FACULTAD DE RECURSOS NATURALES

ESCUELA DE AGRONOMA
CARRERA: AGRONOMIA

GUA DE APRENDIZAJE PARA EL ESTUDIANTE

I.

Datos de Identificacin General

Datos del Curso o Actividad Curricular

1 Ttulo Curso
2 Cdigo
3 Crditos y PMA

Bioqumica
AGRO1109
7 / crditos 4 2 6

Datos del Profesor o Profesora

4
5
6
7
8
9
10

II.

Nombre y apellidos
Grado acadmico
Fono oficina
Email institucional
Contacto va plataforma
Horario atencin
Unidad Acadmica

Leonardo Ivn Anabaln Rodrguez

Lic. en Ciencias Biolgicas y Mg. en Ciencias mencin
Biologa celular y Molecular Aplicada
045-205432
lanabalo@uct.cl
Si
Reunin fijada a travs de correo-e
Escuela de Ciencias Ambientales

Descripcin

Este curso contribuye al perfil de egreso de la carreras Agronoma de la Facultad de

Recursos Naturales, mediante el estudio de la qumica involucrada en los procesos
biolgicos , poniendo especial nfasis en protenas, enzimas, bioenergtica celular,
vas metablicas y cidos nucleicos, as como aspectos puntuales de biologa
molecular en animales y vegetales que le permitan conocer y comprender la
biodiversidad a nivel molecular que sirven de base para las aplicaciones
correspondientes en la construccin de nuevos conocimientos asociados a la
agronoma. De esta, forma el curso tributa al logro de la competencia especfica de:
Aplica las Ciencias Bsicas, Biotecnologa y Agricultura de Precisin, y la competencia
genrica de gestin del conocimiento. Durante el curso se desarrollarn metodologas
integradoras de aprendizajes grupales, y autnomas lo que favorece la adquisicin de
competencias especficas.

III. Competencias
Competencias Genricas a validar

Nombre:
Gestin del conocimiento
Definicin: Procesa informacin para la generacin del conocimiento lo que implica
conocer, comprender, aplicar, analizar, sintetizar, evaluar y transformar
segn las necesidades de aprendizaje y trabajo, y de acuerdo a las
exigencias del medio sociocultural.
Nivel: 1
Reconoce las habilidades y/o procesos cognitivos con los cuales puede
identificar, seleccionar, relacionar e interpretar informacin bsica
relacionada con su profesin futura.

Competencias Especficas

Nombre:
Aplica las Ciencias Bsicas, Biotecnologa y Agricultura de Precisin.
Definicin: Aplica herramientas de las Ciencias Bsicas, Biotecnologa y de la
Agricultura de Precisin en la produccin agropecuaria para alcanzar el
desarrollo sustentable.
Nivel: 1
Utiliza los conocimientos adquiridos en las ciencias bsicas para
comprender y explicar las tecnologas y manejo agropecuario.

IV. Resultados de Aprendizaje

(Sealar entre parntesis con qu CG y CE se relacionan)

RA1: Relaciona los principales constituyentes de la materia viva con la unidad

estructural y funcional de los seres vivos, considerando criterios agronmicos
como instrumentos para conocer el funcionamiento bioqumico de las plantas.
(Gestin del conocimiento y Aplica las Ciencias Bsicas, Biotecnologa y
Agricultura de Precisin)
RA2: Describe, en trminos moleculares, los fenmenos biolgicos;
identificando el sitio celular especfico donde ocurren las principales reacciones
bioqumicas relacionadas con el desarrollo de plantas, tomando como ejemplo
algunos cultivos de inters agronmico y procesos metablicos involucrados
tanto en estrategias de mejoramiento vegetal como en el control de malezas.
(Gestin del conocimiento y Aplica las Ciencias Bsicas, Biotecnologa y
Agricultura de Precisin)
RA3: Conoce las principales metodologas de anlisis bioqumico, explicando los
fenmenos moleculares que en estas ocurren, para el desarrollo y aplicacin de
estrategias tcnicas, por ejemplo en biotecnologa vegetal y diagnstico de
enfermedades; considerando el contexto ambiental, tico y de diversidad
gentica. (Aplica las Ciencias Bsicas, Biotecnologa y Agricultura de Precisin)

V.

Cronograma
P

Semanas

Actividades de Enseanza - Aprendizaje y Actividades de Evaluacin

(sealar entre parntesis a cul de los RA tributan)

P:

A:

Presentacin a los estudiantes la asignatura, y anlisis de

la gua de aprendizaje.
Clase expositiva: Se introducir a los estudiantes en una
visin general al curso, destacando los tpicos principales
y contenidos de la asignatura, visin general de la
bioqumica en el contexto de los seres vivos, definicin de
los trazos a seguir en los contenidos, visin general del
metabolismo, principio de los equilibrios energticos y
moleculares en la biosfera. (RA1, RA2 ,RA3)
Bsqueda de informacin, revisar citas y bases de datos
propuestas en el curso y contraste de ideas en relacin al
papel de la bioqumica en su perfiles de egreso. (RA1, RA3)

P:

M:

A:

P:

M:

A:

P:

Evaluacin diagnstica relacionada a conceptos bsicos de

biologa celular y conceptos generales de qumica.(RA1)
Clase expositiva: Definiciones de la bioqumica y su
importancia en los sistemas biolgicos, aporte de la
bioqumica en biologa vegetal, biotecnologa y
biomedicina. (RA1)
Contextualizacin de resultados de aprendizaje dentro de
los conceptos de aplicacin y definicin de la bioqumica.
(RA1,RA2,RA3)
Formacin de grupos de trabajo para todo el semestre.
Asignacin de primer tema de trabajo en grupo
(preparacin de seminarios): Reacciones bioqumicas y
organelos celulares.(RA1,RA2,RA3)

Introduccin al instrumental bioqumico, con nfasis en

tcnicas analticas de rutina en un laboratorio biolgico
molecular y biotecnolgico. (RA3) (Anexo 2)
Bsqueda informacin en base de datos asignada y
discusin de conceptos e ideas relacionadas con el tema
asignado.(RA1,RA2,RA3)
Clase expositiva: contexto celular de la bioqumica.(RA2)
Taller Presencial 1: Reacciones bioqumicas y organelos
celulares.
Orientacin grupal para el desarrollo de los temas con
nfasis en el contenido, en el desarrollo y la exposicin.
Retroalimentacin oral y orientacin grupal en el estudio
del contexto celular.(RA2)
Introduccin a tcnicas de anlisis en bioqumica.
Espectrofotometra. Principios tericos y aplicaciones en
el campo de la agricultura de precisin. (RA2, RA3) (Anexo
3)
Bsqueda informacin en base de datos asignada y
discusin de conceptos e ideas relacionadas con el tema
asignado. Elaboracin de preguntas sobre los contenidos
en cuestin.(RA3)
Presentacin oral resultados taller 1 y entrega de
presentaciones e incorporacin en la plataforma de la
asignatura EDUCA. En base a preguntas los estudiantes
identifican la compartimentalizacin celular y su identidad
funcional desde el punto de vista bioqumico y molecular.
Evidencia CG: Gestin del conocimiento. La competencia
se valida por medio de la relacin e interpretacin de la
funcin de cada organelo en el contexto bioqumico de las
plantas.(RA1,RA2)
Trabajo Grupal I: Entrega de temas para elaboracin y

desarrollo del informe-trabajo. En el cual se har una

presentacin escrita con formato informe, de los
principales mecanismos involucrados en el estudio de las
biomolculas. (RA1)
A:

