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Mtabolisme cellulaire - 1

PARTIE 4.

LA PHOTOSYNTHSE

Introduction :
Les vgtaux verts nont pas besoin dun apport de matire organique. Ils sont autotrophes
pour le carbone et autotrophes pour lazote.
Lautotrophie pour le carbone est ralise au niveau des chloroplastes : grce au CO2 de
lair, la plante synthtise des oses, puis toutes les autres catgories de molcules. Lnergie
lumineuse est ncessaire pour raliser ces ractions, dites de photosynthse. Il sagit donc
bien dun mtabolisme de photolithotrophie.
6 CO2 + 6 H2O C6H12O6 + 6O2
Rduction du CO2 en matire organique
Comment la plante collecte-t-elle de la lumire au niveau des chloroplastes ? Comment
cette nergie lumineuse est-elle convertie en nergie potentielle chimique sous forme de
molcules organiques ? Quelles sont les ractions permettant de passer du carbone minral
(CO2) au carbone organique (oses, aa) ?

I. LA

PHOTOSYNTHSE

OBSERVATIONS ET RSULTATS EXPRIMENTAUX

A. Les chloroplastes sont les organites de la photosynthse, rappels


Les chloroplastes sont prsents dans les cellules des feuilles (cellules du parenchyme
lacuneux et palissadique i.e. le msophylle) mais aussi dans les cellules des tiges.
Les chloroplastes sont des organites double membrane. Un rseau de mb interne forme
les thylakodes. On compte donc trois compartiments : espace intermembranaire, stroma et
lumen des thylakodes.
Les mb externe et interne sont constitues denviron 60% de lipides pour 40% de protines.
Les protines des membranes sont essentiellement des protines transporteurs assurant
les changes entre le stroma et le cytosol. Mais il semble que la mb externe soit plus
permable que la mb interne.
Le stroma contient une solution aqueuse, trs concentre, en particulier en protines. On y
trouve lADN du chloroplaste (1 molcule circulaire), des ribosomes et les enzymes
ncessaires lexpression du gnome du chloroplaste. Le stroma contient aussi les
enzymes ncessaires la rduction fixation du CO 2, la plus connue tant la Rubisco
Les thylakodes sont constitus dune membrane et forment un compartiment : le lumen.
On distingue les thylakodes granaires et intergranaires. Il existe une continuit entre
thylacodes granaires et intergranaires permettant la diffusion des molcules insres dans
la membrane. L'ensemble des lumens peut tre considr comme un compartiment unique.
La mb dun thylakode contient approximativement : 40% de phospholipides, 10% de
pigments et 50% de protines. Cest le lieu de la collecte de la lumire. Parmi les protines :
- les enzymes ATP synthase
- des protines de transfert dlectrons (chane de transfert dlectrons)
- Complexes protines pigments, les photosystmes, qui captent les photons
On remarque ici la relation structure fonction des thylakodes : leur structure plisse
dveloppe une grande surface de collecte de la lumire, tout en tant maintenue dans un
volume restreint.
La coupe de feuille permet de localiser les voies dchanges :
- entre du CO2 par les stomates et transit par le parenchyme lacuneux
- arrive de leau par la sve brute et vaporation via les stomates
- Rejet de lO2 par les stomates

B. La photosynthse se droule en deux phases : mise en vidence


1) Exprience de Hill
On travaille sur un isolat de thylakodes (extrait de chloroplastes, obtenus eux mme
partir de feuilles, protocole non dtaill). On mesure la concentration en O 2 de lenceinte
grce une sonde oxymtrique.
Rsultats
1- Dans un premier temps, les chloroplastes la lumire ne dgage pas de O 2 : les
thylakodes semblent ne pas fonctionner sans le reste du chloroplastes.

F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 2

2- A t, on injecte le ractif de Hill qui est du ferricyanure de potassium, surtout un oxydant


puissant (accepteur dlectrons donc). A la suite de linjection, seulement en prsence de
lumire, on observe un dgagement de O 2.
Interprtation : au niveau de thylakodes, il se droule une raction doxydorduction, qui
conduit la formation de O2 : H2O serait oxyd en O2. Le ractif de Hill jouant le rle de
laccepteur dlectrons (oxydant) : mais quel est loxydant suffisamment fort pour oxyder
leau ? En effet, le couple O2/H2O a un E trs lev (O2 est un fort oxydant). De plus, la
lumire est indispensable la ralisation de cette raction doxydorduction : apporte-t-elle
lnergie ncessaire la ralisation de la raction ?
2) Exprience de Ruben et Kamen (1940)
Une suspension de chlorelles (algues vertes unicellulaires) est fortement claire. Leau de
leur solution est marque radioactivement loxygne 18 (H 2 18O). Les chercheurs voulaient
savoir ce que devient loxygne de leau, daprs lquation bilan, 2 possibilits :
- hypothse 1 : loxygne se retrouve dans les molcules organiques
- hypothse : loxygne se retrouve dans le dioxygne libr.
Ils ont donc analyser le dioxygne libr par les chlorelles : il contient du 18O en proportions
voisines de celles de leau.
Cette exprience permet de confirmer quil y oxydation de leau :
H20 O2 + 2H+ + 2eDans lexprience de Hill, le ractif de Hill est laccepteur des ces lectrons et
permet la raction.
Mais il nous manque, lautre demi raction, quel est laccepteur des lectrons dans les
chloroplastes ???
On parle de photo-oxydation de leau :
- Raction doxydorduction avec le couple O 2/H2O (cf. Hill et Ruben & Kamen)
- la raction ncessite de la lumire (cf. Hill)
- elle a lieu dans les thylakodes (cf. Hill)
- laccepteur dlectrons est-il hors des thylakodes ?
3) Exprience de Gafron (1951)
On utilise encore une suspension de chlorelles trs claire. On fait buller du CO 2 mais avec
le carbone marqu (14C) afin de pouvoir mesurer la quantit de CO 2 consomme au cours
du temps. Les chlorelles subissent une priode dclairement pendant 1heure puis on les
place lobscurit.
Rsultats : lincorporation de CO2 se prolonge quelques secondes (environ 20s) aprs le
passage lobscurit.
Interprtation Les ractions dincorporation du CO2 dans les molcules organiques ne
ncessitent pas directement la lumire puisquil y a qq secondes de latence.
Hypothse : les ractions se droulant la lumire ( phase claire ) produisent des
molcules utilises lors de ractions ne ncessitant pas la lumire ( phase sombre ).
Bilan :

