Importancia de las plantas C4

La enzima fosfoenolpiruvato carboxilasa (PEPC) est ampliamente distribuida

en clulas vegetales, bacterias fotosintticas y no fotosintticas cianobacterias
y en algas verdes. Participa en procesos de la ruta fotosinttica en la fijacin
del CO2 atmosfrico en plantas C4 y en las plantas con metabolismo cido
crasulceo (CAM).
La enzima PEPC cataliza la b-carboxilacin del fosfoenolpiruvato (PEP),
reaccin altamente exergnica con un cambio de energa muy negativo (DG =
-6 a -8 Kcal/mol) que es prcticamente irreversible bajo condiciones celulares,
utiliza bicarbonato como sustrato y Mg2+, produce oxaloacetato (OAA) y
fosfato inorgnico (Pi) (Oleary 1982), de acuerdo a la siguiente reaccin: PEP
+ HCO3 - OAA+ Pi Se han descrito tres isoenzimas de PEPC en plantas
superiores asociadas a diferentes funciones fisiolgicas:
1) La isoenzima fotosinttica de la hoja de plantas C4, que cataliza la fijacin
de CO2 en la primera reaccin de la ruta C4.
2) La isoenzima de las plantas CAM, con funcin fotosinttica presente en
plantas de clima desrtico, en donde la fijacin de CO2 ocurre durante la
noche.
3) La isoenzima anaplertica, que desempea un papel importante en el
abastecimiento de compuestos de cuatro carbonos al Ciclo de Krebs, cuando
los intermediarios de este ciclo estn siendo usados para biosntesis.
Estas isoformas estn codificadas por genes diferentes y pueden distinguirse
por sus propiedades cinticas y por su comportamiento cromatogrfico. Las
plantas C4 tienen la isoforma de PEPC con funcin fotosinttica. Estas plantas
se caracterizan por presentar dos tipos de clulas diferenciadas que participan
en el metabolismo fotosinttico de la hoja.
En la Figura 1 se muestra un esquema simplificado de metabolismo
C4, donde las clulas del mesfilo se encuentran cerca de la superficie externa
de la hoja y toman CO2 directamente de la atmsfera, se hidrata a bicarbonato
en el citosol por la enzima anhdrasa carbnica (CA) y, subsecuentemente lo
asimila en forma de OAA, un cido de cuatro carbonos, mediante PEPC. Este
metabolito se transporta al interior del cloroplasto en donde se convierte en
malato mediante la enzima mlico deshidrogenasa (MDH) dependiente de
NADP+ (NADPMDH). El malato, en intercambio con el OAA que se est
produciendo, es transportado al citoplasma, para posteriormente, ser llevado a
las clulas de la vaina vascular, las cuales se localizan en la periferia de las
haces vasculares en donde estn aisladas del intercambio directo de CO2 con
la atmsfera. En las clulas de la vaina vascular, el malato es descarboxilado
mediante la enzima mlico deshidrogenasa descarboxilante dependiente de

NADP+ (enzima mlica-NADP) y el CO2 producido se utiliza para la sntesis de

carbohidratos mediante el Ciclo de Calvin que tiene lugar en estas clulas. El
piruvato, producto de la descarboxilacin regresa a las clulas del mesfilo y es
transportado al interior del cloroplasto en donde produce PEP en una reaccin
catalizada por la enzima piruvato ortofosfato dicinasa (PPDK).

La funcin principal de la ruta C4 es concentrar CO2 en las

clulas internas de la vaina vascular por medio de la PEPC que funciona como
una bomba, envindolo a donde se encuentra la enzima Ribulosa-1,5-bifosfato
carboxilasa/oxigenasa, para as suprimir su actividad de oxigenasa y la foto
respiracin asociada. El sistema fotosinttico C4 opera con prdidas de agua
menores que la fotosntesis C3, por que la afinidad por CO2 es superior en las
C4 y pueden mantener alta velocidad de fijacin con apertura estomatal
limitada, que permite fotosntesis activa en condiciones de relativa aridez y con
baja concentracin de CO2; intercambian CO2 por agua ms eficientemente
que las plantas C3, porque la concentracin interna de CO2 es mucho ms
baja que en estas ltimas. Por otra parte, la asimilacin de CO2 es ms
eficiente en las plantas C4, porque poseen la capacidad de aprovechar mayor
cantidad de energa luminosa y crecen mejor en condiciones de alta intensidad
lumnica, por esa razn las plantas C4 dominan la flora de los pastizales y la
produccin de biomasa en regiones de clima tropical y subtropical.
Las enzimas involucradas en la fotosntesis se encuentran en una
misma clula y su actividad se expresa de forma diferente a lo largo del da. En
estas plantas durante la noche cuando la enzima PEPC est activa, los
estomas se encuentran abiertos, el CO2 es fijado produciendo OAA a partir de
PEP. El OAA se transforma en malato que se almacena en vacuolas hasta el
da siguiente (Ting 1985). En las primeras horas de la maana, la fijacin del

