CULTIVO DE MICROORGANISMOS

El cultivo es el proceso de proliferacin de microorganimos al proporcionarles un

entorno con condiciones apropiadas. Los microorganismos en proliferacin
producen rplicas de s mismos y necesitan los elementos presentes en su
composicin qumica. Los nutrientes proporcionan estos elementos en una forma
que se accesible desde el punto de vista metablico. Adems lo microorganimos
requieren energa metablica para sintetizar macromolculas y mantener
gradientes qumicos esenciales a travs de sus membranas.
Los factores que deben controlarse durante la proliferacin incluyen nutrientes,
pH, temperatura, aireacin, concentracin de sales y fuerza inica del medio.

NECESIDADES PARA EL CRECIMIENTO

La mayor parte del peso seco de los microorganismos es la materia inorgnica
que contiene elementos como el carbono, hidrogeno, nitrgeno, oxigeno, fosforo y
azufre. Adems de iones inorgnicos como potasio, sodio, hierro, magnesio, calcio
y cloruro para facilitar los proceso enzimticos y mantener los gradientes
qumicos a travs de la membrana celular.
La materia orgnica consiste en macromolculas formadas por enlaces de anhidro
entre los bloques de construccin. La sntesis de enlaces anhidro requiere
energa qumica que es proporcionada por los enlaces fosfodister contenidos en
el ATP. La energa adicional necesaria para mantener la composicin
citoplasmtica relativamente durante la proliferacin se deriva de la fuerza motriz
protnica, consiste en energa potencial que puede derivarse del paso de protones
a travs de una membrana.
La fuerza motriz protnica es un gradiente electroqumico con dos componentes
una diferencia en pH y una diferencia en su carga inica. La carga en el interior de
la membrana bacteriana es ms positiva que en el interior y la diferencia en las
cargas contribuye a la liberacin de energa libre cuando un protn entra al
citoplasma desde fuera de la membrana. La energa libre puede utilizarse para el
desplazamiento de la clula para mantener los gradientes CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
El cultivo es el proceso de proliferacin de microorganimos al proporcionarles un
entorno con condiciones apropiadas. Los microorganismos en proliferacin
producen rplicas de s mismos y necesitan los elementos presentes en su
composicin qumica. Los nutrientes proporcionan estos elementos en una forma
que se accesible desde el punto de vista metablico. Adems lo microorganimos
requieren energa metablica para sintetizar macromolculas y mantener
gradientes qumicos esenciales a travs de sus membranas.

Los factores que deben controlarse durante la proliferacin incluyen nutrientes,

pH, temperatura, aireacin, concentracin de sales y fuerza inica del medio.

La energa libre puede utilizarse para el desplazamiento de la

clula para
mantener los gradientes inicos o molculas a travs de la membrana para
sintetizar enlaces de anhidro en el ATP. La clula puede utilizar una fuente de ATP
con sus enlaces de anhidro de energa para crear una fuerza motriz protnica que
a su vez puede utilizarse para desplazar la clula y conservar los gradientes
qumicos.
Para su desarrollo, un microorganismo requiere todos los elementos en su materia
orgnica y cantidades adecuadas de iones para la produccin de energa
reacciones catalicas. Debe hacer una fuente de energa para establecer la fuerza
motriz protnica y permitir la sntesis de macromolculas. Varan ampliamente en
sus demandas nutricionales y sus fuentes de energa metablica.

FUENTES DE ENERGIA METABOLICA

Los tres mecanismos principales para la generacin de energa metablica son:

Fermentacin

Respiracin

Fotosntesis

Para el desarrollo del microorganismo debe utilizarse al menos uno de estos

mecanismos.

FERMENTACION
La transformacin de ATP en la fermentacin no se acopla con la transferencia de
electrones. La fermentacin se caracteriza por la fosforilacin del sustrato.
El intermediario fosforilado se forma por procesos metablicos de sustrato
susceptibles de fermentacin no se acompaa de cambios en el estado general de
oxidacin- reduccin del sustrato fermentable y por lo tanto, la composicin
elemental de los productos de fermentacin debe ser idntica a la de los sustratos.