P:

Revisin de literatura en textos para la preparacin de los

temas de seminario, preparacin de presentacin
preliminar.(RA1)
Retroalimentacin oral, relacionada a los temas del
informe trabajo, resolucin de dudas, consultas, discusin
de las aplicaciones de procedimientos y tcnicas vistas en
el trabajo. (RA2)

Clase expositiva Introduccin a Biomolculas.(RA1)

M:

A:

P:
6

M:

A:

Actividad de aplicacin de la espectrofotometra (Anexo 4)

Extraccin de pigmentos fotosintticos, determinacin de
principales pigmentos, cromatografa en papel.(RA3)
Contraste de resultados en actividad de laboratorio con la
informacin que aparece en la literatura. Anlisis y
Discusin de los diferentes espectros de los pigmentos
fotosintticos. Elaboracin del informe (Informe 1).(RA3)
Actividad de Evaluacin 1
Clase expositiva: Bioelementos su clasificacin,
Biomolculas,
tipos,
estructuras,
funcin
y
generalidades.(RA1)
Clase expositiva: cidos nucleicos, estructura funcin,
expresin gnica, regulacin; sntesis de protenas,
regulacin de la sntesis. Alteraciones en la expresin,
patologas asociadas, mutaciones, alteraciones en el
metabolismo. (RA1)
Evidencia CG: gestin del conocimiento. Por medio de
preguntas de la clase expositiva; los estudiantes
identifican las relaciones entre las secuencias gnicas con
la estructura proteica y su papel como catalizador de las
reacciones biolgicas.(RA1,RA2)
Retroalimentacin oral y orientacin individual de
conceptos y procesos involucrados en la expresin gnica
y su relacin con el metabolismo. (RA1, RA2, RA3)
Anlisis de los contenidos vistos en clases y prctica.
Revisin bibliogrfica y formulacin de preguntas.(RA1,
RA2,RA3)

P:
7
M:

A:

P:

Resolucin ejercicios de procesos involucrados en

expresin gnica, entrega gua-taller, discusin de los
resultados. (RA2)

Introduccin tcnica de anlisis de biomolculas (cidos

nucleicos) electroforesis, tipos, aplicaciones. (Anexo
5)(RA1,RA2)
Realizan investigacin bibliogrfica sobre los principales
tipos de geles, tipos de cmaras utilizadas; variantes de
electroforesis y sus aplicaciones.(RA1, RA2)
Actividad de evaluacin 2.(RA1, RA2)
Clase expositiva: Estructura de aminocidos, clasificacin y
estructura. Propiedad cido-base de los aminocidos en
solucin acuosa. Concepto de punto isoelctrico.(RA2,
RA3)
Clase expositiva: Estructura, funciones, clasificacin de las
protenas.(RA2, RA3)

M:

A:

P:
9

M:

A:

Presentacin mtodos de extraccin de biomolculas

desde tejido vegetal y animal. Definicin de protocolos,
innovacin en procedimiento y anlisis del producto
extrado, aplicaciones. (RA2, RA3)
Anlisis y reconocimiento de la estructura de los
aminocidos, revisin bibliogrfica, asociacin de
clasificacin de protenas y su funcin en el
metabolismo.(RA2,RA3)
Clase expositiva: caractersticas estructurales y funcionales
de las enzimas, definicin de catalizadores y su efecto
sobre la energa de activacin. Clasificacin de las
enzimas. (RA2 RA3)
Taller presencial 2: Los estudiantes comenzarn a
desarrollar la presentacin de seminarios orales de
acuerdo a los tpicos relacionados con la cintica
enzimtica, considerando factores que afectan la actvidad.
(Inhibicin de la actividad)
(entrega de temas).
Identificacin de caractersticas de la cintica
enzimtica.(RA1, RA2, RA3)
Retroalimentacin oral y orientacin grupal relacionada
con la clase expositiva, enzimas I e introduccin a la
actividad enzimtica. Discusin, bsqueda bibliogrfica,
gua en la elaboracin del seminario.(RA1, RA2, RA3)
Revisin bibliogrfica, anlisis y discusin de los conceptos
bsicos de enzimas, estructura y clasificacin.(RA1, RA2)

10

P:

M:

A:
11

P:

M:
A:

12

P:

M:

Clase expositiva: Conceptos de actividad enzimtica,

regulacin de su actividad. (RA2)
Presentacin oral resultados taller 2 y entrega de
presentaciones e incorporacin en la plataforma de la
asignatura EDUCA.(RA1, RA2)
Retroalimentacin oral, para reafirmar o reorientar los
conceptos de actividad enzimtica y su relacin con la
estructura proteica, accin de inhibidores, y con
productos qumicos usados como herbicidas y de la CG
gestin del conocimiento.(RA2, RA3)

Retroalimentacin oral y orientacin grupal temas taller

presencial 2. Discusin, bsqueda bibliogrfica, gua en la
elaboracin del seminario.(RA2, RA3)
Revisin bibliogrfica relacionada a los seminarios,
elaboracin de la presentacin.(RA2, RA3)
Clase expositiva: Visin general del metabolismo,
definicin de anabolismo y catabolismo, referencia a las
principales vas de sntesis y degradacin de compuestos
en la clula Equilibrio entre respiracin celular y
fotosntesis. (RA2) El estudiante, a travs de preguntas;
identifica y comprende la diferencia entre reacciones
anablicas y catablicas en el contexto celular y
bioqumico.
Electroforesis PAGE-SDS principio y aplicaciones.(anexo
5)(RA3)
Bsqueda bibliogrfica, apliaciones y variantes del PAGESDS, tipos de electroforesis para protenas y cidos
nuclicos.(RA3)
Elaboracin informe de la actividad (Informe2).(RA3)
Clase expositiva: Vas del metabolismo de los hidratos de
carbono. Propiedades, estructura y funcin de los hidratos
de carbono. Catabolismo de la glucosa, medio anaerbico
(Gliclisis y fermentaciones) y aerobio (Gliclisis, ciclo de
Krebs y Fosforilacin oxidativa). (RA1 RA2)
Evidencia CG Gestin de conocimiento. Los estudiantes; a
travs de preguntas relacionadas a la clase expositiva; los
estudiantes relacionan las principales vas metablicas, en
el contexto de la respiracin celular y su vinculacin con el
equilibrio en la bisfera.(RA 1, RA2)
Actividad de evaluacin 3(RA2, RA3)
Espectrofotometra aplicada a la cuantificacin de
protenas. Mtodos de cuantificacin y aplicaciones
(Anexo 6) (RA2 RA3)

A:

13

P:

M:

A:

14

P:

M:

A:

15

P:

A:

Bsqueda de informacin, anlisis del contexto del

metabolismo y de las principales vas metablicas
involucrados en la obtencin de energa a partir del
catabolismo de los hidratos de carbono.(RA2, RA3)
Clase expositiva: Va de las pentosas fosfato, metabolismo
del glucgeno, Gluconeognesis. Ciclo del Gioxilato(RA2
RA3)
Metabolismo de los lpidos. Transporte de lpidos
Biosntesis y oxidacin de lpidos. (RA2 RA3)

