NDICE

1. INTRODUCCIN................................................................................................2
2. OBJETIVOS........................................................................................................3
2.1

OBJETIVO GENERAL..................................................................................3

2.2

OBJETIVOS ESPECFICOS........................................................................3

3. MARCO TERICO..............................................................................................4
3.1

CIDO GLUTMICO....................................................................................4

3.2

AMINOCIDOS Y PROTENAS...................................................................4

3.3

DETERMINACIN DE LOS PKA DE UN AMINOCIDO CIDO: EL

CIDO GLUTMICO..............................................................................................6
4. MARCO METODOLGICO................................................................................7
4.1

CRISTALERA Y EQUIPO............................................................................7

4.2

REACTIVOS.................................................................................................7

4.3

ALGORITMO DEL PROCEDIMIENTO........................................................7

4.4

DIAGRAMA DE FLUJO DIAGRAMA DE FLUJO.........................................8

5. RESULTADOS....................................................................................................9
6. INTERPRETACIN DE RESULTADOS............................................................12
7. CONCLUSIONES.............................................................................................14
8. BIBLIOGRAFA.................................................................................................17
9. APNDICE........................................................................................................18
9.1

HOJA DE DATOS ORIGINALES................................................................18

9.2

MUESTRA DE CLCULO..........................................................................18

9.3

FOTOGRAFAS..........................................................................................21

1. INTRODUCCIN
Como se ha sealado, los aminocidos son compuesto anfteros, ya que
pueden comportarse como cido o como bases, debido a que contienen al menos
un grupo carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-NH 2) en su estructura. En esta
prctica se realiz la titulacin del cido glutmico, un aminocido cido, que es
uno de los 20 aminocidos que forman parte de las protenas.
Casi todos los procesos biolgicos son dependientes del pH; un pequeo
cambio en el pH produce un gran cambio en la velocidad del proceso y es por esta
razn la importancia de conocer la composicin y rangos en las que actan los
sistemas de tamponamiento. Los grupos amino protonado y carboxilo, delos
aminocidos funcionan como cidos dbiles formando tambin sistemas buffers, el
cual su estado inico depende del pH de la solucin en la que estn disueltos.
Para obtener la curva completa de la valoracin es necesario utilizar un cido
titulante (HCl 1 M) y una base (NaOH 1 M). A partir de la curva de titulacin se
determin los valores pK y K de cada uno de los grupos ionizables, as como las
zonas tapn y la posible importancia fisiolgica de estos equilibrios.

2. OBJETIVOS

2.1 OBJETIVO GENERAL

Determinar el comportamiento del cido glutmico al ser titulado con una base
fuerte, para su neutralizacin con hidrxido de sodio (NaOH) y una retrovaloracin
con cido clorhdrico (HCl).

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

2.2.1 Construir la grfica de titulacin del cido glutmico con HCl con los datos
obtenidos en la prctica.
2.2.2 Determinar grficamente el punto isoelctrico de la grfica pH vrs. mL de
HCl agregados.
2.2.3 Identificar las regiones que se presentan en la grfica y localizar las formas
inicas del cido glutmico que existen durante la titulacin.
2.2.4 Indicar en la grfica los valores de pK 1, pK2 y pK3, con sus respectivas
especies inicas para cada pK.
2.2.5 Presentar la reaccin de ionizacin del cido glutmico.

3. MARCO TERICO
3.1 CIDO GLUTMICO
El cido glutmico, o en su forma ionizada, el glutamato (abreviado Glu o E) es
uno de los 20 aminocidos que forman parte de las protenas. El cido glutmico
es crtico para la funcin celular y no es nutriente esencial porque en el hombre
puede sintetizarse a partir de otros compuestos. Pertenece al grupo de los
llamados aminocidos cidos, o con carga negativa a pH fisiolgico, debido a que
presenta un segundo grupo carboxilo en su cadena secundaria. Sus pK son 2.19;
4.25; 9.67 para sus grupos alfa-carboxilo, gamma-carboxilo y alfa-amino
Es

el neurotransmisor excitatorio

por

excelencia

de

la corteza

cerebral humana. Su papel como neurotransmisor est mediado por la

estimulacin de receptores especficos, denominados receptores de glutamato,
que

se

clasifican

receptores metabotrpicos (de

en: ionotrpicos (canales

siete

dominios

inicos)

transmembrana

acoplados

a protenas G) de cido glutmico.1

Todas las neuronas contienen glutamato, pero slo unas pocas lo usan como
neurotransmisor. Es potencialmente excitotxico, por lo que existe una compleja
maquinaria para que los niveles de esta sustancia estn siempre regulados.

