AO DE LAS CUMBRES MUNDIALES EN EL PER

UNIVERSIDAD NACIONAL
SAN LUIS GONZAGA - ICA

Facultad de Medicina Humana

Dr. Daniel Alcides Carrin

PRCTICA
DOCENTE:
CURSO:
TEMA:
ALUMNA:
AO:

DR: CCERES BELLIDO FERMN

FARMACOLOGIA CLINICA
INDUCCION E INHIBICION ENZIMTICA
CAHUANA SALAZAR MABEL RUB
TERCERO

ICA-PERU
2008

Induccin e Inhibicin enzimtica

Introduccin
El hgado es el sitio principal donde se realiza la biotransformacin de
frmacos, en este se encuentran las enzimas que transforman los
compuestos a metabolitos ms hidrosolubles fcilmente influenciables por
frmacos cuya actividad puede ser incrementada o inhibida, como son las
enzimas oxidativas-450.
Los frmacos que ejercen cambios en la actividad enzimtica de las
enzimas hepticas, producen un mayor o menor nmero de enzimas de
manera que la biotransformacin de otros frmacos muy liposolubles va a
estar alterada cuando se administran junto con estos compuestos.
Con este experimento se pretende demostrar la induccin y la
inhibicin enzimtica que ejercen algunos frmacos sobre el metabolismo
heptico.

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

Marco Terico
Qu es la induccin enzimtica?
La induccin enzimtica (aumento del metabolismo) resulta del incremento
en la produccin de enzimas metabolizadoras e involucra principalmente
reacciones de Fase I. Debido a que la sntesis de protenas est relacionada,
estas interacciones tienen un lento inicio (hasta 3 semanas). Algunos
frmacos precipitantes incrementan el metabolismo del frmaco objeto,
mientras que otros (carbamazepina) incrementan su propio metabolismo.
Cuando se suspende la administracin del frmaco precipitante, el proceso
comienza a retroceder, pero lo hace ms lentamente que al inicio. En la
medida en que el nmero de enzimas disminuye, la concentracin plasmtica
se va incrementando gradualmente si la dosis no se disminuye. Por ejemplo,
en pacientes que reciben simultneamente warfarina y fenitona, el
sangrado puede ocurrir si el inductor enzimtico (fenitona) se suspende sin
ajustar la dosis del anticoagulante.

Como

ejemplos

clnicamente

importantes

tenemos

que

la

fenitona

incrementa el metabolismo de la mexiletina al producir una reduccin de los

niveles plasmticos y por ende de su efecto farmacolgico. De la misma
manera, la teofilina y fenitona parecen incrementar el metabolismo de cada
una de ellas, y pueden incrementar la frecuencia de las convulsiones o
exacerba los sntomas, pulmonares de la EPOC. Otros frmacos inductores
enzimticos son el fenobarbital, la carbamazepina, griseofulvina, primidona
y rifampicina. La ingesta crnica de etanol tambin induce la sntesis de
enzimas metabolizadoras, as como el humo de cigarrillo y la dieta.

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

La inhibicin enzimtica (disminucin del metabolismo) tambin ocurre en el
hgado y es el resultado de lo competencia de los frmacos por el sitio
activo de la enzima. A diferencia de la induccin enzimtica, la inhibicin
tiene un inicio rpido (algunas horas), a menos que el frmaco precipitante
tenga una vida media- larga. Menos frecuente es la inhibicin no
competitiva, la cual est relacionada con una supresin de la actividad
metablica de una enzima.

Qus es el citocromo P450?

Antecedentes generales
Fueron descubiertas en los aos 40. Y debido a una particularidad en su
absorcin, presentaban en los primeros estudios se observaba un espectro
de absorcin con un mximo en la frecuencia de 450 nanometros en el
complejo que se generaba con monxido de carbono. Adems se observ que
el pigmento era el componente final de una cadena transportadora de
electrones que catalizaba oxidacin de sustratos, esto les dio su nombre.
Son una familia de hemoprotenas, localizadas en las membranas del retculo
endoplsmico de los hepatocitos y de otras clulas corporales. Como
hemoprotena consisten de una parte proteica (apoprotena) y un grupo
heme prosttico.
En un principio los diferentes laboratorios obtuvieron resultados distintos y
se cre cierta confusin con respecto a las funciones y caractersticas de
las enzimas citocromo P450. Esto fue aclarado cuando se determin que
existan varios tipos de molculas de citocromos P450 se podan encontrar
en individuos de una misma especie.

