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Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Instituto Politcnico Nacional


PRECIPITACION, SEPARACION Y PUNTO ISOELCTRICO
DE PROTEINAS
Grupo: 3FV01
Alumnos:

Seccin: 02
Miranda Araoz Adrian y

Introduccin:

Crisstomo Gallegos Jess


basndose en sus propiedades de
solubilidad diferentes valores de pH.

la solubilidad de la mayor parte de las protenas


se debe a la interaccin hidrofilica de las
molculas polares del agua y de los grupos
ionizados de las protenas. Los factores
principales que afectan la solubilidad de las
protenas son: la fuerza inica, el pH, la
temperatura y la constante dielctrica del
disolvente. La modificacin de estos parmetros
a soluciones proteicas heterogneas, permite
purificarlas en virtud de su diferente solubilidad.
Las protenas no son solamente polipptidos,
sino que tienen una secuencia de aminocidos
propia. Antes del estudio de una protena, es
necesario que esta est totalmente pura: sin
contaminacin de otras protenas u otras
sustancias celulares para esto es necesario
sepralas. Diferentes protenas tiene diferentes
propiedades de solubilidad, por lo que cuando
una protena es soluble otras precipitan.

Resultados y Discusin:

Objetivo:

Tabla

Tabla 1. Resultados del Salting-Out

Tabla 2. Precipitacin por efecto


Tubo No.

Observacin

Observacin
con etanol

1
(HCl + clara de huevo

Positivo

Positivo

Negativo

Negativo

positivo

Positivo

(NaOH + clara de
huevo)
3
(Reg. De acetatos +
clara de huevo)

del pH y solventes.

Analizar el efecto que produce la Tabla 3. Precipitacin por metales


modificacin de
pesados.
Biuret
Interpretacin
factores
Sobrenadante
Negativoclara
Sinde
coloracin
aparente.
huevo
Observacin
fisicoqumicos
+ problema
sobre la
Pastilla de
Positivo
Coloracin violeta,
solubilidad de las
Cloruro
de de una Positivo
centrifugacin
indicadora
prueba
protenas.
mercuriopositiva,
Determinar el
punto isoelctrico
de la insulina,

Filtrado 1

NegativoNitrato
Sin coloracin,
lo quePositivo
de plata
nos hace ver que el
Acetato
filtrado de
separo las Positivo
protenas.
plomo

Papel filtracin

Positivo Cloruro
Coloracin
el
de violeta enNegativo
papel filtro eso nos hace
ver que la protenas se
quedaron en el papel.

bario
Cloruro de
sodio
Agua

Negativo

3 como se puede apreciar en los datos de


la tabla 4. Por lo que calculando el pH de
ese tubo obtenemos que:

Referencia

Punto isoelctrico de la insulina = 5.30

Tabla 4. Determinacin del punto


isoelctrico de la insulina
Tu Acid
bo o
No. aceti
co
1
0.23
2
0.15
3
0.05

Acet
ato
de
sodio
0.02
0.10
0.20

insuli pH
na

4
5

0.24
0.25

6U
6U

0.01
0.00

6U
6U
6U

Observa
ciones

3.63
4.52
5.30 Precipito
(P.I )
6.08
9.05

Calculamos el pH con las siguientes


ecuaciones:
pH=pKa + log [base]
[acido]
Y para el ltimo tubo:
pH= 7 + 1 pKa + 1 log [sal]
2
2
Calculo del punto isoelctrico de la
insulina:
Como ya sabemos el punto isoelctrico es
el pH en el cual la carga neta es 0 y
adems a este pH la protena tiene menor
solubilidad por lo que precipita, durante
nuestro desarrollo experimental el nico
tubo en el que precipita es en el tubo No.

En la precipitacin por efecto del pH y de


solventes logramos ver que en los tubos
con HCL y regulador de acetatos haba un
indicador positivo esto es debido a que
estas protenas se encontraban muy lejos
de su punto isoelctrico y como sabemos
las protenas en este pH presentan un
mnimo de solubilidad es decir presentan
una
mayor
precipitacin
por
lo
que decimos que la clara de huevo a un
pH bsico se encuentra en un punto
donde su solubilidad es mayor. Al agregar
el etanol se pretenda que las protenas
se solubilizaran menos conforme a la
teora esto fue cierto ya que al aadir
disolventes orgnicos como etanol a
una solucin acuosa
de
protenas,
disminuye la constante dielctrica del
agua as como la interaccin protenaagua, y aumentando la interaccin
protena-protena favoreciendo as la
precipitacin. Por otro lado la precipitacin
con metales nos dio positivos con las
sales de mercurio, plata y plomo pues al
haber iones positivos y negativos que
interacten con las molculas de agua, se
pierde la interaccin protena-agua, por lo
que la protena precipita, sin embargo las
sales de bario y sodio no precipitaron a la
protena estas las solubilizaron.

Bibliografa:
Lehninger, Albert., Nelson, David L.,
Cox, Michael M.,(1993) Principios de
Bioqumica. Segunda Edicin,
Ediciones Omega, Barcelona, Espaa