3.2 AMINOCIDOS Y PROTENAS

La caracterstica ms llamativa de los aminocidos (AA) es la existencia en una
misma

molcula

de

grupos

cidos

(capaces

de

ceder

H+) y

grupos

bsicos (capaces de captar H+). Por lo tanto, en medio cido se comportan como
bases, y en medio bsico se comportan como cidos. Las molculas que
presentan esta caracterstica se dice que son anfteros o anfolitos.

1 Intestinal glutamate metabolism. [J Nutr. 2000] - PubMed Result. Capturado en:

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10736365?dopt=Abstract

Los grupos cidos y bsicos pueden neutralizarse mutuamente, constituyendo

una sal interna formada por un in hbrido (carga positiva y carga negativa), que
se llama zwitterin.
Si consideramos un AA sencillo, ste puede adoptar tres formas inicas
diferentes:

El primer grupo que se disocia es el carboxilo (pK1 = 2,22). Por la proximidad

del grupo NH3+, el COOH se comporta como un cido moderadamente fuerte. Si
aplicamos la ecuacin de Henderson-Hasselbalch al primer equilibrio de
disociacin, resulta que a pH fisiolgico (7,4), la concentracin de la forma
catinica es prcticamente despreciable (una de cada 151.000 molculas en la
forma zwitterin). El segundo grupo en disociarse es el NH3+. Como el pK2 es
9,86, la concentracin de la forma aninica es muy pequea en comparacin con
la forma zwitterin (1 molcula en forma aninica por cada 300 en forma
zwitterinica). El AA se comporta a pH fisiolgico como un cido dbil que est
disociado al 0,35%.
Existe un pH para el cual la carga elctrica media de las molculas es cero.
Este pH se llama punto isoelctrico (pI). El pI es el pH en el que la molcula se
disocia por igual en ambos sentidos, y como equidista de los dos valores de pK,
puede obtenerse por su semisuma:

3.3 DETERMINACIN DE LOS PKA DE UN AMINOCIDO CIDO: EL CIDO

GLUTMICO
Del mismo modo que ocurre con la histidina, el cido glutmico, y en general
los aminocidos cidos, presentan un grupo ionizable adicional en la cadena
lateral. En este caso se trata de otro grupo carboxilo, -COOH, como se puede ver
en la estructura qumica de dicho aminocido:

Esto hace que la valoracin permita determinar tres valores de pK a, 2,19

para el grupo carboxilo principal, 4,25 para el de la cadena lateral (rotulado como
pKR en el grfico) y de 9,67 para el grupo amino, -NH 2. La cercana de los dos
valores hace que en la curva de valoracin no estn tan claros los puntos medios
para su clculo:

Curva obtenida en la titulacin cido base del aminocido cido glutmico

Fuente: Departamento de Bioqumica y Biologa molecular de la Universidad de Salamanca

4. MARCO METODOLGICO
4.1 CRISTALERA Y EQUIPO
4.1.1 Bureta
4.1.2 Beackers
4.1.3 Baln aforado
4.1.4 Pipetas volumtricas
4.1.5 Erlenmeyer
4.1.6 Potencimetro
4.1.7 Pinzas
4.1.8 Soporte

4.2 REACTIVOS
4.2.1 cido Clorhdrico (HCl)
4.2.2 Hidrxido de Sodio (NaOH)
4.2.3 Glutamato Monosdico

4.3 ALGORITMO DEL PROCEDIMIENTO

4.3.1 Se prepar 250 mL de Glutamato Monosdico a 1 M.
4.3.2 Se prepar 250 mL de cido Clorhdrico (HCl) a 1 m; y 250 mL de Hidrxido
de Sodio (NaOH) a 1 M.
4.3.3 Se determin el valor del pH de la solucin de glutamato monosdico.
4.3.4 Se tom una alcuota de 10 mL en un erlenmeyer de la solucin de
glutamato monosdico.
4.3.5 Se titul primero con hidrxido de sodio como titulante hasta alcanzar un pH
mayor de 12.
4.3.6 Se realiz la retrovaloracin con cido clorhdrico como titulante hasta
alcanzar un pH mayor o igual que 2.