6 CO2 + 6 H2O C6H12O6 + 6O2


Rduction du CO2 en ose (phase sombre)
Photooxydation de leau

II. LA

PHASE DE PHOTO OXYDATION DE LEAU

A. Les pigments photosynthtiques : des molcules capables dabsorber la


lumire
1) Les pigments photosynthtiques : nature chimique
Comment extraire et sparer les pigments dune feuille ? On peut raliser une
chromatographie sur papier pour une tude simple et qualitative. Le solvant monte par
capillarit dans le papier : les pigments sont entrans, dautant plus quils sont solubles
dans le solvant. Il sagit en fait des pigments prsents dans les mb des thylakodes. On
retrouve :
- les carotnodes regroupant les carotnes et les xanthophylles. Ce sont des pigments
drivs isoprniques, ils sont hydrophobes (et donc bien stables dans les mb). Jai mis la
F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 3

formule du carotne, les xanthophylles ont une formule trs proche mais correspondent
une forme oxyde (cf. TP Electrophorse chromatographie). On remarque les doubles
liaisons conjugues : les lectrons peuvent se dlocaliser, ce qui est favorable
labsorption de lumire. Les carotnodes absorbent les longueurs donde entre 440 et
500nm (2 pics 440 et 480nm environ). Ce qui correspond aux longueurs donde du bleu au
vert, ils nabsorbent quasiment pas dans les longueurs donde du rouge orange (vers
700nm), do leur couleur.
- les chlorophylles sont constitues dun groupement ttrapyrolique (comme lHb ou les
cytochromes) mais magnsium. Mais il faut noter une queue phytol, constitue dune
chane aliphatique carbone (20C environ) trs hydrophobe qui stabilise la chlorophylle
dans les membranes. On distingue la chlorophylle a et la chlorophylle b qui diffrent dun
groupement (mthyle et aldhyde). L aussi les lectrons du groupement ttrapyrole
peuvent tre dlocaliss et absorber certaines longueurs donde. En loccurrence, les
chlorophylles ont deux pics dabsorption : entre 400 et 500nm (bleu), et vers 700nm
(rouge). Elles nabsorbent pas le vert do leur couleur (qui domine dailleurs).
Rq : spectre dabsorption = % de lumire absorbe pour chaque longueur donde

Spectre dabsorption, spectre daction


On peut aussi construire des spectres daction. En fait, on mesure lactivit
photosynthtique, ici dune algue unicellulaire selon la longueur donde (on les expose
des lumires de longueur donde prcise). Lactivit photosynthtique peut tre mesure
par exemple par le rejet de dioxygne.
On mesure en parallle le spectre dabsorption de lalgue (et non pas de pigments isols).
Rsultats et interprtation : on peut voir une remarquable concidence entre les longueurs
donde absorbes et lintensit de la photosynthse. Les 2 pics ressemblent un peu ceux
de la chlorophylle : un dans le bleu et un dans le rouge. Mais ils sont plus larges : les autres
pigments participent aussi la photosynthse.
2) Les pigments photosynthtiques : proprits dabsorption de lnergie
lumineuse
La lumire peut tre considre comme :
une onde lectromagntique. Comme toute onde, elle est caractrise par une longueur
donde (, homogne une distance, en nm), distance entre le sommet de 2 ondes. On
peut aussi dfinir la frquence (, mesure en s-1) : nombre de crtes par seconde. Il existe
une relation simple liant les deux paramtres : c= o c est la clrit de la lumire, i.e.
300 000 km/s.
un ensemble de particules : les photons. Chaque photon porte une certaine quantit
dnergie (1 quantum dnergie). La formule donnant la quantit dnergie dun quantum
est : E=h=h.c/. avec h la constante de Planck 6,63.10-34 J.s)
Sunlight is like a rain of photons of different frequencies . La lumire du soleil est
constitue de photons de frquences varies, situes dans le visible ou non (UV).
Lorsquun pigment reoit un photon, il absorbe une nergie (selon la formule de Planck) :
plus la longueur donde est leve, plus lnergie reu est faible (et inversement). Le
pigment passe de son tat dnergie bas (et stable) vers un tat dit excit, de plus haute
nergie (instable).
Chl + h Chl*
Chl* notation pour ltat de transition de haute nergie, instable.
Plus prcisment, un lectron change de niveau nergtique. Il existe alors 4 faons
possibles de restituer lnergie absorbe :
- par mission de chaleur (nergie thermique, perdue)
- par mission dun photon de plus basse nergie (cest--dire de plus grande longueur
donde). Cest le phnomne de fluorescence.
- Par transfert dexcitation par rsonance : un pigment transmet son nergie
directement un autre pigment voisin, qui passe son tour ltat excit (lectron
passant un plus niveau nergtique). Il ny a donc pas dmission de photon. Il faut
pour cela que les pigments soient trs proches. Il faut aussi que les niveaux
dnergie de ltat excit soient quivalents.

