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TCNICAS
PARASITOLGICAS
APLICADAS S
ANLISES
CLNICAS
61
Cur
Sumrio
1. INTRODUO .......................................................................................... 1
2. HELMINTOS ............................................................................................. 4
2.1. GEOHELMINTOSES ...............................................................................................................5
2.1.1 Ascaris lumbricoides ......................................................................................... 5
2.1.2- Trichuris trichiura ......................................................................................... 10
2.1.3. Ancilostomdeos ............................................................................................ 13
2.1.4- Strongyloides stercoralis................................................................................ 18
2.2. ENTEROBIOSE .....................................................................................................................23
2.3 ESQUISTOSSOMOSE ..........................................................................................................26
2.3.1- Schistosoma mansoni .................................................................................... 27
2.4- TENIOSE E CISTICERCOSE ...............................................................................................32
4. PROTOZORIOS COMENSAIS............................................................ 65
5. FATORES QUE INFLUENCIAM O ACHADO DOS PARASITOS ....... 66
5.1. COLETA .................................................................................................................................69
5.2. PRESERVAO DO MATERIAL BIOLGICO ....................................................................73
1. INTRODUO
As parasitoses intestinais constituem um grave problema de
Sade Pblica, sobretudo em pases em desenvolvimento. Mesmo
com o avano tecnolgico e a globalizao, tais problemas ainda
acometem indivduos desde as zonas rurais s reas urbanas e periurbanas, em virtude da contaminao do ambiente, falta de
saneamento bsico, condies precrias de moradia, diarreia dos
viajantes e doenas do sistema imunolgico, como a Sndrome da
Imunodeficincia Adquirida (AIDS), que colaboram para que este
quadro seja mantido (BROOKER et al., 2010).
As infeces causadas por geohelmintos e a esquistossomose
representam mais de 40% da carga global de doenas, levando a
bito 43,5 milhes de pessoas no mundo, segunda causa de mortes
s perdendo para a tuberculose (46,5 milhes), com 155 mil mortes
anuais. Estimativas para um cenrio mundial apontam que cerca de
25% da populao est infectada por Ascaris lumbricoides, 20% por
Ancilostomdeos, 17% por Trichuris trichiura e 3 a 4% por
com
prevalncias
variando
de
49,2%
72,4%
tcnicas
parasitolgicas
empregadas
so
insuficientes
2. HELMINTOS
As helmintoses intestinais esto entre as principais doenas
tropicais negligenciadas. Estima-se que cerca de 2 bilhes de
pessoas estejam infectadas com helmintos intestinais (BETHONY et
2.1. GEOHELMINTOSES
As geohelmintoses so um grupo de infeces adquiridas
mediante a ingesto de ovos e do contato com larvas, que podero
viver por anos no trato gastrointestinal humano. Os geohelmintos
so parasitos com ciclo evolutivo ocorrendo no solo e no hospedeiro
definitivo. Apresentam uma distribuio global, com exceo locais
de frio e calor extremos (HOTEZ et al.,2006), e compreendem as
espcies
de
Ascaris
lumbricoides,
Trichuris
trichiura,
lumbricoides,
colaborando
para
contaminao
do
ambiente,
meio
ambiente
desinfetantes
usuais,
resistindo
ocasionando
processos
ascaridiana
(FALLON;
alrgicos
devido
2007),
infiltrado
em
crianas
vivendo
em
locais
com
baixos
ndices
de
10
al., 2000).
Quanto s manifestaes clnicas, essas variam de acordo com
a carga parasitria, causando moderada ou graves infeces, porm
em
muitos
casos
podem
ser
assintomticos.
As
infeces
11
da
Nigria
foi
contra
os
resultados
apresentados,
12
13
et al., 2005).
2.1.3. Ancilostomdeos
Apresentando ampla distribuio geogrfica, predominante
em regies de clima temperado, os ancilostomdeos ganharam
importncia na Sade Pblica com a morte de 12 mil pessoas em
1901 em Porto Rico (BROOKER et al., 2004), e atualmente acomete
um
ciclo
monoxnico,
com
fases
de
14
15
resultado
da
presena
de
enzimas
hidrolticas
16
al., 2010).
O diagnstico da Ancilostomose feito mediante o emprego
das tcnicas de Willis et al. (1921), especfico para pesquisa de ovos
de ancilostomdeos, e Kato Katz (KATZ et al., 1972) para pesquisa
quantitativa de ovos, contudo a demora no processamento da
amostra faz com que ocorra um processo de degenerao nos ovos,
dificultando sua visualizao atravs deste mtodo (KNOOP et al.,
2008).
