra, en ncleo.
Cmo sacarlo de dnde se encuentra? rompiendo la bicapas de fosfato del ncleo. Una vez
liberado, cmo se hara el ADN insoluble, de forma visible? Se logra estabilizando las
cargas de los grupos fosfatos de la molcula. Esto permitir que se agrupe. Cmo puedo
hacer el extracto ms puro? Rompiendo las protenas llamadas Histonas que hacen que la
molcula de ADN se condense. Si estas protenas siguen presentes la molcula de ADN
tiende a convertirse en una molcula ms pequea invisible, porque esa es la funcin de las
histonas, condensar el ADN.
Cmo se puede extraer? Mediante la precipitacin, lograda al agregar alcohol al 90%, que
es menos denso que la muestra, pero tambin porque el ADN es insoluble en alcohol.
Lo que se observa ser ms ni menos que cmulos de cromtidas, teidas con azul de
metileno. Porque ser imposible observar la doble hlice como tal con un microscopio.
Los resultados de extraccin se vern afectado a un cien por ciento del protocolo seguido.
Siendo factores a afectarse como la pureza y cantidad del ADN extrado. De importancia
primaria para el estudio de las causas genticas de la enfermedad y para el desarrollo de
diagnsticos y drogas. Y otras ms utilidades como lo fue la codificacin del genoma
humano.
Infografa
29/5/2016).
University of Utah, Genetics Science Learning Center, 2008. How to Extract DNA
from Anything Living. Recuperado de:
http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/ howto/ . (Fecha de Consulta:
5/6/2016).
The University of Waikato, Biotecnology Learning Hub. DNA Extraction.
Recuperado de: http://biotechlearn.org.nz/themes/dna_lab/dna_extraction (Fecha de
consulta: (8/6/2016).