Biotransformaciones

Las biotransformaciones son reacciones qumicas catalizadas

por clulas, rganos o enzimas aisladas en las que se aprovechan
las cualidades propias de los biocatalizadores,
biocatalizadores principalmente su
regio- y estereoespecificidad y su capacidad para llevar a cabo
reacciones en condiciones no extremas de pH y temperaturas. Las
bi
biotransformaciones
f
i
pueden
d ser usadas
d para lograr
l
conversiones
i
especficas de sustratos complejos usando clulas vegetales,
animales o microbianas o enzimas purificadas.
p
Estos procesos se diferencian sustancialmente de la biosntesis, en
la cual se producen sustancias complejas a partir de molculas
simples y de la biodegradacin en la cual sustancias complejas son
degradadas enzimticamente a molculas sencillas.

Los enfoques y desarrollos biocatalticos son llevados a cabo por

qumicos orgnicos en bsqueda de nuevas herramientas
sintticas- y ppor biotecnlogosquienes
g q
buscan nuevas
aplicaciones para sus biocatalizadores- .
la pareja perfecta para el casamiento cientfico.
Kurt Faber & Ramesh Patel

Transformar sustratos naturales y no naturales

Objetivo: Dilucidar rutas bioqumicas y mecanismos enzimticos
Dcada del 70

Biocatlisis
Bi
tli i como
herramienta de la sntesis orgnica

La complejidad de los mtodos

Gran componente emprico

Prejuicios contra las reacciones enzimticamente catalizadas y

Contra las enzimas

Se dice de ellas
ellas
Que son muy sensibles
Que son caras
Que solo son activas frente a sus sustratos naturales
Que trabajan solo en ambientes naturales

Desmitifiquemos
Sensibilidad: relativamente cierto
Tomando ciertas precauciones son
asombrosamente estables
Costos: variables
Adems pueden ser reutilizadas
Es DEFINITIVAMENTE FALSO que las
enzimas solo son activas frente a sus sustratos
naturales
M h enzimas
Muchas
i
funcionan
f i
en solventes
l t orgnicos
i

Adems las enzimas son

catalizadores eficientes
SeEcolgicamente
utilizan en bajas concentraciones
molares porcentuales de 0.1 a1%
aceptables
Pueden actuar en condiciones suaves:
pH 5-8
Temperatura 20-40C
Se minimiza el nmero de reacciones secundarias: descomposiciones,
isomerizaciones, racemizaciones, reordenamientos, etc

Adems las enzimas son

catalizadores eficientes
SeEcolgicamente
utilizan en bajas concentraciones
molares porcentuales de 0.1 a1%
aceptables
Son compatibles
p
unas con otras
Exhiben amplia tolerancia de sustrato
Funcionan
mismas o similares
condiciones.
Nobajo
estnlas
supeditadas
a su rol natural
Esto permite realizar varias reacciones biocatalticas en cascada,
Ya sea por
sistemas
o con
enteras.
Paradoja:
A multienzimticos
mayor especificidad
de clulas
reaccin,
mayor amplitud en
la aceptacin de sustratos
No se conocen los sustratos naturales de un gran nmero de enzimas
perfectamente caracterizadas

Adems las enzimas son

catalizadores eficientes
SeEcolgicamente
utilizan en bajas concentraciones
molares porcentuales de 0.1 a1%
aceptables
Son compatibles
p
unas con otras
Exhiben amplia tolerancia de sustrato
Funcionancatalizar
bajo las mismas
similares condiciones.
Pueden
unoamplio
espectro de reacciones

Esto permite realizar varias reacciones biocatalticas en cascada,

Ya sea por sistemas multienzimticos o con clulas enteras.
Adems puden catalizar reacciones que no se logran por mtodos tradicionales
Como las hidroxilaciones de posiciones no activadas

Quimioseleccin
Las enzimas
i
actan
sobre
b un solo
l tipo
i de
d grupo
funcional
Esto reduce notablemente el nmero de reacciones
secundarias

O
M ih t
Manihot

OH

H
CH3

CH3

Regioseleccin
Las enzimas p
pueden distinguir
g entre los mismos grupos
g p
funcionales situados en diferentes regiones de una
misma molcula
O
R1

OH

Reductasa de levadura
NADP+

O
R2

R1

OH

OH

R2

OH

Cl

OAc
R2

(S), ee>99%

(R), ee>99%

R1
(S), ee 96%

O
hepticas
enoato reductasa
rpida

(-)-carvona

OH

hepticas
carbonil reductasa
lenta

(+)-n-dihidrocarvona

neo-dihidrocarvenol

Estereoseleccin
Las enzimas son catalizadores quirales.
La quiralidad de los sustratos es reconocida por el
biocatalizador al formar el complejo enzimasustrato.
Un sustrato proquiral
U
i l puede
d ser transformado
f
d en
productos pticamente activos a travs de un
proceso de desimetrizacin.

