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OBJETIVOS

Objetivo general

Observar como acta la amilasa (saliva) como catalizador sobre el almidn,


a travs de una reaccin que efecta un cambio de coloracin

Objetivos especficos

Identificar la accin de la amilasa de la saliva sobre el almidn


Identificar los productos de la accin de la amilasa sobre el almidn
Entender cmo influye la amilasa en el proceso de la digestin

MARCO TERICO

Nuestro cuerpo, para poder extraer la energa de los azcares en un tiempo til (es
decir, que nos mantenga vivos, pestaeando, caminando, pensando o leyendo este
artculo), utiliza catalizadores que aceleran esa misma reaccin y provocan que
ocurra miles de veces ms rpido. Los catalizadores de los seres vivos son las
enzimas, protenas que nuestro propio cuerpo produce. De ah lo de autocataltico.
Una clula relativamente simple, como la bacteria Escherichia coli, puede producir
ms de 4 mil protenas diferentes. Despus del agua, las protenas son las
molculas ms abundantes dentro de las clulas (~15% de la masa de una
bacteria). Una clula es una coleccin de miles de molculas en constante
movimiento y organizadas en estructuras especficas.
Las enzimas tienen una enorme variedad de funciones dentro de la clula: degradan
azcares, sintetizan grasas y aminocidos, copian fielmente la informacin
gentica, participan en el reconocimiento y transmisin de seales del exterior y se
encargan de degradar subproductos txicos para la clula, entre muchas otras
funciones vitales.
La identidad y el estado fisiolgico de un ser vivo est determinado por la coleccin
de enzimas que estn funcionando con precisin de cirujano y con la velocidad de
un rayo en un momento dado dentro de las clulas. As, a lo largo de millones de
aos de evolucin, la naturaleza ha desarrollado una gran diversidad de enzimas
para mantener el complejo fenmeno de la vida.

Para el proceso de digestin, las biomolculas ingeridas en la dieta deben ser


degradadas a sus componentes ms sencillos para ser absorbidas a nivel del tubo
digestivo y as llegar al lugar correspondiente a nivel celular.
La digestin de los carbohidratos comienza en la boca, donde los alimentos se
mezclan con la Amilasa salival que degrada los enlaces del almidn liberndose
Maltosa, Glucosa y dextrinas de almidn que poseen todos los enlaces.
La accin de las enzimas, por sus caractersticas fsico-qumicas, puede afectarse
por las condiciones presentes en el lugar de accin de stas. Entre los principales
factores que pueden modificar la accin enzimtica tenemos:

La temperatura
El pH
Inductores e inhibidores

Los inhibidores tienen gran utilidad en bioqumica, ya que ayudan a determinar la


especificidad de la enzima por el sustrato, la naturaleza de los grupos funcionales
en el mantenimiento de la estructura activa de la enzima. Estos compuestos no son
alterados qumicamente por la enzima.
De acuerdo al tipo de inhibicin que ejerzan stas sustancias, se han clasificado en
Inhibidores Reversibles.
Inhibidores Irreversibles

Determinacin de velocidades iniciales en una enzima


La actividad cataltica de un enzima se determina midiendo la velocidad inicial de
reaccin, que es la pendiente de la curva de progreso (curva de producto formado
sustrato transformado frente al tiempo) en el tiempo cero (Fig. 1).
Inicialmente, las reacciones transcurren linealmente, pudindose tomar la pendiente
de esta recta como velocidad inicial. A tiempos ms largos, el progreso de la
reaccin se aparta de la linealidad. Esta cada de la velocidad de reaccin se debe
a la disminucin significativa de la concentracin de sustrato, aunque tambin
pueden influir otros factores como el aumento de la concentracin de producto,
cambios de pH, inactivacin del enzima, etc.
La mxima fiabilidad en la determinacin de la actividad de un enzima la suministra
el valor de velocidad inicial o velocidad durante el tramo inicial de progreso lineal de
la reaccin.

Efecto del pH sobre la actividad enzimtica


La actividad de un enzima se ve afectada por el pH al cual se lleva a cabo la
reaccin. La curva actividad-pH puede ser diferente para cada tipo de enzima (Fig.
2). En el caso ms general la curva tiene forma de campana. El valor de pH al cual
la actividad es mxima se denomina pH ptimo; dicho pH no tiene porqu coincidir
con el pH intracelular. La relacin entre el pH y la actividad depende del
comportamiento cido-base del enzima y del propio sustrato. Sustrato y enzima
(centro activo) pueden contener grupos funcionales cidos y bsicos, siendo su
grado de disociacin dependiente del pH, lo que determinar, entre otros aspectos,
la conformacin de la protena, la capacidad de unin del sustrato al centro activo
del enzima (Km) y la capacidad de transformacin del sustrato (kcat). Los estudios
cinticos a diferentes valores de pH nos proporcionan informacin sobre el
mecanismo cataltico de los enzimas y la naturaleza de los aminocidos ms
directamente implicados en la catlisis.

Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica


La velocidad de una reaccin enzimtica vara al aumentar la temperatura de
acuerdo a lo indicado en la Fig. 3, donde se representa una tpica curva de actividad
enzimtica/temperatura. Tal dependencia refleja un doble efecto de la temperatura:
positivo a bajos valores, debido al incremento general que experimenta la velocidad
de cualquier reaccin qumica al hacerlo la temperatura, y negativo a valores altos,
debido a la desnaturalizacin trmica del enzima. Esto es, la velocidad de una
reaccin enzimtica se incrementa al aumentar la temperatura dentro de un
determinado rango, alcanzando un valor mximo a la denominada temperatura
ptima. A valores superiores la actividad disminuye debido a que el enzima, como
cualquier otra protena, sufre procesos de desnaturalizacin y, por lo tanto, de
inactivacin. Durante la fase de incremento de la velocidad, la relacin entre sta y
la temperatura viene determinada por la ecuacin de Arrhenius:

Ea es la energa de activacin, R la constante de los gases (1,9872 cal K-1 mol-1;


8,3145 J K-1 mol -1) y T la temperatura absoluta (K). El valor de Ea se puede
calcular a partir de la representacin de Arrhenius.

METODOLOGA

Obtencin de la enzima amilasa

Se enjuag la boca
y se coloc 1ml de
saliva en un tubo
de ensayo.

La saliva se diluy
empleando 1ml de
saliva y 9ml de agua
destilada, para obtener
la enzima base.

Se prepar una solucin


al 2% de almidn, es
decir 2g de almidn se
disolvieron en 100ml de
agua

Se prepar 50ml de
solucin de amilasa
porcina a una
concentracin de
1mg/ml.

Preparacin de las muestras

Se coloc en
tubos de ensayo
por triplicado

Tubo 1: 2ml de agua


destilada, 2ml de
solucin de almidn al
2%, 2ml de solucin de
amilasa humana

Se colocaron 3 tubos a bao


maria a 37C, la misma
cantidad de tubos a 4C y el
resto a temperatura ambiente,
todos durante 15 minutos, para
que la amilasa hidrolizara al
almidn.

Tubo 2: 2ml de
agua destilada, 2
ml de solucin de
almidn al 2%

Tubo 3: 2ml de
agua destilada, 2ml
de solucin de
almidn al 2%, 2ml
de amilasa humana

Reacciones de lugol para almidn


La prueba del yodo o el lugol permite identificar la presencia de almidn, con este
reactivo se obtiene un color azul-violeta caracterstico.

Se agrego una
gota de yodo a
cada tuvo de
ensaye

Si no existe la hidrlisis
del almidn la hidrlisis
ser positiva (color
azul).

El yodo se agreg a los


9 tubos de ensaye para
observar los cambios
con respecto a la
temperatura

Si existe hidrlisis la
prueba ser negativa
(color mbar)

RESULTADOS
IMAGEN

RESULTADO

En tres tubos de ensayo (marcados


como A-1.B-1, C-1) se coloc 2 ml de la
saliva diluida con agua destilada, 2 ml de
la solucin de almidn al 2%
previamente preparado y 2 ml de agua
destilada.

En otros tres tubos de ensayo (marcados


como A-2, B-2, C-2) se coloc 2ml de
agua destilado y 2ml de la solucin de
almidn.

En los ltimos tres tubos de ensayo


(marcados como A-3, B-3, C-3)
colocamos 2 ml de agua destilada, 2ml
de la solucin de almidn al 2% y 2 ml de
solucin de amilasa porcina.

Cuando estuvieron completos los tubos


se colocaron al mismo tiempo a
diferentes condiciones de temperatura.
Los tubos A-1, 2, 3 se mantuvieron a
37C durante 15 minutos.

Los tubos B-1, 2, 3 se mantuvieron en la


gradilla a temperatura ambiente por el
mismo lapso de tiempo.