F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 4

Par transfert dun lectron. Lnergie reue provoque une diminution du potentiel
redox et un lectron peut tre cd un accepteur. Llectron pass ltat de plus
haute nergie, est cd plus facilement
Mais comment ces pigments sont-ils organiss dans la membrane du thylakode ? Comment
captent-ils lnergie lumineuse ?
-

B. Les photosystmes, les structures de collecte de la lumire gnrent un


gradient de protons et du pouvoir rducteur
1) Les photosystmes collectent la lumire
Emerson, dans les annes 1950, a ralis des mesures de lefficacit de la photosynthse. Il
utilise le rendement quantique comme paramtre destimation de lefficacit.
Rdt quantique = (quantit dO2 produit)/(nb de photons absorbs)
Emerson a mesur le rendement quantique obtenu avec diffrentes longueurs donde (sur
des chloroplastes), en particulier 680 et 700nm
Rsultat : le rendement quantique obtenu avec le mlange (680nm + 700nm) est suprieur
la somme des rendements quantiques obtenus avec 680nm ou 700nm.
Rdt(680+700)>rdt(600)+rdt(700)
Interprtation : il existe deux structures de collecte de la lumire, lune absorbant
prfrentiellement vers 680nm lautre vers 700nm. Mais elles fonctionnent en synergie,
elles sont complmentaires lune de lautre : le rdt quantique est beaucoup plus lev,
lorsquelles fonctionnent toutes les deux.
On les appelle les photosystmes : il y a le photosystme II, qui absorbe 680nm et le
photosystme I, qui absorbe 700nm.
Organisation et principe du fonctionnement dun photosystme
Un photosystme est un complexe protines/pigments (carotnodes, chlorophylles)
insr dans la membrane des thylakodes. On distingue :
- une antenne collectrice qui reoit lnergie lumineuse, lnergie y est transmise de
pigment pigment par rsonance (transfert dexcitation par rsonance). Pour que le
transfert dnergie par rsonance se fasse il faut (1) que les pigments soient trs proches,
ce qui est le cas dans un photosystme. (2) Il faut aussi que les niveaux dnergie de ltat
excit soient quivalents. Un peu dnergie est perdue chaque transfert.
- un centre ractionnel, il est constitu dune (ou 2) chlorophylle a qui est le dernier
accepteur dnergie. Lnergie reue provoque une diminution du potentiel redox et un
lectron peut tre cd un accepteur. La chlorophylle a du centre ractionnel, lorsquelle
passe dans son tat excit, a un potentiel redox abaiss, elle peut cder un lectron ( un
plus fort oxydant)
Chla+/chla*
Forts rducteurs

Aox/Ared

lumire

Forts oxydants

Dox/Dred
+

Chla+/chla

Finalement, la raction ralise est la suivante, normalement non spontane :


Drd + Aox Dox + Ared
2) apportant lnergie pour un transfert dlectrons
On a vu quil existe deux photosystmes :
- le photosystme II ou P680 absorbe 680nm. Il est majoritairement situ au niveau
des thylakodes granaires.
F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 5

Le photosystme I ou P700 absorbe 700nm. Il est majoritairement situ au niveau


des thylakodes intergranaires, en contact avec le stroma.

Le photosystme II permet loxydation de leau, il agit donc comme un oxydant trs


puissant (plus fort que O2 lui-mme un oxydant trs fort). Il comprend :
- lantenne collectrice transmembranaire avec des chlorophylles a, b, des carotnes
associs un complexe protique.
- le centre ractionnel transmembranaire est form de 2 protines, dun dimre de
chlorophylles a, de phophytine des quinone A et B. Lorsque la chl a est excite, son
potentiel redox chute, elle peut cder un lectron la phophytine (Accepteur dlectons).
Elle passe ltat oxyd chla+ (ltat excit tant instable, elle revient ltat de bas)
chla* chla+* + echla+* redevient instantanment chla+
phophytine ox + e- phophytine rd
- un centre de Mn, lieu prcis de loxydation de leau, situ ct lumen.
La raction est :
2H2O O2 + 4H+ +4eLa production de 1 O2 libre 4 lectrons, le centre de Mn a un fonctionnement cyclique 5
tats permettant de librer les lectrons 1 par 1. Et dviter par consquent la formation
dintermdiaires toxiques. Le donneur dlectrons qui rgnre la chla partir de chla+ est
donc ici leau via le centre de Mn.
Remarque : le photosystme II est localis majoritairement au niveau des thylakodes
granaires.
La phophytine peut cder ses lectrons la quinone A (QA), qui les cde immdiatement
la quinone B (QB). Enfin cest la plastoquinone (PQ) qui reoit 2 lectrons et 2 protons, elle
passe ltat rduit (PQH2). A ltat rduit, elle peut se dissocier du complexe et elle
devient mobile dans la membrane. Elle emporte ainsi les lectrons vers le complexe b6f.
Remarque : la plastoquinone a une structure proche de la quinone mitochondriale, en
particulier une queue hydrophobe les stabilise dans la membrane.
Le complexe b6f reoit les lectrons. Il sagit dun complexe protique 4 sous units,
avec plusieurs groupements prosthtiques : 2 hmes de type c, 1 hme de type f, un
groupement fer soufre. La structure et le fonctionnement ressemblent un peu ceux du
cytochrome c rductase.
La plastoquinone (QH2) cde 1 lectron au groupement FeS. FeS transmet lhme c. Cyt c
cde la plastocyanine qui est un transporteur mobile. Au niveau du complexe b6f, les
transferts dlectrons se font dans le sens des potentiels croissants, donc spontanment.
Lnergie libre par les ractions doxydorductions est convertie en un gradient de
protons. Le complexe b6f fonctionne comme une pompe protons (vers le lumen).