Inconvenientes de los procesos biocatalticos

La naturaleza nos provee de enzimas en una sola forma
enantiomrica
Es imposible crear la imagen especular de una enzima a partir de los D-aminocidos
Entonces es imposible en principio invertir la induccin quiral de
una reaccin enzimtica

Inconvenientes de los procesos biocatalticos

La naturaleza nos provee de enzimas en una sola forma
enantiomrica
Las enzimas requieren parmetros operacionales que varan
en un estrecho rango
Esta ventaja es a veces un cuello de botella.
Altas temperaturas, valores de pH o de concentracin salina extremos no son
Compatibles con la actividad enzimtica.
enzimtica

Inconvenientes de los procesos biocatalticos

La naturaleza nos provee de enzimas en una sola forma
enantiomrica
Las enzimas requieren parmetros operacionales que varan en
un estrecho rango
Las enzimas muestran su mayor actividad biocataltica en H2O
El H2O es un solvente de alto PE, alto calor de vaporizacin.
La mayora de los sustratos orgnicos son poco solubles en H2O
Al trabajar
j con enzimas en solventes orgnicos
g
se corre el riesgo
g de perder
p
actividad en relaciones mayores a un orden de magnitud

Inconvenientes de los procesos biocatalticos

La naturaleza nos provee de enzimas en una sola forma
enantiomrica
Las enzimas requieren parmetros operacionales que varan
en un estrecho rango
Las enzimas muestran su mayor actividad biocataltica en H2O
Muchas enzimas necesitan cofactores
Las enzimas son blanco de fenmenos de inhibicin
La eficacia de los procesos puede ser afectada por inhibicin por sustrato o
por producto
Se pueden aplicar tcnicas de agregado contnuo de sustrato o de remocin
i situ
in
it de
d producto
d t

Biosintticamente dirigidas
Biotransformaciones
Xenobiticas

Enzimas aisladas
Biotransformaciones

Clula entera
Extractos proteicos
o extractos libres de clulas

Fermentacin vs biotransformacin
Biotransformacin

Fermentacin

Clulas en desarrollo sumergidas

e inmovilizadas

PRODUCTO DE
PARTIDA

Clulas en desarrollo sumergidas e

inmovilizadas
Clulas en reposo
Procesos acotados Catalticos
Una o pocas reacciones
Una o pocas enzimas
Sustrato:
Complejo natural o xenobitico

PRODUCTO FINAL

Natural o no natural

Solo natural

TOLERANCIA A LA
CONCENTRACIN DE
PRODUCTO FINAL

Alta/Baja

Baja

AISLAMIENTO DE
PRODUCTO FINAL

Sencillo/Complejo

Complejo

PRODUCTOS
SECUNDARIOS

Generalmente pocos

G
Generalmente
l
t muchos
h

ORGANISMO

REACCIN

Procesos largos
Muchas reacciones
Muchas enzimas
Fuentes de C y N

Clulas enteras
Equipamiento mas complejo y caro
Complejidad de procesos de purificacin
Necesidad de manejar
j mayores
y
volmenes
Baja tolerancia de sustrato
Baja
B j productividad
d ti id d
Baja tolerancia a los solventes orgnicos
Reacciones laterales

Ventajas
j de utilizar clulas enteras vs. enzimas aisladas:
No es necesario el agregado ni reciclado de cofactores, ni
de coenzimas, ni de cosustratos
Las
L colecciones
l i
d organismos
de
i
di
disponibles
ibl son mucho
h
ms numerosas que las enzimas aisladas comercialmente
accesibles
Muchas enzimas activas en su ambiente celular no
pueden ser aisladas, caracterizadas y mucho menos
producidas
d id a niveles
i l comerciales
i l
Es el caso de las enzimas unidas a estructuras de membrana que son muy lbiles en forma
aislada. Esto es muy notable para enzimas que introducen funciones oxigenadas a los sustratos
siendo las reacciones que ellas catalizan muy difciles de llevar a cabo por mtodos qumicos.
Por ejemplo mono y dioxigenasas.