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

Las enzimas citocromo P450 son los componentes terminales del sistema
enzimtico oxigenasa de funcin mixta (MFO).
Se pueden ubicar principalmente en el hgado pero tambin en glndulas y
tejidos del resto del cuerpo (testculos, glndulas adrenales) o tejidos
involucrados en el procesamiento de alimentos.

Induccin de las enzimas citocromo P450

Se sabe que en el sistema P4501A1 primeramente un qumico txico se une a
un receptor arilhidrocarburo hidroxilasa (Ah) en el citoplasma de la clula y
causa la liberacin de la heat shock protein (hsp 90). Esta protena es
reemplazada

por

la

ARNT

(Transferasa

Nuclear

receptor

Aril

hidrocarburo). Este nuevo complejo entra al ncleo de la clula donde se une

en forma especfica al DNA, que a su vez permite el acceso a factores de
transcripcin, encargados de transcribir los genes del P450 1A1, que a
travs de RNA mensajeros que pasan al citoplasma donde se transcriben a
nuevas molculas de enzima citocromo p450 que luego viajan al retculo y
actan en la degradacin (metabolismo) del qumico txico.

Funciones que cumplen las Enzimas Citocromo P450

Las enzimas citocromo P450 son un grupo promiscuamente activo
molecularmente. En la actualidad el nmero de sustratos conocidos para
estas enzimas est por sobre mil. Entre las funciones ms importantes que
realizan:

Funciones detoxificadoras, eliminando sustancias exgenas, es decir,

sustancias que no son sintetizadas en el propio organismo.

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

Esto se

logra agregando grupos

funcionales, hidrosolubles

compuestos de carcter lipoflico. Entre stos: drogas, sustancias

carcinognicas, pesticidas, etc .

Funciones de metabolismo endgeno, es decir, la degradacin de

sustancias del propio organismo. Como ejemplos de stos: esteriodes,
sales biliares, vitaminas liposolubles (A y D), alcaloides endgenos,
etc.

Involucrados en la sntesis de xido ntrico gaseoso simple, usado,

entre otras funciones, como toxina anti-patgeno.

En algunos organismos sirve como mecanismo de defensa ante el

ataque de alcaloides txicos de plantas y les aporta, por lo tanto, un
alimento abundante que no es apetecible por otros organismos.

Cahuana Salazar, Mabel Rub

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Usos de las Enzimas Citocromo P450

Debido a la multiplicidad de los citocromos P450, se han utilizado como
instrumentos para estudios de tipo evolucionario, filogenticos. De esta
manera se generan mapas de relaciones entre distintas especies de acuerdo
a su complementaridad gentica a nivel del DNA de los genes codificadores
del P450.
Por otro lado aunque la respuesta de induccin de sntesis de las enzimas
citocromo P450 no ha sido caracterizado para todas las familias P450, la
subfamilia P450 1A ha sido ampliamente estudiadas. En mamferos las
dioxinas, hidrocarburos polihalogenados y otros contaminantes ambientales
son inductores. Por ello el anlisis de niveles proteicos a travs de mtodos
catalticos o inmunolgicos proveen una forma conveniente de monitorear
efectos de contaminacin a nivel molecular.
Debe considerarse que factores endgenos de los organismos y externos,
ambientales, pueden afectar la interpretacin de datos obtenidos, por
ejemplo organoclorados son inhibidores de la actividad degradativa
(catlisis) y ciclos reproductivos pueden producir esteroides que a su vez
pueden afectar la actividad cataltica.
Es posible encontrar numerosos estudios utilizando las P450 como
biomarcadores de impacto por productos qumicos orgnicos por ejemplo en
Livingstone (1993) se encuentran referencias a ms de 15 estudios. En ellos
el uso de las P450 como biomarcadores fue muy exitoso.

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

Estructura de las Enzimas Citocromo P450

Utilizando la figura 1 como referencia simplificada de la estructura de una
enzima citocromo P450 se puede sealar que sta posee sitios para atrapar
dos molculas: una de oxgeno (O 2) en el sitio heme y otra molcula, el
sustrato que modifica, que se une justo por sobre el grupo heme. En el caso
de la figura 2, corresponde a la enzima citocromo P450 de una bacteria de
nombre Pseudomonas putida, se observa que est formada adems por a
-hlices (formas espirales) y hojas b (estructuras planas), adems de
segmentos no tan organizados (en forma de hilos en la figura).
Numerosos genes citocromo P450 codifican diferentes versiones de las
enzimas. Para fines prcticos, estos genes han sido agrupados en diferentes
familias
(nmeros 1, 2, etc.), subfamilias (letras A, B, etc.), y enzimas individuales
(nmeros 1, 2, etc.). Por ejemplo la enzima citocromo P450 inducida por el
2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (dioxina) se le da la designacin
P4501A1 (Shugart, 1996).