4.4 DIAGRAMA DE FLUJO DIAGRAMA DE FLUJO

INICIO
Preparar solucin de
Glutamato Monosdico a 1M

Preparar soluciones de HCl

y NaOH a 1M

Determinar el valor pH de
la solucin de Glu

Tomar alcuota de 10mL de

Glu en un erlenmeyer

Titular con NaOH hasta

alcanzar un pH 12

Realizar retrovaloracin con HCl

como titulante hasta un pH 2

FIN

5. RESULTADOS

Grfica I. Titulacin de retrovaloracin del cido glutmico con cido clorhdrico.

Fuente: Datos Originales.

Grfica II. Punto Isoelctrico de la grfica de titulacin del cido glutmico con
HCl.

Fuente: Datos Calculados.

Grfica III. Regin que se dan en la titulacin y las formas inicas del cido
glutmico que existen durante la titulacin.

Fuente: Apuntes de Clase de Bioqumica, impartida por el Ingeniero Cesar Garca.

Universidad San Carlos de Guatemala, Facultad de Ingeniera.

Grfica IV. Valores de pK1, pK2 y pK3, con sus respectivas especies inicas.

Fuente: Datos Calculados, Graficas Primera y Segunda Derivada (Grficas V y VI).

Apuntes de Clase de Bioqumica, impartida por el Ingeniero Cesar Garca.
Universidad San Carlos de Guatemala, Facultad de Ingeniera.

Imagen I. Reaccin de ionizacin del cido glutmico.

Fuente: Apuntes de Clase de Bioqumica, impartida por el Ingeniero Cesar Garca.

Universidad San Carlos de Guatemala, Facultad de Ingeniera.

6. INTERPRETACIN DE RESULTADOS
El objetivo del informe tcnico es lograr identificar los pKs del cido glutmico
por medio de la neutralizacin completa del cido glutmico con hidrxido de
sodio. Posteriormente se realiz una retrovaloracin utilizando cido clorhdrico.
Para obtener las curvas de titulaciones de pH se determin titulando en
intervalos de 1 mL y posteriormente en 2 mL y de ltimo en 4 mL de cido
clorhdrico, utilizando el potencimetro para medir los cambios del pH en los
distintos intervalos agregados de cidos.
Un aminocido puede existir en varias formas inicas, dependiendo del pH del
medio en donde se encuentre disuelto. Esta propiedad se describe mejor
utilizando la ecuacin de Henderson-Hasselbach. Los aminocidos tienen al
menos dos grupos disociables, el amino y el carboxilo; pueden tener ms si el
grupo R tiene a su vez grupos que se puedan ionizar. Para cada uno de estos
grupos existen un pK, el del carboxilo se le llamar pK COOH y pKNH2 al del amino.
El cido glutmico tiene un grupo amino, y un grupo cido, en concreto, un
grupo carboxilo; esto hace que tengan un comportamiento anftero, y que se
comporte como aminocido cido.
En solucin acuosa y a pH fisiolgico, el cido glutmico se encuentra
normalmente como molcula ionizada, lo que se conoce como zwitterin, en el
que el grupo amino gana un protn y adquiere una carga positiva, mientras que el
grupo carboxilo pierde el protn y adquiere una carga negativa.
El cido glutmico presenta un grupo ionizable en la cadena lateral, en este
caso se trata de otro grupo carboxilo, -COOH. Esto hace que la valoracin permita
determinar tres valores de pK.
El pKCOOH 2.29 es para el grupo carboxilo principal; pK R 5.98 para la cadena
lateral; y un pKNH2 9.82 para el grupo amino.

De la grfica IV, la forma A (totalmente protonada) tiene una carga neta

positiva; la forma B tiene carga neutra (una positiva y una negativa), la forma C
tiene una carga negativa y la forma D tiene dos cargas negativas. El punto
isoelctrico del cido glutmico es de 6.055 (la semisuma de pK 1 y pK2, los pK que
flanquean a la forma zwitterin).
En la grfica IV se observan las formas inicas en las que puede existir el
cido glutmico, estn determinadas por el pH del medio (en este caso el pH es
igual al punto isoelctrico) en el que se encuentra disuelto, de tal manera que
cuando el pH< pKCOOH se encontrar nicamente (100%) la forma ms protonada
(cida), del aminocido, es decir la que se seala como A.
Se sabe que cuando el pH= pK COOH existen la sal y el cido en la misma
cantidad, para este caso tendr el 50% de la forma A (cido) y 50% de la forma B
(sal). Cuando el pH> pKCOOH y pH< pKNH2, la forma A ya no se encuentra puesto
que toda (100%) se ha convertido a la forma B. (Ver la grfica IV).
Cuando el pH se acerca al valor del pK NH2, el compuesto B que a pH's ms
bajos se comport como sal, ahora es un cido y dona portones para
transformarse en el compuesto C. De tal forma que cuando pH=pK NH2 se tendr
50% del compuesto B (cido) y 50% del compuesto C, es decir, su sal. (Ver la
grfica IV).
Finalmente, cuando pH < pKNH2, la forma B ya no se encuentra y el 100% del
aminocido se encuentra en la forma C. (Ver la grfica IV).

