UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIAPAS

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

CAMPUS IV, TAPACHULA

DIAGNOSTICO MOLECULAR

TAREA

“PROTEINAS”

CATEDRATICO:

DR. LUIS MIGUEL CANSECO AVILA

ALUMNO:

RODAS HERRERA MIGUEL ANGEL

SEMESTRE: 6° GRUPO: “A”

TAPACHULA CHIAPAS A 07 DE MAYO DEL 2010

1.- Para poder extraer unas proteínas de PM de 50 Kda con un pH (-) ¿que tipo
de cromatografía utilizarías?
la de intercambio aniónico y La exclusión por tamaño
1.- la columna debe estar rellena con un soporte al que van unidos grupos
cargados positivamente

Una vez pegadas las proteínas, para retirarlas

de la columna, se subira la fuerza iónica de la
fase móvil (aumentando la concentración), de
esta forma se eluyen primero las proteínas
mas débilmente retenidas y cuando la fuerza
iónica sea mayor saldrán las proteínas más
cargadas y por lo tanto más retenidas.

Proteínas cargadas
negativamente de
distintos tamaños
(Kda).
No se
usaran

2.- la de exclusión por tamaño

Primero utilizaría un soporte de

50 Kda en la cual quedarían
proteínas de 50 Kda y menores.
En la segunda utilizaría un
soporte de 49 Kda en la cual en
el primer tubo recogería las de
50 Kda que pasan rápido y en
otro las menores

1°

500Kda 50 Kda y menores

2°

50 Kda 49Kda para abajo

2.- en un cultivo celular donde exista E. coli enterotoxica, enterohemorragica y
enteroinvasiva y salmonella thipy se pretende identificar cada una de las
bacterias mencionadas a través de sus proteínas de superficie que tiene:

E. coli enterotoxica= 95 Kda con PI=8 con

carga (-)
E. coli enterohemorragica= 80 Kda con PI=8 con
carga (+)
E. coli enteroinvasiva= 115 Kda con PI= 6 con
carga neta
Salmonella= 75 Kda con PI=3 con
carga ¿?

¿Qué método realizaría para hacer extracción, purificación y detección?

FUENTE:
Bacterias (membrana celular)

EXTRACCIÓN:
Congelación y descongelación

ESTABILIZACIÓN DE LA MOLECULA:
Tras la rotura o bien durante la rotura, se utilizan tampones de extracción para
solubilizar las proteínas. Por ejemplo: disoluciones acuosas de tampones
específicos para proteínas que además contengan detergentes (YA QUE SE
PRETENDE PURIFICAR PROTEINAS ASOCIADAS A MEMBRANAS).

PURIFICACIÓN Y DETECCIÓN:
La manipulación de las proteínas durante el proceso de purificación suele
llevarse a cabo en disoluciones tamponadas, a bajas temperaturas (4ºC) y se
procura que el proceso sea lo más corto posible, además en ocasiones es
necesario añadir al tampón de extracción agentes protectores de grupos
funcionales específicos de la proteína o bien inhibidores de proteasas.
El lisado contiene una mezcla de enzimas, membranas y células rotas.
Esta preparación se somete a centrifugación (10.000 – 15.000 rpm) para
eliminar los restos celulares y separar, el sobrenadante, que contiene las
proteínas que estaban asociadas a membranas, y que para solubilizarlas
requirió un tratamiento adicional con detergentes, del precipitado que
contienen restos celulares.
A la hora de centrifugar hay que tener en cuenta que la centrífuga sea
refrigerada, balancear los tubos y asegurarse siempre que los rotores estén
fijos.

CROMATOGRAFIA:
*cromatografía de afinidad para E. coli enterotoxica
*cromatografía de afinidad para E. coli enterohemorragica
*cromatografía de afinidad para E. coli enteroinvasiva
*cromatografía de afinidad para Salmonella
 ELECTROFORESIS
La bidimensional

10

9
8
7
6
5
4
3
2
1
0

E. coli enterotoxica= 95 Kda con PI=8 con

carga (-)
E. coli enterohemorragica= 80 Kda con PI=8 con
carga (+)
E. coli enteroinvasiva= 115 Kda con PI= 6 con
carga neta
Salmonella= 75 Kda con PI=3 con
carga ¿?
90
80
70
100
110
120