Cuantificacin de protenas: Mtodo de Biuret. Principios

del reactivo de Biuret, curva de calibracin. Cuantificacin
muestras de protenas obtenidas en el laboratorio. Gua
elaboracin de informe de actividad, tutora grupal. (RA3)
(informe 3).
Elaboracin de la curva de calibracin, anlisis de los
procedimientos involucrados en la cuantifcacin de
protenas, utilizando el mtodo de Biuret.(RA3)
Anlisis del contexto de la oxidacin de los lpidos en el
metabolismo energtico.(RA2, RA3)
Taller Presencial 3: Vas del metabolismo de aminocidos.
Sntesis de compuestos nitrogenados. Ciclo del Nitrgeno,
Digestin y transporte de protenas. Catabolismo de
aminocidos, desaminacin y ciclo de la Urea. (RA2)
Recepcin, discusin grupal e individual de los principales
puntos involucrados en la presentacin de un resultados
de cuantifcacin de biomolculas de manera grupal,
revisin del informe 3. (RA2)
Bsqueda de informacin, anlisis de las principales vas y
reacciones relacionadas con el catabolismo de
aminocidos. Focaliza el nfasis en la relacin del ciclo de
la Urea y el ciclo de Krebs.(RA2, RA3)
Clase expositiva: Fotosntesis, visin general en el
contexto del equilibrio en la bisfera, regulacin y fases
de la reaccin. (RA2, RA3)
Sistema de captacin de luz, fotosistemas, fotlisis del
agua y transporte de electrones; sntesis de ATP y NADPH.
(RA2, RA3)
Presentacin oral de resultados del taller 3 y entrega de
presentaciones e incorporacin en la plataforma de la
asignatura EDUCA.(RA2, RA3)
Bsqueda de informacin, anlisis y definicin de la
fotosntesis en la fisiologa de las plantas y su rol en el
medio ambiente.(RA2, RA3)

16

P:

A:

17

P:

Clase expositiva: Fotosntesis; Reacciones independiente

de la luz, fijacin del CO2 (Ciclo de Calvin), regeneracin
del aceptor ribulosa, sntesis de azcares. (RA2, RA3)
Actividad de evaluacin 4. Esta actividad considera
aspectos meta cognitivos relacionados a los principales
procesos involucrados en la fotosntesis, tanto reacciones
luminosas y oscuras.(RA2, RA3)

69

22

102

Anlisis grupal y discusin de las fases de la fotosntesis,

enfatizando en los productos de cada una y la relacin
entre ellas.(RA2, RA3)
Bsqueda de informacin tcnica de herbicidas que
inhiben reacciones o sntesis de molculas especficas en
la fotosntesis.(RA2, RA3)
Evaluacin Final, Examen escrito.(RA1, RA2, RA3)

Subtotal
Total

195

VI. Material de lectura

Lehninger, D. Nelson, M. Cox. (2005) Principios de Bioqumica. New York : W.H.
Freeman, 2005.
L. Stryer Berg, J.M. Tymoczko, J.L. (2008) Bioqumica
Ed. Revert S.A;
Barcelona Espaa.
Alberts B.
(2002) Biologa Molecular de la Clula .Ediciones Omega.
Barcelona
Mathews CK, van Holde KE & Ahern KG (2002) Bioqumica 3 Ed. Madrid:
Pearson Addison Wesley.
Base
de
datos
informacin
www.
pubmed.com
(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/) .

VII. Anexos (Materiales de apoyo para el estudiante)

Anexo 1. Condiciones generales del curso.
Asistencia: El curso de Bioqumica, exige un 100% de asistencia para las actividades de
presentacin de seminarios y de laboratorio. Los estudiantes que por motivos de
fuerza mayor (motivos de salud) incurra en inasistencia debe de presentar en un plazo
no mayor a una semana a partir del da de la inasistencia, un certificado que respalde o
acredite la situacin. Si el estudiante no asiste a alguna evaluacin esta se podr
recuperar con un certamen global al final del curso.
Hora de llegada al aula: La llegada a la sala de clases y al laboratorio debe ser puntual;
transcurridos 5 minutos de haber comenzado la clase no se permitir la entrada a los
estudiantes, ni la interrupcin de esta; quedando ausente de la actividad. La entrada
al laboratorio se condicionar al uso de delantal blanco y tenencia de gua prctica.
Exencin: Los estudiantes podrn eximirse del examen final, si han obtenido una nota
final promedio de todas las actividades de un 5,0 (cinco coma cero).
Link al reglamento del estudiante de la UC Temuco:
(http://www.uctemuco.cl/fdi/usuarios/admin3/doc/201011051655320.reglamento_al
umno_pregrado.pdf)
Evaluaciones:
Evaluacin
Taller Presencial 1
Taller Presencial 2
Taller Presencial 3

Semana
3-4
9-10
14-15

Ponderacin

Promedio 5% de la nota final

Informe prctica 1
Informe prctica 2
Informe prctica 3
Prueba Laboratorio
Evaluacin Presencial 1
Evaluacin Presencial 2
Evaluacin Presencial 3
Evaluacin Presencial 4

6
11
13
14-15
6
8
12
16

Promedio 10% de la nota final

10% de la nota final

Promedio 75% de la nota final

Pauta para elaboracin de los informes.
Se utilizar letra Arial 12, espacio y medio, margen superior 2,5 cm, margen inferior 2,5
cm, margen izquierdo 3 cm y margen derecho 3 cm, hoja tamao carta.
Captulo

Descripcin
Portada
Se debe incluir el logo de la
Universidad, donde se
seale, la facultad, la
escuela y carrera a la cual
pertenece el o los
estudiantes. Se incluye el
nombre del docente,
ayudante y el nombre de
los integrantes del grupo.

Extensin (pginas)
1

I
II
III

IV

VI

Resumen
Introduccin
Materiales y mtodos
En este captulo, se deber
detallar tanto los
materiales usados y los
tratamientos y/o
metodologas que indique
el profesor, las cuales
fueron necesarias para
llevar a cabo la actividad.
Se debe redactar en
pasado y tercera persona,
ya que dan cuenta de lo
realizado.
Resultados y discusin
En este captulo se deben
presentar los resultados de
lo realizado, las
observaciones, y las
variantes o modificaciones
realizadas en el
experimento. En este
punto se debe de
contrastar los resultados
propios con la literatura.
Para la presentacin, de
deben incluir grficos,
imgenes, tablas cuando
sea necesario.
Conclusiones:
Se deben considerar como
conclusiones solo lo que se
desprenda del ensayo,
apoyndose en la
literatura.
Literatura citada.

1
1
1

5 (mximo)

Rbrica de la competencia genrica (CG)

Gestin del Conocimiento
Definicin: Procesa informacin para la generacin del conocimiento, lo que implica
conocer, comprender, aplicar, analizar, sintetizar, evaluar y transformar, segn las
necesidades de aprendizaje y trabajo y de acuerdo a las exigencias del medio
sociocultural.
Nivel
Criterio
Manejo de la
informacin

Nivel 1
Reconoce las habilidades y/o procesos cognitivos con los cuales
puede identificar, seleccionar, relacionar e interpretar informacin
bsica relacionada con su profesin futura.
Gestiona la informacin integrando de manera restringida tcnicas
adecuadas de recogida de datos y diversas fuentes de consulta bsica
para la organizacin y el control de procesos que permitan resolver
problemas simples de su rea acadmica o profesional.
Utiliza buscadores, sitios Web y bibliotecas de fcil acceso o indicadas por el profesor para hallar
informacin solicitada.

Expresa la informacin mediante tablas y grficos propuestos por el profesor.

Expresa las habilidades nuevas desarrolladas o los procesos cognitivos seguidos durante el proceso
de aprendizaje.