CO2 la llevan a cabo conjuntamente la PEPC y Rubisco, pero al aumentar la

temperatura e intensidad de luz, los estomas se cierran para evitar la prdida
excesiva de agua, es entonces cuando el malato es movilizado desde las
vacuolas y la actividad de PEPC disminuye y est en presencia de su inhibidor.
La descarboxilacin del malato crea una concentracin elevada de CO2, el cual
es utilizado por la Rubisco en la misma forma que lo hacen los cloroplastos de
las hojas de plantas C3. Las isoformas de PEPC con funciones no
fotosintticas, se encuentran en clulas de los tejidos no fotosintticos de las
plantas C4, en los tejidos fotosintticos y no fotosintticos de plantas C3, en
semillas y en frutos, donde funciona como enzima anaplertica, que reabastece
al ciclo de los cidos tricarboxlicos de OAA, cuando sus intermediarios son
empleados para sntesis de aminocidos o porfirinas. Estas isoformas tienen
mayor afinidad para el sustrato PEP, la Km es hasta 10 veces menor que la
isoforma fotosinttica, mientras que para bicarbonato, el segundo sustrato de la
enzima tiene menor afinidad en plantas C3 que en plantas C4.
Algunas de las funciones de PEPC como enzima anaplertica son las
siguientes: la asimilacin de nitrgeno en ndulos aumenta por actividad de
PEPC, cuando se requiere de esqueletos carbonados para la asimilacin inicial
de N, estos esqueletos se derivan del ciclo de los cidos tricarboxlicos como
acetoglutarato y oxaloacetato. En los ndulos de raz de las leguminosas, la
PEPC proporciona una cantidad sustancial de carbono para rellenar la poza de
cidos orgnicos para la sntesis de malato. Se ha determinado que hasta el
25% del carbono requerido para la actividad de nitrogenasa y la asimilacin de
nitrgeno podra ser aportado por PEPC. La PEPC puede comprender hasta el
2% del total de la protena soluble del ndulo en especies que transportan
amidas.
La PEPC participa en tejidos con alta actividad metablica como el
tejido vascular de las semillas en formacin, en la maduracin y su
germinacin, se ha observado gran cantidad de PEPC durante la
diferenciacin, tambin se ha observado alto contenido de PEPC en la
aleurona cuando la actividad mittica en esas clulas es alta y puede estar
relacionada con la acumulacin de malato en el endospermo almidonoso, en
los ltimos estados de desarrollo del grano. Durante la maduracin de las
semillas de ricino tambin se ha observado que hay gran incremento de la
actividad de PEPC y probablemente est involucrado en la generacin de
malato para la sntesis de lpidos de reserva.

Regulacin de la PPCK en condiciones de estrs.

Las plantas C4 y CAM son conocidas por tener una eficiencia hdrica superior a
la de las plantas C3. Adems, son plantas muy competitivas en ambientes
salinos. La contribucin de la PEPC a esta respuesta al estrs salino se

demostr en algunas especies C4 como el sorgo, y tambin en especies C3,

con un aumento de la actividad PEPC. Tambin se ha mostrado un aumento de
la actividad PEPC en ndulos tratados con diferentes concentraciones de sal.
En la planta halfita Mesembryanthemum crystallinum la salinidad induce la
transcripcin y la actividad de la PEPC y del metabolismo CAM. Sin embargo,
curiosamente, el promotor de la PEPC de Mesembryanthemum crystallinum
expresado en plantas transgnicas de tabaco no es inducible por sal. En la
actualidad se sabe que el estrs salino conlleva un incremento de PEPC y
paralelamente un aumento de actividad nocturna de la PPCK Ca2+independiente, en plantas CAM.
Estudios realizados en la planta Clusia, con patrones fotosintticos
entre C3 y CAM constitutivo, han podido demostrar que la expresin de la
PEPC es el factor primario determinado por la capacidad genotpica del CAM y
que la abundancia de transcritos de PPCK regulados durante el da y la noche
es ms bien la consecuencia del funcionamiento del CAM y de la fluctuacin
diurna de metabolitos. Si bien se sabe que la expresin de la PEPC en la
induccin del CAM por salinidad u otros factores de estrs es tambin
producida por ABA, no existen datos sobre la participacin de esta hormona en
la expresin de la PPCK. La induccin de la PEPC y de la PPCK en el
metabolismo CAM est bien documentada; sin embargo, existen pocos trabajos
sobre la contribucin del mecanismo de fosforilacin de la PEPC a la
adaptacin o tolerancia a la salinidad, y en general a otros estreses, en plantas
C4.
Este concepto es tanto ms importante cuanto que es 93 LA
FOSFOENOLPIRUVATO CARBOXILASA (PEPC): ENZIMA CLAVE DE LOS
METABOLISMOS FOTOSINTTICOS C4 Y CAM conocido que en la planta C4
la fosforilacin de la PEPC responde del 85% de la eficacia fotosinttica. Los
primeros resultados publicados sobre el efecto de la salinidad en la PPCK y en
la fosforilacin de la PEPC en una planta C4 fueron obtenidos por nuestro
grupo y derivan del hallazgo de un espectacular aumento de la actividad de la
PPCK en extractos crudos de plantas de sorgo aclimatadas a concentraciones
crecientes de NaCl (172 y 258 mM NaCl). Este aumento de PPCK repercute en
un incremento de la fosforilacin in vivo de la PEPC, sin embargo los niveles de
PEPC no se ven alterados (Echevarra et al., 2001). El efecto sobre la PPCK es
independiente del estrs osmtico; se debe a la toxicidad inica siendo tambin
promovido por Li+, y no es promovido por la aplicacin de ABA exgeno bien a
cultivos hidropnicos o por pulverizacin foliar. Por ltimo, el tratamiento con
NaCl aumenta la actividad PPCK de hojas de sorgo en oscuridad en un
proceso que depende de sntesis proteica. Este es el primer contexto
metablico en el que se induce la sntesis de la PPCK en oscuridad, en una
hoja de planta C4.

