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tcnicas cromatogrficas
https://lidiaconlaquimica.wordpress.com/cromatografia/
03/08/2015
Introduccin a las tcnicas cromatogrficas
Parmetros cromatogrficos.
Resolucin de la columna.
Aplicaciones de la cromatografa.
Ejercicios.
Definicin de cromatografa
Segn la IUPAC, la cromatografa es un mtodo fsico de separacin en el que los
componentes a separar son distribuidos entre dos fases, una de las cuales
permanece estacionaria mientras que la otra se mueve en una direccin
determinada.
Por lo tanto, en cualquier proceso cromatogrfico distinguimos:
Una fase mvil (FM), que puede ser un gas, un lquido o un fluido supercrtico,
en la que va disuelta la muestra.
Una fase estacionaria (FE) inmiscible, la cual se mantiene fija sobre una
columna o sobre una superficie slida.
Los componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven con
mayor lentitud en la fase mvil, mientras que aquellos que se unen dbilmente a la fase
estacionaria se mueven con mayor rapidez. Esta diferencia de velocidades en el seno de
la fase mvil permite la separacin y el anlisis cualitativo o cuantitativo de los
componentes.
Parmetros cromatogrficos
04/08/2015Deja un comentario
04/08/2015
Cromatograma
Tiempo muerto (tM o t0): tiempo requerido para que una especie no
retenida alcance el detector.
Los picos cromatogrficos tienen forma de curva de error normal o Gaussiana. Estas
curvas representan la distribucin simtrica de los datos replicados alrededor de la
media.
Constante de distribucin
Las asimetras suelen ser debidas a la presencia en la fase estacionaria de lugares que
retienen al soluto con ms fuerza que otros o a la inyeccin de una cantidad excesiva de
muestra.
Velocidad de migraciN
Esta ltima expresin relaciona la velocidad de migracin del soluto con la constante
de distribucin y de los volmenes de las fases mvil y estacionaria.
Tasa de flujo volumtrico
El factor de retencin mide la relacin entre el tiempo que las molculas del analito
estn en la fase estacionaria y el que estn en la fase mvil. Se usa para comparar las
velocidades de migracin de los solutos, y no depende de la forma de la columna o de la
tasa de flujo volumtrico.
Lo ideal es que el valor de los factores de retencin de los solutos de una muestra
oscilen entre 1 y 10. Valores mucho menores que la unidad indican que el analito sale
de la columna en un tiempo prximo al tiempo muerto. Valores mucho mayores indican
un tiempo de elucin excesivamente largo.
FACTOR DE Selectividad
Considera que una columna cromatogrfica est constituida por una serie de capas
estrechas, discretas pero contiguas, denominadas platos tericos, en los cuales se
establece el equilibrio de distribucin de cada soluto entre la fase mvil y la fase
estacionaria.
Podemos definir, entonces, plato terico como la longitud de una columna en la que el
soluto experimenta un equilibrio completo entre las dos fase. El nmero de platos
tericos N de una columna de longutid L ser:
Cuantos ms platos tericos formen una columna mayor ser su eficacia (o lo que
es lo mismo, cuanto menor sea la altura de plato mayor ser la eficacia).
Como los picos cromatogrficos tienen forma de curva gaussiana, la anchura de cada
pico est directamente relacionada con la varianza () o la desviacin estndar (). Por
lo tanto, la altura de plato terico H se puede definir en funcin de dichos parmetros
como:
Se puede deducir que el nmero de platos tericos se relaciona con parmetros que
pueden deducirse fcilmente de un cromatograma:
Estos tres factores se relacionan con la altura de plato mediante la ecuacin de van
Deemter:
Con una resolucin igual a 10 el solapamiento entre los dos picos es del 4 %. Con una
resolucin de 15 el solapamiento es tan slo del 03 % y permite una separacin
esencialmente completa de los dos componentes:
La resolucin de la columna se puede relacionar con los factores de retencin de los dos
componentes A y B, el factor de selectividad y el nmero de platos que forman la
columna:
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Una solucin frecuente consiste en cambiar las condiciones que afectan a k mientras
tiene lugar la separacin. En cromatografa de lquidos se recurre a variaciones en la
composicin de la fase mvil durante la elucin (elucin en gradiente). En
cromatografa de gases, el incremento de temperatura permite conseguir las condiciones
ptimas para las separaciones (programacin de temperatura).
Aplicaciones de la cromatografa
05/08/2015Deja un comentario
Se pueden realizar estudios cuantitativos de las muestras separadas a partir de las alturas
de los picos cromatogrficos. La mayor precisin se consigue cuando tenemos picos
bien definidos, agudos, estrechos y simtricos. Hay que tener en cuenta que la altura
es inversamente proporcional a la anchura del pico, por lo que este mtodo se ve
muy afectado por las condiciones experimentales (temperatura de la columna, caudal de
la fase mvil, velocidad de inyeccin de la muestra), por lo que su aplicacin es
limitada. Puede ser til en ensayos de rutina o en aquellos en los que se prefiera una
mayor rapidez, aunque se pierda exactitud.
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Las reas de los picos son independientes de la anchura, por lo que estos anlisis son
ms precisos que los basados en las alturas de los picos, aunque su lectura sea ms
sencilla. Una forma de estimar el rea de los picos es multiplicar su altura por el ancho a
la mitad de su altura. En realidad, la mayora de los cromatgrafos actuales incluyen
sistemas de integracin electrnicos y programas informticos que permiten que el
analista pueda determinar con precisin las reas de los picos.
los picos. Para poder emplear este mtodo debemos tener mezclas
que en las condiciones en las que trabajemos se puedan eluir todos
los componentes en un tiempo razonable.
Clculo del nmero y la altura de los platos tericos de una columna cromatogrfica:
Ejercicio 2
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Ejercicio 3
Ejercicio 4
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Ejercicio 5
Aplicacin de la cromatografa con fines cuantitativos, basado en las reas de los picos.
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