Construccin
del
conocimiento

Interacta con la informacin desarrollando a travs de operaciones

mentales bsicas aportes restringidos al conocimiento de su rea de
desarrollo acadmico o profesional.
Utiliza operaciones mentales sencillas como la comparacin y la clasificacin para construir
conocimiento.

Utiliza el conocimiento de manera disociada a lo que intenta sustentar.

Cita de manera inicial siguiendo las normas de la institucin ms aceptada o normas sealadas por
el profesor.

Transferencia

Socializa el conocimiento construido en grupos de clase o cercanos e

identifica las aplicaciones posibles del conocimiento generado.
Presenta el conocimiento generado en los formatos preestablecidos o sealados por el profesor (por
ejemplo, informe)

Participa en situaciones organizadas en el aula por el profesor para difundir el conocimiento

generado (presentaciones orales en clase)

Identifica las aplicaciones posibles del conocimiento generado.

Caracteriza etapas y procesos desarrollados en la obtencin de sus aprendizajes.

Rbrica para calificar seminario en base a talleres presenciales.

Criterio
Contenido

Insuficiente 1
El seminario no
contempla en su
totalidad
los
contenidos
analizados en el
taller presencial.
Son expuestos
de
manera
superficial,
no
cuenta de lo que
se
trata
el
trabajo, dejndo
de
considerar
algunos puntos.

Suficiente 2
El seminario
no contempla
en su totalidad
los contenidos
analizados en
el
taller
presencial. Son
expuestos de
manera
general,
no
presenta
ejemplos que
se relacionen
con la biologa
vegetal
o
biomedicina.

Bueno 3
El
seminario
contempla los
contenidos
analizados en el
taller
presencial,
descritos
de
forma general,
presentando los
principales
tpicos
del
tema. Relaciona
la bioqumica
con ejemplos
en
biologa
vegetal
o
biomedicina.

Exposicin

No
existe
dominio de lo
que se va a
presentar,
titubeo, mal uso
de la voz y de
lenguaje
adecuado
al
tema que se est
tratando. No hay
sintona con el
resto del grupo
que
est
exponiendo. No
respeta
el
tiempo (muy por
debajo
o
sobrepasado)
lmite definido
con anterioridad
por el profesor.
La presentacin
no se realiza
mediante
programa
de
presentaciones
en
formato
keynote
o
powepoint.
Presenta
un
nmero
extremadamente
corto o extenso
de diapositivas.
Presenta
demasiado

Dominio
mediocre del
tema
a
exponer. Fallas
en la sintona
con el resto
del
grupo.
Manejo
suficiente del
lenguaje
de
acuerdo
al
tema que se
est tratando.
Utiliza mayor
tiempo que el
lmite definido
con
anterioridad
por
el
profesor.

Buen dominio
del
tema,
claridad
al
exponer
las
ideas,
los
integrantes del
grupo
tienen
sintona
y
coordinacin
con las distintas
etapas de la
exposicin.
respeta
el
tiempo lmite
definido
con
anterioridad
por el profesor.

La
presentacin
se
realiza
mediante
programa de
presentaciones
en
formato
keynote
o
powepoint.
Nmero
excesivo
de
diapositivas.
No presenta
de grficos ,
esquemas
o

La presentacin
se
realiza
mediante
programa
de
presentaciones
en
formato
keynote
o
powepoint.
Nmero
de
diapositivas en
concordancia
con el tiempo,
claramente
definidas
las
diapositivas a

Formato
Presentacin

Sobresaliente 4
El
seminario
contempla los
contenidos
analizados en el
taller
presencial, son
descritos
o
expuestos
en
profundidad.
Relaciona
la
bioqumica con
ejemplos
en
biologa vegetal
o biomedicina, y
cita
investigaciones
o
avances
cientficos
de
dominio
pblico.
Dominio
absoluto
del
tema. Expone
claramente y en
orden las ideas
de acuerdo al
tema tratado. El
lenguaje
es
apropiado,
logra transmitir
las ideas al
resto de los
estudiantes,
respeta
a
cabalidad
el
tiempo lmite
definido
con
anterioridad por
el profesor.
La presentacin
se
realiza
mediante
programa
de
presentaciones
en
formato
keynote
o
powepoint .
Nmero
de
diapositivas en
concordancia
con el tiempo,
claramente
definidas
las
diapositivas a

Preguntas

texto, dificultoso
de leer, con
prrafos
no
justificados.
Ausencia
de
grficos
,
esquemas
o
imgenes
que
ayuden en la
presentacin del
tema
en
cuestin.
No se responden
las preguntas de
la audiencia ni
las del profesor.

imgenes que
ayuden en la
presentacin
del tema en
cuestin. Uso
de
la
informacin
discreta que
incluye fuentes
generales.

cada integrante
del curso. Uso
de
la
informacin de
manera
adecuada que
incluye fuentes
especializadas.

cada integrante
del curso.
Uso
de
la
informacin
sobresaliente
que
incluye
fuentes
especializadas

Las preguntas
realizadas por
la audiencia y
por
el
profesor, son
respondidas
de
manera
insegura, con
resuestas
vagas
o
incorrectas.

Las preguntas
realizadas por
la audiencia y
por el profesor
son
respondidas de
manera
correcta
fundamentando
tal respuesta.
Comenta con el
profesor
las
implicancias de
tales
respuestas.

Las preguntas
realizadas por la
audiencia y por
el profesor son
respondidas de
manera
sobresalientes
por todos los
integrantes del
grupo;
fundamentando
de
manera
slida
sus
respuesta.
Comenta
y
relaciona
sus
respuestas con
lo visto en las
clases y en el
contexto
biolgico de la
bioqumica.
Entrega
ejemplos
concretos
en
biologa vegetal
y
en
biomedicina.

Anexo 2:
Introduccin al instrumental bioqumico. Normas del laboratorio y actividades
prcticas.
Introduccin
Para la comprensin de la Bioqumica, actividad intelectual abierta con limitaciones
que establece el mtodo cientfico, se requiere una actitud de curiosidad despierta
para observar hechos en condiciones experimentales.
La capacidad de obtener informacin precisa al mximo de exactitud, registrar,
ordenar y presentar los datos en forma comprensibles a los observadores
independientes que tengan acceso a ellos es una habilidad que no se logra sino es por
la prctica personal del ejercicio.
La presente gua de laboratorio, tiene la finalidad de cumplir con los siguientes
Objetivos Especficos:
1. Ejercitar a los alumnos en el mtodo cientfico mediante el manejo de tcnicas
generales y sencillas, aplicables a mltiples problemas particulares.
2. Desarrollar habilidad para programar experimentos, sistematizar el trabajo de
laboratorio, manipular los equipos y realizar mediciones u observaciones rigurosas, as
como saber expresar sus resultados.
3. Procurar el desarrollo de iniciativa personal y de razonamiento lgico frente a
problemas que se planteen, de tal modo que el alumno pueda realizar innovaciones o
variaciones en los mtodos de trabajo.
4. Desarrollar el sentido de responsabilidad social para manejar los recursos humanos
y materiales que inciden en su propia formacin.
5. Exigir en forma intransigente una actitud de honestidad intelectual.
El registro de los resultados de los experimentos es una parte esencial de cualquier
trabajo cientfico. Los experimentos de laboratorio son el fundamento de las hiptesis,
teoras, conocimientos cientfico y tecnologa, y son intiles si no se consigna por
escrito la descripcin de lo que se ha hecho y observado en tal forma que permita a
cualquiera, con cierto conocimiento del asunto, que repita, compruebe o corrija el
trabajo realizado sin necesidad de gua especial.
Las anotaciones deben ser breves y muy claras; se llevarn en el cuaderno exclusivo de
laboratorio, as como los grficos y calibraciones de los experimentos que lo requieran.
Se harn inmediatamente despus de cada experimento sin confiar a la memoria un
momento ms de lo necesario.
Para que los experimentos de laboratorio tengan valor formativo, se aprenda a hacer
observaciones exactas, se estimule la curiosidad y se desarrolle un sentido crtico
basado en los aspectos cuantitativos de la ciencia es necesario que antes de iniciar el
trabajo en el laboratorio:
Se revise en textos, los principios fundamentales implicados