RESPIRACION
La respiracin es anloga a los procesos de acoplamiento de pendientes de
energa para la descargar una bacteria. La reduccin qumica de un oxidante a
travs de una serie especfica de trasportadores de electrones en la membrana
establece la fuerza motriz protnica a travs de la membrana bacteriana. El
reductor puede ser un compuesto orgnico o inorgnico. A menudo se utiliza
oxigeno gaseoso como oxidante pero algunos microorganismos pueden utilizar
oxidantes alternativos como dixido de carbono, sulfato y nitrato. inicos o
molculas a travs de la membrana para sintetizar enlaces de anhidro en el ATP.
La clula puede utilizar una fuente de ATP con sus enlaces de anhidro de energa
para crear una fuerza motriz protnica que a su vez puede utilizarse para
desplazar la clula y conservar los gradientes qumicos.
Para su desarrollo, un microorganismo requiere todos los elementos en su materia
orgnica y cantidades adecuadas de iones para la produccin de energa
reacciones catalicas. Debe hacer una fuente de energa para establecer la fuerza
motriz protnica y permitir la sntesis de macromolculas. Varan ampliamente en
sus demandas nutricionales y sus fuentes de energa metablica.

FOTOSINTESIS.
La fotosntesis es similar a la respiracin en el sentido de que la reduccin de un
oxidante a travs de una serie especfica de transportadores de electrones
establece una fuerza motriz protnica.
La diferencia en los dos procesos consiste en que la fotosntesis se crean el
reductor y el oxidante de modo fotoqumico por medio de energa luminosa
absorbida por los pigmentos en la membrana; as, la fotosntesis contina en tanto
exista una fuente de energa luminosa. Las plantas y algunas bacterias son
capaces de invertir cantidades sustanciales de energa luminosa para hacer del
agua un reductor para el CO2. El oxgeno participa en este proceso y se produce
materia orgnica. La respiracin, oxidacin favorable desde el punto de vista
energtico de la materia orgnica por un aceptor de electrones como el oxgeno,
puede proporcionar a los microorganismos con capacidad de fotosntesis energa
de ausencia de una fuente luminosa.

NUTRICION.

La nutricin en medios de cultivo debe contener todos los elementos necesarios

para la sntesis biolgica de un nuevo microorganismo. En la siguiente revisin, los
nutrientes se clasifican con base en los elementos que proporcionan.

FUENTES DE AZUFRE
Al igual que el nitrgeno, el azufre es un componente de muchas sustancias
orgnicas de las clulas .forma parte de la estructura de varias coenzimas y se
encuentra en las cadenas laterales de cisteinil y metionil de las protenas. El
azufre en su forma elemental no puede utilizarse por plantas o animales. Sin
embargo, algunas bacterias auttrofas pueden oxidarse a su forma de sulfato .La
mayor parte de los microorganismos pueden utilizar sulfato como fuente de azufre,
al reduci8r el sulfato al nivel de cido sulfhdrico (H2S).Algunos microorganismos
pueden asimilar H2S directamente del medio de cultivo, pero este compuesto
puede ser toxico para muchos de ellos.

FUENTES DE FOSFORO.
El fosfato es necesario como el componente de ATP, cidos nucleicos y coenzimas
como NAD, NADP. Adems muchos metabolitos, lpidos (fosfolpidos lipidoA).
Componentes de las paredes celulares (cido teicoico), algunos polisacridos
capsulares y algunas protenas sufren fosforilacin.
El fosforo siempre se asimila en forma de fosfato inorgnico libre (P).

FUENTES MINERALES
Numerosos minerales son necesarios para la funcin de las enzimas. El magnesio
(Mg2+) y el ion ferroso (Fe2+) tambin se encuentran en derivados de porfira: el
magnesio en las molculas de clorofila, el hierro como parte de las coenzimas de
los citocromos y peroxidasa. Mg 2+ y K+ son esenciales para la funcin e integridad
de los ribosomas. El calcio es necesario como constityete de las paredes
celulares de bacterias grampositivas, aunque es indispensable para las bacterias
gramnegativos. Muchos microorganismos marinos requieren Na + para su
desarrollo. Durante la elaboracin de un medio para el cultivo de la mayor parte de
los microorganismos, es necesario proporcionar fuentes de potasio, magnesio,
calcio y hierro, por lo general en sus formas inicas (K +, Mg2+,Ca2+ y Fe2+). Son
necesarios muchos otros minerales (p. ej., Mn 2+,Mo2+,Co2+,Cu2+,Zn2+); estos con