17
18
em
indivduos
imunocompetentes
sintomas
19
20
que,
entre
outros
sintomas,
pode
ocasionar
al., 2010).
Apesar da associao existente entre nveis scio-econmicos
baixos e parasitismo, nota-se nos ltimos anos um acentuado
aumento
na
prevalncia
de
estrongiloidose
em
pases
21
22
2.2. ENTEROBIOSE
23
como
inquietao,
nervosismo,
irritabilidade
24
como
nas
reas
rurais
peri-urbanas,
25
al., 2004).
26
de
especificidade,
contra
5%
15%
dos
mtodos
et al., 2010).
2.3 ESQUISTOSSOMOSE
Descoberta em 1852 por Theodor Bilharz, a esquistossomose
mansnica considerada a principal infeco causada por helmintos
27
28
29
30
da prevalncia para
esquistossomose, podemos
31
deteco, porm
desvantagem
32
33
ocorre
uma
srie
de
sintomas
neurolgicos
34
35
existem
muitos
estudos
abordando
complexo
empregada
no
diagnstico
no
apresenta
36
no
interior
dos
ovos,
pesquisadores
sugerem
3. PROTOZORIOS PATOGNICOS
Infeces por protozorios so um grave problema de Sade
Pblica
em
uma elevada
37
3.1 GIARDIOSE
O gnero Giardia apresenta cerca de 6 espcies, contudo a
38
39
hdrica
pela
ingesto
ou
recreao
em
guas
40
41
higinico-sanitrias
42
precrias,
deficincia
no
al., 2004).
Outro
grave
problema
consiste
na
contaminao
via
ocorrendo
com
indivduos
assintomticos,
que
tm
43
quando realizados mtodos sorolgicos (ELISA) ou de imunofluorescncia (IFA) com uma especificidade de 95% a 100%.
3.2. CRIPTOSPORIDIOSE
A
criptosporidiose
44
uma
das
infeces
emergentes
lhe
confere
resistncia,
composta
por
uma
dupla
camada
provocando
alteraes
na
arquitetura
das
microvilosidades, sendo que este um parasito intracelular extracitoplasmtico dentro de um vacolo parasitforo aderido
45
que
sofrero
excistao
ainda
no
interior
do
al., 2005).
Os sintomas clnicos variam de pessoa para pessoa devido
principalmente ao estado imune do indivduo e a idade, podendo
em alguns casos ser assintomtico. O sintoma mais comum da
criptosporidiose a diarreia aquosa e em grande quantidade, em
alguns casos apresentando muco. Outros sintomas apresentados
so febre, vmitos, nusea, anorexia, perda de peso, fadiga e
problemas respiratrios, com a durao mdia de 12 dias em
pessoas saudveis e autolimitante.
46
apresentam
um
perodo
mais
curto
de
incubao,
47
razo
de
subdiagnosticada
que
e
muitas
vezes
subnotificada,
esta
sendo
que
uma
infeco
em
muitos
48
49
3.3 CISTOISOSPOROSE
Assim como Cryptosporidium spp, Cystoisospora tambm
um coccdio de distribuio mundial restrita, se limitando s regies
tropicais (STARK et al., 2009), sendo que apenas as espcies C.
50
51
52
53
tambm atravs da colorao por Safranina, aps a centrfugoconcentrao (NG et al., 1984), alm disso, os oocistos podem ser
identificados atravs dos mtodos de Sheather (LINDSAY et al.,
1997), que facilita a visualizao, pela tcnica de Faust et al.
(1938), que menos sensvel, e at mesmo pelo colorao de
imunofluorescncia de Auramina- Rodamina (LINDSAY et al., 1997;
LAPPIN, 2005; GARCIA; BRUCKNER, 1997), contudo a identificao
em todas as tcnicas apresentadas pode ser prejudicada, visto sua
semelhana com os oocistos de Sarcocystis spp. (VELASQUEZ et al.,
2008).
Estudo realizado comparando outros mtodos de deteco
para C. belli, observou 94,5% de positividade em amostras
diagnosticadas pela colorao de Kinyoun, enquanto os mtodos
direto e de Ritchie et al., apresentaram taxas de positividade de
31,6% e 97,4% respectivamente (JONGWUTIWES et al., 2007).
No existem mtodos sorolgicos para deteco de oocistos de C.