 Se reflexione y relacione con otros principios o hechos previamente conocidos

Se estudie y comprenda bien las instrucciones del experimento antes de realizarlo
Las anotaciones en el cuaderno deben ser una descripcin completa y honesta de lo
que ha visto y hecho. No es aceptable hacer anotaciones en borrador para despus
pasarlo en limpio y conceder al aspecto esttico un valor que no merece. Aunque los
experimentos que se harn, producen resultados previsibles por las teoras conocidas
que de ellos se derivan originalmente, cualquier resultado imprevisto, raro, o an
absurdo debe anotarse y de ningn modo llenar el protocolo con lo que debi pasar
pues sera una relacin completamente intil.
Los resultados falsos o las omisiones no ensean nada. S en cambio, el anlisis
concienzudo de los resultados inesperados o contrarios a lo previsto, que pueden ser
fuente de mucha informacin til para el desempeo futuro en el laboratorio.
Normas de Seguridad
Todos los accidentes personales por triviales que sean deben comunicarse al professor
o al ayudante encargado de la prctica.
Las sustancias que se utilizan, y las operaciones que se realizan en el laboratorio son
potencialmente txicas y peligrosas. Trabaje con cuidado, atento a los eventos que
puedan comprometer la seguridad personal o colectiva.
Usar delantal blanco, para proteger la ropa y el cuerpo, las personas que lleguen sin
delantal no podrn realizar la actividad prctica y sern consideradas ausentes de la
actividad.
No fumar en el interior del laboratorio
No consumir alimentos ni bebidas en el laboratorio
No utilizar la llama del mechero sin cerciorarse antes de que no haya cerca
lquidos inflamables.
Dirija la boca del tubo o matraz de reaccin lejos de s mismo y del vecino, el
contenido puede proyectarse.
Con los lquidos corrosivos, cidos y bases concentrados o venenosos, se debe tener
cuidado de no inhalar sus vapores y el contacto con cualquier parte del cuerpo. Si se
tiene contacto accidentalmente, lvese de inmediato con abundante agua del cao y
avise al profesor.
No mantenga el mechero encendido sin necesidad.
No arroje slidos (grasa, fsforos, papel de filtro, etc.) al desague.
Cudese de no arrojar fsforos encendidos o incompletamente apagados a los
depsitos de basura.
No cambie de lugar los reactivos para uso del grupo. Deben estar disponibles para
todos.
No confunda los tapones de los frascos de reactivos ni se introduzcan en ellos pipetas
o goteros. De preferencia sirva un poco del que necesita en un tubo de ensayo o vaso
precipitado muy limpio y de all srvase para su experimento.
Tenga especial cuidado con los solventes voltiles que pueden llegar a provocar
explosiones. Si se vierte accidentalmente sobre la mesa, squela inmediatamente con
un trapo hmedo y enjuguese ste en el chorro de agua, exprimindolo.
Conserve limpio su lugar de trabajo. Lave con mucho cuidado el material de vidrio y
enjuguelo con abundante agua.

Anexo 3:
Introduccin a tcnicas de anlisis en bioqumica. Espectrofotometra
Laboratorio Bioqumica: Espectrofotometra de absorcin molecular.
Objetivo: Comprender los principios de la absorcin molecular de la luz visible y valorar
su uso en el anlisis cuantitativo.
Introduccin
Todas las molculas y tomos son capaces de absorber radiacin
electromagntica, lo que nos permite, por ejemplo, sentir el calor de una estufa
encendida. Pero no fue hasta que se describi la Ley de Lambert y Beer que esta
propiedad alcanz una forma prctica, La Ley de Lambert y Beer dice:

Donde el logaritmo decimal de la razn entre la luz monocromtica incidente I0 a una

muestra con respecto a la luz transmitida I (esta razn la llamaremos de ahora en
adelante Absorbancia) es directamente proporcional a un coeficiente de extincin
molar , la longitud del paso de la luz por la muestra d, y la concentracin del
compuesto que absorbe la radiacin en la muestra c. Esto se ejemplifica en la siguiente
figura:

La mayora de los mtodos para el anlisis de los componentes de la sangre y

otros lquidos biolgicos se basan en la generacin de una solucin y la comparacin
entre la luz que absorbe la solucin problema con la que absorbe una solucin de
concentracin conocida. Los mtodos son simples, rpidos y sensibles y hacen posible
la estimacin de pequeas cantidades de sustancias muy difciles de medir por otros
mtodos.
Los espectrofotmetros son instrumentos para medir la luz que llega a un
detector fotoelctrico, llamado fotomultiplicador, traducindola en una seal elctrica
que luego es procesada por el equipo para el clculo de la concentracin del material
absorbente de la luz.
Los espectrofotmetros constan en esencia de las siguientes partes:

Una fuente luminosa que es variable segn la zona del espectro

electromagntico que desee utilizarse, principalmente las lmparas de
mercurio para la luz UV, y de tungsteno para la luz visible.

Un dispositivo colimador para alinear los rayos luminosos que se emiten en

todas las direcciones a partir del material incandescente y que puede ser un
espejo curvo, una lente o ambos y formar un haz de rayos paralelos.
Un monocromador, que puede ser un prisma o una retcula de difraccin para
descomponer la luz en su espectro y por medio de una hendidura mvil dejar
pasar slo longitud de onda de la luz que interesa para el experimento.
Una cubeta que es un recipiente que absorbe una cantidad de luz conocida y
constante, en la cual se coloca la solucin problema o el blanco de reactivos.
Las cubetas pueden ser tubos de ensayo seleccionados por su calibre igual, y
que al ponerse en el aparato dan lecturas iguales, que se ajusta a cero.
Un fotomultiplicador que transforma la energa luminosa que excita su
superficie en energa elctrica.

Las unidades en que se expresa la Absorbancia (Abs) son:

Transmitancia (T) = I x 100 escala aritmtica de 0 a 100
I0
Absorbancia (A) = - log T escala logartmica de 0 a 2
Densidad ptica (D.O)

Cuestionario
1.- Qu es un espectro de absorcin?
2.- Cules son las aplicaciones y limitaciones del mtodo espectrofotomtrico?
3.- De que color aproximado se ve un cuerpo que absorbe luz de longitudes de onda
correspondientes al color verde y al azul?
4.- Puede efectuarse una determinacin fotomtrica en un lquido transparente
incoloro? Qu requisitos exigira a su instrumento? Explique.
5.- Si las soluciones coloreadas presentan una absorbancia muy grande que dificulta la
medida en el espectrofotmetro. Qu hara usted para poder medir las
concentraciones de estas soluciones?