F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 6

Fonctionnement du complexe b6f

Hmes b

La plastocyanine est une petite protine avec un atome de Cu (Cu 3+/Cu2+). Il sagit dune
protine majoritairement hydrophile, elle est dissoute ct lumen mais elle reste en contact
avec la membrane thylakodienne. Elle cde ses lectrons au complexe P700, le
photosystme I.
Le photosystme I est ltat excit un trs fort rducteur, il permet la formation de
NADPH,H+.
- L'antenne collectrice renferme des molcules de chorophylles a, de chlorophylles b et des
carotnodes. Et des protines
- Le centre ractionnel contient un dimre de chlorophylles a pige (P700), une molcule
(A) spcialise dans la capture de l'lectron du P700 ainsi que diffrents centres fer-soufre,
qui jouent le rle de transporteurs d'lectrons jusqu' l'accepteur final du PSI constitu par
la ferredoxine (Fd).

F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 7

ox
A0 red

PC ox

PCred

P7

P700

Remarque : le PSI est lui situ majoritairement au niveau des thylakodes intergranaires. Ce
qui permet un accs aux molcules du stroma impliques dans les ractions
(NADP+/NADPH,H+)
La ferredoxine est une petite protine plutt hydrophile, situe sur la face stroma de la
membrane. Elle cde ses lectrons laccepteur final, un NADP +. La rduction du NADP+ en
NADPH,H+ se fait au niveau dun complexe enzymatique ferredoxine NADP rductase.
Bilan :
2 H2O O2 + 4H+ +4eE=0,82V
2 NADP+ + 4H+ +4e- 2 NADPH,H+
E=-0,32V
+
+
2 H2O + 2 NADP O2 + 2 NADPH,H
rG=+104kcal/mol = +437kJ/mol
La raction globale est endergonique, trs endergonique. Un apport dnergie extrieur est
ncessaire : cest lnergie lumineuse.
Il sagit donc bien dune conversion dnergie : lnergie lumineuse est convertie en nergie
potentielle chimique (sous forme de pouvoir rducteur). Le pouvoir rducteur est sous
forme de NADPH,H+. Il est fabriqu du ct du stroma.
Toutefois, on a vu la raction globale na pas lieu directement, elle est dcompose en
plusieurs ractions au niveau des complexes. Une partie des ractions correspond un
transfert dlectrons dans le sens des potentiels croissants donc spontan. Lnergie est l
convertie en gradient de H+, les protons saccumulent dans le lumen.
- Le complexe b6f agit comme une pompe, il transfre les protons dans le lumen.
Mais le gradient nest pas form que par pompage :
- la photooxydation de leau libre 4 protons, au niveau du lumen. Seuls les lectrons
sont transfrs dans la chane de transports des lectrons.
- La formation du NADPH,H+ se fait du ct stroma, et prlve des protons libres.
- La rduction de la plastoquinone utilise aussi 2H+ qui sont prlevs du ct stroma.

C. Le gradient de protons est utilis dans la synthse dATP


1) Photophosphorylation : exprience et principe
En 1966, des expriences ont t menes sur des chloroplastes isols. On travaille
lobscurit.
1- Les chloroplastes sont placs dans une solution tampon pH 4 pendant plusieurs
heures. Un quilibre est atteint : le stroma comme le lumen sont pH=4.
F. Brondex-E. Paitel

P7

Mtabolisme cellulaire - 8

2- Les chloroplastes sont placs dans une solution pH 8 contenant aussi ADP et Pi.
Transitoirement, on a cre un gradient artificiel. pH=4 dans le lumen. pH=8 dans le
stroma.

Stroma pH 4

Stroma pH 8
Solution pH 8 avec ADP et Pi
Solution pH 4
ADP

Lumen pH 4

Aprs ltape 1

H+

ATP

Lumen pH 4

Rsultat : synthse dATP 1

Aprs ltape 2

Rsultats : on observe une synthse dATP, en labsence de lumire et sans chane de


transfert des lectrons fonctionnelle.
Interprtation : seul le gradient de protons mis en place artificiellement peut expliquer la
synthse dATP.
Le principe est le mme que dans la mitochondrie. Le gradient de protons mis en place
entre le lumen et le stroma, est une forme dnergie potentielle, on parle de force proton
motrice.
Ce

rG (concentration ) RT ln

Ci

Ce
Ci

rG (lectrique ) zFV zF (Vi Ve )

lumen
Do

rGRT ln

stroma

H zF(ViVe)2,303.RT.log H zF(ViVe)2,303RT(pHe pHi)zF(ViVe)