54
3.4. AMEBIOSE
A amebiose uma infeco causada pelo protozorio
Entamoeba
histolytica/dispar,
apresentando
uma
distribuio
55
56
sendo
que
as
crianas
apresentam
mais
imunidade
(PRITT;
CLARK,
2008).
Muitos
pacientes
57
diagnstico
diferencial
das
espcies
de
Entamoeba
58
3.5. BLASTOCISTOSE
Dentre os parasitos encontrados nas fezes, Blastocystis
59
anos,
enfatizando
seu
potencial
de
patogenicidade,
60
et al., 2008).
Os sintomas dessa infeco no so especficos e incluem:
diarreia, dor abdominal, clicas e nuseas, a qual recebe o nome de
Blastocistose. Outros sintomas so: fadiga, anorexia e flatulncia.
Tambm
podem
apresentar
leucocitose
fecal,
eosinofilia,
61
infeco por
62
Por
muitos
anos
alguns
pesquisadores
associavam
dos
pacientes.
No
entanto
alguns
ensaios
no
al., 2005).
63
64
blastocistose
causa
infeces
com
respostas
de
4. PROTOZORIOS COMENSAIS
Em muitos exames parasitolgicos, comum a elevada
presena de determinados protozorios como Entamoeba coli,
65
ascaridase
quanto
esquistossomose
podem
ser
66
67
68
5.1. COLETA
Os resultados laboratoriais com base na recuperao e
identificao do parasito dependem de uma coleta adequada da
69
antimalricos,
preparativos
no
absorvveis
70
71
abdominal
significativa,
laxantes
so
contraindicados
72
fechado
essencial
recipientes descartveis de
para
prevenir
desidratao;
73
74
fixador
de
Schaudinn
frequentemente
usado
na
demonstrao de protozorios
75
6. ESCOLHA DO MTODO
76
os
parasitas
principalmente
da
fecais,
suspeita
escolha
clnica
do
da
mtodo
depende
importncia
do
aumentam
as
chances
de
deteco
do
parasito
77
78
desvantagem
79
no
interior
dos
ovos,
pesquisadores
sugerem
80
coloraes
acidfast
como
Ziehl
Neelsen
modificada
tcnica de
81
colorao
acidfast,
como
Ziehl
Neelsen
modificado
82
83
84
blastocistose
causa
infeces
com
respostas
de
85
6.2.1. CENTRFUGO-CONCENTRAO
A fim de concentrar os organismos menores, coccdios e
microspordios, a centrfuga deve alcanar velocidade recomendada
antes de monitoramento do tempo comea a centrifugao (500 x g
86
reduzida
para
qualquer
uma
das
etapas
de
87
cayetanensis).
Vantagens: Sedimento mais limpo.
Etapas: Homogeneizao, filtrao, lavagem do material,
separao em camadas, visualizao.
Hidro
termotropismo
das
larvas
Strongyloides stercoralis.
de
89
90
permite
concentrao
dos
cistos
de
91
92
aumentar
sensibilidade
do
exame
Cyclospora cayetanensis.
Pontos
crticos:
centrifugao,
filtrao
com
gaze,
93
Etapas:
homogeneizao,
suspender
com
soluo
de
7. MTODOS QUANTITATIVOS
94
Tcnica
quali-quantitativa,
para
pesquisa
ovos
presentes
sua
multiplicao
por
24
resulta,
S.mansoni
7.2 COPROKIT
Fundamento: O kit comercial Coprokit (Campinas Medical)
consiste na deteco e quantificao de ovos de helmintos,
mediante a utilizao de uma soluo diafanizadora sobre a alquota
de fezes (1g), permitindo uma maior homogeneidade ao material
analisado.
Vantagens: Permite a visualizao rpida em at 1 hora aps
a realizao do procedimento, todo material descartvel.
Pontos crticos: Homogeneizar a soluo diafanizadora com
as fezes e espalhar as fezes de forma homognea com o papel
celofane.
Desvantagens: Maior custo na rotina laboratorial.
8. MTODOS DE COLORAO
Deteco
identificao
de
protozorios
intestinais
perdidas
pelo
exame
direto
de
mtodos de
95
96
no processo, quando as lminas so coradas, organismos lcoolacidos (Cryptosporidium parvum, Cyclospora cayetanensis e
97
Cryptosporidium
parvum,
Cyclospora
cayetanensis
esfregaos
espessos
dificultando
descolorao,
Fixao,
colorao,
Diferenciao,
Contra-corante
visualizao
98
9. Consideraes Finais
O cenrio atual do diagnstico parasitolgico passa por um
conjunto de trs fatores que muitas vezes so cruciais para uma
analise adequada e um tratamento eficaz.
