Tincin de Ziehl Neelsen

Procedimiento:
Frotis:
Colocar los frascos con las muestras en orden consecutivo de izquierda a
derecha
2.
Poner las lminas en la mesa (en este caso dentro de la CSB) y numerarlas
con los nmeros correspondientes a las muestras usando 1/3 de la lmina al
reverso (para que al momento de hacer la decoloracin no se borre)
3.
Abrir el frasco de la muestra de manera firme y lenta
4.
Ver el contenido del frasco y obtener la parte ms purulenta
5.
Con
un
palillo
de
madera
escoger
la
porcin
ms
purulenta/sanguinolenta/slida, no se debe batir demasiado la muestra
6.
Extender la muestra en un frotis de una capa no muy gruesa (sobre loso 2/3
de lmina sobrante) sin llegar a los bordes
7.
Si es necesario, desmenuzar las partculas grandes con las puntas del palillo
de madera quebrado por la mitad
8.
Desechar el aplicador en un frasco de boca ancha con alcohol o cloro
9.
Dejar secar el frotis
10. Tomar la lmina por el extremo numerado con la muestra hacia arriba,
pasarla tres veces por la llama del mechero para fijar el frotis, dejar enfriar el
frotis (2-3 min.)
Tincin:
1.
Cubrir todo el porta-objeto con fucsina filtrada
2.
Calentar hasta la emisin de vapores (aprox. 5 min.)
3.
Lavar con agua (poniendo la lmina de una manera inclinada para evitar
barrer la muestra) y escurrir
4.
Cubrir con solucin decolorante durante 2 min.
5.
Lavar con agua (poniendo la lmina de una manera inclinada para evitar
barrer la muestra) y escurrir
6.
Cubrir con azul de metileno de 45seg.-1min.
7.
Lavar con agua y luego poner en la tabla de secado (para escurrir)
1.

Reporte de resultados:

Informe
Negativo (-)
No. Exacto de
bacilos
Positivo (1+)
Positivo (2+)
Positivo (3+)

Nmero de BAAR
No se observaron BAAR en 100
observados (C.O.)
Se observan de 1-9 BAAR en 100 C.O.

campos

Se observa de 10-99 BAAR en 100 C.O.

Se observa de 1-10 BAAR x campo en 50 C.O.
Se observa ms de 10 BAAR x campo en 20 C.O.

Cmo hacer una tincin de Gram

1Preprate para el trabajo de laboratorio.

2Esteriliza un
microscopio.

portaobjetos

de

vidrio

para

3Coloca la muestra en el portaobjetos.

4Fija la muestra por calor.

5Posiciona el portaobjetos en una bandeja para

tincin.

6Empapa la muestra con cristal violeta

7Enjuaga suavemente el cristal violeta.

8Empapa la mancha con yodo y luego enjuaga

9Agrega un
rpidamente.

decolorante

luego

enjuaga

10Empapa la mancha con

secundario y luego enjuaga

un

colorante

11Seca el portaobjetos

12Identifica las bacterias Gram positivas en el

microscopio

13Desecha los materiales

TINCIN DE ESPORAS (WIRTZ-CONKLIN)

La tincin especfica de esporas requiere
dos colorantes:
1.- Verde malaquita: capaz de teir las
esporas en caliente.
2.- Safranina: colorante de contraste que tie las formas vegetativas.
Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado
con agua, y s lo harn las formas vegetativas, que quedarn teidas con el
segundo colorante.
REALIZACIN
Se emplearn cultivos en fase estacionaria para dar lugar a que las bacterias
produzcan las esporas. Esta tincin es delicada en su realizacin y para poder
obtener unos resultados satisfactorios hay que seguir cuidadosamente las
instrucciones.
1.

Preparar los frotis bacterianos indicados.

2.
Teir
con
verde malaquita. Con unas
pinzas de madera colocar la
muestra encima de la llama
del mechero de forma que el
colorante humee durante 5
min.
Nota: evitar que la
muestra hierva. Aadir ms
colorante si ste se evapora;
es importante que la muestra
no se seque.
3.
Lavar
con
abundante agua el exceso de
colorante.
4.
Teir
safranina 1 min.
5.

Lavar con abundante agua el exceso de colorante.

6.

Secar la preparacin.

con

7.
Observar la preparacin al microscopio. Anotar la disposicin y
la morfologa de las tres especies del gnero Bacillus.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

La posicin y la morfologa de la endospora en el interior de la bacteria
constituyen un carcter taxonmico til para diferenciar especies dentro de un
mismo gnero.