H
H
e

On prend T=310K, F=23,06 kcal. V-1.mol-1, R=2cal.mol-1.K-1

rG 2,303.RT .pH zFV

Et pH=pHe-pHi=-3,5et V=Vi-Ve=0V

F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 9

Alors rG=-5kcal/mol lorsque les protons retournent du lumen au stroma. On retrouve les
rgles de la thorie chimioosmotique de Mitchell (1961).
2) Fonctionnement de lATP synthase
LATP synthase du chloroplaste et lATP synthase de la mitochondrie sont trs proches par
leur structure et leur fonctionnement. LATP synthase chloroplastique est constitue de 2
sous parties : cF0 et cF1.
- Le domaine Fo est un complexe protique intgr la membrane. La stoechiomtrie des
sous-units est 1a, bb', 10c. Elle est transmembranaire.
- les sous units c (trs hydrophobes), sont formes de 2 hlices
transmembranaires. Les sous units c forment une "couronne" au sein de la
membrane.
- la sous unit a forme 2 demi canaux protons permettant le passage des protons
entre les deux faces de la membrane lintrieur de la bicouche. Le passage dun
demi canal lautre seffectuant via les sous units c
- les 2 sous units bb' incluent une partie transmembranaire et un domaine trs
polaire, qui stend lextrieur de la membrane et tablissent une liaison avec la
partie F1 de lenzyme via la sous unit .
- Le domaine F1, hydrophile, (qui fait saillie dans le stroma) comprend 5 polypeptides
(sous-units , , , , ,). La stoechiomtrie des sous-units est 3, 3, 1, 1, 1. Les ATP
synthases sont localises majoritairement dans les thylakodes intergranaires. Ainsi, la
partie cF0 (encombrante lchelle molculaire) est toujours au contact du stroma. De
plus, ATP, ADP, Pi sont des molcules prsentes dans le stroma, ainsi elles peuvent
rencontrer les ATP synthases.
Les sous units et forment un anneau. Les portent les sites catalytiques. Elles peuvent
adopter 3 conformations (L, T et O) selon un cycle identique lATPase de la mitochondrie.
On ne reprend donc pas.

D. Le transfert cyclique dlectrons permet la synthse seule dATP


Les lectrons de la chlorophylle a du centre ractionnel de P700* sont transfrs la
ferredoxine (via les intermdiaires vus prcdemment). Mais, au niveau du complexe FNR
(ferredoxine, NADP reductase), la ferredoxine ne cde pas ses lectrons au NADP +. Les
lectrons sont transfrs au complexe b6f. Les potentiels redox sont compatibles avec cette
raction : E(b6f)=0V et
E(ferdx)=-0,4V. La raction est exergonique. Dailleurs, le complexe b6f convertit lnergie
en gradient de protons.
Ensuite, le complexe b6f transmet ses lectrons la plastocyanine, qui son tour les
cdent nouveau au photosystme I (P700). Et la boucle recommence.
Quelles sont les consquences de ce transfert cyclique dlectrons ?
- Pas de pouvoir rducteur : aucun NADPH,H+ nest obtenu.
- Le gradient de protons est en place : de nombreux ATP sont synthtiss.
Il sagit dune modalit dajustement en fonction des besoins et disponibilits de la cellule.
Par exemple, le transfert cyclique peut se mettre en place si il ny a pas de NADP +
disponible (i.e. si il ny a que du NADPH,H +).
A lissue de la phase dite claire, le chloroplaste a synthtis du pouvoir rducteur sous
forme de NADPH,H+ et de lATP. A quoi sont utilises ces 2 molcules ?

III. PHASE

DE FIXATION DU CARBONE

A. Lexprience historique de Calvin et Benson


Exprience de Calvin et Benson (1962). Il sagit encore dune exprience sur des chlorelles,
algues chlorophylliennes unicellulaires. Elles sont maintenues en suspension dans un
rcipient clair o barbote de lair enrichi en CO 2.
Une pompe permet de prlever un volume fixe de suspension, elles sont envoyes dans un
systme de tube. Le dbit est contrl donc le temps pass dans le circuit lest aussi.
A un point donn du circuit, on ralise une injection de 14CO2 radioactif. On peut donc choisir
le temps dexposition au dioxyde de carbone radioactif.
En fin de parcours, les chlorelles sont tues dans du mthanol bouillant.
F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 10

Ensuite, on cherche savoir dans quelles molcules a t intgr le carbone marqu. On


extrait les molcules des chlorelles et on ralise une radiochromatographie. Comme toute
chromatographie, il y a un support fixe et un luant (solvant) mobile, qui entrane les
molcules, ici selon leur solubilit. Cest une chromatographie en 2D : une premire
migration dans une direction, puis une 2 me migration 90 de la 1re. Les molcules sont
rvles grce la radioactivit du carbone.
Rsultats : - dure dexposition au CO2marqu : 1s (non reprsent). Un seul compos est
apparu, cest lAPG (3 Phospho glycrate, C3).
- Dure dexposition : 5s. On observe en plus : des trioses phosphate (C3), des hexose
(C6), du Ribulose 1,5 biP
- Dure dexposition : 5 min. Dautres substances varies ont t synthtises : des
acides amins, en particulier.
Interprtation : on obtient lordre de synthse des molcules partir de la fixation du CO 2.
La fixation du CO2 conduit la formation du 3P glycrate (C3). Puis les trioses phosphates
(C3) sont synthtiss et les hexoses (C6). Le ribulose 1,5biP est un pentose, quelle place at-il dans les synthses ? Peut-tre la rgnration, permettant un fonctionnement cyclique.
B.