Anexo 4:
LABORATORIO BIOQUIMICA
PIGMENTOS VEGETALES
CROMATOGRAFA EN PAPEL Y ESPECTROFOTOMETRA.INTRODUCCIN.La funcin de los pigmentos fotosintticos es la absorcin de energa luminosa durante
el proceso de fotosntesis. Estos pigmentos se encuentran unidos a travs de enlaces
covalentes y no covalentes a protenas presentes en las membranas de los
cloroplastos, constituyendo as los Fotosistemas (I y II). Entre los pigmentos
fotosintticos destacan las clorofilas (a y b), como pigmentos principales y tambin los
carotenoides y ficobilinas, como pigmentos antena o accesorios. Todos estos
pigmentos tienen diferentes colores debido a las diferentes propiedades de absorcin
de la luz visible que ellos presentan.

Debido a la propiedad de absorcin de luz, los pigmentos fotosintticos pueden ser

detectados y cuantificados a travs de espectrofotometra, que es una medicin de
la cantidad de energa radiante que absorbe un sistema qumico en funcin de la
longitud de onda () de la radiacin, o diferentes mediciones a una determinada .
En los mtodos espectrofotomtricos de anlisis es muy til saber que longitudes
de onda de la energa radiante se absorben con mayor fuerza. Esto se hace
irradiando la muestra en solucin con un haz de luz de una sola y midiendo la
cantidad de absorcin, luego se cambia la y se mide nuevamente la absorcin, y
as sucesivamente hasta obtener un barrido completo de la sustancia. Al graficar
la Absorbancia en funcin de (nm) se obtiene el espectro de absorcin de la
sustancia analizada. El instrumento que se emplea para obtener dicha informacin
se denomina Espectrofotmetro. El espectro de absorcin nos permite determinar
aquella(s) longitud(es) de onda en la(s) cual(es) una sustancia absorbe una mayor
cantidad de luz. Este valor de mxima absorbancia es nico para cada sustancia o
compuesto, y por ello utilizado para conocer su naturaleza y concentracin.

ACTIVIDAD 1
OBTENCIN DE PIGMENTOS FOTOSINTTICOS.ACTIVIDAD 1.1.- EXTRACCIN DE LOS PIGMENTOS.- Pesar 6 grs de hojas de espinaca.
- Colocarlas en un mortero y molerlas.
- Agregar directamente a las hojas maceradas 10 mL de Acetona y dejar reposar
durante 5 minutos.
- Filtrar el extracto por papel de filtro en embudo cnico, dentro de un matraz
Erlenmeyer de 100 mL y guardar este extracto.
ACTIVIDAD 1.2.- CROMATOGRAFA DE LOS PIGMENTOS.- Dentro del matraz Erlenmeyer conteniendo el extracto acetnico de los pigmentos
vegetales, colocar una tira de papel de filtro de 3x 9 cm de largo con ayuda de las
pinzas (evite manipular el papel de filtro directamente con los dedos).
-Tapar la boca del matraz con un vidrio de reloj.
- Dejar que el extracto de los pigmentos ascienda por el papel, durante 10 a 15
minutos aprox.
- Sacar el papel del matraz, dejar secar al aire unos instantes y luego recortar las
zonas que presenten diferente coloracin.
- Colocar cuidadosamente con una pinza el trozo de papel RECORTADO dentro de
un tubo de ensayo.
- Agregar 4 mL de acetona sobre el pedazo de papel y dejar reposar por 5 minutos
-Retirar cuidadosamente el lquido y traspasarlo al tubo de ensayo pequeo para
leer en el espectrofotmetro.
A qu se deben los diferentes colores observados en el papel de filtro?
ACTIVIDAD 2
ESPECTROFOTOMETRA DE PIGMENTOS FOTOSINTTICOS.ACTIVIDAD 2.1.- ABSORBANCIA DE LOS PIGMENTOS FOTOSINTTICOS.
- Encender el Espectrofotmetro para que se estabilice. En el tablero principal
presionar el botn test y luego en el men principal seleccione la opcin
mltiples longitudes de ondas.
- Seleccione las opciones que le permitan hacer un barrido de la absorbancia de
sus muestras en el rango de longitudes de onda de 350 a 700 nm, registrando
valores a cada 20 nm.
- Coloque dentro del espectrofotmetro un tubo de vidrio conteniendo slo
acetona, en la celda correspondiente al blanco (B). Cere el espectrofotmetro
con este solvente.
- Introduzca los tubos conteniendo sus muestras y comience a registrar sus
lecturas de absorbancia.
- Complete la siguiente tabla.
- Con los valores de absorbancia y diferentes longitudes de onda construya los
espectros respectivos para sus dos muestras.
- Indique en sus espectros el o los peaks de mxima absorbancia y a qu
pigmentos corresponderan. Analice e interprete los espectros de absorcin
obtenidos por Usted y compare con datos de la literatura.
A qu se debe la absorbancia de los diferentes pigmentos fotosintticos?
A qu se deben los diferentes colores que presentan los diferentes pigmentos?
Qu funcin cumplen las clorofilas en el proceso de fotosntesis?
Qu funcin cumplen los carotenoides en el proceso de fotosntesis?

Tabla 1 :
Longitud de Onda (nm)
340
360
380
400
420
440
460
480
500
520
540
560
580
600
620
640
660
680
700

ABS

ABS

Informacin complementaria : Cromatografa.

Objetivo: Adquirir el conocimiento bsico en tcnicas cromatogrficas y valorar su uso
prctico dentro del campo de la biologa.
Introduccin
La cromatografa es una tcnica de separacin de molculas que consta de dos
fases denominadas fase estacionaria y fase mvil. En este sistema las molculas se
separan unas de otras segn su afinidad a cada una de las fases. Por ejemplo si la
molcula tiene alta afinidad por la fase estacionaria, esta se quedar ms tiempo
detenida que otra molcula que no interacta de ninguna forma con el soporte. Estos
tipos de interacciones pueden ser: electrostticos, hidrofbicos, de difusin y de
afinidad.
Cromatografa en Capa Fina
Esta tcnica se usa generalmente en la separacin e identificacin de pequeas
cantidades de muestras biolgicas.
Una placa de vidrio o aluminio se cubre con una delgada capa uniforme de
adsorbente (soporte), los cuales necesitan un agente ligando como el sulfato de calcio
para facilitar la adherencia a la placa. Como adsorbente generalmente se usa Hidrxido
de Silicio, tambin llamado Silica-Gel. El espesor normal que se espera obtener es de
unos 0.25 mm. cuando se utilizan las placas para hacer anlisis cualitativos. Si se trata
de trabajos preparativos se debe usar lminas con un espesor de 0,5 mm.
Las placas de Silica-gel se utilizan para la separacin y caracterizacin de
aminocidos, alcaloides, azcares, cidos grasos, aceites esenciales, esteroides y bases
nitrogenadas.

Cromatografa en Columna
La cromatografa en columna es la tcnica ms utilizada para separar e
identificar compuestos de inters biolgico de una mezcla. Se emplea un medio a
travs del cual fluye un lquido provocando una migracin diferencial de los
compuestos que se aplican. Los solutos se distribuyen entre la fase mvil y la fase
estacionaria de acuerdo a las caractersticas de la fase estacionaria. sta se encuentra
empacada en una columna de vidrio.