Los tubos C-1, 2, 3 se llevaron al


congelador
a
una
temperatura
aproximada de 5.5 C
Por el mismo lapso de tiempo

Pasado el tiempo se sacaron los tubos y


se le agrego de dos a tres gotas de yodo
para detectar la presencia de almidn en
las muestras.

En los tubos A-1, 2, 3 la solucin se torn


de un mbar muy tenue.

En los tubos B-1, 2, 3 hubo una reaccin


con el yodo y el almidn, su coloracin
fue estos tubos solo sirvieron de control

En los tubos C-1, 2 ,3 la mezcla reaccion


formando una coloracin violeta en los
tubos.

DISCUSIN DE LOS RESULTADOS


La prueba de Lugol o Yodo es utilizada para identificar la hidrolisis de Almidn, a
partir de esta prueba se puede determinar la actividad enzimtica de la amilasa
indirectamente, partido de la presencia de almidn en una muestra, dentro de la
prctica mantuvimos como variable la temperatura de las muestra. De acuerdo con
nuestros resultados los tubos que estuvieron a 37 C presentaron una actividad
enzimtica mayor que los que estuvieron a temperatura ambiente y los que
estuvieron a -4C, pues presentaron una coloracin mbar al agregar yodo esta
coloracin corresponde a la hidrolisis del almidn (ausencia de almidn).Entonces
podemos concluir de acuerdo a nuestros resultados que la amilasa salivar y la
amilasa porcina tienen mayor eficiencia como catalizador a temperaturas similares
a las de cuerpo humana esto es 37C.ya que la actividad enzimtica a temperaturas
bajas es no es eficiente.

CONCLUSIN
La saliva contiene una enzima llamada amilasa que acta sobre el almidn y lo
descompone en azcares reductores como la glucosa. En una mezcla de saliva y
almidn diluido, si aadimos yodo despus de dejar que la mezcla reaccione la
disolucin puede volverse mbar. Si el color es azul, es que el yodo ha
reaccionado con el almidn, o sea no se ha descompuesto, pero si el color que
toma es el mbar u amarillo significa que ya no hay almidn, sino glucosa; ya que
se conserva el color caracterstico del yodo. La coloracin se debe a que el yodo
ocupa los espacios vacos en las molculas de glucosa.

CUESTIONARIO

1. Cmo acta la amilasa sobre el almidn?


La amilasa genera una descomposicin en el almidn, de manera que, a partir de
sus elementos, se forman azucares menos complejas, como la glucosa
2. Cmo est formado el almidn qumicamente?
El almidn est formado por la polimerizacin de una gran cantidad de monmeros
de la glucosa que forman cadenas largas. Est formado por una mezcla de dos
sustancias principalmente amilasa y amilo pectina. Es por ello que se le considera
un polisacrido

3. Qu es la amilasa desde el punto de vista qumico?


Se considera una enzima por su capacidad de digerir el glicgeno y el almidn para
formar azucares simples. Podemos de ste modo decir que es una biomolcula.
4. Cul es papel que desempea el almidn en los animales?
El almidn es un carbohidrato que proporciona energa a los animales, la cual
utilizan para sus actividades locomotrices
5. Por qu es necesario para los animales que la amilasa acte sobre el
almidn?
Porque si la amilasa no descompone al almidn, ste ltimo no podra ser
degradado, no producira azucares simples como la glucosa, que a su vez no sera
absorbida por las clulas
6. Cmo afecta la temperatura a las enzimas?
Existe un incremento en la actividad enzimtica con la elevacin de la temperatura,
pero al llegar a cierto punto la temperatura puede causar un decremento, esto es
debido a la desnaturalizacin de las de las enzimas

7. Cmo afecta el pH a las enzimas?


La catlisis de una enzima sobre una sustancia, requiere que ambos tengan grupos
qumicos en forma inica particular para poder interactuar, al llegar a cierto punto el
pH modifica este estado y por tanto a la velocidad de la reaccin. Y un pH extremo
puede desnaturalizar la estructura de la enzima lo que llevara a su vez a un
decremento de actividad.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Aldave, M. T. (11 de 09 de 2016). uco. Obtenido de


http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biolmol/pdfs/32%20INVERTASA%20CIN%C3%89TICA.pdf

Ramirez, J. R. (11 de 09 de 2016). Revista UNAM. Obtenido de


http://www.revista.unam.mx/vol.15/num12/art91/

Salud 180. El estilo de vida saludable. Amilasa


http://www.salud180.com/salud-z/amilasa