Le cycle de Calvin Benson ou cycle de rduction du CO 2

Le CO2 est fix sur une molcule de ribulose 1,5biP, cest une carboxylation. Cela permet
dobtenir 2 molcules de 3 P Glycrate (ou APG)
C5 + CO2 C6 + H2O C3 + C3
rG=-12,4kcal/mol raction
exergonique
Ru diP
APG
Cette raction est catalyse par la Ribulose 1,5 bi phosphate carboxylase oxygnase ou
Rubisco. Cest la protine la plus abondante des feuilles. Elle est constitue :
- de 8 grosses sous units (56 kDa), codes par le gnome du chloroplaste. Chaque
grosse sous unit porte 1 site catalytique, et 1 site de rgulation.
- De 8 petites sous units (14 kDa), codes par le gnome nuclaire. Rle des petites
sous units pas clair
Comme son nom le suggre, la Rubisco a une activit carboxylase (substrat CO2, fix sur le
RudiP), mais aussi une activit oxygnase. Le substrat est O2 ; elle peut catalyser la fixation
dun O2. Cest le dbut dune suite de raction qui aboutit un rejet de CO 2. Cest pourquoi
on parle de photorespiration. En fait, elle accepte 2 substrats (CO 2 et O2) qui sont en
comptition. Notons que laffinit pour le CO 2 est beaucoup plus leve (la carboxylation
est majoritaire). A 25C et des pressions partielles atmosphriques normales de gaz
carbonique et doxygne, 2 molcules sur 10 de RuBP sont oxygnes au lieu dtre
carboxyles.
Mais le 3Pglycrate, rsultant de la raction de fixation du CO 2, nest pas un ose. Une
rduction du 3P glycrate a lieu ce qui aboutit un ose. Mais il est dabord phosphoryl en
1, 3 biP glycrate (un phosphate rajout sur le C1). Cest une raction endergonique, elle
est couple avec lhydrolyse de lATP. En fait, cest, classiquement, un transfert de
groupement phosphate de lATP vers le 3P glycrate. Il sagit bien sr de lATP synthtis
lors de la phase photochimique : 1er couplage entre les 2 phases.
Puis le 1,3 biP glycrate est rduit en glycraldhyde 3P. Le donneur dlectrons est le
NADPH,H+, qui retourne donc sa forme oxyde (NADP +). Cest nouveau une raction
utilisant un des prodits de la phase photochimique.
Le glycraldhyde 3P est un triose phosphate.
A partir du glycraldhyde3P, 2 voies sont possibles :
- une partie sert la rgnration du RudiP. Il sagit de plusieurs ractions conscutives
un peu compliques, car obtenir un pentose (C5) partir dun triose (C3) nest pas simple.
Dailleurs, ces ractions ne seront pas dtailles.
- une partie sert aux synthses diverses.
Les trioses peuvent tre exports hors du chloroplaste, du glucose et du fructose
sont produits. Le principe est assez simple, 2 trioses (C3) sont lis pour former un hexose
(C6). A partir de ces 2 hexoses, le saccharose est obtenu. Il peut tre mis en rserve
temporairement dans la vacuole. Il peut tre export via la sve labore, dans le phlome,

F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 11

destination des organes consommateurs (racines) ou encore des organes de rserve


(tubercules)
Les trioses peuvent tre convertis en glucose, puis les glucoses sont polymriss sur
place en amidon. Cest un stockage temporaire (de jour). Il y a exportation sous forme de
saccharose, la nuit (cf. cas prcdent)
Les trioses peuvent servir la synthse dautres molcules organiques. En 1 er lieu, la
synthse des acides amins qui a lieu aussi dans les chloroplastes. Cette synthse se fait
partir dammoniac (NH3) ou de nitrates (NO3-). Mais une cellule vgtale peut aussi
synthtiser des lipides partir des trioses (non dtaill).

Bilan nergtique :

Pour synthtiser une molcule de glucose, en 6 tours de cycle.

A chaque tour de cycle de Calvin, l'assimilation d'une molcule de CO 2 exige la


consommation de 3 ATP et 2 molcules de NADPH,H + dlivrant les lectrons de rduction.
Petite estimation du rendement nergtique de la photosynthse :
- Loxydation complte dune mole dhexose permet de rcuprer 2804kJ. Cest
lnergie potentielle obtenue aprs 6 tours de cycle.
- On considre habituellement quil faut 8 moles de photons pour fixer 1 mole de CO 2.
Or lnergie contenue dans 1 mole de photons de =680nm : 175kJ. Donc lnergie
extrieure ncessaire la synthse dune mole dhexose vaut : 8x6x175=8400kJ
Le rendement est le rapport de lnergie potentielle obtenue par lnergie entrante
Rdt=2804/8400=33%.
Le chloroplaste rcupre, sous forme dhexose, 33% de lnergie lumineuse utilise dans les
thylakodes

IV. PHOTOSYNTHSE

EN C3, PHOTOSYNTHSE EN C4
Rappel : la Rubisco a une double activit catalytique :
- carboxylation du RudiP (fixation d1 CO2)
- oxygnation du RudiP, le RudiP ragit avec un O 2. Cest une suite de ractions qui
aboutit la formation de CO2 et de srine (un aa). Son intensit augmente avec
lintensit lumineuse. Do le nom de photorespiration.
O2 et CO2 sont en comptition au niveau des sites actifs de la Rubisco. Une partie non
ngligeable des produits de la photosynthse part dans la photorespiration. Elle a t
considre comme un gaspillage nergtique chez la plante. La photorespiration induit une
diminution de lefficacit de la photosynthse. (Par exemple on nen a pas tenu compte
dans notre bilan ci-dessus). Mais apparemment elle est ncessaire dans le cadre de
certaines synthses.
La part relative de la photorespiration et de la carboxylation dpend de la teneur en CO 2, en
O2 et de la temprature. Quand la temprature augmente, le CO 2 est moins soluble, lapport
de CO2 se fait plus mal vers les cellules chlorophylliennes et les chloroplastes.
F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 12

