MEDIOS DE CULTIVO Y SU CLASIFICACIN: POR SU NATURALEZA, CONSISTENCIA, Y

UTILIZACIN.
Medios de cultivo. Son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones
fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Son esenciales en el Laboratorio de
Microbiologa por lo que un control en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegura la exactitud,
confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en
sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han
preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de
condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado
correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos
orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de
carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. Se lica
completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas
excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por
aquellas que crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes
bacterias provocan su licuacin.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento
como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se
adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para
detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El
suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos
menos resistentes.
Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido
o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya
que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide
el crecimiento de la mayora de las bacterias Gram-positivas).
CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS.
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de
factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio.
1- Disponibilidad de nutrientes adecuados:

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Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono,
nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras
sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer
de donantes o captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o
extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de estas sustancias para su aplicacin a los medios de
cultivo provocaba la prdida de los factores nutritivos lbiles.
Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que,
adems, representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn ya que la mayora de los
microorganismos, que no suelen utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminocidos y otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a muchos medias sustancias
como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales
minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del
crecimiento, generalmente de naturaleza vitamnica.
Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades
metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
2- Consistencia adecuada del medio:
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albmina,
gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se
desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusin de este solidificante y de que otros
tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay tambin gran
cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente extendido en el laboratorio.
3- Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases:
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno normal. Algunas pueden
obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos slo se
desarrollarn adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los
microorganismos microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias (tensin
de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a
cualquiera de las citadas condiciones.

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4- Condiciones adecuadas de humedad:
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen
desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas
condiciones mnimas en las estufas de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el medio.
5- Luz ambiental:
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay
excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos.
6- pH:
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La
mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios ms
o menos cidos. No se debe olvidar que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos normales.
7- Temperatura:
Los microorganismos mes-filos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43C. Otros como los
psicrfilos crecen a 0C y los termfilos a 80C o incluso a temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas
generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y
los saprofitos tienen rangos ms amplios.
8- Esterilidad del medio:
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la aparicin de formas de vida
que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especmenes
inoculados en dichos medios. El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que
utiliza vapor de agua a presin como agente esterilizante).

TIPOS BSICOS DE MEDIOS DE CULTIVO.

Atendiendo a su estado fsico:

Lquidos.

Semislidos.

Slidos.

Atendiendo a su utilidad prctica:

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Medios para aislamientos primarios:
Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos
difciles de hacer crecer. A menudo estn enriquecidos con materiales como: sangre, suero,
Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las
bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc.)
Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se aaden sustancias que
inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de
otras. Variando la sustancia aadida, se vara el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey,
Kanamicina-Vancomicina)
Enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal
potenciando el cultivo y crecimiento deseado (Selenito, medio con Vitamina K).
Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen
requerimientos de grupos especficos de bacterias, ayudando a su identificacin (Lowenstein).
Medios para identificacin:
Diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las peculiaridades
fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo) especficas de las bacterias. Seleccionando los
medios adecuados se puede llegar a la identificacin de casi cualquier bacteria (OxidacinFermentacin).
INGREDIENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

Agua.

Bases nutritivas.

Peptonas, hidrolizados y digeridos Extractos, infusiones y dializados.

Carbohidratos.

Azcares Agua y derivados Almidones Otros.

Sales Minerales.

Macroelementos (fsforo, azufre, sodio, cloro, hierro y otros) Microelementos (zinc, cobre y otros).

Colorantes e indicadores.

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Factores de crecimiento.

Vitaminas Protenas Otros.

Otros.

Antibiticos y lpidos.

CLASIFICACIN:
De acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes:

Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las
que son usualmente complementadas por la adicin de minerales y otras sustancias. En ellos no se
conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.

Medios definidos o sintticos: son los medios que tienen una composicin qumica definida cuali y
cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigacin.

De acuerdo al uso del medio de cultivo:

Medios de enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de

microorganismo en particular. Permiten aumentar el nmero de microorganismos de ese tipo. Usualmente
contienen una o ms sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepcin de los
que se quieren cultivar.

Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios slidos y
estn diseados para el aislamiento de microorganismos especficos.

Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad
microbiana de los microorganismos. No contienen ningn tipo de sustancia con actividad antimicrobiana.
Permiten revelar caractersticas fisiolgicas de los microorganismos.

Atendiendo a su estado fsico:

Lquidos.

Semislidos.

Slidos.

Segn su origen:

naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser
extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce exactamente.

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sintticos: son los medios que contienen una composicin qumica definida cualitativamente y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.

semisintticos: son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento bajo una forma de un
extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.

Segn su formulacin:

qumicamente definidos: se conoce la cantidad exacta de cada uno de los compuestos que hay en el
medio.

complejos: se realizan a partir de extractos naturales (extracto de levadura, sangre, etc.); no se conoce
exactamente cul es la composicin del medio; sin embargo, presenta la ventaja de que ya estn
presentes todos o casi todos los elementos que una clula puede requerir.

Segn su uso:

medio general: medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los que necesitan
condiciones especiales (por ejemplo, agar CLED).

medio selectivo: permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado

(hongos, bacterias entricas, protozoos...).

medio diferencial: permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio. Puede ser por
su crecimiento, su metabolismo, su respiracin, etc. (por ejemplo, medio de McConkey).

medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia
variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un
mismo medio.

medio mnimo: contiene la mnima cantidad de nutrientes posible que permite el crecimiento de una
especie;

medio de transporte: preparado para servir como almacenamiento temporal a especmenes

transportados o en transferencia; mantienen su viabilidad y su concentracin;

Simple.

ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las condiciones que
seale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25 o), con poca humedad y
protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de
calor o vapor.

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UTILIZACIN.
Los medios de cultivo deshidratados son higroscpicos. Cuando los envases de estos medios de cultivo
deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe tener la precaucin de cerrarlos tan pronto como sea
posible y mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada de humedad. La absorcin de agua produce
cambios de pH, formacin de grumos, decoloraciones del polvo, etctera, lo cual indica que deben ser
descartados porque pueden haber sufrido cambios qumicos o estar contaminados.
Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede almacenarse a temperatura ambiente
por un periodo mximo de 2 semanas protegido de la luz, o por periodos mayores a 1215 oC. Sin embargo,
almacenados bajo refrigeracin entre 2 y 8 oC se prolonga la vida til de los mismos, (nunca por debajo de
0oC porque se destruye la estructura del gel). Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien
cerrados para evitar su deshidratacin y cuando se usa tapn de algodn, se debe colocar por encima una
envoltura de papel (Craft).
Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo preparado debe pasar por un
riguroso proceso de control de calidad, en donde se determinan sus propiedades fisicoqumicas (apariencia,
pH) y microbiolgicas (esterilidad y promocin de crecimiento) verificando que cumplan con los requisitos de
calidad establecidos y por ende demostrar que son aptos para su uso.