frecuencia pueden sumistrarse en agua corriente o como contaminantes de otros

ingredientes de los medios de cultivo.
La captacin de hierro, que forma hidrxidos insolubles a pH neutro, es facilitada
en muchas bacterias y hongos por la produccin de siderforos, compuestos que
contienen la capacidad de generar y favorecer su transporte en forma de complejo
soluble. Esto incluye a los hidroxomatos (-CONH 2OH) conocidos como
sideraminas y derivados de catecoles (p.ej., dihidroxibenzoilserina). Los
siderforos determinados por plsmidos desempean una funcin importante en la
capacidad de invasin de algunos patgenos bacterianos. Los mecanismos de
capacitacin de hierro dependientes de sideroforos y de no sideroforos por las
bacterias

FUENTE DE CARBONO.
Como se mencion antes, las plantas y algunas bacterias son capases de utilizar
energa de fotosntesis para reducir el dixido de carbono a expensas del agua.
Estos microrganismos pertenecen al grupo de microrganismo auttrofos, seres
vivos que no necesitan nutrientes orgnicos para su desarrollo. Otros
microrganismos auttrofos son los quimiolitotrofos, que utilizan sustratos
inorgnicos como hidrogeno y tiosulfato como reductor y dixido de carbono como
fuente de carbono.
Los microorganismos hetertrofos, para su desarrollo, requieren carbono orgnico
que deben encontrarse en una forma que puedan asimilar. Por ejemplo, el
naftaleno proporciona todo el carbn y energa necesaria para el desarrollo de
microorganismos hetertrofos respiratorios, pero muy pocos microorganismos
poseen la va metablica necesaria para la asimilacin de naftaleno.
Por otra parte, la glucosa puede sustentar el desarrollo mediante procesos de
respiracin o fermentacin en muchos microorganismos. Es importante que los
sustratos de crecimiento se suministren a niveles apropiados para la cepa
microbiana que se est cultivando: las concentraciones que sostiene el desarrollo
del microorganismo pueden inhibir el desarrollo de otro.
El dixido d carbono es necesario para barias reacciones de fotosntesis. Muchos
microorganismos respiratorios producen ms del dixido de carbono necesario
para satisfacer sus necesidades, en tantos que otros requieren fuentes de dixido
de carbono en su medio de cultivo.

Factores de crecimiento
Un factor de crecimiento es un compuesto orgnico que debe contener la celula a
fin de desarrollarse, porque es incapaz de sintetizar. Muchos microorganismos
que reciben los nutrientes mencionados antes son capaces de sintetizar todos los
bloques para la construccin de macromolculas: aminocidos, purinas,
pirimidinas y pentosas (precursores metablicos de cidos nucleicos);
carbohidratos adicionales (precursores de polisacridos) y cidos grasos y
compuestos isoprenoides. Adems, los microorganismos de vida libre deben ser
capaces de sintetizar complejos vitamnicos que actan como precursores de
coenzimas.
Cada uno de estos compuestos esenciales se sintetiza por una secuencia de
reacciones enzimticas; cada enzima se produce bajo el control de un gen
especifico. Cuando un microorganismo sufre una mutacin gentica que da origen
a la falta de una de estas funciones enzimticas, la cadena se rompe y ya no se
elabora el producto terminal. El microorganismo debe obtener el compuesto de su
entorno; el compuesto se transforma en un factor de crecimiento para el
microorganismo. Este tipo de mutacin puede inducirse con facilidad en el
laboratorio.
Diferentes especies microbianas varan ampliamente en cuanto a sus necesidades
de factores de crecimiento. Los compuestos involucrados se encuentran y son
esenciales en todos los microorganismos; las diferencias en cuanto a sus
necesidades refleja las diferencias en sus capacidades de sntesis. Algunas
especies no requieren factores de crecimiento, en tanto que otras (los bacilos)
perdieron durante su evolucin la capacidad de sintetizar hasta 30 a 40
compuestos esenciales y, por tanto, necesitan obtenerlos de su medio ambiente.

FACTORES AMBIENTALES QUE AFECTAN AL CRECIMIENTO.

Un medio de cultivo debe de contener todos los nutrientes necesarios, para el

microorganismo a cultivar, y tales factores incluyen pH, temperatura y aireacin
que deben ser controlados con gran cuidado. Se utiliza un medio de cultivo lquido,
se le puede aadir agar o gel de slice para que adquiera consistencia de gel para
situaciones especiales.
Algas marinas = agar (polisacrido), no lesiona a las bacterias.