Cahuana Salazar, Mabel Rub

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Enzimas Citocromo P450 - Mecanismos de accin

La accin de las enzimas puede explicarse en una serie de pasos qumicos
simples:
1.- Comienza atrapndose el sustrato al citocromo frrico (Fe 3+).
2.- Un electrn es transferido al tomo Fe, pasando ste a su estado
ferroso (Fe2+), esta transferencia es a veces realizada por protena

citocromo b5 (figura 1).

3.- Esta forma frrosa se une a una molcula de O2
4.- Se realiza una segunda reduccin agregndose un electrn y adems un
protn.
5.- Este intermediario pierde una molcula de agua dejando un complejo
(FeO)3+ que directamente oxida el sustrato.

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

Algunos de los posibles orgenes de electrones involucrados en el proceso
recin explicado. Se observa al citocromo P450 en la membrana del retculo
endoplsmico (un rganelo celular de la mayora de las clulas animales). Los
electrones involucrados en la oxidacin de los sustratos en manos del
citocromo P450 pueden provenir de o el NADPH (Fosfato dinucleotido
nicotinamida-adenina) desde el citoplasma o el citocromo b5 que se
encuentra en la membrana.

Cmo cree que se comportar el promedio de tiempo de

sueo en cada grupo de cuyes?
Analizando la tabla comparativa: el tiempo de sueo tiene un promedio igual
a 50 minutos, con un rango de 20 minutos mas y menos.
Podemos decir tambin que algunos cobayos permanecieron demasiado
tiempo durmiendo, y se quedaban luego sin recuperar el reflejo de
enderezamiento por otro largo tiempo ms.

Cul sera el mecanismo de accin de fenobarbital y la

cimetidina para provocar este efecto?
La cimetidina es un frmaco que contiene imibidazol, que usualmente era
utilizado en el tratamiento de ulcera

gstrica, actualmente no se

recomienda su uso debido a los efectos secundarios que puede causar como
la ginecomastia (en varones).

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

Este frmaco

se fija con fuerza al hierro HEN del citocromo P450 y

reducen de manera eficaz el metabolismo de sustratos endgenos

(testosterona) u otro frmaco administrado de manera simultnea, a travs
de inhibicin competitiva.
La cimetidina retrasa el metabolismo del fenobarbital, haciendo que su
tiempo de vida media se prolongue y con esto la accin farmacolgica, es
decir hay presencia de una dosis tipo relativa, que significa alteracin del
metabolismo del frmaco por diversos factores.
El fenobarbital es uno de los agentes inductores enzimticos, este induce la
sntesis del ciocromp P450, que es una oxidasa terminal y ms importante
del sistema enzimtico microsomal heptico, como tambien induce la
biosntesis de la reductasa NADPH citocromo P450, al activar a estas
enzimas se desencadena la activacin del oxgeno molecular, para
incorporarlo a la droga que se transformar en un metabolito oxidado con
prdida de agua.
Esto en suma es una reaccin de oxido reduccin inmersos en el citocromo
P450, oxida las molculas por na serie de reacciones que incluyen nmeltilaciones,

hidrosilaciones

aromticas

desmetilaciones

sulfoxidaciones, los productos derivados de estas reacciones son mas

polares y ms fciles de eliminar.
Es un barbitrico depresor no selectivo del SNC, capaz de producir
distintos niveles de alteracin del estado de animo, Estudios recientes han
demostrado que los efectos hipnosedantes y anticonvulsivos pueden estar
relacionado por su capacidad para potenciar o mimetizar la accin simptica
inhibitoria del GABA.

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

Cmo se comportar el promedio del peso del hgado en cada

grupo de cuyes?
Para poder verificar si el peso del hgado de un cobayo a disminuido o ha
aumentado con la administraron de los frmacos nos basamos en el grupo 1 y
2, ya que se les administro durante 4 das, solucin salina (suero fisiolgico).
Pero en sta practica no pudimos pesar el el hgado del cobayo, pero de
acuerdo a lecturas, el peso normal de un hgado de cobayo esta entre 20
25 gramos.
Entonces tenemos que los cobayos que recibieron cimetidina en los cuatro
das anteriores, y el da de la prctica pentobarbital tenan el peso del
hgado disminuido.
Y los cobayos que recibieron fenobarbital los cuatro das anteriores, y el da
de la prctica pentobarbital tenan el peso del hgado aumentado

Explique los resultados.