Il en va de mme pour le dioxygne mais lui est produit sur place par la phase
photochimique.
Bilan : quand la temprature augmente, la part de loxygnation augmente aux dpens de
la carboxylation.
La photosynthse quon vient de dcrire est dite photosynthse en C3, car le 1 er compos
form par la fixation du CO2 est le 3Pglycrate, une molcule 3C. Mais il existe un autre
mtabolisme, formant une molcule 4C : la photosynthse en C4.

A. Les plantes en C3 et en C4 diffrent par des caractres anatomiques et


cytologiques
On compare une coupe transversale de feuille de :
- Mas (Zea mays), une gramine (Monocotyldone, crale) tropicale, ralisant une
photosynthse en C4.
- Avoine (Avena sativa), une gramine (Monocotyldone, crale) tempre, ralisant
une photosynthse en C3.
Plante en C3 : On remarque que le msophylle (entre pidermes infrieur et suprieur)
contient un seul type de cellules chlorophylliennes. On trouve des faisceaux conducteurs.
Plante en C4 : On remarque 2 types de cellules contenant des chloroplastes. Les cellules du
msophylle et les cellules de la gaine privasculaires (entourant les faisceaux vasculaires).
De nombreux plasmodesmes permettent les changes de molcules entre cellules du
msophylle et cellules de la gaine privasculaires.
En y regardant de plus prs, les chloroplastes des deux types de cellules sont aussi
diffrents :
- les chloroplastes des cellules du msophylle ont une organisation classique, avec des
thylakodes granaires et intergranaires.
- Les chloroplastes des cellules de la gaine privasculaires sont particuliers : les
thylakodes granaires sont trs peu dvelopps. On ne trouve presque que des
thylakodes intergranaires.
Si on se souvient de la rpartition des complexes, on peut supposer que les chloroplastes
des cellules de la gaine privasculaire contiennent peu de PSII (P680). Mais ils possdent
des PSI, des complexes b6f, des ATPases. Hypothse : les cellules de la gaine privasculaire
peuvent raliser le transfert cyclique des lectrons mais probablement raliser peu de
chane complte de transfert dlectrons.

B. Les ractions de la photosynthse en C4 se ralisent sur les 2 types de


cellules
Fixation : Le CO2 provient de lextrieur, il est dissous en HCO 3-. Il est fix dans les cellules
du msophylle sur le PEP (phosphonolpyruvate). Lenzyme est la PEP carboxylase. Cette
enzyme a une activit carboxylase uniquement (pas doxygnation donc). Le produit de la
raction est loxaloactate (molcule en C4). Loxaloactate est rduit en malate (ce qui
ncessite loxydation du NADPH,H+).
Transport : Le malate est alors transport, par les plasmodesmes, vers les cellules de la
gaine privasculaires.
Dcarboxylation fixation : Le malate est alors dcarboxyl et oxyd ce qui aboutit au
pyruvate. Cette raction ncessite la rduction dun NADP + en NADPH,H+. Il sagit de
coenzymes rduits qui peuvent tre utiliss (roxyds) dans le cycle de Calvin. Mais
surtout, la raction produit 1 CO2. Celui-ci peut entrer dans le cycle de Calvin : La Rubisco
catalyse alors la carboxylation du Ribulose 1,5biP, et le cycle de Calvin fonctionne comme
indiqu pralablement.
Ces cellules contiennent principalement des thylakodes intergranaires : la phase claire
fonctionne principalement sur le transfert cyclique des lectrons : production dATP mais
pas de NADPH,H+. Le NADPH,H+ utilis dans le cycle de Calvin peut provenir de loxydation
du malate.
Rgnration du PEP : Le pyruvate est transport vers les cellules du msophylle, il y est
rgnr en PEP. Cette rgnration consomme 2 ATP.
Concernant, les ractions de la phase claire :

F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 13

Cellule du msophylle : les thylakodes granaires et intergranaires, comportent tous


les complexes ncessaires pour raliser une chane de transfert complte
(notamment PSI et PSII). Il y a production dATP et de NADPH, H + indispensables pour
les ractions dcrites.
- Cellule de la gaine privasculaire : Ces cellules contiennent principalement des
thylakodes intergranaires : la phase claire fonctionne principalement sur le transfert
cyclique des lectrons : production dATP mais pas de NADPH,H+. Le NADPH,H+ utilis
dans le cycle de Calvin peut provenir de loxydation du malate.
On remarque tout dabord que les produits de la photosynthse sont fabriqus dans les
cellules de la gaine privasculaire, au plus prs des vaisseaux dexportation (le phlome).
-

On voit que la photosynthse en C4 consomme 2 ATP en plus par CO 2 fix.