NUTRIENTES.
En general debe de suministrarse lo siguiente:
1) Donadores y aceptores de hidrogeno, casi 2 g/l.
2) Fuentes de carbn 1g/l
3) Fuente de nitrgeno 1g/l
4) Minerales de azufre, fosforo, casi 50 g/l, de cada uno y oligoelementos, 0.1
g/l a 1 mg/l de cada uno.
5) Factores de crecimiento: aminocidos, purinas y pirimidinas casi, 50 g/l.
Por lo general es necesario preparara un medio completamente sinttico en el cual
se conozcan las caractersticas y concentraciones exactas de cada uno de los
ingredientes.
La mayor parte de los microorganismos de vida libre se desarrolla bien en
extractos de levaduras; las formas parasitarias pueden necesitar sustancias
especiales que se encuentran solo en sangre o en extractos de tejidos de
animales.
CONCENTRACION DE IONES HIDROGENO (pH)
La mayor parte de los microorganismos tiene un pH optimo muy estrecho. La
mayora de los microorganismos NEUTROFILOS prolifera mejor en un pH de 6.0 a
8.0 aunque algunas formas MICROORGANISMOS ACIDOFILOS encuentran su
optima con pH de 3.0 y otros ALCALOFILOS tienen un pH ptimo de hasta 10.5.
El pH interno est regulado por un grupo de sistemas de transporte de protones en
la membrana citoplasmtica lo que incluye una bomba de protones controlada por
ATP y un intercambio de Na/H.

TEMPERATURA.
Los psicrofilos crecen mejor a temperaturas bajas (-5 a -15c).
Los psicrotrofos, temperatura ptima es de 20 y 20c.
Los mesofilos crecen mejor entre 30 y 37c
Los termfilos crecen mejor entre 50 y 60c
Algunos microroganismos pueden ser hipertermofilos y pueden desarrollarse en
temperaturas a punto de ebullicin, la cual existe en sitios de alta presin como en
las profundidades del ocano.

Bibliografia.

Brooks GF.Carroll KC. Butel JS.Morse

SA. Mietzner TA. Microbiologia medica. NP; Mc Graw Hill; 2014
Paginas: 67-70

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U4a_CrecimientoMicrobiano_198
36

Licenciatura en Estomatologa

Materia:
Microbiologia
Profesor:
Dra. Daniela Guzmn Uribe.

Equipo:
Geraldine Gonzlez Anda
Mauricio Martinez Martinez
Marlene Jimnez Rosas
Rolando Carren Torres
Abril Alvares Muoz
Naomi Abigail Escobar Gonzlez
Karina lvarez Martinez
Grado y grupo:
3-A

Trabajo de investigacin:
Nutricin, crecimiento y metabolismo bacteriano

Bibliografa:

Brooks GF.Carroll KC. Butel JS.Morse

SA. Mietzner TA. Microbiologia medica. NP; Mc Graw Hill; 2014 Paginas: 67-70

CURVA DE CRECIMIENTO EXPONENCIAL BACTERIANA.

En Microbiologia el crecimiento se define como el incremento en el nmero de
clulas.
La biparticin (fisin binaria) es el proceso por el cual una clula se divide para
formar dos clulas iguales.
El intervalo que transcurre en la formacin de dos clulas, a partir de una clula se
llama generacin, y el tiempo requerido para esto es el tiempo de generacin o
tiempo de duplicacin.
CRECIMIENTO EXPONENCIAL.
Cuando un cultivo se duplica de manera regular, durante un intervalo de tiempo se
denomina crecimiento exponencial. Una grfica aritmtica del crecimiento muestra
un incremento constante mientras una logartmica permite observar con respecto
al tiempo, cuando el crecimiento es exponencial y puede entonces calcularse el
tiempo de generacin.
TIEMPO DE GENERACION.
Tiempo de generacin (G) es el tiempo requerido para que una clula se divida o
una poblacin se duplique.
G= t (tiempo) / n (nmero de generacin)
Si partimos de una clula al cabo de una generacin habr duplicado su nmero y
as sucesivamente en cada generacin. Como se puede comprobar el crecimiento
se produce en progresin geomtrica.

1 generacin- 2 clulas
2 generaciones- 4 clulas