Existen ciertos frmacos de accin

inhibitoria o inductora enzimtica,

que se manifiesta con la inhibicin del metabolismo de otros frmacos o el

aumento de degradacin de los mismos respectivamente, alterando los
procesos metablicos de dichos frmacos, los cuales pueden causar efectos
no deseados en el organismo y las interacciones farmacolgicas existentes
entre estos frmacos el fenobarbital, el pentobarbital y la cimetidina.

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

Desarrollo de la Prctica
MATERIALES

3 cuyes por mesa

Fenobarbital sdico 40 mg/ml
Cimetidina 8 mg/ml
Pentobarbital sdico 35 mg/ml
Solucin salina 0.9% 500 ml
Jeringas de 1ml, 5 ml, 10 ml.
Reloj o cronmetro
1 par de guantes quirrgicos por alumno.
Bandeja porta material.
Material de limpieza y aseo personal.
Material de diseccin

* FENOBARBITAL: El fenobarbital es el prototipo de los agentes

inductores enzimticos, induce la sntesis del citocromo P450, que es una
oxidasa terminal y la ms importante del sistema enzimtico microsomal
heptico (p=pigmento; 450 = 450 nanmetros en la banda de absorbancia),
tambin induce la sntesis de la citocromo P450 reduc tasa y del sistema
NADPH.
El sistema funciona a travs de la activacin oxgeno molecular por el
citocromo P450 (semejante al transporte de electrones en la cadena

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

respiratoria), para incorporarlo a la droga que se transformar en un
metabolito oxidado con prdida de agua. En realidad se produce un proceso
de xidoreduccin

(funcin mixta), este es el sistema de enzimas que

contiene citocromo P450, oxida las molculas por una variedad de

reacciones que incluyen hidroxilaciones ar omticas, N- desmetilaciones, Odemetilaciones y sulfoxidaciones. Los productos de estas reacciones son
ms polares y ms fcilmente excretados por el rin.
Es por eso que

cabria esperar un adormecimiento ligero o que durara

menos que lo normal ya que se acelera el metabolismo y con eso la excrecin

del frmaco.

*CIMETIDINA: Es agente antiulceroso antagonista de los receptores H2

de la histamina, es un potente inhibidor del sistema enzimtico microsomal
heptico, es decir que tiene la capacidad de inhibir el metabolismo oxidativo
de numerosas drogas por ejemplo: teofilina, warfarina, quinidina, nifedipina,
lidocana, fenitona, benzodiacepinas, propranolol. Las reacciones adversas
pueden ser severas como resultado de la administracin conjunta de
cimetidina con estas drogas.

Como vimos, la cimetidina es un potente inhibidor enzimtico, adems

reduce el flujo sanguneo heptico, en cambio ranitidina y famotidina, que
son tambin agentes anti-H2 no producen inhibicin enzimtica microsomal
heptica o alteracin del metabolismo de otras drogas apreciable en clnica.
Aunque conservan la propiedad de enlentecer el flujo sanguneo heptico.

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

Por tanto se espera un sueo mayor y que puede ocasionar la muerte debido
a la sobredosis inesperada ya que no se va a metabolizar la droga,
permitiendo una mayor aparicin del frmaco.

Cuatro das antes de la experimentacin, inyecte diariamente a 3 grupos de

cuyes de 6 animales cada uno, con los siguientes tratamientos:

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

Grupo1: (mesas 1 y 2) administre a cada cuy, solucin salina

0,2ml/100g IP dos veces al da.

Grupo2: (mesas 3 y 4) Administre a cada cuy 40 mg/k, IP de

fenobarbital sdico dos veces al dia.

Grupo3: (mesas 5 y 6) Administre 80 mg/k IP de Cimetidina dos

veces al da.

El da de la prctica en el laboratorio, administre a cada cuy 25 mg/k de

pentobarbital sdico, IP y mida el tiempo de sueo de cada animal (este
tiempo es determinado iniciando cuando el animal pierde el reflejo de
enderezamiento y termina cuando vuelve a recuperar dicho reflejo). Calcule
el promedio de tiempo de sueo de los 3 cuyes en cada grupo y haga la
comparacin entre ellos, analice y explique los resultados.
Despus que midi el tiempo de sueo en todos los cuyes, sacrifquelos con
un golpe en la cabeza, luego extraiga sus hgados y pselos.