O primeiro fator importante o mdico que muitas vezes
pouco capacitado na indicao do exame e na orientao para a
realizao da coleta de material adequada e em alguns casos na
interpretao dos resultados. Somado a isso, muitas vezes ele
possui pouca confiana no resultado do laboratrio.
99
clnico
que
muitas
vezes
no
apresenta
uma
falso
negativos,
visto
que
nos
diversos
inquritos
100
101
102
103
S; MAIPANICH, W;
104
ARAUJO,
C.F;
FERNANDEZ,
C.L.
Prevalence
of
intestinal
Soc. Bras.
105
CALLEGARI-JACQUES,
S.M;
ZOPPAS,
B.C.A.
Evoluo
da
106
K.F;
SMITH,
H;
NIMRI,
L;
VISCOGLIOSI,
E;
107
of
an
indirect
immunofluorescence
assay
for
Giardia
spp
em
guas
minerais
naturais
de
nascentes
108
S;
CLEMENTS,
A.C.A;
BUNDY,
D.A.P.
Global
ALEXANDER, N;
GEIGER, S;
HOTEZ, P.J;
BETHONY, J; MOYEED, R.A; STANDER, J; FLEMING, F; CORREAOLIVEIRA, R. Contrasting patterns in the small-scale heterogeneity
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109
ativa de
tenase e de outras
110
111
R.M;
DAVIES,
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Minireview:
Clinical
112
parasitic
infections
in
patients
with
acquired
113
P.M;
ENK,
M.J;
KATZ,N.Treatment
of
clinical
114
115
116
SANTOS,
S.A;
MERLINI,
L.S.
Prevalence
of
E.
Trichocephalus
and
trichocephaliasis.
EMC-
E;
GATOPOULOU,
A;
STAMOS,
C;
117
118
is
not
reliable
tool
for
delineating
within
119
R.
Taxonomy
and
species
delimitation
in
G.
R;
ANDRADE,
C.F.S.
Alguns
aspectos
120
121
122
123
124
L.S;
ASH,
L.R.
Diagnostic
parasitology-
clinical
L.S;
BRUCKNER,
DA.
Diagnostic
Medical
intervention
in
large
urban
centre
on
social,
125
126
E.M.N.
Incidncia
de
enteroparasitas
com
O;
DOMINGO,
L;
TEIXIDOR,
J;
127
128
129
130
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W;
KOSKI,
R.A.
Experimental
approaches
to
the
131
132
133
S;
ANSART,
S;
PEREZ,
L;
DANIS,
M;
S;
PARIS,
L;
CAUMES,
E.
Acute
an
enzyme-linked
immunoassay
for
the
detection
of
134
135
G.T;
DAMEN,
J.G;
SAFIYANU,
H;
ODEY,
F;
A.P;
MWAPASA,
V;
MESHNICK,
S.R;
136
137
D.E;
TAYLOR,
D.N.
Parasitic
infections
of
the
B.H;
Polyparasitism
LENGELER,
with
C;
Schistosoma
TANNER,
M;
UTZINGER,
J.
P.B,
NUTMAN,
T.B.
Strongyloides
stercoralis
in
138
139
140
141
142
F.
Strongyloides
hyperinfection
syndrome
and
143
STRINA,
A;
ALCANTARA-NEVES,
N.M;
BARRETO,
M.L.
144
P.
Laboratory
diagnosis
of
cryptosporidiosis.
J.
MIDTUN,
A;
HANEVIK, K;
EIDE, G.E;
145
W.M;
NEITZKE,
H.C;
LONARDONI,
M.V.C;
caractersticas
epidemiolgicas
da
leishmaniose
146
147
L;
CHADEE,
K.
The
immunopathogenesis
of
148
149
D.J;
WELD,
F.V;
L.H;
SCHWARTZ,
FREEDMAN,
D.O;
E;
REED,
KOZARSKY
C;
P.E.
150
S;
SANPRASERT,
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KAEWZAITHIM,
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153
154
Prevalence
of
155
156
PEREIRA, W.R; KLOOS, H; CRAWFORD, S.B; VELSQUEZMELENDEZ, J.G; MATOSO, L.F; FUJIWARA, R.T; CANADO, G.G;
LOVERDE, P.T; CORREA-OLIVEIRA, R; GAZZINELLI, A. Schistosoma
SILVA,
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VARELLA,
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Parasitoses
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et
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vermicularis
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158
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hominis
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isolate
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178
11. ANEXOS
Exame direto:
1. 2 a 3 gotas de salina em lmina.