Fase mvil

Muestra

Fase estacionaria
Protenas
separadas

Los
distintos tipos de cromatografa en columna se clasifican en su mayora de acuerdo a
las caractersticas de la fase estacionaria.
As tenemos la cromatografa de intercambio inico, en el cual la fase estacionaria
posee carga neta positiva o negativa, cromatografa de exclusin molecular, en la que
tenemos un gel con un entramado o malla de un tamao conocido, que retiene ciertas
protenas y excluye otras, y la cromatografa de afinidad, en la que la fase estacionaria
posee un sustrato de afinidad que permite que se una un solo compuesto o protena
de la muestra a la columna, excluyendo a los dems.
Otras tcnicas cromatogrficas se clasifican de acuerdo a su equipamiento,
como la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC, por sus siglas en ingls), que
ocupa pequeas columnas de acero que permiten el paso de la fase mvil a altas
presiones, y la cromatografa de gases, en la que la fase mvil es un gas.
En este laboratorio abordaremos la cromatografa en papel como tcnica para
separar pigmentos presentes en muestras biolgicas.

Anexo 5:
Introduccin tcnica de anlisis de biomolculas (cidos nucleicos y protenas)
electroforsis, tipos y aplicaciones.
EXTRACCIN Y ELECTROFORESIS DE PROTEINAS DE PLANTAS.
INTRODUCCION.La electroforesis es una tcnica que mide la tasa de migracin de molculas cargadas
en un medio que contiene lquido cuando se aplica un campo elctrico al lquido. Las
molculas cargadas negativamente (aniones) emigrarn hacia el electrodo positivo
(nodo), y las molculas cargadas positivamente (cationes) emigrarn hacia el
electrodo negativo (ctodo). Varios factores afectan la tasa de migracin, como la
potencia del campo elctrico y la accin de tamiz molecular del medio en que se
realizar la migracin. Como las protenas y cidos nucleicos estn electricamente
cargados, la electroforesis se ha utilizado extensamente para proporcionar
informacin del tamao, la conformacin y la carga neta de stas macromolculas.
En la prctica, la electroforsis emplea un sistema de tampones, un medio ( gel de
almidn, gel de agarosa o gel de poliacrilamida) y una fuente de electricidad. Se
aplican las muestras y la corriente elctrica elctrica pasa por el sistema durante un
tiempo adecuado. Despus de la migracin de las molculas, el gel puede tratarse con
colorantes selectivos para ver la localizacin de los componentes separados (Klug y
Cummings, 1999).
Uso de electroforesis en la identificacin de las variedades.
De acuerdo a su potencial gentico las diversas especies vegetales desarrollan
sustancia qumicas especficas detectables segn un adecuado estado electrofortico.
De este modo la estabilidad de protenas y enzimas solubles en agua, otorga la
posibilidad de estudios taxonmicos.
El principio bsico es la migracin de partculas coloidales (protenas) como
consecuencias de ser sometidas a un campo elctrico. Esta migracin de depende de
la carga elctrica neta de la partcula o molcula, de su configuracin, de grado de
disociacin, pH, y el tipo o medio de soporte que se utilice.
Estas partculas que han migrado de acuerdo al proceso electrofortico, tendrn
caractersticas especficas tales como: tamao (peso molecular), intensidad de banda
(cantidad de protena), nmero para cada variedad y que sern reveladas con los
colorantes apropiados.
En el caso de investigacin clonal de especies como la papa y relativo a la identificacin
de las protenas, estas se caracterizan por la presencia de todas o algunas de cuatro
bandas principales ubicadas en el tercio superior del sector catdico del gel de soporte
y por muchas bandas finas en el sector andico.
Esquema tpico de un foregrama de papa con sus cuatro bandas principales.
A

- : CATODO

+: ANODO

Junto a la investigacin proteica es necesario el estudios de los espectro de esterasas

que dan una certidumbre adicional a lo anterior, ya que estn menos influidas por la
brotacin.
En el proceso de electroforesis, es importante que los tubrculos a usar estn
maduros, pues si estos estn inmaduros los patrones son menos pronunciados.
Se ha constatado que las bandas proteicas persisten an cuando el material se cultive
bajo distintas condiciones ecolgicas y biolgicas.
La identificacin de una variedad desconocida se inicia por su espectro de protenas.
DE acuerdo a la presencia o ausencia de las cuatro bandas principales ( A, B, C, D), que
se ubica en el tercio cercano al punto de partida (catdico), se puede incluir a la
variedad dentro de las nueve posibles combinaciones (Stegeman y Loeschcke, 1976).
Clasificacin de foregrama de papas.
ZONA
A
B
C
D

1
+
-

2
+
+

3
+
+
-

combinaciones
4
5
+
+
+
+
+
+

6
+
+
-

7
+
+
+
-

8
+
+
+
+

9
+
-

En el sector andico, se presentan muchas bandas finas, y se utilizan en el diagnstico

fino por comparacin directa con el patrn.
Ventaja de la electroforesis
1. anlisis rpido. El perodo entre la toma de la muestra y la obtencin de resultados
es de 24 horas.
2. Evita duplicaciones del material clonal
3. Posibilita agrupar clones segn bandas electroforticas.
4. Las papas se pueden guardar por un perodo de seis meses a una temperatura de
4-10C, no registrando cambios durante este perodo en los espectros
electroforticos.
5. Se requiere de una reducida cantidad de tubrculos (aproximadamente 1 gr. De
cualquier sector de este).
6. No existe una influencia del clima, del suelo, de tratamiento de reguladores de
crecimiento, ni de fertilizante, con respecto a los espectros electroforticos.
PASOS PRACTICOS.Preparacin de las muestras
Las protenas a separar se extraen en un tampn de rotura y solubilizacin (tampn
Laemmli), que contiene:
Agua destilada
3.55 mL
Tris-HCl 0.5 M pH 6.8
1.25 mL
Glicerol
2.5 mL
SDS al 10%
2 mL
2--Mercaptoetanol
0.5 mL
Azul de Bromofenol al 0.5% (p/v)
0.2 mL

Se pesan 50 mg de ndulos y las protenas de los mismos se extraen con 150 mL de

tampn de rotura. Las muestras se homogenizan con un "mini-mortero". A
continuacin se hierven durante 10 min en un bao a ebullicin. Finalmente se
centrifugan 5 min a 14000 rpm.
Con este tratamiento las protenas quedan solubilizadas en el sobrenadante, del cual,
con una micropipeta, se tomar el volumen adecuado (dependiendo de la
concentracin de protenas) para introducir en los pocillos del gel.
Electroforesis.
Se analizarn distintas variedades de papa.Preparacin de la muestra.
Tubrculos maduros y frescos preferentemente levantados despus de la muerte del
follaje, deben ser sanos libres de infecciones bacteriolgicas y fungicidas.
Se deben lavar con agua fra y secar con una toalla de papel. Refrigerar a
20C por lo menos 16 Hrs. Se deshielan los tubrculos a temperatura ambiente lo
que lleva un par de horas.
Se retira la piel, y la extraccin de la savia se hace en una prensa, en una maquina
molinex incluso entre dos cucharas. Se le agrega una gota de solucin de
antioxidante a la savia (Na2S2O5 0.75 g + Na2 SO3 1.0g agregar 5 cc de agua
destilada).
El almidn es removido por filtracin o por centrifugacin a 3000 rpm durante 10
minutos. Se puede almacenar el sobrenadante en tubos plsticos.
Se usa una cmara para electroforesis horizontal con una peineta para 10 muestras.
Preparacin del gel.
El gel se prepara al 6% de acrilamida y 0.3% de methilen-bis-acrilamida disueltos en el
buffer requerido.
PROTEINAS:
Solucin stock de buffer para protenas: 30.3 g de Tris y 36.6g de cido brico en 1000
cc de agua. PH: 7.9. Para usar se diluye en 1 parte de buffer con 7 de agua.
Buffer de acrilamida para el gel: Disolver 8.5g de acrilamida y 450 mg de methylenbis-acrilamida en 150 ml de buffer preparada (1 volumen de solucin stock en 7 de
agua destilada) diluir y filtrar.
Confeccin del gel: Calentar hasta 20C 35 ml del buffer de acrilamida para gel, una
vez alcanzada la temperatura agregarle 0.0125 g de (Na2SO3 anhidro) inmediatamente
una gota de Themed (cuidado es VENENO) y al final 0.8 ml de persulfato de amonio
recientemente preparado 0.1g de persulfato en 25cc de agua), revolver con una
bagueta sin que queden burbujas, y verter inmediatamente en la bandeja del gel,
poner la peineta y esperar unos 45 minutos a que polimerize..
Carga de las muestras: a 0.4 ml de la muestra previamente descongelada, agregar 0.1
ml de amido negro. Se toman 25 ul con una micropipeta y se ponen en el contenedor
para la muestra . Llenar las vasijas de los electrodos con solucin Stock de buffer ya
diluida hasta tocar los bordes del gel (sin llegar a cubrirlo). Conectar a la fuente de
poder durante aproximadamente 1 hora a 150 V aprx 50 m a dentro del refrigerador
para evitar el recalentamiento.