1. Tenemos el cobayo dentro de un balde transparente y comprobamos

que se encuentre en buen estado, con los sentidos activos, calculamos
su peso para calcular el medicamento.

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

2. El clculo del peso de los 3 cuyes tenemos que sacarlo con 25 mg/kg,
y le vamos a administrar pentobarbital sdico para sedarlos,
entonces:

Cuy N1:
Tenemos 340 gr. = 0.340 kg

25 mg/kg x 0.340 kg = 8.5 mg

Ahora aplicamos una regla de tres simple, ya que el frmaco fue

diluido en 40 ml. de agua destilada.

8.5 mg --------- 1000 mg

x

--------- 40 mg

x = (8.5 mg) (40 mg)

1000 mg
x = 0.34 mg.

Cuy N2:
Tenemos 500 gr. = 0.500 kg

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

25 mg/kg x 0.500 kg = 12.5 mg

Ahora aplicamos una regla de tres simple, ya que el frmaco fue

diluido en 40 ml. de agua destilada.

12.5 mg --------- 1000 mg

x

--------- 40 mg

x = (12.5 mg) (40 mg)

1000 mg
x = 0.5mg.

Cuy N3:
Tenemos 500 gr. = 0.500 kg

25 mg/kg x 0.500 kg = 12.5 mg

Ahora aplicamos una regla de tres simple, ya que el frmaco fue

diluido en 40 ml. de agua destilada.

12.5 mg --------- 1000 mg

x

--------- 40 mg

x = (12.5 mg) (40 mg)

1000 mg
x = 0.5 mg.

3. La va escogida fue la Intraperitoneal, entonces aplicamos el frmaco,

y esperamos respuestas que nuestro cuy entre en estado de
somnolencia, para esto poco a poco va a ir perdiendo el reflejo del
enderezamiento.
Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

SE LE
CUY

ADMINISTRAC

ESTUVO
ADMINIST
RANDO:

IN DE

PESO COBAYO

PENTOBARBIT

gr.

AL

Fenobarbital
Suero
fisiolgico
Cimetidina

0.34

340 grs.

0.5

500 grs.

0.5

500 grs.

CONCLUSIONES

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

1. La prctica no tuve el xito esperado puesto que la administracin
fue por muy poco tiempo, lo esperado era que el cuy al cual se le
administr fenobarbital debi demorar su efecto del frmaco, y al de
ranitidina debi ser ms rpido su efecto.
2. El cuy que estuvo recibiendo Fenobarbital inici el efecto despus de
7minutos, el que estuvo recibiendo suero inici a los 6, y el que estuvo
recibiendo ranitidina a los 2 minutos.

FENOBARBITAL
El tiempo de sueo, es menor con respecto al control, ya que se
produjo la induccin enzimatica y consecuentemente, mas rpido
metabolismo
La relacin hgado/peso, esta notoriamente aumentado, lo cual
evidencia que se ha producido la induccin enzimtica
Se demostr notablemente que el Fenobarbital desarrollo la induccin
enzimtica

RANITIDINA
No qued demostrado que la Ranitidina haya cumplido su funcin de
inhibicin enzimatica. A pesar que el cuy empez rpido su efecto
para llegar a ataxia decimos que no se cumpli puesto que no lleg a
hipnosis rpido.
El tiempo de sueo, es ligeramente mayor, pero no es el resultado
esperado, ya que la inhibicin enzimtica debi demostrarse con
mayora.

BIBLIOGRAFA

Cahuana Salazar, Mabel Rub

Induccin e Inhibicin enzimtica

Joel G. Hardman, Lee E. Limbird, Alfred Goodman Gilman / Las bases
Farmacolgicas de la Teraputica / Dcima Edicin / McGraw-Hill
Interamericana Editores / 2003

Bertram G. Katzung / Farmacologa bsica y clnica / Octava Edicin

/ Editorial El Manual Moderno / 2001

http://www.insm.es/glosariogr/glosarionsm/terminos/ficha_termino
s.php3?c_termino=388

http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/12161/lecciones/04_
01_01.htm

FARMACOLOGA CLINICA

FARMACOLOGA BASICA

LITTER

V EDICIN

MALGOR VALSECIA

Cahuana Salazar, Mabel Rub