7. CONCLUSIONES
7.1 Est prctica, aunque su desarrollo fue sencillo, nos deja conocimientos
amplios, sobre todo las curvas de titulacin, que son herramientas muy
poderosas, ya que a travs de stas se determin los pKs y el punto
isoelctrico del cido glutmico.
7.2 El conocer el comportamiento del cido glutmico ayudo a comprender las
propiedades de los aminocidos, como su elevado punto de fusin, que
podemos atribuir a su estructura de in dipolar.
7.3 La grfica de titulacin del cido glutmico en su retrovaloracin es la
siguiente:

7.4 El punto isoelctrico del cido glutmico en su retrovaloracin equivale a

pI=6.055; y se ubica grficamente as:

7.5 La nica regin que se observ en la retrovaloracin de la titulacin del cido

glutmico fue la zona tampn y sus 4 formas inicas del cido glutmico que
se presentaron son las siguientes (grficamente):

7.6 Grficamente los valores de pK 1, pK2 y pK3

inicas es la siguiente:

con sus respectivas especies

7.7 La reaccin de ionizacin del cido glutmico se presenta en 4 formas, las

cuales son:

8. BIBLIOGRAFA

8.1 Lehninger, Albert.; Nelson, David L.; Cox, Michael M., (1993) Principios de
Bioqumica. Segunda Edicin, Ediciones Omega. Barcelona, Espaa.

8.2 Gary D., Christian., (2009) Qumica Analtica. Sexta Edicin. Editorial Mc
Graw-Hill. Mxico. 219-234 pgs.

9. APNDICE

9.1 HOJA DE DATOS ORIGINALES

Adjunta al final del reporte.

9.2 MUESTRA DE CLCULO

CALCULO DE GRAMOS DE HIDRXIDO DE SODIO (NaOH)

1 mol NaOH
L40 g NaOH
0.25
=10 g NaOH
L
1mol NaOH

CALCULO DE GRAMOS DE CIDO CLORHDRICO (HCl)

L36.45 g HCl
100
1 mol HCl
1 mol
1 mol HCl
37
0.25
=2.83 mLde HCl
L
1.19 g/cm 3

CALCULO DE GRAMOS DE GLUTAMATO MONOSDICO (Glu Na)

1 mol Glu Na
L169.11 g Glu Na
0.25
=42.28 g Glu Na
L
1 mol Glu Na

Grfica V. Titulacin del cido glutmico con hidrxido de sodio.

Fuente: Datos Originales.

Grfica VI. Primera Derivada con respecto a la grfica I, pH vrs. HCl.

Fuente: Datos Originales.

Grfica VII. Segunda Derivada con respecto a la grfica I, pH vrs. HCl.

Fuente: Datos Originales.

CALCULO DEL PUNTO ISOLECTRICO (pI)

Valores de pKCOOH 2.29 y pKNH2 9.82

pI =

2.29+ 9.82
=6.055
2

9.3 FOTOGRAFAS
Fotografa I. Armando Equipo para realizar la Titulacin.

Fuente: Tomada por Omar Porn. Laboratorio 1, de la Escuela de Ingeniera

Qumica, Universidad San Carlos de Guatemala.

Fotografa II. Equipo Armado listo para la Titulacin del cido Glutmico.

Fuente: Tomada por Omar Porn. Laboratorio 1, de la Escuela de Ingeniera

Qumica, Universidad San Carlos de Guatemala.
Fotografa III. Grupo 1, esperando el valor de pH brindado por el potencimetro,
en la titulaciones.

Fuente: Tomada por Omar Porn. Laboratorio 1, de la Escuela de Ingeniera

Qumica, Universidad San Carlos de Guatemala.