Se retira el gel, se corta la parte donde estuvo inserta la peineta. Sacar una muesca
arriba a la izquierda (para saber el lado). Y poner en solucin de teido.
Solucin de Teido: solucin de teido: Acido tricloroactico 30 g en 800 ml de agua
destilada + 200 ml de metanol + 70 ml de cido actico. Teir agitando en 150 ml de
solucin de teido + 0.9 ml de azul de coomasie brillante (al 1%). Dejar 3 horas
tiiendo en agitacin constante.
Lavar el gel de tres a cuatro veces (durante 30 minutos cada vez), en agitacin en
solucin de agua, metanol y acido actico en proporcin 14:6:1.
REACTIVOS:
Na2S2O5 ( metabisulfito)
Na2 SO3 (sodio sulfito anhidro )
Tris
Acido brico
Acrilamida
Methylen-bis-acrilamida
Themed
Persulfato de amonio
Amido negro ( Indicador )
Acido tricloroactico
Azul de coomasie
Metanol
Acido actico

MATERIALES y EQUIPOS DE LABORATORIO.Micropipetas unicanal Gilson

Vasos precipitados de 100,500cc
Agitador magntico
PHmetro
Matraces
Probetas de 50, 100, 1000 cc
Balanza analtica.
Balanza de precisin
Refrigerador
Orbit Shaker
Cubetas psticas
Camara electrofortica
Fuente de Poder
Centrfuga
Tubos eppendorf (1,5 ml)
Molinex
Microonda
Espatulas

BIBLIOGRAFIA.
STEGEMAN, H Y V. LOESCHCKE, 1976. Index Europischer Kartoffel-sorten;
Bestimmung durch elecktrophoretische Spektren. Paul Parey, Berlin 214 p.
COUTO, A., PETERS, I., BRUNE, W. Y G, CANDIA. 1991. Electroforese de protena e isoenzimas
de fungos e essencias florestais. Universidad Federal de Vicosa. 242 p.
GRIFFITHS, AJF et al. 1996. An Introduction to Genetics Analysis. WH Freeman & Company.
Nfew York, USA.KLUG, W. y M. CUMMINGS. 1999.
Prentice Hall

Conceptos de Gentica. Quinta edicin.

Anexo 6:
Espectrofotometra aplicada a la cuantificacin de protenas. Mtodos de
cuantificacin y aplicaciones.
Determinacin de la concentracin de protenas.
Objetivo: Conocer y determinar la concentracin de protenas que estn presentes en
muestras biolgicas, segn el mtodo de Biuret.
Introduccin
Las protenas son los componentes principales de todos los seres vivos, y si
queremos estudiar protenas en particular, lo primero que tenemos que conocer es la
concentracin de protenas totales en una muestra biolgica.
La longitud de onda donde tenemos mximo de Absorcin de luz de las
protenas est cercano a los 220 nm, lamentablemente, las bases nitrogenadas del
DNA y, RNA, coenzimas y una multitud de compuestos biolgicos tambin comparten
ese mximo de absorcin, por lo que se necesita un mtodo que desplace el mximo
de absorcin de luz de las protenas a una longitud de onda donde no tengamos
interferencia con otros compuestos biolgicos.
Dado que las protenas son totalmente heterogneas entre s, no existe un
mtodo que pueda calcular en forma absoluta la concentracin de protenas en una
muestra, pues depender de que tipo de protena utilicemos como Standard y la
reactividad de sta al mtodo. As, la eleccin del mtodo estar dada por los
materiales que dispongamos en el laboratorio y la sensibilidad que queremos. Por
ejemplo, para muestras relativamente concentradas de protenas, como el plasma
sanguneo, pensamos en el mtodo de Lowry o el de Biuret, para muestras ms
diluidas, como homogenados celulares, seleccionaremos el mtodo de Bradford o el
del cido Bicinconnico (BCA).
El reactivo de Biuret es el sulfato cprico diluido en solucin alcalina. Los
compuestos que contienen dos o ms enlaces peptdicos tales como el Biuret
(NH2CONHCONH2) y protenas, forman complejos rgano metlicos con los iones
cpricos para dar un color prpura caracterstico. Los dipptidos y todos los
aminocidos con excepcin de la histidina, serina y treonina, no reaccionan con Biuret.

En las muestras biolgicas prcticamente no hay sustancias fuera de las

protenas que den la reaccin de Biuret. A pH cidos los iones cobre se combinan
tambin con los grupos carboxilos y a pH bsicos reaccionan con los grupos amino de
las protenas. La reaccin no debe efectuarse en presencia de iones amonio, debido a
que forma compuestos coloreados con los iones de cobre.
La sensibilidad del mtodo se encuentra en el rango de 1 a 20 mg.
Materiales y Reactivos
1. Tubos de Ensayo
2. Pipetas de 1ml, 5 ml y 10 ml.
3. Solucin stock de Gelatina de 20 mg/ml
4. Agua destilada.
5. Espectrofotmetro.

Protocolo

Prepare una batera de tubos que incluyan el blanco, los cinco tubos de la curva
de calibrado y el tubo de muestra, como lo indica la tabla:

Reactivos

Blanco

Std 1

Std 2

Std 3

Std 4

Std 5

Muestra
Gelatina (ml)
H2O destilada (ml)
Reactivo de Biuret (ml)

-0,5
2,50

0,1
0,4
2,50

0,2
0,3
2,50

0,3
0,2
2,50

0,4
0,1
2,50

0,5
-2,50

Muest
ra
0,5
2,50

Mezcle bien cada tubo y djelos reposar por 15 minutos.

Lea frente a sus blancos en el espectrofotmetro a 570 nm.
Lea el tubo de muestra y calcule la concentracin de protenas de ella,
interpolando en la curva de calibrado graficada en papel milimetrado o en la
ecuacin de la recta de su calculadora.

Cuestionario
1.- Si tuviera muestras biolgicas con protenas y alto contenido de grasas. Cmo
tratara a su muestra para la determinacin de protenas? Explique con detalle.
2.- Qu otras tcnicas se pueden utilizar para la determinacin de protenas?
3.- Si tenemos una muestra biolgica animal y una vegetal. Es posible encontrar
diferencias sustanciales en la concentracin de protenas totales entre las dos
muestras? Fundamente.