INTRODUCCION

La microbiologa es el estudio de los organismos microscpicos (celulares y

subcelulares), principalmente de aquellos que se encuentren por debajo del
poder de resolucin del ojo humano, estos seres tienen un rango de tamao
de10-5 a 10 mm, por ende es necesario el manejo experimental para
observar, describir su morfologa y taxonoma.
Para ello se debe tener habilidades de manejo de los instrumentos de
laboratorio (principalmente el microscopio), saber las tcnicas bsica de
preparacin de una muestra fija de bacteria para tincin, que es un
procedimiento preliminar a la mayora de mtodos de tincin a bacterias. Se
aprender a realizar el mtodo de tincin simple con colorantes bsicos en
cual consiste en destacar el microorganismo completo para que se vean las
formas y las estructuras bsicas
Objetivos

Aprender las tcnicas de preparacin de una muestra fija

Aprender cuales son las coloraciones ms utilizadas
Identificar las principales formas bacterianas
Aprender la importancia de las tinciones simples en la caracterizacin
morfolgica de estos microrganismo

MATERIALES Y METODOS
EJERCICIO N. 1 PREPARACION DE UNA MUESTRA FIJA DEBACTERIAS PARA
TINCIN
Previo al desarrollo de una tcnica de tincin, el material al ser observado
debe ser fijado, es decir adherido a una lmina de vidrio sobre la cual ha de
realizarse la tincin. Si la preparacin no es fijada, la muestra tiende a
perderse durante el procedimiento de tincin. El procedimiento de fijacin
mata al microorganismo, coagula el protoplasma celular y provoca su
adhesin a la lmina de vidrio. Un agente de fijacin ideal preserva la
estructura de la clula en la forma y posicin normal sin causar la aparicin
de artefactos (estructuras no presentes en la clula viviente). Aunque el
calentamiento es el agente de fijacin de uso ms comn, el alcohol y otros
agentes qumicos tambin pueden ser usados satisfactoriamente.
MATERIALES

Muestra conteniendo bacterias

Asa de klle
Lamina porta objetos
Mechero de alcohol
Piseta con agua

PROCEDIMIENTO
1. Lavar perfectamente los portaobjetos, secarlo con papel seda.
2. Prender el mechero y esterilizar el asa klle en la flama del mechero
hasta que se ponga al rojo vivo.
3. Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los
microorganismos sean destruidos, despus acercar al mechero el

tubo de cultivo, quitarle el tapn y flamear rpidamente la boca del

mismo.
4. Colocar una gota de agua destilada sobre una lmina porta objeto
completamente limpia. Con ayuda del asa de klle coloque sobre la
gota una pequea porcin de la muestra a fijar. Si la muestra que
contiene al microorganismo es lquida puede aplicarse directamente
sin la gota de agua.
5. Distribuya la gota cargada con la muestra en la lmina hasta formar
una pelcula delgada luego seque la lmina al aire o a una razonable
distancia sobre la llama del mechero.
6. Cuando la pelcula este seca, pase la lmina a travs de la llama del
mechero unas 2 a 3 veces para as fijarlo con calor, cuidando que la
pelcula este hacia arriba y que la lmina no se recaliente. La sobre
exposicin al calor puede alterar la forma y estructura del
microorganismo
EJERCICIO NRO. 02 TINCION SIMPLE CON COLORANTES BASICOS
La tincin simple constituye una tcnica sencilla y directa que a travs del
uso de un colorante, nos permite constatar y diferenciar los
microorganismos de su entorno. Los colorantes bsicos, los cuales se utiliza
ms comnmente para teir microorganismos, difieren en el grado de
reactividad con las clulas, estas generalmente tiene una superficie cargada
negativamente cuando el pH del medio es cercano a la neutralidad,
entonces se aplica el azul de metileno ( ion positivo) que reacciona con la
pared celular por medio de enlaces inicos dbiles que estn cargadas
negativamente a la tasa ms baja, tomando de 50 a 60 segundos para teir
apropiadamente una preparacin microbiana. El cristal violeta es ms
reactivo y generalmente requiere solo 10 segundos. La carbolfucsina es un
colorante an ms rpido, requiriendo solo 5 segundos. Su reactividad es
tan grande que ciertamente puede dificultar una tincin apropiada, sobre
todo cuando la muestra contiene abundante materia orgnica.
MATERIALES

Laminas fijadas de microorganismos

Aceite de inmersin
Vaso de precipitados de 100 ml
Colorantes bsicos
Azul de metileno
Cristal violeta
Carbolfucsina
Papel secante
Piseta de agua
Soporte para tincin

PROCEDIMIENTO
1. Coloque las lminas fijadas de microorganismos sobre el soporte para
tincin.
2. Agregue 5 a 6 gotas de cada colorantes dejando que acten por un
tiempo de 60 segundos para el azul de metileno; 10 segundos para
que el cristal violeta; y 5 segundos para la carbolfucsina.

3. Una vez cumplido el tiempo para los colorantes, lave cada lmina con
agua destilada.
4. Seque las lminas al aire o dentro del papel secante.
5. Examine las preparaciones teidas bajo el objetivo de inmersin
(100X) de un microscopio compuesto.
6. Elabore esquemas de sus observaciones destacando las diferencias
en tamao forma, y agrupaciones que se presenten.