Pour 6 CO2 fixs, 18 ATP pour la photosynthse en C3
18+12=30 ATP pour la photosynthse en C4.
Toutefois, le systme dcrit permet une concentration du CO 2. Lorsque la temprature
augmente la solubilit des gaz diminue (CO 2 et CO2), la diffusion de gaz se fait aussi moins
efficacement. De plus, lorsque la temprature augmente trop, les plantes ragissent en
fermant leurs stomates : elles limitent ainsi les pertes deau par transpiration. Mais la
fermeture des stomates empche aussi les changes de CO 2 et dO2 ! Le CO2 ne rentre plus
et lO2 saccumule lintrieur. Dans ces conditions o le CO 2 diffuse mal :
- la fixation se fait par PEP carboxylase, sans activit oxygnase. Pas de comptition
avec la photorespiration.
- lapport de CO2 se fait par le transfert de malate.
- LO2 est faible teneur dans les cellules de la gaine privasculaire : il diffuse mal
depuis lextrieur. Il est peu produit sur place : rappelez vous les thylakodes
granaires peu dvelopps, ce qui signifie une faible activit doxydation de leau (qui
produit lO2).
La photosynthse en C4 est plus coteuse en ATP, mais elle limite les effets de pertes de
carbone dus la photorespiration. Est-ce que lquilibre cot bnfice se ralise ? Dans
quelles conditions trouve-t-on des plantes qui fonctionnent selon la photosynthse en C4 ?

C. Les plantes en C3 et en C4 ragissent diffremment aux conditions de


temprature
On mesure le rendement quantique de la photosynthse en fonction de la temprature
foliaire.

rdt

molesCO 2 fixes
moles photons

Rsultats : Le rdt quantique ne varie pour la plante en C4. Alors que le rdt quantique
diminue quand la temprature augmente. On peut remarquer, en dessous de 28C, le rdt
quantique de la plante en C3 est suprieur. Au-dessus de 28C, le rdt quantique de la
plante en C4 est suprieur.
Interprtation : Le rdt quantique de la plante en C3 est sensible la temprature pour des
raisons voques prcdemment :
- la teneur en CO2 diminue dans les chloroplastes quand la temprature augmente : la
solubilit, la diffusion du CO2 diminue. La photorespiration augmente plus que la
photosynthse. Il y a une perte nette de carbone incorpor Le rendement quantique
baisse.
Dans une plante en C4, le mcanisme de concentration du CO 2 permet de limiter la
photorespiration par rapport la fixation du CO 2, par la Rubisco. Le rdt quantique ne
dpend pas de la temprature.
Ainsi, des tempratures infrieures 28, le cot nergtique de 2ATP li la
photosynthse en C4 la rend moins efficace que la fixation en C3. On remarque que les
plantes en C3 sont trs majoritaires en milieu tempr.
A des tempratures suprieures 28, la photorespiration induit un cot dans la
photosynthse en C3, qui est moins efficace alors que la fixation en C4. Dailleurs, les
F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire - 14

plantes en C4 se rencontre principalement en milieu tropical (parmi des


Monocototyldones).
Conclusion :
La photosynthse est une raction mtabolique de premire importance :
- elle permet la ralisation de lautotrophie pour le carbone pour les vgtaux
chlorophylliens, en particulier les Angiospermes. Mais aussi pour de nombreux
Procaryotes (Cyanobactries par exemple). En effet, partir de C minral, elle
permet la synthse de molcules organiques : oses, aa
- Mais la photosynthse est aussi capitale au fonctionnement des cosystmes : les
vgtaux sont les producteurs primaires dont dpendent touts les autres tres
vivants directement (consommateurs primaires) ou non (consommateurs
secondaires)
La photosynthse repose sur des conversions dnergie subtiles : de lnergie lumineuse
un gradient de protons, puis lATP (photophosphorylation). De lnergie lumineuse un
pouvoir rducteur (NADPH,H+ accepteurs des lectrons). Les ractions doxydorduction
sont encore au centre de ces processus.
Rappelons aussi la complmentarit entre les mtabolisme respiration et photosynthse.
Ici, nous navons pas abord les modalits prcises des changes entre la plante et le
milieu extrieur : entre de CO2 par les stomates, H2O prleve dans le sol et transporte
par la sve brute.

F. Brondex-E. Paitel

Mtabolisme cellulaire

PARTIE 4. LA PHOTOSYNTHSE
I. La photosynthse : observations et rsultats exprimentaux
A.
B.

Les chloroplastes sont les organites de la photosynthse, rappels


La photosynthse se droule en deux phases : mise en vidence
1) Exprience de Hill
2) Exprience de Ruben et Kamen (1940)
3) Exprience de Gafron (1951)

II. La phase de photo oxydation de leau


A.

Les pigments photosynthtiques : des molcules capables dabsorber la lumire


1) Les pigments photosynthtiques : nature chimique
2) Les pigments photosynthtiques : proprits dabsorption de lnergie lumineuse
B. Les photosystmes, les structures de collecte de la lumire gnrent un gradient de
protons et du pouvoir rducteur
1) Les photosystmes collectent la lumire
2) apportant lnergie pour un transfert dlectrons
C. Le gradient de protons est utilis dans la synthse dATP
1) Photophosphorylation : exprience et principe
2) Fonctionnement de lATP synthase
D. Le transfert cyclique dlectrons permet la synthse seule dATP

III. Phase de fixation du carbone


A.
B.

Lexprience historique de Calvin et Benson


Le cycle de Calvin Benson ou cycle de rduction du CO 2

IV. Photosynthse en C3, photosynthse en C4


A. Les plantes en C3 et en C4 diffrent par des caractres anatomiques et cytologiques
B. Les ractions de la photosynthse en C4 se ralisent sur les 2 types de cellules
C. Les plantes en C3 et en C4 ragissent diffremment aux conditions de temprature