La consecuencia de este hecho es un considerable aumento de la

concentracin de malato en oscuridad adems de un incremento de malato en
luz respecto de las plantas controles. La ausencia de fijacin nocturna de CO2
parece indicar que la planta C4 en condiciones de estrs severo, al igual que
algunas C3, podra manifestar un CAM-latente con un aumento de los niveles
de malato tanto nocturnos como diurnos. Adems del estrs salino se han
descrito resultados sobre un aumento de la PPCK en aire libre de CO2, en
plantas CAM y en estrs oxidativo. En conjunto estos resultados indican que la
participacin de la PEPC en situaciones de desecacin, salinidad, o CO2
limitante, se puede establecer por una regulacin del nivel de fosforilacin de la
enzima destacando el papel de la PPCK como enzima implicada en
mecanismos de tolerancia al estrs.

Regulacin de la degradacin de la PEPC-quinasa.

El protagonismo en los estudios de la PPCK ha estado centrado en la
regulacin de la sntesis de la enzima y de la cadena de transduccin de
seales que conduce a la sntesis/activacin tanto en plantas C4 como CAM.
Este hecho est justificado porque la sntesis de la PPCK es el elemento
principal de la regulacin circadiana de la actividad PPCK en estas plantas. En
este sentido se le ha prestado muy poca atencin a la regulacin de la
degradacin y a los mecanismos implicados. Los resultados obtenidos por el
grupo de Izui, utilizando una PEPC-quinasa recombinante de F. trinervia

expresada transitoriamente en protoplastos de clulas de mesfilo de maz,

sugieren que la PEPC-quinasa puede ser degradada va ubiquitinaproteasoma. Sin embargo, los experimentos realizados con anticuerpos anti
ubiquitina en los que utiliza extractos crudos o PPCK purificada de hojas de
maz no le han permitido mostrar que la PPCK de la planta est ubiquitinada,
sugiriendo que pueda ser debido a una falta de afinidad del anticuerpo o a la
poca abundancia de esta protena. Resultados recientes obtenidos por nuestro
grupo muestran que en hojas de sorgo la degradacin de la PPCK est
regulada por ABA en un proceso que podra estar mediado por el proteosoma.
Tanto el ABA como el inhibidor MG132, infiltrados a hojas o a discos
de hojas inhiben la degradacin de la PPCK. Estas son la primeras evidencias
mostradas en plantas de que la degradacin de la PPCK podra regularse por
un mecanismo en el que estara implicado el ABA y el proteosoma. La
regulacin de la degradacin de la PPCK podra tomar relevancia en contextos
especficos como plantas sometidas a estrs. En este sentido, hemos obtenido
evidencias de que en plantas tratados con Li+ el aumento espectacular de
PPCK que se mantiene a partir de 30 min de iluminacin es independiente de
la transcripcin de la PPCK va PLC, y se debe, en parte, a la inhibicin de la
degradacin.
En conclusin la PEPC es una enzima importante en la
productividad de las plantas debido a que permite la asimilacin ms eficiente
de CO2 atmosfrico por las plantas C4 durante la fotosntesis o cumple
funciones de vital importancia en condiciones de estrs osmtico y durante el
desarrollo de los vegetales. Estas caractersticas la hacen atractiva para su
estudio, lo que ha llevado a la manipulacin gentica por tcnicas de
transformacin en varias especies para aumentar los contenidos de esta
protena y de esta manera aumentar la productividad de los cultivos, aunque se
han tenido resultados de sobreexpresin, no han sido significativos. No
obstante, hay resultados que muestran que es posible aumentar los niveles de
PEPC fotosinttico en plantas transformadas aumentando la concentracin de
la enzima y mejorando el uso eficiente de agua cuando sta es limitada, pero
an falta por hacer ms. Con la obtencin de plantas trasformadas
eficientemente, los productos que surjan de estos sern beneficios para la
sociedad.