2. Tocar comum palito vrios pontos das fezes, transferindo para a
lmina.
3. Espalhar as fezes na lmina.
4. Para identificao de cistos de protozorios e larvas de helmintos
corar com lugol.
5. Examinar a lmina com objetiva de 10X e/ou 40X.
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Mtodo de Ritchie
1. Dissolver cerca de 5g de fezes em 10ml de gua e filtrar em gaze
dobrada em quatro.
2. Depositar o material em tubo cnico de centrfuga e centrifugar a
1500 rpm por 2 minutos.
3. Desprezar o sobrenadante e ressuspender novamente em 10 ml
de gua.
4. Repetir os passos 2 e 3 at que o sobrenadante apresente-se
claro.
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Mtodo de Rugai
1- Retirar a tampa do recipiente que acondiciona as fezes e
envolv-lo em ter gazes, fazendo uma pequena trouxa.
2- Colocar o material assim preparado, com a abertura voltada
para baixo, num clice de sedimentao, contendo gua aquecida
(45C), em quantidade suficiente para entrar em contato com as
fezes.
3- Deixar em repouso por uma hora
4- Coletar o sedimento no fundo do clice, com ajuda de uma
pipeta. 5-Corar as larvas com Lugol e observ-las com o maior
aumento para identific- las. Fezes diarricas (as larvas morrem
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Faust Centrfugo-Flutuao
1. 10 g de fezes em 20 mL de gua (homogeneizar bem).
2. Filtrar em gaze e transferir para um tubo de hemlise.
3. Centrifugar a 2.500 rpm por 1 minuto.
4. Desprezar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em gua.
(Repetir esta operao at o sobrenadante fique claro)
5. Ressuspender o sedimento em soluo de sulfato de zinco a
33%. (densidade = 1,18 g/mL)
6. Centrifugar novamente.
7. Os cistos e alguns oocistos de protozorios e ovos leves de
helmintos ficaro na pelcula superfcial.
8. Retirar com ala de platina, adicionar uma gota de lugol e
analisar em lmina.
Mtodo de Willis
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Mtodo de Sheather
1. Misturar, em partes iguais, fezes e soluo fisiolgica.
2. Filtrar a suspenso em gaze dobrada em quatro partes.
3. Completar o tubo com soluo saturada de acar.
4. Recolher o filtrado em tubo de centrfuga, completando at a
metade.
5. Cobrir o tubo com papel celofane transparente ou um pedao de
lamnula de plstico e fix-lo com uma gominha.
6. Homogeneizar bem por agitao.
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Hematoxilina Frrica
A colorao deve ser feita preferencialmente nos primeiros 20
minutos aps a evacuao. Na impossibilidade disto, conservar o
material no fixador de Schaudinn, refrigerado.
1. Centrifugue o material fixado a 1500 2000 rpm durante 2
minutos e faa uma lmina em esfregao no muito espesso. Caso o
material seja fresco, faa a lmina e deixe fixando em Schaudinn
por no mnimo 1 hora.
2. Transfira a lmina para uma soluo de lcool iodado 70% por 5
minutos para remover os cristais de cloreto de mercrio (a soluo
de lcool iodado feita adicionando-se algumas 2ml tintura de iodo
2% a 98 ml de lcool 70%).
3. Passe a lmina em lcool 95% por 5 minutos.
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10 g
10 g
10 ml
0,1 g
Etanol 95%
10 ml
3,0 g
gua Destilada 87 ml
Procedimento: Dissolver o Fenol Cristal na gua destilada.
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0,5 ml
Etanol 70 %
100 ml
0,5 g
100 ml
Mtodo
1 Realizar um esfregao fecal,
2 Fixar com Metanol por 3 minutos.
3 Corar com Fenol- Auramina O por 10 minutos.
4 Lavar com gua corrente.
5 Descorar com soluo Etanol- cido 0,5%.
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Identificao
Usando um microscpio de incidncia de luz fluorescente com
filtro azul ou FITC (filtro de excitao de 490 nm; emisso de 510
nm), tela de 200X ou 400X (mnimo de 50 campos), exame
presuntivo de oocistos em 400X e confirmao se dar atravs de
uma nova colorao por Ziehl Nielsen modificado para
Cryptosporidium.
Oocistos fluorescentes de Cryptosporidium apresentam discos
ou anis com colorao amarelo esverdeado no homogneo.
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